СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ КОМПЛЕКСА ФОСФОЛИПИДОВ

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ КОМПЛЕКСА ФОСФОЛИПИДОВ


RU (11) 2071337 (13) C1

(51) 6 A61K35/60, A61K35/56 

(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ 
Статус: по данным на 27.09.2007 - прекратил действие 

--------------------------------------------------------------------------------

(14) Дата публикации: 1997.01.10 
(21) Регистрационный номер заявки: 93040879/14 
(22) Дата подачи заявки: 1993.08.12 
(45) Опубликовано: 1997.01.10 
(56) Аналоги изобретения: Авторское свидетельство СССР N 1080825, кл. A 61 K 37/22, 1984. 
(71) Имя заявителя: Любченко Сергей Александрович; Исмаилов Низами Алекпер-оглы 
(72) Имя изобретателя: Любченко Сергей Александрович; Исмаилов Низами Алекпер-оглы 
(73) Имя патентообладателя: Любченко Сергей Александрович; Исмаилов Низами Алекпер-оглы 

(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ КОМПЛЕКСА ФОСФОЛИПИДОВ 

Изобретение относится к пищевой, медицинской, фармацевтической и парфюмерно-косметической промышленности, а именно к способам получения комплекса фосфолипидов. Технический результат заключается в обеспечении более высокого выхода фосфолипидов и более высокого содержания в их составе фосфатидилхолина при использовании в качестве сырья икры сельди или промышленных отходов двустворчатых моллюсков. Способ предусматривает измельчение сырья, экстракцию общих липидов органическими растворителями, отделение нелипидных примесей промывкой экстракта и осаждение фосфолипидов, при этом экстракцию общих липидов проводят из икры сельди или промышленных отходов двустворчатых моллюсков смесью хлороформа с этанолом, отделение нелипидных примесей приводят промывкой экстракта 0,5-0,7-ным водным раствором хлористого кальция, затем осаждают примеси путем растворения общих липидов гексане при соотношении 1:5-1:6, после чего раствор перемешивают, осадок примесей общих липидов удаляют центрифугированием, гексановый раствор упаривают, сухой остаток фосфолипидов очищают от примесей путем перерастворения в хлороформе и осаждения фосфолипидов ацетоном при соотношении хлороформного экстракта и ацетона 1:6-1:8, затем полученный раствор отстаивают, фильтруют, осадок промывают ацетоном, сушат, а сухой остаток растворяют в хлороформе и повторно очищают фосфолипиды от примесей хроматографией на колонке с окисью алюминия смесью гексан-эфир уксусной кислоты при соотношении 35:15:1, после чего выделяют фосфатидилэтаноламин последовательно хлороформ-этанолом при соотношении 1: и хлороформ-этанол-концентрированным водным аммиаком при соотношении 1:1,5: 0,14, а затем фосфатидилхолин хлороформ-этанол-концентрированным аммиаком при соотношении 1:1,5:0,28. 


ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ



Изобретение относится к пищевой, медицинской, фармацевтической и парфюмерно-косметической промышленности, а именно к способам получения комплекса фосфолипидов.

Известен способ получения комплекса фосфолипидов из сырья животного происхождения, включая экстракцию общий липидов смесью хлороформа и метанола, отделение нелипидных примесей промывкой экстракта, перерастворение общих липидов и осаждение фосфолипидов (авт. св. N 825084, кл. А 61 К 37/22, А 61 К 35/34, С 07 F 9/10, 1979).

Следующие существенные признаки данного способа совпадают с существенными признаками заявляемого изобретения, а именно: способ получения комплекса фосфолипидов из сырья животного происхождения предусматривает измельчение сырья, экстракцию общих липидов, отделение нелипидных примесей промывкой экстракта и осаждение фосфолипидов.

Указанный способ не обеспечивает высокий выход фосфолипидов и высокое содержание в их составе фосфатидилхолина, которое не превышает 30-50% т.к. в нем отсутствует двукратная очистка фосфолипидов от примесей.

