ЛЕЧЕБНО-ПРОФИЛАКТИЧЕСКИЙ БИОПРЕПАРАТ

ЛЕЧЕБНО-ПРОФИЛАКТИЧЕСКИЙ БИОПРЕПАРАТ "БАКТИСПОРИН"


RU (11) 2130316 (13) C1

(51) 6 A61K35/74, C12N1/20, C12N1/20, C12R1:125 

(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ 
Статус: по данным на 18.07.2007 - действует 

--------------------------------------------------------------------------------

(14) Дата публикации: 1999.05.20 
(21) Регистрационный номер заявки: 97101057/13 
(22) Дата подачи заявки: 1997.01.23 
(45) Опубликовано: 1999.05.20 
(56) Аналоги изобретения: RU 2067616 C, 10.10.96. 
(71) Имя заявителя: Государственное предприятие НПО. "Иммунопрепарат" 
(72) Имя изобретателя: Михайлова Н.А.; Кузнецова Т.Н.; Кунягина О.В. 
(73) Имя патентообладателя: Государственное предприятие НПО. "Иммунопрепарат" 
(98) Адрес для переписки: 450024, Республика Башкортостан, Уфа, ул.Новороссийская, 105, НПО "Иммунопрепарат" 

(54) ЛЕЧЕБНО-ПРОФИЛАКТИЧЕСКИЙ БИОПРЕПАРАТ "БАКТИСПОРИН" 

Изобретение предназначено для коррекции микрофлоры желудочно-кишечного тракта при дисбактериозах, ферментной недостаточности органов пищеварения, гнойных инфекциях, пищевой аллергии, для лечения хирургической инфекции мягких тканей, для профилактики хирургической инфекции при травмах и оперативных вмешательствах. Биопрепарат содержит в качестве основы антибиотикоустойчивый антагонистически активный штамм Bacillus subtilis 3H (ГИСК 248) и наполнитель. Наполнитель содержит 5% лактозы или 8% сахарозожелатиновой смеси. Препарат характеризуется высокой антагонистической активностью в отношении широкого спектра патогенных и условно-патогенных микроорганизмов и устойчивостью к целому ряду антибиотиков. 3 табл. 


ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ



Изобретение относится к биотехнологии, а именно к производству биопрепаратов-пробиотиков.

В настоящее время существует целый ряд биопрепаратов, подавляющих рост патогенных и условно-патогенных бактерий: лактобактерин, бифидумбактерин, колибактерин, бактисубтил и споробактерин. Однако эти препараты нельзя применять совместно с антибиотиками.

Наиболее близким к изобретению является препарат-пробиотик "Споробактерин", содержащий биомассу Bacillus subtilis и наполнитель, который предназначен для профилактики и лечения заболеваний желудочно-кишечного тракта, дисбактериозов (1). Однако известный препарат чувствителен к антибиотикам, за исключением поломиксина, что ограничивает сферу его применения при тяжелых формах гнойно-воспалительных заболеваний, лечение которых требует совместного введения бактериального препарата и антибиотика.

Задача, решаемая изобретением, - создание нового препарата-пробиотика, применение которого возможно совместно с антибиотиками.

Результат, получаемый от использования нового препарата, выражается в повышении эффективности лечения за счет возможности сочетанного применения бактериального препарата с антибиотиками.

Это достигается тем, что в качестве основы биопрепарата используют штамм Bacillus subtilis 3H, депонированный в коллекции ГИСК им. Л.А.Тарасевича под N 248, патент N 2067616 (2). Штамм Bacillus subtilis 3H характеризуется высокой антагонистической активностью в отношении широкого спектра патогенных и условно-патогенных микроорганизмов и устойчивостью к целому ряду антибиотиков.

Препарат содержит в качестве основы живые клетки Bacillus subtilis 3H (ГИСК N 248) и наполнитель, при следующем соотношении компонентов, мас.%:

Биомасса Bacillus subtilis 3H - 1109-5109 живых микробных клеток в 1 мл растворителя - 92 - 95

Наполнитель - 5 - 8

В качестве растворителя можно использовать физиологический раствор, дистиллированную или кипяченую воду. В качестве наполнителя препарат может содержать 5% лактозы или 8% сахарозо-желатиновой смеси (7% сахарозы и 1% желатина). Необходимость наполнителя обусловлена его защитным действием для бактериальных клеток при дальнейшем лиофильном высушивании препарата.

