1,3-БИС(ИЗОБУТИЛТИОЭТИЛ)-5-ИЗОБУТИЛТИОЭТИЛОКСИ-6-МЕТИЛ- УРАЦИЛ, ПРОЯВЛЯЮЩИЙ ИММУНОТРОПНУЮ АКТИВНОСТЬ

1,3-БИС(ИЗОБУТИЛТИОЭТИЛ)-5-ИЗОБУТИЛТИОЭТИЛОКСИ-6-МЕТИЛ- УРАЦИЛ, ПРОЯВЛЯЮЩИЙ ИММУНОТРОПНУЮ АКТИВНОСТЬ


RU (11) 2027710 (13) C1

(51) 6 C07D239/62, A61K31/505 

(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ 
Статус: по данным на 25.10.2007 - прекратил действие 

--------------------------------------------------------------------------------

(14) Дата публикации: 1995.01.27 
(21) Регистрационный номер заявки: 4917731/04 
(22) Дата подачи заявки: 1991.03.11 
(45) Опубликовано: 1995.01.27 
(56) Аналоги изобретения: Машковский М.Д. Лекарственные средства М.: Медицина 1985, ч.1. с.568, ч.2 с.138. 
(71) Имя заявителя: Институт органической химии Уральского отделения РАН; Башкирский государственный медицинский институт 
(72) Имя изобретателя: Кривоногов В.П.; Толстиков Г.А.; Муринов Ю.И.; Зарудий Ф.С.; Лазарева Д.Н.; Исмагилова А.Ф.; Волкова С.С.; Спирихин Л.В.; Абдрахманов И.Б.; Афзалетдинова Н.Г.; Хисамутдинов Р.А. 
(73) Имя патентообладателя: Институт органической химии Уральского отделения РАН; Башкирский государственный медицинский институт 

(54) 1,3-БИС(ИЗОБУТИЛТИОЭТИЛ)-5-ИЗОБУТИЛТИОЭТИЛОКСИ-6-МЕТИЛ- УРАЦИЛ, ПРОЯВЛЯЮЩИЙ ИММУНОТРОПНУЮ АКТИВНОСТЬ 

Использование: в качестве иммунотропного средства в медицине. Сущность изобретения: продукт - 1,3 - бис(изобутилтиоэтил) - 5 - изобутилтиоэтилокси - 6 метилурацил, бф C23H42N2O3S3 , выход 42,18%. Реагент 1: 5 - гидрокси - 6 метилурацил. Реагент 2: - хлорэтилизобутилсульфид. Условия процесса: в водно-спиртовом растворе в присутствии щелочи. 3 табл. 


ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ



Изобретение относится к области органической химии, конкретно к новому химическому соединению - 1,3-бис(изо- бутилтиоэтил)-5-изобутилтиоэтокси-6-метилурацилу формулы

проявляющему выраженную иммунотропную активность.

Указанное соединение, его свойства в литературе не описаны.

Аналогом по строению и назначению является 6-метилурацил, способ которого описан в литературе.



Недостаток 6-метилурацила в том, что он слабо стимулирует гуморальный иммунитет.

Новое соединение - 1,3-бис(изобутилтиоэтил)-5-изобутилтиоэтокси-6-метилура-цил (11-89-3), номер регистрационного удостоверения 9374189 от 11 августа 1989 г., характеризуется выраженной иммунотропной активностью.

1,3-Бис(изобутилтиоэтил)-5-изобутилти- оэтокси-6-метилурацил получают в условиях известного способа, согласно которому 5-гидрокси-6-метилурацил в водно-спиртовой среде в присутствии едкого кали обрабатывают трех-, четырехкратным мольным количеством -хлорэтилизобутилсульфидом при комнатной температуре с последующим нагреванием реакционной смеси до 90оС и перемешиванием при этой температуре до нейтральной или слабокислой среды (2-3 ч). Выход 42,18% 1,3-бис(изобутилтиоэтил)-5-изобутилтиоэтокси-6-метилурацила, представляющего собой светло-желтую жидкость с nD20 1,5320, хорошо растворимую в хлороформе, бензоле, эфире, ацетоне, спирте и нерастворимую в воде.

Найдено,%: C 56,00; H 8,84; N 5,70; S 20. 44.