Наиболее близким к изобретению по совокупности признаков аналогом (прототипом) является способ получения комплекса фосфолипидов их сырья животного происхождения, включающий измельчение сырья, экстракцию общих липидов смесь хлороформа с метанолом отделение нелипидных примесей промывкой экстракта, перерастворение общих липидов и осаждение фосфолипидов, при этом экстракцию общих липидов проводят из промышленных отходов головоногих моллюсков, отделение нелипидных примесей проводят путем промывки экстракта 0,09-0,1%-ным водным раствором хлористого натрия, перерастворяют общие липиды в органическом растворителе, а фосфолипиды осаждают ацетоном при соотношении растворителя и ацетона 1:5-1:10 в течение 1-2 час, кроме того, в качестве растворителя на стадии перерастворения общих липидов используют петролейный эфир, диэтиловый эфир, хлороформ или этиловый спирт (авт. св. N 1080825, кл. A 61 K 37/22, 1982).

Следующие существенные признаки данного способа совпадают с существенными признаками заявляемого изобретения, а именно: Способ получения комплекса фосфолипидов из сырья животного происхождения предусматривает измельчение сырья, экстракцию общих липидов, отделение нелипидных примесей промывкой экстракта и осаждение фосфолипидов.

Указанный способ не обеспечивает высокий выход фосфолипидов и высокое содержание в их составе фосфатидилхолина при использовании в качестве сырья икры сельди или промышленных отходов двустворчатых моллюсков.

Задача, на решение которой направлено заявляемое изобретение, заключается в обеспечении более высокого выхода фосфолипидов и более высокого содержания в их составе фосфатидилхолина при использовании в качестве сырья икры сельди при промышленных отходов двустворчатых моллюсков.

В заявляемом способе получения комплексам фосфолипидов технический результат заключается в обеспечении более высокого выхода фосфолипидов и более высокого содержания их в составе фосфатидилхолина при использовании в качестве сырья икры сельди или промышленных отходов двустворчатых моллюсков.

В предлагаемом способе технический результат достигается тем, что в способе получения комплекса фосфолипидов из сырья животного происхождения, предусматривающем измельчение сырья, экстракцию общих липидов органическими растворителями, отделение нелипидных примесей промывкой экстракта и осаждение фосфолипидов, при этом экстракцию общих липидов проводят из икры сельди или промышленных отходов двустворчатых моллюсков смесью хлороформа с этанолом, отделение нелипидных примесей проводят промывкой экстракта 0,5-0,7%-ным водным раствором хлористого кальция, затем осаждают примеси и путем растворения общих липидов гексане при соотношении 1:5-1:6, после чего раствор перемешивают, отстаивают, осадок примесей общих липидов удаляют центрифугированием, гексановый раствор упаривают, сухой остаток фосфолипидов очищают от примесей путем перерастворения в хлороформе и осаждении фосфолипидов ацетоном при соотношении хлороформного экстракта и ацетона 1:6-1:8, затем полученный раствор отстаивают фильтруют осадок промывают ацетоном, сушат а сухой остаток растворяют в хлороформе и повторно очищают фосфолипиды от примесей хроматографией на колонке с окисью алюминия смесью гексан-эфир уксусной кислоты при соотношении 35:15:1, после чего выделяют фосфатидилэтаноламин последовательно хлороформ этанолом при соотношении 1:1 и хлороформ-этанол-концентрированным водным аммиаком при соотношении 1:1,5:0,15, а затем фосфатидилхолин хлороформ-этанол-концентрированным водным аммиаком при соотношении 1:1,5:0,3.

Сопоставительный анализ с наиболее близким аналогом (прототипом) позволяет сделать вывод, что заявляемый способ получения комплекс фосфолипидов, отличается тем, что экстракцию общих липидов проводят из икры сельди или промышленных отходов двустворчатых моллюсков смесью хлороформа с этанолом, отделение нелипидных примесей проводят промывкой экстракта 0,5-0,7%-ным водным раствором хлористого кальция, затем осаждают примеси путем растворения общих липидов в гексане при соотношении 1:5-1:6, после чего раствор перемешивают, отстаивают, осадок примесей общих липидов удаляют центрифугированием, гексановый раствор упаривают, сухой остаток фосфолипидов очищают от примесей путем перерастворения в хлороформе и осаждения фосфолипидов ацетоном при соотношении хлороформного экстракта и ацетона 1:6-1:8, затем полученный раствор отстаивают, фильтруют, осадок промывают ацетоном, сушат, а сухой остаток растворяют в хлороформе и повторно очищают фосфолипиды от примесей хроматографией на колонке с окисью алюминия смесью гексан-эфир-уксусной кислоты при соотношении 35:15:1, после чего выделяют фосфатидилэтаноламин последовательно хлороформ-этанолом при соотношении 1:1 и хлороформ-этанол-концентрированным водным аммиаком при соотношении 1:1,5:0,15, а затем фосфатидилхолин хлороформ-этанол-концентрированным водным аммиаком при соотношении 1:1,5: 0,3.