Препарат характеризуется высокой антагонистической активностью в отношении патогенных и условно-патогенных микроорганизмов. Антагонистическую активность проверяли методом отсроченного антагонизма (табл. 1).

Препарат характеризуется безвредностью (таб. 2) и устойчивостью к ряду антибиотиков (табл. 3).

Пример. На основе штамма B.subtilis 3H с типичными морфологическими, культуральными, биохимическими свойствами приготовлены 5 вариантов препарата с различным содержанием микробных клеток в составе препарата.

Вариант 1. Препарат, содержащий, мас.%:

Биомасса B. subtilis 3H 1108 живых микробных клеток в 1 мл физиологического раствора - 92

Наполнитель - сахарозо-желатиновая смесь - 8

Вариант 2. Препарат, содержащий, мас.%:

Биомасса B. subtilis 3H 1109 живых микробных клеток в 1 мл физиологического раствора - 93

Наполнитель - сахарозо-желатиновая смесь - 7

Вариант 3. Препарат, содержащий, мас.%:

Биомасса B. subtilis 3H 5109 живых микробных клеток в 1 мл физиологического раствора - 94

Наполнитель - сахарозо-желатиновая смесь - 6

Вариант 4. Препарат, содержащий, мас.%:

Биомасса B. subtilis 3H 51010 живых микробных клеток в 1 мл физиологического раствора - 95

Наполнитель - сахарозо-желатиновая смесь - 5

Вариант 5. Препарат, содержащий, мас.%:

Биомасса B. subtilis 3H 51010 живых микробных клеток в 1 мл физиологического раствора - 95

Наполнитель - лактоза - 5

Изготовленные варианты препарата разливали в стерильные ампулы, высушивали лиофильно, ампулы запаивали. Проверяли безвредность полученных вариантов препарата на лабораторных животных, специфическую антагонистическую активность в отношении тест-культур - представителей различных групп патогенных и условно-патогенных микроорганизмов.

Для определения безвредности содержимое ампулы разводили в 0,5 мл физиологического раствора и вводили эту дозу перорально мышам. Для каждого варианта опыта использовали не менее 10 мышей массой 15 - 16 г. Препарат считали безвредным, если все мыши оставались живыми в течение пяти суток наблюдения и ни у одной из них не выявлено заболевания.

Для определения специфической активности исследовали антагонистическую активность вариантов препарата в отношении тест-культур. Исследование осуществляли методом отсроченного антагонизма. Для этого содержимое ампулы растворяли в 1 мл физиологического раствора. Полученную взвесь высевали штрихом по диаметру чашки Петри с агаризованной средой Гаузе N 2. Посевы инкубировали в термостате при 37oC в течение 72 ч. Затем к выросшей культуре подсевали штрихом тест-микроорганизмы (500-миллионные суспензии суточных культур в физиологическом растворе). Учет результатов проводили через 18 часов инкубирования при 37oC по величине зон отсутствия роста тест-культур. Контролем роста тест-культур служило параллельное выращивание их на чашках с агаризованной средой Гаузе N 2 без исследуемой культуры.

Чувствительность препарата к антибиотикам определяли с помощью стандартных дисков, пропитанных антибиотиками. В чашку Петри с МПА наливали 1 мл суспензии суточной культуры штамма в 0,9%-ном растворе натрия хлорида, содержащей 1109 микробных клеток, и равномерно распределяли по поверхности агара. Избыток удаляли пастеровской пипеткой. На поверхности засеянного агара пинцетом раскладывали диски с антибиотиками, по 5 дисков на каждую чашку. Чашки выдерживали в термостате при температуре (371)oC в течение (182) ч, после чего измеряли зоны задержки роста вокруг дисков, включая диаметр самого диска.

Полученные результаты испытания вариантов препарата представлены в таблицах 1 - 3.

Из данных таблицы 1 следует, что оптимальным количеством живых микробных клеток в одной дозе препарата является 1109 - 5109. Дальнейшее увеличение количества микробных клеток не изменяет существенным образом антагонистическую активность препарата в отношении тест-культур микроорганизмов.

Проведено изучение безвредности различных вариантов препарата на белых аутбредных мышах при введении per os 1 дозы. Наблюдение за изменением веса животных осуществляли в течение 5 суток. Полученные данные представлены в таблице 2.

Испытание показало, что все животные остались живыми, их первоначальная масса увеличивалась, отсутствовали какие-либо признаки заболевания.

