СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ ТЕЧЕНИЯ ИШЕМИЧЕСКОГО ИНСУЛЬТА

СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ ТЕЧЕНИЯ ИШЕМИЧЕСКОГО ИНСУЛЬТА


RU (11) 2236685 (13) C1

(51) 7 G01N33/577 

(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ 
Статус: по данным на 07.09.2007 - может прекратить свое действие 

--------------------------------------------------------------------------------

(14) Дата публикации: 2004.09.20 
(21) Регистрационный номер заявки: 2003109484/15 
(22) Дата подачи заявки: 2003.04.04 
(24) Дата начала отсчета срока действия патента: 2003.04.04 
(45) Опубликовано: 2004.09.20 
(56) Аналоги изобретения: RU 2195672 С2, 27.12.2002. KRUPINSKI J. et al. Immunochemical studies of cellular reaction in human ischemic brain stroke. MAB and CD68 stains macrophages, astrocytes and microglial cells in infarcted area, Folia Neuropathol, 1996, 34(1), p.17-24. БУРЦЕВ Е.М. и др. Изменения гемостаза и иммунитета в остром периоде ишемического инсульта. Инсульт: приложение к журналу "Журнал неврологии и психиатрии им. С.С.Корсакова", 2001, №3, с.41-44. 
(72) Имя изобретателя: Герасимова М.М. (RU); Медведева С.Л. (RU); Медведев С.В. (RU); Герасимов С.М. (RU) 
(73) Имя патентообладателя: Государственное учреждение Тверская государственная медицинская академия (RU) 
(98) Адрес для переписки: 170642, г.Тверь, ул. Советская, 4, ГУ Тверская медакадемия, патентный отдел 

(54) СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ ТЕЧЕНИЯ ИШЕМИЧЕСКОГО ИНСУЛЬТА 
Изобретение относится к области медицины, а именно неврологии, и касается прогнозирования течения ишемического инсульта путем проведения иммунофенотипирования лимфоцитов. Сущность способа состоит в том, что на 1, 10, 21-й день от момента развития ишемического инсульта определяют средний уровень CD95-лимфоцитов, %, при значении уровня CD95-лимфоцитов на 1-й день более 7,2±2,8% и возврате к норме на 21-й день прогнозируют благоприятный исход, при уровне CD95-лимфоцитов выше 7,2±2,8% и сохранении среднего уровня показателя на 21-й день - прогнозируют благоприятный прогноз для жизни и неблагоприятный для восстановления неврологического дефицита, а при значении среднего показателя CD95-лимфоцитов выше 29,12±3,1% - прогнозируют неблагоприятный прогноз для жизни. Техническим результатом является разработка способа, обеспечивающего высокую точность прогноза, позволяющего проводить адекватную терапию. 1 табл. 



ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ


Изобретение относится к медицине, а именно к неврологии. Острые нарушения мозгового кровообращения (ОНМК) являются важнейшей медико-социальной проблемой, что обусловлено их высокой долей в структуре заболеваемости и смертности населения, значительными показателями временных трудовых потерь и первичной инвалидности. В России заболеваемости цереброваскулярными болезнями составляет около 400 человек на 100 тыс. населения. Показатель смертности за последние 15 лет возросли на 18% и достигли 280 человек на 100 тыс. населения. Смертность от сосудистых заболеваний мозга в нашей стране занимает 2-е место, что не намного уступает смертности от сердечно-сосудистых заболеваний. Поэтому прогнозирование течения инсульта имеет большое значение в практической неврологии.

В качестве прототипа авторы предлагают “Способ прогнозирования течения ишемического инсульта” (патент №2195672 от 30.03. 2001 г., бюллетень №36 от 27.12.2002 г. М.М.Герасимовой, Г.Н.Жданова и Ю.В.Антипиной), заключающийся в определении в сыворотке крови больных с ишемическим инсультом уровня анти-ДНК способом иммуноферментного анализа. С этой целью авторы исследовали сыворотку крови больных на 1,10 и 21-й день заболевания с последующим проведением клинико-иммунологического анализа. Было достоверно (р0,05) выявлено, что при повышении уровня анти-ДНК на 1-й день в пределах 0,196±0,01 ед. ОП и снижения практически к норме на 21-й день - прогноз благоприятный, если на 21-й день уровень анти-ДНК выше показателя контрольной группы и к 21-му дню уровень анти-ДНК держится примерно на том же уровне, то прогноз относительно благоприятен для жизни, но неблагоприятен для восстановления неврологического дефицита. Если же на 1-й день показатель выше 0,601±0,04 ед. ОП, то прогноз неблагоприятный для жизни.

Некоторым недостатком этого способа является малодоступность и дороговизна приборов и тест-систем.