Все существенные признаки, отличительные от наиболее близкого аналога (прототипа), являются достаточными во всех случаях, на которые испрашивается объем правовой охраны.

Сырье измельчают для обеспечения более полной экстракции общих липидов органическими растворителями.

Для более полного отделения нелипидных примесей проводят промывку экстракта 0,5-0,7%-ным водным раствором хлористого кальция затем осаждают примеси путем растворения общих липидов в гексане при соотношении 1:5-1:6, после чего раствор перемешивают, отстаивают, осадок примесей общих липидов удаляют центрифугированием, гексановый раствор упаривают.

Для обеспечения более высокого выхода фосфолипидов осуществляют их двукратную очистку от примесей сначала путем перерастворения в хлороформе и осаждения фосфолипидов ацетоном при соотношении хлороформного экстракта и ацетона 1: 6-1: 8, затем полученный раствор отстаивают, фильтруют, осадок промывают ацетоном сушат, а сухой остаток растворяют в хлороформе и повторно очищают фосфолипиды от примесей хроматографией на колонке с окисью алюминия смесью гексан-эфир уксусной кислоты при соотношении 35:15:1.

Для более полного выделения фосфатидилэтаноламина и фосфатидилхолина сначала выделяют фосфатидилэтаноламин хроматографией на колонке с окисью алюминия последовательно хлороформ-этанолом при соотношении 1:1 и хлороформ-этанол-концентрированным водным аммиаком при соотношении 1:1,5:0,15, затем фосфатидилхолин хлороформ-этанол-концентрированным водным аммиаком при соотношении 1:1,5:0,3.

Заявляемый способ осуществляют следующим образом.

В качестве сырья используют икру сельди или промышленные отходы двустворчатых моллюсков. 1 кг измельченного сырья заливают 5 объемами хлороформ-этанола при соотношении 2:1 интенсивно перемешивают в растворе с мешалкой в течение 1,0-1,5 ч при температуре 30-35oC, после чего фильтруют. Фильтрат помещают в холодильник в колбе с притертой пробкой и выдерживают при температуре 0-1oC. К полученному осадку приливают 5 объемов хлороформ-этанола при соотношении 2:1, интенсивно перемешивают в реакторе с мешалкой в течение 1-1,5 ч при температуре 30-35oC, после чего фильтруют. Проводят еще четыре экстракции с указанным способом. Достигают из холодильника колбу с первым экстрактом и выливают его вместе с пятью полученными экстрактами в делительную колонку для отделения нелипидных примесей. Объединенные экстракты промывают 0,2-0,3 объемами 0,5-0,7%-ным водным раствором хлористого кальция путем перемешивания смеси в делительной колонке в течение 30-35 мин. Затем смесь отстаивают в течение 12-14 ч при температуре 0-1oC для разделения фаз и получения двухфазной системы. Верхнюю фазу образовавшейся двухфазной системы сливают. Нижнюю фазу фильтруют, упаривают досуха. Полученный сухой остаток липидов немедленно растворяют в гексане при соотношении сухой остаток общих липидов гексан 1:5-1:6. Раствор интенсивно перемешивают в реакторе с мешалкой в течение 10-15 мин при температуре 0-4oC. Затем смесь выдерживают в течение 2-3 ч для осаждения примесей белков, нейтральных липидов и незначительной части фосфолипидов (например, сфингомиэлина). Осадок удаляют центрифугированием. Гексановый раствор фосфолипидов упаривают досуха и полученный сухой остаток фосфолипидов немедленно перерастворяют в хлороформе при соотношении сухой остаток фосфолипидов-хлороформ 1:5-1:6 и осаждают фосфолипиды ацетоном при соотношении хлороформный экстракт-ацетон 1:6-1:8. Полученный раствор отстаивают в течение 1-2 ч при температуре от -10 до -7oC. Выпавший осадок отделяют фильтрацией и промывают его три раза ацетоном при соотношении осадок-ацетон 1:3-1:4. Осадок высушивают от ацетона при температуре 15-20oC в течение 15-20 мин и полученный сухой остаток фосфолипидов растворяют в хлороформе при соотношении сухой остаток-хлороформ 1:5-1:6. Для элюирования полученного хлороформного раствора фосфолипидов используют хроматографическую колонку, в которую загружают окись алюминия при соотношении сухой остаток фосфолипидов-окись алюминия 1:20. Диаметр колонки 4,5 см, высота адсорбционного столба 35 см, объем 556 мл.