Проведено сравнительное изучение антибиотикоустойчивости препаратов Бактиспорин и Споробактерин. Полученные данные представлены в таблице 3.

Полученные данные свидетельствуют, что новый препарат обладает выраженной антибиотикоустойчивостью.

Проведены клинические испытания препарата в детском отделении городской клинической больницы N 6 г. Уфы. Показана его абсолютная безвредность, хорошая переносимость и высокая эффективность.

Пример 1. Пациент Давлетбаев К., 1995 года рождения. Находился на стационарном лечении по поводу ОРВИ, осложненной острой гнойной ангиной. Сопутствующая патология: ассоциированный дисбактериоз кишечника, субкомпенсированная форма. При поступлении жалобы (матери) на повышение температуры тела, вялость. Практически с рождения у мальчика наблюдались выраженные изменения характеристик стула в виде разжижения кала и наличие в нем патологических примесей (слизи, комочков непереваренной пищи). Последнее обострение клинических проявлений дисбактериоза было обусловлено присоединением ОРВИ и в последующем острой гнойной ангины. Учитывая выше описанную симптоматику, в комплексную терапию, наряду с назначением курса антибиотика, был включен бактиоспорин по 1 дозе 2 раза в день в течение 10 дней.

Со второго для приема препарата было отмечено уменьшение проявлений болезненности по ходу толстого кишечника (при пальпации). С третьего дня стул стал практически полностью переваренным.

Пример 2. Больной Сакаев М., 1995 года рождения.

Находился на стационарном лечении с диагнозом: ОРВИ. Сопутствующие заболевания: дисбактериоз кишечника ассоциированный, субкомпенсированная форма, атопический дерматит. Проявление диспептического синдрома в виде разжижения стула, появления в кале слизи, непереваренных комочков пищи отмечаются с 4-х месяцев после перевода ребенка на искусственное вскармливание. При осмотре живот умеренно вздут, отмечается болезненность и урчание по ходу толстого кишечника, стул желто-зеленого цвета с большим количеством слизи. Жалобы на вялость, снижение аппетита. В связи с обострением дисбактериоза назначен бактиспорин по 1 дозе 2 раза в день в течение 10 дней.

С 4-го дня приема аппетит и самочувствие нормализовались. С 6-го дня полностью исчезли явления метеоризма, стул стал гомогенным.

Пример 3. Больной Климов Д., 1994 года рождения.

Находился на стационарном лечении с диагнозом: ОРВИ, обструктивный бронхит. Сопутствующие заболевания: атопический дерматит, пищевая сенсибилизация. Дисбактериоз кишечника, субкомпенсированная форма. В связи с обструктивным бронхитом мальчик получил курс ампицилина, на фоне которого у ребенка появился диспептический синдром: периоды тошноты, спонтанные боли в животе, разжижение стула, в кале появились комочки слизи. Таким образом, в период реконвалесценции обструктивного бронхита назначен бактиспорин по 1 дозе 2 раза в день в течение 10 дней.

К третьему дню приема восстановился аппетит, кожные проявления дерматита не нарастали, а интенсивность зуда даже несколько уменьшилась. К четвертому дню стул стал полностью переваренным, а к шестому дню исчезли явления метеоризма.

Таким образом, проведенные исследования препарата Бактиспорин показали, что он безвреден, характеризуется высокой антагонистической активностью в отношении тестовых штаммов патогенных и условно-патогенных микроорганизмов, обладает выраженной антибиотикоустойчивостью и обладает лечебным действием.

Применение: лечебно-профилактический препарат Бактиспорин используют при расстройствах желудочно-кишечного тракта, дисбактериозах, ферментной недостаточности органов пищеварения, гнойных инфекция, пищевой аллергии, для лечения хирургической инфекции мягких тканей, для профилактики хирургической инфекции при травмах и оперативных вмешательствах.

Источники информации:

1. Споробактерин сухой, ВФС 42-371ВС-92 утв. 18.12.92.

2. Патент РФ N 2067616, кл. C 12 N 1/20, 10.10.96. 


ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ



Лечебно-профилактический биопрепарат, включающий биомассу штамма Bacillus subtilis 3H (ГИСК N 248), отличающийся тем, что он дополнительно содержит наполнитель при следующем соотношении компонентов, мас.%:

Биомасса штамма Bacillus subtilis 3H (ГИСК N 248) - живых микробных клеток - (1 - 5) 109 в 1 мл растворителя - 92 - 95

Наполнитель - 5 - 8