ИММУНОКОРРЕГИРУЮЩЕЕ СРЕДСТВО И СПОСОБ ИММУНОКОРРЕКЦИИ

ИММУНОКОРРЕГИРУЮЩЕЕ СРЕДСТВО И СПОСОБ ИММУНОКОРРЕКЦИИ


RU (11) 2138271 (13) C1

(51) 6 A61K33/04, A61K9/08, A61K35/78, A61K35/80 

(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ 
Статус: по данным на 15.02.2008 - прекратил действие 

--------------------------------------------------------------------------------

(21) Заявка: 99103792/14 
(22) Дата подачи заявки: 1999.03.04 
(24) Дата начала отсчета срока действия патента: 1999.03.04 
(45) Опубликовано: 1999.09.27 
(56) Список документов, цитированных в отчете о поиске: Справочник ВИДАЛЬ. Лекарственные препараты в России. - М.: АстраФармСерви, 1997, с.15-654. RU 2096037 C1, 20.11.97. RU 2077882 C1, 27.04.97. RU 2121354 C1, 10.11.98. GB 1444024 A, 28.07.76. WO 83/01196 A1, 14.04.83. 
(71) Заявитель(и): Новицкий Юрий Алексеевич (RU); Лаптев Анатолий Федорович (RU); Лаптев Владимир Федорович (RU); Плетнев Владимир Владимирович (UA) 
(72) Автор(ы): Новицкий Ю.А.(RU); Лаптев А.Ф.(RU); Лаптев В.Ф.(RU); Плетнев Владимир Владимирович (UA) 
(73) Патентообладатель(и): Новицкий Юрий Алексеевич (RU); Лаптев Анатолий Федорович (RU); Лаптев Владимир Федорович (RU); Плетнев Владимир Владимирович (UA) 
Адрес для переписки: 101000, Москва, Главпочтамт, До востребования, Лаптеву В.Ф. 

(54) ИММУНОКОРРЕГИРУЮЩЕЕ СРЕДСТВО И СПОСОБ ИММУНОКОРРЕКЦИИ 

Изобретение относится к области медицины и касается иммунокоррегирующего средства и способа иммунокоррекции при лечении различных заболеваний, сопровождающихся расстройствами функций иммунной системы. Изобретение состоит в том, что иммунокоррегирующее средство представляет собой протеоселеновый комплекс (ПСК), включающий органический низкомолекулярный компонент, полученный из протеинсодержащего растительного сырья путем экстракции спиртом, или эфиром, или димексидом с последующим высушиванием экстракта и растворением в 60-90% спирте, и ионизированную органическую соль селена из расчета 3-6 мкг на 1 мл раствора, смесь выдерживают в электромагнитном синусоидальном высокочастотном поле с частотой 20-30 МГц. Способ иммунокоррекции заключается в ведении ПСК в суточной дозе 6-150 мг. Изобретение эффективно для коррекции нарушений иммунной системы при различных патологических процессах, обеспечивает энергетическую стимуляцию клеток, осуществляет нормализацию функции микроциркуляторного русла, что приводит к восстановлению естественной структуры тканей тела человека и адекватных метаболических энергетических процессов. 2 с. и 13 з.п.ф-лы, 1 табл. 


ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ



Изобретение относится к области медицины, биологической химии, фармакологии и может быть использовано в клинической практике для лечения различных заболеваний, сопровождающихся расстройствами иммунной системы.

Известно, что помимо защиты от возбудителей инфекционных заболеваний иммунная система организма участвует в противоопухолевой защите, осуществляет нормальную дифференцировку клеток кроветворной системы, обеспечивает нормальное внутриутробное развитие плода, элиминацию и утилизацию отмирающих тканевых структур, а также играет определенную роль при таких физиологических состояниях, как старение /Беклемишев Н. Д. "Иммунопатология и иммунорегуляция", М., Медицина. 1986, стр. 9-18/.