Хлороформный раствор фосфолипидов вносят в колонку и начинают процесс элюирования. Для элюирования используют: 10 колоночных объемов (5560 мл) смеси гексан-эфир-уксусной кислоты при соотношении 35:15:1. Вымывают все остатки примеси нейтральных липидов.

20-25 колоночных объемов (11120-13900 мл) смеси хлороформ-этанола при соотношении 1:1. Вымывают фосфатидилэтаноламин.

На выходе хроматографической колонки смесь собирают в колбы с притертыми пробками. Заполненные колбы помещают в холодильник при температуре 0-1oC. После окончания элюирования хроматографически определяют состав фосфолипидов в каждой колбе. Объединяют смеси с одинаковыми компонентами фосфолипидов и упаривают досуха, для получения фосфатидилэтаноламина. 10-20 колоночных объемов (5560-11120 мл) смеси хлороформ-этанол-концентрированного водного аммиака при соотношении 1:1,5:0,14.

Вымывают остатки фосфатидилэтаноламина. 10-20 колоночных объемов (5560-11120 мл) смеси хлороформ-этанол-концентрированного водного аммиака (при соотношении 1:1,5:0,28).

Вымывают фосфатидилхолин. На выходе хроматографической колонки смесь собирают в колбы с притертыми пробками. Заполненные колбы помещают в холодильник при температуре 0-1oC. После окончания элюирования хроматографически определяют состав фосфолипидов в каждой колбе. Объединяют смеси с одинаковыми компонентами фосфолипидов и упаривают досуха для получения фосфатидилхолина.

Пример 1. В качестве сырья используют внутренности двустворчатых моллюсков, включающий гонады и мозг. 1 кг измельченного сырья заливают 5000 мл хлороформ-этанола при соотношении 2:1 интенсивного перемешивают в реакторе с мешалкой в течение 1 ч при температуре 30oC, после чего фильтруют. Фильтрат помещают в холодильник в колбе с притертой пробкой и выдерживают при температуре 0oC. К полученному осадку приливают 5000 мл хлороформ-этанола при соотношении 2:1, интенсивно перемешивают в реакторе с мешалкой в течение 1 ч при температуре 30oC, после чего фильтруют. Проводят еще четыре экстракции указанным способом. Достают из холодильника колбу с первым экстрактом и вымывают его вместе с пятью полученными экстрактами в делительную колонку для отделения нелипидных примесей. Объединенные экстракты промывают 0,2 объемами 0,5% -ного раствора хлористого кальция путем перемешивания смеси в делительной колонке в течение 30 мин. Затем смесь отстаивают в течение 12 ч при температуре 0oC для разделения фаз и получения двухфазной системы. Верхнюю фазу образовавшейся двухфазной системы сливают. Нижнюю фазу фильтруют, фильтрат упаривают досуха на роторном испарителе при температуре 35oC в токе азота и остаточном давлении 15 мм рт.ст.

Полученный сухой остаток общих липидов 30 г немедленно растворяют в 150 мл гексана (при соотношении сухой остаток общих липидов-гексан 1:5). Раствор интенсивно перемешивают в реакторе с мешалкой в течение 10 мин при температуре 0oC. Затем смесь выдерживают в течение 2 ч для осаждения примесей белков, нейтральных липидов и незначительной части фосфолипидов (например, сфингомиэлина). Осадок удаляют центрифугированием. Гексановый раствор фосфолипидов упаривают досуха на роторном испарителе при температуре 35oC в токе азота и остаточном давлении 15 мм рт.ст. Полученный сухой остаток фосфолипидов 5 г немедленно перерастворяют в 50 мл хлороформа (при соотношении сухой остаток фосфолипидов-хлороформ 1:10) и осаждают фосфолипиды 300 мл ацетона (при соотношении хлороформный экстракт-ацетон 1:6).

Полученный раствор отстаивают в течение 1 часа при температуре -10oC. Выпавший осадок отделяют фильтрацией и промывают его три раза 150 мл ацетона (при соотношении осадок-ацетон 1:3). Осадок высушивают от ацетонам при температуре 15oC в течение 20 мин и полученный сухой остаток фосфолипидов 3,7 г растворяют в 20 мл хлороформа (при соотношении сухой остаток-хлороформ 1:5).