C23H42N2O3S3

Вычислено,%: C 56,29; H 8,63; N 5,75; S 19,60; O 9,78.

ИК спектр (, см-1): 740 (RCH2S); 1000 (C = C, RCH = CHR) 1090, 1120 (C-O-C); 1240 (); 1090, 1120, 1140, 1240, 1340 (C-N); 1380, 1390 (гем. ); 1440 (); 1650, 1700 (C = O, -N-C=O); 2880 (); 2930 (); 3200 (C-N).



ЯМР1Н (, м.д., CDCl3): 0,99 (д, J = 6,64; 18H6д); 1,8 (м, 3Н3г); 2,37 (с, 3Н6); 2,465 (д, J = 6,85; 4Н2в); 2,5 (д, J = 5,93; 2Н1в); 2,74 (сикст.) J = 6,57; 4Н2б); 2,82 (сикст.) J = 7,14, 2Нб); 4,0 (т, J = 7,96; 6H).

Иммунные свойства и острая токсичность предлагаемого соединения изучена на кафедре совместной лаборатории Института органической химии Уральского отделения РАН и кафедре фармакологии Башкирского медицинского института им. 15-летия ВКЛСМ.

Исследования проводили на белых беспородных мышах массой 18-20 г.

Острую токсичность определяли на беспородных мышах обоего пола при однократном внутрибрюшинном введении. Вводили дозы 50-1600 мг/кг. После введения токсических доз через 5-10 мин у животных наблюдалась вялость, вытягивание конечностей, снижение подвижности. Смерть наступала от остановки дыхания.

Параметры токсичности определяли по методу Кербера. При внутрибрюшинном введении ЛД50 соединения составила 40034,5. На основании классификации токсичности веществ при введении под кожу и брюшную полость данное соединение относится к малотоксичным.

Влияние соединения 1,3-бис(изобутилтиоэтил)-5-изобутилтиоэтокси-6-метилура-цила на иммунную систему изучали на моделях гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ) к 2,4-динитрофторбензолу (ДНФБ) воспроизводили сенсибилизацией животных нанесением на кожу живота 25 мкл 0,5%-ного раствора ДФНБ в смеси ацетона с оливковым маслом (4:1). Через 5 сут после сенсибилизации на предварительно измеренные микрометром уши капали по 20 мкл 0,25% -ного раствора ДНФБ. Реакцию оценивали по отеку уха через 24 ч после нанесения разрешающей дозы ДФНБ. Соединение вводили в дозе 40 мг/кг (1/10 от ЛД50) в течение 4 сут, начиная с первого дня после сенсибилизации. Структурный аналог соединения метилурацил вводили в общепринятой дозе (200 мг/кг).

Влияние соединения 11-89-3 на реакцию ГЗТ у мышей дано в табл.1.

Значение прироста толщины ушей в опытной и контрольной группах одинаковы, что позволяет говорить об отсутствии у соединения 11-89-3 супрессирующего влияния на клеточное звено иммунитета, в отличие от структурного аналога метилурацила, который достоверно стимулировал реакцию ГЗТ к ДНФБ.

Влияние соединения 11-89-3 на образование АОК в селезенках беспородных мышей-самцов приведены в табл.2.

Соединение 11-89-3 [1,3-бис(изобутилтиоэтил)-5-изобутилтиоэтокси-6-метилура-цил] существенно стимулирует образование АОК, являясь более активным (Р < 0,05) ( в 3 раза), чем известный препарат 6-метилурацил, не влияя на массу селезенки и не увеличивая, в отличие от 6-метилурацила, количества силеноцитов.

Так как соединение 11-89-3 увеличивает число АОК, авторами проведено дополнительное исследование влияния данного вещества на титры гемагглютининов. Титр гемагглютинации определяли по общепринятой методике.

Соединение 11-89-3 вводили в течение 4-х сут после иммунизации в дозе 1/10 от ЛД50. В качестве препарата сравнения использовали 6-метилурацил в дозе 200 мг/кг в том же режиме введения (см.табл.3).

Соединение 11-89-3 [1,3-бис(изобутилэтил)-5-изобутилтиоэтокси-6-метилурацил] аналогично 6-метилурацилу увеличивает титры гемагглютининов, что еще раз подтверждает стимулирующее влияние вещества 11-89-3 на гуморальный иммунный ответ.