В регуляции разнообразных процессов, происходящих в тканях органов тела человека, ведущая роль принадлежит тканевому и клеточному иммунитету. Благодаря опосредованному влиянию тканевых фагоцитов, гистиоцитов, плазмоцитов и лимфоцитов в системе комплемента и антител осуществляется надзор за регенерацией тканей, выведением продуктов распада, а также жизнедеятельностью клеток. При этом необходимо отметить, что со стороны иммунной системы происходит жесткий контроль за структурами и функциями всех тканей и органов человека и, главным образом, за нормализацией функций микроциркуляторной сети.

Проведенные в течение последних десятилетий теоретические и клинические исследования показали тесную связь иммунной и микроциркуляторной системы с жизнеобеспечением различных структур, тканей и функций тела человека. Все большее подтверждение получает концепция стимулирования иммунной системы и микроциркуляции для устранения различных патологических процессов.

В настоящее время в клинической практике для иммунокоррекции используют как синтетические, так и средства природного происхождения. Это, как правило, препараты из экстрактов зобной железы, лимфатических узлов, соединительной ткани и селезенки. К таким препаратам относятся хорошо известные в клинической практике средства, например, тимолин, Т-активин, тимоптин, миелопид, тимоген и т. д. /Машковский М. Д. "Препараты, стимулирующие процессы иммунитета" - в кн. : Лекарственные средства, М, "Медицина". 1993, том 2, стр. 193-204/. К этому же классу лекарственных веществ можно отнести препарат "пропес" для инъекций /утверждено фармокомитетом МЗ Украины 25. 12. 95, регистрационный номер 95/245/7./ содержащий стерильный раствор оптимального комплекса аминокислот, выделенный из эмбриональных органов низкомолекулярных пептидов, так и полученных в результате органического протеолиза высокомолекулярных предшественников. Этот препарат, по утверждению автора, стимулирует функциональную активность хелперов и мононуклеарных фагоцитов, обладает резко выраженным иммуномодулирующим действием и отчетливым антитоксическим эффектом.

Однако все известные препараты обладают в большей степени органотропным действием, нежели общим и поэтому не могут оказывать единого интегрального действия на иммунобиологическую систему организма. К недостаткам этих препаратов принципиального характера, ограничивающих их применение в клинической практике, можно отнести следующие: неспецифичность воздействия на структуры живого вещества, побочные последствия в виде токсических и мутагенных нарушений, относительно низкую активность воздействия на молекулярно-энергетические процессы.

Неспецифичность воздействия современных препаратов на иммунную систему обусловлено тем, что подобные лекарственные вещества не обладают синергическим действием на рецепторный аппарат мембран клеток и тканей, что не приводит к оптимальной и адекватной стимуляции лимфоцитарной и гистиоцитарной систем. В то же время принцип сенситизации, то есть адекватного синергичного воздействия вещества на рецепторы мембран и клеток с одновременным синтезом АТФ, является основным в стимуляции жизнедеятельности всех тканей тела человека, в том числе иммунной системы.

В последнее время всеобщее внимание исследователей и клиницистов привлек селен, обнаруженный в качестве жизненно важного микроэлемента. Согласно проведенным исследованиям селен является необходимым элементом для осуществления всех иммунологических процессов как гуморальных, так и тканевых. Синтез антител и формирование клонов иммуноактивных клеток может происходить только при участии селена. Как известно, селен является составной частью глютатионовой пероксидазы - энзима, играющего важную роль в клетке. Этот микроэлемент предотвращает образование в них химически активных агрессивных частиц кислорода - свободных радикалов - и обладает антиокислительным действием, аналогичным действию витамина Е. Именно с этой функцией защитника клеток может быть связан весь профилактический спектр действия селена и его соединений.

При помощи селена и его соединений в организме осуществляется биосинтез иммуноглобулинов, особенно типа G; происходит коррекция клеточных компонентов иммунитета, возрастает количество хелперов и уменьшается количество супрессоров, в связи с чем нормализуется коэффициент иммунорегуляции. Кроме того, активная роль селена и его органических соединений в осуществлении антиоксидантных процессов приводит к нормализации клеточного дыхания и восстановлению метаболических энергетических процессов.