Для элюирования полученного хлороформного раствора фосфолипидов используют хроматографическую колонку, в которую загружают 80 г окиси алюминия (при соотношении сухой остаток фосфолипидов-окись алюминия 1:20). Диаметр колонки 4,5 см, высота адсорбционного столба 35 см, объем 556 мл.

Хлороформный раствор фосфолипидов вносят в колонку и начинают процесс элюирования.

Для элюирования используют: 5560 мл (10 колоночных объемов) смеси гексан-эфир-уксусной кислоты (при соотношении 35:15:1). Вымывают все остатки примесей нейтральных липидов. 11120 мл (20 колоночных объемов) смеси хлороформ-этанола (при соотношении 1:1). Вымывают фосфатидилэтаноламин.

На выходе хроматографической колонки смесь собирают в колбы с притертыми пробками, емкостью 25 мл. Заполненные колбы помещают в холодильник при температуре 0oС. После окончания элюирования хроматографически определяют состав фосфолипидов в каждой колбе. Объединяют смеси с одинаковыми компонентами фосфолипидов и упаривают досуха на роторном испарителе при температуре 35oC в токе азота и остаточном давлении 15 мл рт.ст. Выход около 1,1 г фосфатидилэтаноламина.

5560 мл (10 колоночных объемов) смеси хлороформ-этанол-концентрированного водного аммиака (при соотношении 1:1,5:0,14). Вымывают остатки фосфатидилэтаноламина. Выход около 0,1 г фосфатидилэтаноламина.

5560 мл (10 колоночных объемов) смеси хлороформ-этанол-концентрированного водного аммиака (-) (при соотношении 1:1,5:0,28). Вымывают фосфатидилхолин.

На выходе хроматографической колонки смесь собирают в колбы с притертыми пробками, емкостью 25 мл. Заполненные колбы помещают в холодильник при температуре 0oC. После окончания элюирования хроматографически определяют состав фосфолипидов в каждой колбе. Объединяют смеси с одинаковыми компонентами фосфолипидов и упаривают досуха на роторном испарителе при температуре 35oC в токе азота и остаточном давлении 15 мл рт.ст. Выход около 2,35 г фосфатидилхолина (60%).

Пример 2. В качестве сырья используют икру сельди 1 кг измельченного сырья заливают 5000 мл хлороформ-этанола при соотношении 2:1, интенсивно перемешивают в реакторе с мешалкой в течение 1,5 ч при температуре 35oC, после чего фильтруют. Фильтрат помещают в холодильник в колбе с притертой пробкой и выдерживают при температуре 1oC. К полученному осадку приливают 5000 мл хлороформ-этанола при соотношении 2:1, интенсивно перемешивают в реакторе с мешалкой в течение 1,5 ч при температуре 35oC, после чего фильтруют. Проводят еще четыре экстракции указанным способом. Достают из холодильника колбу с первым экстрактом и выливают его вместе с пятью полученными экстрактами в делительную колонку для отделения нелипидных примесей.

Объединенные экстракты промывают 0,3 объемами 0,7%-ным водным раствором хлористого кальция путем перемешивания смеси в делительной колонке в течение 35 мин. Затем смесь отстаивают в течение 14 ч при температуре 1oC для разделения фаз и получения двухфазной системы. Верхнюю фазу образовавшейся двухфазной системы сливают. Нижнюю фазу фильтруют, фильтрат упаривают досуха на роторном испарителе при температуре 35oC в токе азота и остаточном давлении 15 мм рт.ст.

Полученный сухой остаток общих липидов 92 г немедленно растворяют в 550 мл гексана (при соотношении сухой остаток общих липидов-гексан 1:6). Раствор интенсивно перемешивают в реакторе с мешалкой в течение 15 мин при температуре 4oC. Затем смесь выдерживают в течение 3 ч для осаждения примесей белков, нейтральных липидов и незначительной части фосфолипидов (например, сфингомиэлина). Осадок удаляют центрифугированием.