Таким образом, 1,3-бис(изобутилтиоэтил)-5-изобутилтиоэтокси-6-метилурацил активнее в 3 раза (число АОКх106 спленоцитов 2289,0278,5), 6-метилурацила (число АОКх106 спленоцитов 75,328,6), соединение не влияет на массу селезенки и не увеличивает, в отличие от 6-метилурацила, количества спленоцитов, а также аналогично 6-метилурацилу увеличивает титры гемагглютининов, что подтверждает стимулирующее влияние вещества 11-89-3 на гуморальный иммунный ответ.

Данное изобретение иллюстрируется примерами.

П р и м е р 1. 1,3-Бис(изобутилтиоэтил)-5-изобутилтиоэтокси-6-метилурацил.

В трехгорлую колбу емкостью 1000 мл, снабженную механической мешалкой, обратным холодильником, капельной воронкой, заливают 250 мл воды, присыпают 61 г 82%-ного едкого кали (0,9 моль), приливают 250 мл спирта и присыпают 42,9 г (0,3 моль) 5-гидрокси-6-метилурацила при перемешивании. К полученному гомогенному раствору прибавляют по каплям 152,5 г (1,0 моль) -хлорэтилизобутилсульфида в течение 1 ч, нагревают до 90о и при этой температуре перемешивают 4 ч, следя за окончанием реакции по изменению рН (в начале рН 8-9, по окончании реакции рН 7-6). Реакционную смесь охлаждают, отделяют верхний слой, водный экстрагируют эфиром (3х100 мл), соединяют с основным слоем, отгоняют эфир на роторном испарителе ИР-1М, остаток сушат бензолом и получают 140,6 г (95%) полукристаллической массы, из которой отфильтровывают кристаллы, маточник переносят в колбу Кляйзена, отгоняют непрореагировавший -хлорэтилизобутил- сульфид (20,02) при температуре бани 140-200о/3 мм рт.ст. и получают 62,1 г (42,18%) 1,3-бис-изобутилтиоэтил)-5-изобутилтиоэт- окси-6-метилурацила, представляющего собой светло-желтую жидкость с nD20 1,5320, хорошо растворимую в хлороформе, бензоле, эфире, ацетоне, спирте и нерастворимую в воде.

Найдено,%: C 56,00; H 8,84; N 5,70; S 20,44.

C23H42N2O3S3

Вычислено,%: C 56,29; H 8,63; N 5,75; S 19,6; O 9,78.

ИК-спектр (, см-1): 740 (RCH2S; 1000 (C = C, RCH = CHR); 1090, 1120 (C-O-C); 1240 (); 1090, 1120, 1140, 1240, 1340 (C-N); 1380, 1390 (гем. ); 1440 (); 1650, 1700 (C=O,N-C-O); 2880 (); 2930 (); 3200 (C-N).



ЯМР1Н (, м. д. CDCl3); 0,99 (д, J = 6,64; 18Н6д); 1,8 (м, 3H); 2,37 (с, 3Нс6); 2,465 (д, J = 6,85; 4Н2в); 2,5 (д, J = 5,93; 2Н1в); 2,74 (сикст. , J = 6,57; 4Н2б); 2,82 (сикст. J = 7,14; 2Нб); 4,0 (т, J = 7,96; 6H).

Биологическая активность 1,3-бис(изобутилтиоэтил)-5-изобутилтиоэтокси-6-мети- лурацил (11-89-3) иллюстрируется следующими примерами.

П р и м е р 2. В качестве модели клеточного иммунитета использовали реакцию гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ) у беспородных мышей. Реакцию ГЗТ воспроизводили обычным способом, сенсибилизируя мышей нанесением на выстриженный живот 25 мкл 4,5%-ного раствора ДНФБ в смеси ацетона с оливковым маслом (4:1). Через 5 сут после сенсибилизации на предварительно измеренные микрометром уши капали по 20 мкл 0,25%-ного раствора ДНФБ. Реакцию оценивали по отеку уха через 24 ч после нанесения разрешающей дозы ДНФБ. Соединение вводили в дозе 40 мг/кг (1/10 ЛД50) в течение 4 сут, начиная с первого дня после сенсибилизации. Структурный аналог соединения 6-метилурацил вводили в общепринятой дозе (200 мг/кг) по той же схеме.

