СПОСОБ ВЫЯВЛЕНИЯ НОВОРОЖДЕННЫХ, УГРОЖАЕМЫХ ПО РАЗВИТИЮ ГИПОКСИЧЕСКИ-ИШЕМИЧЕСКОЙ ЭНЦЕФАЛОПАТИИ

СПОСОБ ВЫЯВЛЕНИЯ НОВОРОЖДЕННЫХ, УГРОЖАЕМЫХ ПО РАЗВИТИЮ ГИПОКСИЧЕСКИ-ИШЕМИЧЕСКОЙ ЭНЦЕФАЛОПАТИИ


RU (11) 2291443 (13) C1

(51) МПК
G01N 33/68 (2006.01)
G01N 33/53 (2006.01) 

(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ 
Статус: по данным на 07.09.2007 - действует 

--------------------------------------------------------------------------------

Документ: В формате PDF 
(14) Дата публикации: 2007.01.10 
(21) Регистрационный номер заявки: 2005138808/15 
(22) Дата подачи заявки: 2005.12.14 
(24) Дата начала отсчета срока действия патента: 2005.12.14 
(45) Опубликовано: 2007.01.10 
(56) Аналоги изобретения: ТАБОЛИН В.А. и др. Детская иммунология. Актуальные вопросы перинатальной иммунологии. Раздел: Иммунопатогенез неинфекционных заболеваний плода и новорожденного. М., РГМУ, 2004. RU 2148262 С1, 27.04.2000. SU 1121006 А, 30.10.1984. Yuan S. et al. Role of Carbon Monoxide and Nitric Oxide in Newborn Infants With Postasphyxial Hypoxic-Ischemic
Encephalopathy. Pediatrics. Vol.106, №6, December, 2000, p.1447-1451. Найдено из Интернет: http://pediatrics.aappublications.org/cgi/content/full/106/6/1447. [Найдено 21.03.2006]. [он-лайн]. OYGUR N. et al. Predictive value of plasma and cerebrospinal fluid tumour necrosis factor-alpha and interleukin-1 beta concentrations on outcome of full tern infants with hypoxic-icshaemic encephalopathy. Arch. Dis. Child. Fetal. Neonatal. Ed. 1998, Nov., 79(3), F. 190-193. реф. Найдено из БД PubMed. PMID 10194989. [Найдено 10.03.2006]. [он-лайн].

(72) Имя изобретателя: Самсонова Елена Геннадьевна (RU); Герасимова Маргарита Михайловна (RU); Гнусаев Сергей Федорович (RU) 
(73) Имя патентообладателя: Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Тверская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию" (RU) 
(98) Адрес для переписки: 170642, г.Тверь, ул. Советская, 4, ГОУ ВПО Тверская ГМА Росздрава, патентный отдел 

(54) СПОСОБ ВЫЯВЛЕНИЯ НОВОРОЖДЕННЫХ, УГРОЖАЕМЫХ ПО РАЗВИТИЮ ГИПОКСИЧЕСКИ-ИШЕМИЧЕСКОЙ ЭНЦЕФАЛОПАТИИ
Изобретение относится к медицине, а именно к неврологии и педиатрии, и может найти применение для выявления новорожденных, угрожаемых по развитию гипоксически-ишемической энцефалопатии (ГИЭ). Сущность способа: на 2-й день жизни в периферической крови новорожденного определяют содержание интерлейкина 1 методом иммунно-ферментного анализа. При значении концентрации интерлейкина 1 - 21,8±0,21 пг/мл ребенка относят к группе детей, угрожаемых по развитию ГИЭ. Применение способа позволяет повысить точность выявления развития ГИЭ, определить тяжесть поражения ЦНС на ранних стадиях и выбрать оптимальную терапию для лечения этих детей.




ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ


Изобретение относится к медицине, а именно к неврологии и педиатрии.

Несмотря на значительные успехи в развитии технологий клинического мониторинга и изучении патологии плода и новорожденного, гипоксически-ишемическая энцефалопатия (ГИЭ) остается тяжелым состоянием, вызывающим значительную смертность, долгосрочную заболеваемость и инвалидизацию детей. Поэтому особенно важна ранняя диагностика и уточнение степени тяжести гипоксически-ишемическои энцефалопатии для возможности более быстрого определения наиболее правильной тактики лечения этих детей на ранних этапах.