Гексановый раствор фосфолипидов упаривают досуха на роторном испарителе при температуре 35oC в токе азота и остаточном давлении 15 мл.рт.ст. Полученный сухой остаток фосфолипидов 57 г немедленно перерастворяют в 285 мл хлороформа (при соотношении сухой остаток фосфолипидов-хлороформ 1:5) и осаждают фосфолипиды 2300 мл ацетона (при соотношении хлороформный экстракт-ацетон 1: 8). Полученный раствор отстаивают в течение 2 ч при температуре -7oC. Выпавший осадок отделяют фильтрацией и промывают его три раза 240 мл ацетона (при соотношении осадок-ацетон 1:4). Осадок высушивают от ацетона при температуре 20oC в течение 15 мин и полученный сухой остаток фосфолипидов 50 г растворяют в 300 мл хлороформа (при соотношении сухой остаток хлороформ 1:6).

Для элюирования полученного хлороформного раствора фосфолипидов используют хроматографическую колонку, в которую загружают 1000 г окиси алюминия (при соотношении сухой остаток фосфолипидов-окись алюминия 1:20). Диаметр колонки 4,5 см, высота адсорбционного столба 35 см, объем 556 мл. Хлороформный раствор фосфолипидов вносят в колонку и начинают процесс элюирования.

Для элюирования используют:

5560 мл (10 колоночных объемов) смеси гексан-эфир-уксусной кислоты при соотношении 35:15:1. Вымывают все остатки примесей нейтральных липидов.

13900 мл (25 колоночных объемов) смеси хлороформ-этанола при соотношении 1:1. Выливают фосфатидилэтаноламин.

На выходе хроматографической колонки смесь собирают в колбы с притертыми пробками, емкостью 25 мл. Заполненные колбы помещают в холодильник при температуре 1oC. После окончания элюирования хроматографически определяют состав фосфолипидов в каждой колбе. Объединяют смеси с одинаковыми компонентами фосфолипидов и упаривают досуха на роторном испарителе при температуре 35oC в токе азота и остаточном давлении 15 мл рт.ст. Выход около 10 г фосфатидилэтаноламина

11120 мл (20 колоночных объемов) смеси хлороформ-этанол-концентрированного водного аммиака (при соотношении 1:1,5:0,14). Вымывают остатки фосфатидилэтаноламина. Выход около 1 г фосфатидилэтаноламина.

11120 мл (20 колоночных объемов) смеси хлороформ-этанол-концентрированного водного аммиака (при соотношении 1:1,5:0,28). Вымывают фосфатидилхолин.

На выходе хроматографической колонки смесь собирают в колбы с притертыми пробками емкостью 25 мл. Заполненные колбы помещают в холодильник при температуре 1oC. После окончания элюирования хроматографически определяют состав фосфолипидов в каждой колбе. Объединяют смеси с одинаковыми компонентами фосфолипидов и упаривают досуха на роторном испарителе при температуре 35oC в токе азота и остаточном давлении 15 мл рт.ст. Выход около 28 г фосфатидилхолина (56%).

Использование предлагаемого способа позволяет получать из икры сельди или промышленных отходов двустворчатых моллюсков комплекс фосфолипидов с содержанием фосфатидилэтаноламина, равным 22-32% и фосфатидилхолина 55-60% 


ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ



Способ получения комплекса фосфолипидов из сырья животного происхождения, включающий измельчение сырья, экстракцию общих липидов органическими растворителями, отделение нелипидных примесей промывкой экстракта и осаждение фосфолипидов, отличающийся тем, что экстракцию общих липидов проводят из икры сельди или промышленных отходов двустворчатых моллюсков смесью хлороформа с этанолом, отделение нелипидных примесей проводят промывкой экстракта 0,5 0,7%-ным водным раствором хлористого кальция, затем осаждают примеси путем растворения общих липидов в гексане при соотношении 1 5,0 1,6, после чего раствор перемешивают, отстаивают, осадок примесей общих липидов удаляют центрифугированием, гексановый раствор упаривают, сухой остаток фосфолипидов очищают от примесей путем перерастворения в хлороформе и осаждения фосфолипидов ацетоном при соотношении хлороформного экстракта и ацетона 1 6 8, затем полученный раствор отстаивают, фильтруют, осадок промывают ацетоном, сушат, а сухой осадок растворяют в хлороформе и повторно очищают фосфолипиды от примесей хроматографией на колонке с окисью алюминия смесью гексан-эфир-уксусной кислоты при соотношении 35 15 1, после чего выделяют фосфатидиэтаноламин последовательно хлороформ-этанолом при соотношении 1 1 и хлороформ-этанол-концентрированным водным аммиаком при соотношении 1 1,5 0,14, а затем фосфатидилхолин хлороформ-этанол-концентрированным водным аммиаком при соотношении 1 1,5 0,28.