1,3-Бис(изобутилтиоэтил)-5-изобутилти- оэтокси-6-метилурацил (11-89-3) не оказывает супрессивного действия на клеточное звено иммунного ответа. При дозе 40 мг/кг прирост толщины ушей (в %) составляет 46,55,5, в отличие от структурного аналога 6-метилурацила, который достоверно стимулирует реакцию ГЗТ к ДНФБ. Так, при дозе 200 мг/кг прирост толщины ушей (в %) составляет 60,24,8 (см.табл.1).

П р и м е р 3. В качестве модели первичного иммунного ответа использовали метод локального гемолиза в геле N.K.Jerne, A.A. Nordin в модификации A.J. Cunningham.

Беспородных мышей иммунизировали внутрибрюшинным введением нормиммунной дозы (2х108) эритроцитов барабана за 4 полных суток до опыта. Взвесью спленоцитов эритроцитов барабана и комплемента морской свинки в соотношении 1:1:2 заполняли камеры. После инкубации в термостате при температуре 37оС в течение 1,5 часа подсчитывали визуально число зон гемолиза, соответствующее количеству антителообразующих клеток (АОК). Производили перерасчет АОК на 106спленоцитов. Соединение вводили на +1-+4 сутки после иммунизации в дозе 1/10 ЛД50 (140 мг/кг). Для 11-89-3 число АОКх106 спленоцитов равно 2289,0278,5. В качестве препарата сравнения использовали 6-метилурацил в дозе 200 мг/кг в том же режиме введения, число АОКх106спленоцитов равно 751,328,6.

1,3-Бис(изобутилтиоэтил)-5-изобутил- тиоэтокси-6-метилурацил оказывает в 3 раза выше, чем 6-метилурацил, стимулирующее влияние на антителогенез, не увеличивая массу селезенки и не увеличивая, в отличие от структурного аналога 6-метилурацила, количество спленоцитов (см.табл.2).

П р и м е р 4. Исследование влияния данного соединения 11-89-3 на титры гемагглютининов проводили по общепринятой методике.

Соединение 11-89-3 вводили в течение 4 сут после иммунизации в дозе 1/10 от ЛД50. В качестве препарата сравнения использовали 6-метилурацил в дозе 200 мг/кг в том же режиме введения.

1,3-Бис(изобутилтиоэтил)-5-изобутилти- оэтокси-6-метилурацил аналогично 6-метилурацилу увеличивает титры гемагглютининов, что еще раз подтверждает стимулирующее влияние вещества 11-89-3 на гуморальный иммунный ответ (см. табл.3).

П р и м е р 5. Острая токсичность 1,3-бис(изобутилтиоэтил)-5-изобутилтиоэтокси-6-метилурацила (11-89-3) определяли на беспородных мышах обоего пола массой 18-20 г при однократном внутрибрюшинном введении. Вводили дозы от 50 до 1600 мг/кг. После введения токсических доз через 5-10 мин у животных наблюдалось угнетение состояния, вытягивание конечностей, они были малоподвижны, смерть наступила от остановки дыхания.

Параметры токсичности определяли по методу Кербера. При внутрибрюшинном введении соединение 1,3-бис-(изобутилтиоэтил)-5-изобутилтиоэтокси-6-метилурацила ЛД50составляет 400,034,5. На основании классификации токсичности веществ при введении под кожу и брюшную полость данное соединение относится к малотоксичным.

Таким образом, малотоксичное соединение 1,3-бис(изобутилтиоэтил)-5-изобутилтиоэтокси-6-метилурацил характеризуется выраженной иммунотропной активностью, слабо подавляет клеточное звено иммунного ответа и стимулирует антителогенез в 3 раза лучше, чем аналог 6-метилурацил. Соединение 11-89-3 может найти практическое применение как иммуномодулятор, стимулирующий гуморальный иммунитет. 


ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ



1,3-БИС(ИЗОБУТИЛТИОЭТИЛ)-5-ИЗОБУТИЛТИОЭТИЛОКСИ-6-МЕТИЛ-УРАЦИЛ, ПРОЯВЛЯЮЩИЙ ИММУНОТРОПНУЮ АКТИВНОСТЬ.

1,3 - Бис(изобутилтиоэтил)-5-изобутилтиоэтилокси-6-метилурацил формулы



проявляющий иммунотропную активность.