В качестве прототипа авторы предлагают способ исследования крови на содержание в ее сыворотке интерлейкина-1b (ИЛ-1b) у новорожденных с транзиторными нарушениями гемоликвородинамики гипоксического генеза, в раннем периоде адаптации ("Детская иммунология" - Актуальные вопросы перинатальной иммунологии. В.А. Таболин, Н.Н.Володин, М.В.Дегтярева, Д.Н.Дегтярев, К.К.Бахтикян. Российский государственный медицинский университет. Москва, 2004 г. Раздел: Иммунопатогенез неинфекционных заболеваний плода и новорожденного.) Авторами было установлено, что у новорожденных с ГИЭ концентрация ИЛ-1b в сыворотке периферической крови была невелика на первой неделе жизни и достоверно повышалась ко второй и третьей недели жизни. Степень повышения концентрации ИЛ-1b в сыворотке крови новорожденных детей с ГИЭ совпадало с тяжестью состояния ребенка.

В этом предложении нет критериев выявления новорожденных, угрожаемых по развитию гипоксически-ишемического поражения головного мозга, и нет описания методики исследования в сыворотке крови ИЛ-1b.

Определенными недостатками способа, предложенного в качестве прототипа, являются:

ИЛ-1b является провоспалительным иммуноцитокином, секретируемым моноцитами, он лежит в основе запуска каскада иммунологических и острофазовых воспалительных реакций как местно, так и на системном уровне, поэтому использование ИЛ-1b является менее специфичным для диагностики гипоксически-ишемического поражения головного мозга у новорожденных;

- наличие транзиторных нарушений гемоликворадинамики у новорожденных гипоксического генеза;

- отсутствие критериев диагностики гипоксического поражения головного мозга у новорожденных.

Техническим результатом предлагаемого способа является определение значений интерлейкина-1 (ИЛ-1 ) для ранней диагностики ГИЭ и назначения адекватной терапии.

Авторы предлагают свой способ ранней диагностики ГИЭ у новорожденных путем исследования сыворотки крови на содержание в ней ИЛ-1 . Синтез ИЛ-1 является одним из звеньев реакции иммунной системы на патологический процесс и отражает тканевое повреждение, относясь к провоспалительным цитокинам. Данный цитокин играет ведущую роль в реализации взаимодействия нервной и иммунной систем.

Полученные результаты показали, что чем выше уровень ИЛ-1 , тем тяжелее церебральные нарушения. Это дает авторам основание предположить, что провоспалительные цитокины играют важную роль в патогенезе ГИЭ. В результате повышения проницаемости гематоэнцефалического барьера иммунокомпетентные клетки проникают в мозговую ткань - это приводит к активации микроглии, которая способствует выделению в больших количествах цитокинов, в том числе ИЛ-1 , в ЦНС, что приводит к воспалительному повреждению мозговой ткани. Следовательно, по исходному уровню провоспалительных цитокинов можно говорить о ранней диагностики церебральной патологии у новорожденных.

Авторами было обследовано 141 новорожденный, из них:

1 группа - с ГИЭ II степени тяжести - 73 ребенка;

2 группа - с ГИЭ III степени тяжести - 27 детей;

3 группа - контрольная (здоровые) - 41 ребенок.

Для определения уровня содержания ИЛ-1 осуществляют забор периферической крови в объеме 3 мл, на 2-й день от рождения. Проводят иммунно-ферментный анализ (ИФА) выявления антигенов с помощью моноклональных антител на твердофазной основе. Анализ делится на несколько стадий: в лунки полистиролового планшета, содержащие антигены к ИЛ-1 , вводят сыворотку пациента; инкубируют один час при комнатной температуре, затем лунки отмывают и высушивают; вводят конъюгат. Инкубируют при комнатной температуре один час; отмывают, высушивают. Добавляют субстратную смесь. После ее добавления появляется цветная реакция.

Для остановки иммунологической реакции через 15-20 минут (стандартное время) вводят стоп-реагент, фотометрируют на иммунно-ферментном анализаторе при длине волны 450 нанометра (длина волны стандартная). Результаты получают в единицах концентрации (прибор автоматически строит калибровочную кривую и результаты выдает в единицах концентрации в ПГ/мл).

В контрольной группе содержание ИЛ-1 в сыворотке крови 2,17±0,48 пг/мл, но у 14 детей из этой группы отмечалось повышенное содержание ИЛ-1 в сыворотке крови до 21,8±0,21 ПГ/мл.

У новорожденных с ГИЭ II степени тяжести содержание ИЛ-1 в сыворотке крови при первом заборе составило от 50,31±10,30 пг/мл и более, а у новорожденных с ГИЭ III степени тяжести содержание ИЛ-1 в сыворотке крови составило 93,16±0,85 пг/мл и более.