В связи с этим селеносодержащие препараты получают все большее распространение. Так для поддержания функций иммунной системы в качестве микроэлемента селен вводят в комплексы витаминных препаратов, например центрум /centrum/. (Справочник ВИДАЛЬ Лекарственные препараты в России, М., АстраФармСервис, 1997, стр. Б-654). Известны также селеносодержащие препараты, полученные на основе биомассы водорослей /патент GB 2203043, 1988 или патент РФ 2096037, 1997/, обладающие общетонизирующим действием, реализация которого связана с активным воздействием на иммунную систему соединений селена.

Однако указанные препараты имеют недостаточно высокое содержание органического селена, а технология их получения сложна и требует длительного времени.

Задачей настоящего изобретения является расширение ассортимента иммунокоррегирующих средств; создание лечебного вещества, введение которого в организм не сопровождается побочными последствиями, а вызывает системный лечебный эффект, основанный на нормализации энергетических процессов иммунной системы.

Для решения поставленной задачи предлагается средство, обладающее иммуностимулирующим и иммунокоррегирующим действием. Оно включает органический низкомолекулярный компонент, полученный из протеинсодержащего сырья путем экстракции органическим растворителем с последующим высушиванием субстанции и растворением в 60% - 90% спирте и ионизированную органическую соль селена, и выдержанный в электромагнитном синусоидальном высокочастотном поле 20-30 МГц.

Полученное вещество мы назвали протеоселеновым комплексом (ПСК).

Получение ПСК.

В качестве исходных продуктов используют зеленую массу белковосодержащих растений, например злаковых и бобовых, а также богатые белками листья кукурузы. Зеленую массу предварительно высушивают и измельчают. С помощью экстракции из полученного сырья извлекают белковоорганические комплексы. Экстракцию осуществляют с помощью эфира, спирта или димексида. Полученный экстракт выпаривают и производят лиофильную сушку. Полученный порошок растворяют в 60% или 90% спирте. После этого к раствору добавляют селен в виде ионизированных ионов, получаемых при электролизе селеномочевины SeC(NH2)2 из расчета 3-6 мкг селена на 1 мл раствора. Полученный раствор помещают в электромагнитное (плотность потока мощности 510-3Вт/см2) синусоидальное высокочастотное поле 20-30 МГц на 5 минут. Указанное поле может быть создано, например, в сквидмагнитометрах, которые применяются для магнитокардиографии или магнитоэнцефалографии.

Полученное таким образом вещество помещают во флаконы и герметизируют.

Конкретные примеры получения ПСК.

Пример 1.

Измельчили 15 г бобового высушенного растения (клевер розовый), поместили в колбу, добавили 50 г 5% димексида и оставили на 3 дня. По истечении этого времени наблюдали обесцвечивание частиц размельченного вещества. Слили жидкость в объеме 40 мл. Полученный раствор высушили и получили 400 мг порошка светло-зеленого цвета. Порошок высыпали в емкость в 50 мл и добавили 40 мл 60% спирта. В раствор добавили 120 мкг ионизированной соли селена (из расчета 3 мкг на 1 мл). Раствор с селеном поместили на 5 минут в высокочастотное электромагнитное поле сквидмагнитометра, в результате чего произошло соединение селена с аминокислотами растительного белка. Препарат разлили во флаконы емкостью 15 мл и осуществили герметизацию.

Пример 2.

Измельчили 30 г высушенного растения (листья кукурузы), добавили 50 г 90% спирта, оставили на 3 дня. Слили жидкость и добавили 120 мкг ионизированной соли селена. Полученный раствор поместили на 5 минут в высокочастотное электромагнитное поле сквидмагнитометра. Препарат разлили во флаконы емкостью 15 мл и осуществили герметизацию.

Рентгеноструктурный анализ полученного вещества показал, что ПСК представляет собой асимметричную белковую молекулу с альфа-спиралью и бета - структурой. Гидрофобный конец молекулы ПСК, представленный сульфгидридными связями, переходит в альфа-спираль. Бета структура молекулы ПСК извита соответствующим образом и на внешней стороне аминокислотной цепочки, как и на внутренней, имеются диселенидные связи, обеспечивающие пространственную устойчивость и в то же время гибкость данной молекулы.

