СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ БРУЦЕЛЛЕЗНОГО АНТИГЕНА

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ БРУЦЕЛЛЕЗНОГО АНТИГЕНА


RU (11) 2086258 (13) C1

(51) 6 A61K39/10 

(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ 
Статус: по данным на 17.09.2007 - действует 

--------------------------------------------------------------------------------

(14) Дата публикации: 1997.08.10 
(21) Регистрационный номер заявки: 93020804/14 
(22) Дата подачи заявки: 1993.04.21 
(45) Опубликовано: 1997.08.10 
(56) Аналоги изобретения: ФС 42-315 ВО-90 на диагностикум эритроцитарный бруцеллезный антигенный. 
(71) Имя заявителя: Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им.Н.Ф.Гамалеи 
(72) Имя изобретателя: Драновская Е.А.; Желудков М.М. 
(73) Имя патентообладателя: Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им.Н.Ф.Гамалеи 

(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ БРУЦЕЛЛЕЗНОГО АНТИГЕНА 

Изобретение относится к биотехнологии, в частности, к медицине и ветеринарии и может быть использовано для производства бруцеллезных диагностикумов. Для получения бруцеллезного антигена используют вакцинный штамп B. abortus 19. Использование этого штамма позволяет снизить биологическую опасность, получить полноценный антиген. Кроме того, данный способ позволяет упростить технологию получения антигена, исключить из нее обработку микробных клеток большими количествами взрывоопасных ацетона и эфира. 2 табл. 


ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ



Изобретение относится к биотехнологии, в частности, к медицине и ветеринарии и может быть использовано для производства бруцеллезных диагностикумов.

Известен способ получения бруцеллезного антигена, используемый для диагностики бруцеллеза, включающий культивирование бруцелл, отмывание микробных клеток, обработку фенолом и окрашивание аналог (ВФС 42-62 Вс-86 на диагностикум бруцеллезный жидкий для реакции агглютинации).

Однако антиген, полученный известным способом, используется только для постановки реакции агглютинации, с помощью которой обнаруживают агглютинины в сыворотке больных бруцеллезом людей и животных.

Известен также способ получения бруцеллезного антигена, включающий выращивание бруцелл, отмывку микробных клеток, обработку их ацетоном, эфиром, высушивание в вакуум-эксикаторе, экстракцию трихлоруксусной кислотой (ТХУ), высушивание, обработку щелочью, осаждение ацетоном, высушивание. Антиген, полученный данным способом, используют для выявления гемагглютининов в сыворотках больных бруцеллезом людей и животных в реакции непрямой гемагглютинации (РНГА) прототипа (ФС 42-315 ВС-90г на диагностикум эритроцитарный бруцеллезный антигенный).

Однако бруцеллезный антиген, полученный по данному способу, имеет недостатки при его получении: низкий выход антигена; используют вирулентный штамм В. abortus 99 и/или вакцинный штамм В. abortu 19-ВА, который не стабилен, подвержен диссоциации и имеет неполноценную антигенную структуру; сложная технология; используют большие объемы взрывоопасных ацетона (до 10 л) и эфира, и время обработки биомассы составляет 22 сут. Время для получения бруцеллезного антигена от момента культивирования составляет 36 сут.

Предлагаемый способ позволяет повысить выход антигена, снизить биологическую опасность и/или избежать использования штамма с неполноценной антигенной структурой, упростить технологию, сократить время получения антигена.

Это достигается использованием вакцинного штамма В. abortus 19, исключением из технологии обработки микробных клеток эфиром, ТХУ и 10- кратным уменьшением количества ацетона.

Пример. Бруцеллы вакцинного штамма В. abortus 19 выращивают в течение 48 ч, смывают микробные клетки (м. кл.) нейтральным физиологическим раствором (НФГ), центрифугируют, промывают трехкратно осадок с помощью НФР при центрифугировании, ресуспендируют осадок до получения суспензии, содержащей 200 млрд. м. кл. в 1 мл, добавляют равный объем раствора 1N NaOH при постоянном перемешивании в течение 30 мин, нейтрализуют 2N уксусной кислотой, проводят осаждение антигена ацетоном и/или этиловым спиртом в соотношении объемов 1: 5, осадок отделяют центрифугированием, промывают двукратно ацетоном и/или этиловым спиртом и сушат в вакуум эксикаторе и/или лиофилизируют.

В табл. 1 представлена сравнительная характеристика предлагаемого способа и известного способа прототипа.

В табл. 2 дана сравнительная иммунохимическая характеристика и основной состав бруцеллезных антигенов, полученных предлагаемым способом и известным (прототип).

Предлагаемый способ позволяет повысить выход бруцеллезного антигена в 3 раза, ускорить процесс получения антигена в 5 раз (с 36 сут до 7 сут), получать полноценный антиген белковолипополисахаридной природы, который может быть использован не только как антиген-липополисахарид в прототипе для постановки РНГА и РНАт, но и в РАГА и для получения высоко активной и специфичной сыворотки, а также снизить использование ацетона с 7-10 л до 500-700 мл и исключить применение эфира и ТХУ. 


ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ



Способ получения бруцеллезного антигена, включающий выращивание бруцелл, их отмывание, экстракцию антигена, обработку щелочью, осаждение целевого продукта ацетоном и высушивание, отличающийся тем, что используют вакцинный штамм B. abortus 19, экстракцию осуществляют обработкой промытых клеток щелочью, нейтрализуют уксусной кислотой, а осаждение целевого продукта проводят ацетоном или спиртом.