У новорожденных из контрольной группы, у которых при первом определении уровень ИЛ-1 был повышен, отсутствовала неврологическая симптоматика, при контрольном исследовании сыворотки крови через 7 дней выявило повышение содержания ИЛ-1 до 35 пг/мл - 45 ПГ/мл. Одновременно с этим или чуть раньше на 2-3 дня у детей отмечалось появление неврологической симптоматики: появился тремор подбородка, конечностей, спонтанный рефлекс Моро, повысился мышечный тонус в проксимальных отделах во флексорах. Эти дети авторами были выделены в группу детей, угрожаемых по развитию ГИЭ.

Предлагаемый способ прост, доступен, не требует дорогостоящего оборудования, достаточно забора крови. Он позволяет улучшить качество диагностики ГИЭ, выявлять тяжесть поражения ЦНС на ранних стадиях и выбрать оптимальную терапию для лечения этих детей.

Клинический пример №1: история болезни №3/1112.

Больная Н., 2 дня. От первой беременности, протекавшей без особенностей, от первых срочных родов в 40 недель беременности, длительность родов 9 часов 45 минут, безводный период 1 час 45 минут. Родилась девочка весом 3520 г, длина 51 см, окружность головы 34 см, окружность груди 33 см, оценка по Апгар 8-9 баллов. В неврологическом статусе при рождении без особенностей. При исследовании сыворотки крови, на 2-е сутки от рождения выявили повышенное содержание ИЛ-1 до 21,4 пг/мл. Это дало возможность предположить наличие ГИЭ у новорожденного. На 5-е сутки жизни у ребенка стал отмечаться тремор конечностей, появилось общее беспокойство, вздрагивание, умеренное снижение мышечного тонуса, непостоянный спонтанный рефлекс Моро.

При определении ИЛ-1 в сыворотке крови на 7-е сутки нахождения в отделении выявлено повышение его уровня до 38 ПГ/мл.

Клинические данные и данные изменения содержания ИЛ-1 в сыворотке крови новорожденного дало основание выделить ее в группу детей, угрожаемых по развитию ГИЭ, и определить дальнейшую тактику ведения и лечения этого ребенка.

Клинический пример №2: история болезни №15/7185. Больной С., 2 дня. Диагноз: ГИЭ II степени тяжести, гипертензионный синдром, субэпиндемальная киста слева.

Ребенок от 3-й беременности, протекавшей на фоне хронического бронхита с астматическим компонентом. От первых родов (в анамнезе 2 медаборта), в 40 недель беременности, длительность родов 4 часа 50 минут, безводный период 5 часов 20 минут, преждевременный разрыв плодного пузыря. Родился мальчик весом 3190 г, длина 50 см, окружность головы 33 см, окружность груди 32 см, оценка по Апгар 8-9 баллов. После рождения отмечался тремор конечностей, запрокидывание головы назад. На пятые сутки выявлено расхождение сагиттального шва с 0,5 до 1,5 см. Размеры большого родничка 3×3 см, малого родничка 1,5×1,5 см. При поступлении в отделение окружность головы 35 см, большой родничок 5,0×5,0 см, сагиттальный шов 1,5-2,0 см, малый родничок 3,0×3,0 см. Выявлен тремор конечностей, снижен хватательный рефлекс, спонтанный рефлекс Моро, мышечный тонус в руках снижен, в ногах повышен в проксимальных отделах во флексорах. Сухожильные рефлексы высокие, перекрестные, с расширенной рефлексогенной зоной (=). Сомнительный синдром Лесажа. На ЭКГ признаки постгипоксической ишемии миокарда. Расширение вен глазного дна. НСГ: МПЩ - 2,0 мм, содержит жидкость; ПРБЖ - S-4 мм, D - 3 мм. Слева субэпиндемальная киста, эхоструктура головного мозга диффузно повышенной эхогенности.

Содержание ИЛ-1 в сыворотке крови: при поступлении: 44,14 пг/мл, через 7-10 дней 111,14 пг/мл.

Был выставлен диагноз: ГИЭ II степени тяжести, гипертензионно-гидроцефальный синдром, субэпиндемальная киста слева.

Повышение содержания ИЛ-1 в сыворотке крови больного соответствовало средней степени тяжести ГИЭ.




ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ


Способ выявления новорожденных, угрожаемых по развитию гипоксически-ишемической энцефалопатии, включающий определение в периферической крови интерлейкина методом иммунно-ферментного анализа, отличающийся тем, что на 2-й день жизни новорожденного определяют содержание интерлейкина 1 и при значении концентрации интерлейкина 1 = (21,8±0,21) пг/мл ребенка относят к группе детей, угрожаемых по развитию гипоксически-ишемической энцефалопатии.