В состав всей молекулы ПСК входит 15 основных аминокислот, из которых 11,5% принадлежит аланину, 24,0% лейцину, 10,5% пролину и 27% глютаминовой кислоте. Соответственно описанной технологии могут быть получены ПСК молекулы из 15-20 аминокислот с молекулярным весом 3-4 тыс.

Острую токсичность препарата исследовали при внутрибрюшинном введении ПСК в дозе 250 мг/кг мышам (возраст 6 недель, вес 28-30 г). Значение ЛД50 составило 700 мг/кг.

При исследовании общей токсичности мышам вводили ПСК в дозе 100 мг/кг/день внутрибрюшинно непрерывно в течение 10 дней. Снижение веса или каких-либо других нарушений при этом не наблюдали. В последующем, при наблюдении этих мышей в течение трех месяцев, отклонений от нормы не выявлено.

В результате проведенных исследований установлено, что ПСК является органическим низкомолекулярным соединением, обладает иммуностимулирующим и иммунокоррегирующим действиями, не токсичен, полностью растворим в воде, биологических жидкостях, крови, лимфе и ликворе. В 1 мл ПСК содержится в зависимости от количества аминокислот в лиганде от 10 до 12 мг субстанции и 3-6 мкг селена.

Доза вводимого препарата зависит от клинического состояния больного, его возраста, веса, а также способа введения. Эффективная терапевтическая суточная доза для больного составляет от 6 мг до 150 мг активного вещества, которое вводят одномоментно или дробно.

Способ стимуляции и коррекции иммунной системы осуществляют следующим образом.

Полученный препарат ПСК представляет собой раствор активного вещества в 60% - 90% спирте, 1 мл которого содержит 10-12 мг лекарственной субстанции. ПСК вводят перорально, внутримышечно, внутривенно, внутриартериально, а также наружно в виде суспензии в масляном растворе или в виде мази с масляно-спиртовым наполнителем.

При пероральном введении необходимую дозу рассчитывают следующим образом:

В 20 каплях раствора содержится 10-12 мг лекарственной субстанции;

В 10 каплях(1/2 мл) содержится 5-6 мг препарата;

В 5 каплях(1/4 мл) содержится 2,5-3 мг препарата;

В 3 каплях(1/7 мл) содержится 1,5-1,7 мг препарата.

При внутримышечном, внутривенном или внутриартериальном введении препарат растворяют в физиологическом растворе для лучшей диссоциации в соотношении 1:10 при использовании 60% спирта или 1:15 - при 90% спирте.

Например, детям до 6 лет при клинической патологии средней степени тяжести препарат вводят однократно в виде инъекции от 0,1 мл до 0,5 мл в день, при тяжелой степени патологии указанную дозу вводят два раза в день. При проведении интенсивной терапии препарат вводят внутримышечно или внутривенно(внутриартериально) по 1,0 -2,0 мл соответственно с добавлением 10 или 20 мл физиологического раствора. В случае перорального введения в зависимости от возраста, веса и степени поражения - от 0,5 мл до 3,0 мл, причем препарат растворяют в 1/3 стакана кипяченой слегка теплой воды(36-38o C).

Длительность лечения может колебаться от 1 до 3 месяцев. В случае тяжело протекающей патологии курс лечения повторяют с интервалом 1-2 месяца до выраженного клинического эффекта. В период проведения лечения контролируют иммунологический статус больного по развернутой клинической формуле крови и иммунограмме.

Конкретный пример реализации способа.

Больной П.В.В. 32 лет поступил в Киевский медицинский институт (История болезни 11704 от 1994 года) с диагнозом: посттравматическая сегментарная миелопатия с синдромом нарушения функций нижне-шейного отдела спинного мозга.

Считает себя больным с 1989 года, кода после травмы верхнего шейного отдела позвоночника стал отмечать слабость в правой кисти. Слабость нарастала, и в 1992 г. он, будучи военнослужащим, проходил курсы реабилитации в различных медицинских учреждениях. 18/05/1992 г. был освидетельствован военно-врачебной комиссией; выставлен диагноз "сирингомиелии шейного утолщения с преимущественным поражением передних рогов спинного мозга и выраженным верхним вялом парапарезом, нарушением функции обеих кистей".

Объективно в неврологическом статусе: карпорадиальные рефлексы снижены с обеих сторон, больше справа, снижены рефлексы с двуглавых мышц, больше справа. Гипотрофия мышц правого предплечья и межкостных мышц кистей с двух сторон. Снижена мышечная сила в дистальных отделах верхних конечностях: справа 1,0-1,5 балла, слева 2,5-3,0 балла. Сухожильные рефлексы с рук D > S. Чувствительных расстройств не выявлено. Гипестезия в зоне нейродерматомов Д1-Д2, фибриллярные подергивания в области мышц плечевого пояса с обеих сторон.

Кожные покровы в области обеих кистей сухие, холодные на ощупь. При осциллографии выявлена умеренная дистония сосудов рук с гипертонусом с обеих сторон, при ортопробе резкое повышение тонуса с затруднением венозного оттока. Была проведена комплексная лечебная терапия - витамины группы Е, В, прозерин, фосфаден, пантоган, АТФ, актовегин, лидаза. Проведенное лечение ожидаемого эффекта не дало. Больной был комиссован и признан МСЭК (акт - 154469) инвалидом 2-й группы.

В институте больному проведена ядерная магнитная резонансная томография шейного отдела позвоночника и спинного мозга. Было обнаружено снижение высоты межпозвоночных дисков С6-Т1, уменьшение диаметра нижней части шейного утолщения спинного мозга, сужение суборахоидального пространства спинного мозга на уровне позвонков С5-Д1. К этому времени четко развилась симптоматика поражения мышц предплечья правой кисти (область иннервации сегментов С7-Т1) и выраженная гипертрофия мышц предплечья и левой кисти (сегментов С8-Т1). Сила мышц в дистальных отделах правой руки 3 балла, левой 1 балл. При этом иммунограмма показала до лечения: Т-лимфоциты CD3 - 52, Т - хелперы CD4-33, Т-супрессоры CD8-30. Анализ крови: лейкоцитов - 7370, эритроциты - 4790000, гемоглобин - 145, эозинофилы - 4, палочкоядерные - 8, моноциты - 8, лимфоциты - 16, сегментоядерные - 64, СОЭ-17 мм/ч, цветной показатель - 0,9.

С согласия больного и его родственников проходит периодически курсы лечения с применением протеоселенового препарата внутримышечно по определенной схеме из расчета 1,0 мл препарата на 10 мл физраствора 1 раз в день в течение 80 дней. За 3 года проведено 6 курсов лечения по вышеуказанной схеме.

После проведенного лечения: сила мышц предплечья левой руки 5 баллов, кисти левой руки 4,5 балла. В левой кисти отмечается незначительная гипотрофия мышц возвышения мизинца и некоторая гипотрофия первой межкостной мышцы. В правой руке сила мышц предплечья 3,5-4,0 балла, кисти 1,5-2,0 балла. Улучшилось кровообращение обеих рук и кистей, осциллографически отмечается нормальная амплитуда кровенаполнения, фибриллярных подергиваний в мышцах обеих рук нет.

В связи с выраженным клиническим эффектом больной был переведен на 3-ю группу инвалидности. МСЭК, акт N032903 от 24/11/98 г.

Иммунограмма в конце лечения: Т-лимфоциты CD3-72, Т-хелперы CD4-44, Т-супрессоры CD8-28. Анализ крови: лейкоцитов - 9000, эритроциты - 3280000, гемоглобин - 109, эозинофилы - 2, палочкоядерные - 2, моноциты - 16, лимфоциты - 17, сегментоядерные - 63, СОЭ-5 мм/ч, цветной показатель - 0,9.

Т. О. можно заключить, что активная стимуляция клеточного иммунитета у данного больного привела к восстановлению микроциркуляторного русла в шейном отделе спинного мозга.

С помощью предложенного способа проведено лечение 24 больных, у которых иммунологическая недостаточность была обусловлена преимущественно инфекционной и опухолевой патологией. Из них 8 больных после тяжелой инфекции и у 5 больных несостоятельность иммунной системы развилась на фоне хронических заболеваний различного генеза.

При исследовании показателей иммунограмм этих больных до и через 1 месяц после лечения были получены следующие значения (см. таблицу 1).

Как видно из представленной таблицы, в процессе лечения значительно(достоверно) увеличивается количество Т-хелперов и Т киллеров и уменьшается количество супрессоров.

На основании проведенных исследований четко установлены следующие факторы действия ПСК:

Специфическая регуляция иммунобиологической активности с активацией всех компонентов клеточного иммунитета и тканевого метаболизма;

Антиокислительное тканевое воздействие;

Улучшение адаптационно-трофических процессов и микроциркуляции.

Таким образом, ПСК является эффективным препаратом для коррекции нарушений иммунной системы при различных патологических процессах; обеспечивает энергетическую стимуляцию клеток, нормализацию функции микроциркуляторного русла, что приводит к восстановлению нормальной структуры ткани человека и адекватных метаболических энергетических процессов. 


ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ



1. Иммунокоррегирующее средство на основе селена, отличающееся тем, что оно представляет собой протеоселеновый комплекс, включающий органический низкомолекулярный компонент, полученный из протеинсодержащего растительного сырья путем экстракции органическими растворителями с последующим высушиванием субстанции и растворением в 60 и 90% спирте, и органическую соль селена, выдержанный в электромагнитном синусоидальном высокочастотном поле 20 - 30 МГц.

2. Иммунокоррегирующее средство по п.1, отличающееся тем, что в качестве протеинсодержащего сырья используют массу злаковых, и/или бобовых растений, и/или листья кукурузы.

3. Иммунокоррегирующее средство по п.1, отличающееся тем, что оно содержит 15 основных аминокислот, из которых 11,5% аланин, 24,0% лейцин, 10,5% пролин и 27,0% глютаминовая кислота.

4. Иммунокоррегирующее средство по п.1, отличающееся тем, что оно содержит органическую соль селена в виде ионизированных ионов, получаемых при электролизе селеномочевины из расчета 3 - 6 мкг на 1 мл органического компонента.

5. Иммунокоррегирующее средство по п.1, отличающееся тем, что 1 мл раствора протеоселенового комплекса содержит 10 - 12 мг субстанции и 3 - 6 мкг селена.

6. Иммунокоррегирующее средство по любому из пп.1 - 5, отличающееся тем, что оно предназначено для перорального введения.

7. Иммунокоррегирующее средство по любому из пп.1 и 3 - 5, отличающееся тем, что оно предназначено для парэнтерального введения.

8. Иммунокоррегирующее средство по любому из пп.1 и 3 - 5, отличающееся тем, что оно предназначено для наружного использования в виде суспензии или мази.

9. Способ иммунокоррекции путем введения лекарственного средства, содержащего селен, отличающийся тем, что вводят лекарственное средство по пп.1 - 5 в эффективном количестве.

10. Способ по п.9, отличающийся тем, что суточная доза протеоселенового комплекса составляет 6 - 150 мг.

11. Способ по пп.9 и 10, отличающийся тем, что суточную дозу вводят одномоментно или дробно.

12. Способ по пп.9 - 11, отличающийся тем, что протеоселеновый комплекс вводят перорально, парэнтерально или наружно.

13. Способ по п.12, отличающийся тем, что при парэнтеральном введении протеоселеновый комплекс растворяют в физиологическом растворе в соотношении 1 : 10 - 1 : 15.

14. Способ по пп.9 и 10, отличающийся тем, что продолжительность курса лечения составляет 1 - 3 месяца.

15. Способ по пп.9 - 13, отличающийся тем, что при тяжелом протекании патологического процесса курс лечения повторяют с интервалом 1 - 2 месяца до выраженного клинического эффекта.