Авторы предлагают свой способ прогнозирования течения ишемического инсульта способом иммунофенотипирования лимфоцитов. Лимфоциты выделяют из гепаринизированной крови центрифугированием на градиенте фиколл-верографии (плотность 1,077 г/мл). 1 мл лимфоцитов в объеме 50 мкл вносят в центрифужные пробирки и добавляют 5 мкл тестируемого моноклонального антитела CD95 с последующим инкубированием в течение 30 мин. Затем добавляют 150 мкл раствора Хенкса и центрифугируют 5 мин при 200 g, удаляют супернатант, затем опять вносят 150 мкл раствора Хенкса, суспендируют и центрифугируют повторно. К осадку добавляют 50 мкл фрагментов овечьих антител, меченных ФИТЦем с последующим суспендированием и инкубированием. Дважды отмытые клетки готовы для просмотра в флюорисцентном микроскопе. Количество антиген позитивных клеток определяют как процент флюорисцирующих клеток при просматривании 200 лимфоцитов за вычетом процента флюорисцирующих клеток, наблюдаемых в препарате отрицательного контроля (приложение к лицензии №42/98-065-0509 от 06.05.1998 г. “Перечень медицинских изделий, разрешенных к использованию обществу с ограниченной ответственностью (ООО) Сорбент, г. Подольск Московской области). Полученный результат сравнивают с результатом контрольной группы, который составил 7,2+2,8% (n=30).

У всех больных производился забор венозной крови с определением среднего уровня CD95 - лимфоцитов на 1, 10 и 21-й день от момента развития ишемического инсульта. Заявители предлагают производить забор крови из локтевой вены на 1-й день от начала заболевания (т.к. это острейший период, с целью подтверждения наличия или отсутствия повышения уровня CD95-лимфоцитов), на 10-й день (т.к. к этому сроку должна наблюдаться максимальная реакция иммунной системы на действие повреждающего фактора - острую ишемию), на 21-й день (с целью наблюдения последствий иммунного процесса).

В условиях клиники обследованы 47 больных. Из них выделено 3 группы в зависимости от исхода заболевания. 1-я группа (12 больных) - больные с практически полным восстановлением неврологического дефицита. У больных этой группы уровень CD95-лимфоцитов на 1-й день составил 11,16±1,79%, на 10-й день - 7,5±2,05%, на 21-й день 5,3±1,13%. 2-я группа (23 человека) - больные, у которых оставался стойкий неврологический дефицит к 21-м суткам. В этой группе уровень CD95 в 1-й день -18,52±3,68%, 10-й день - 17,88±1,11%, на 21-й день - 17,11±0,89%. 3 группа (13 человек) - больные с неблагоприятным прогнозом для жизни (с летальным исходом). В 3-й группе в 1-й день - 29,12±3,1%, на 10-й день - 31,5±1,4%, причем 6 больных не дожили до 10-го дня, а 3 больных - до 21 дня. 4-ую группа - контрольная (30 человек) составили практически здоровые люди, у которых CD95 составил 7,2±2,8%. Наглядно клинико-иммуннологические данные сгруппированы в таблицу.



Достоверность р0,05

Таким образом, было достоверно установлено, что при повышении уровня CD95 в 1-й день более 7,2±2,8% и возвращении практически к норме на 21-й день свидетельствует о благоприятном исходе ОНМК. Если на 1-й день уровень CD95 выше 14,8%, а к 21-му дню этот показатель держится на том же уровне, то прогноз относительно благоприятный для жизни, но не благоприятный для восстановления неврологического дефицита. Если же уровень CD95 выше 29,12±3,01% - прогноз неблагоприятен для жизни.

Способ не требует дорогостоящего оборудования, прост в исполнении, позволяет достоверно прогнозировать течение ишемического инсульта, что помогает своевременно вносить коррекцию в проводимую терапию, а значит, влиять на показатели летальности и инвалидизации.

Клинический пример:

1. Григорьев В.И., 62 года, и/б №9134

Дs: ишемический инсульт в бассейне правой средне-мозговой артерии при атеросклерозе сосудов головного мозга и гипертонической болезни с умеренным левостороннем гемипарезом.

Уровень CD95 крови:

1-й день - 15%

10-й день - 29%

21-й день - 7%.

Подъем CD95 на 10-е сутки совпадает с объективным ухудшением состояния больного, обусловленным углублением очаговой неврологической симптоматики с изменением сознания, однако отрицательная динамика достаточно быстро купирована проведением оптимальной терапии, что привело к значительному улучшению состояния больного и к значительно меньшему неврологическому дефициту на 21-й день (сохранялся легкий, больше рефлекторный левосторонний гемипорез), что соответствует уровню CD95-лимфоцитов (7%) на 21-й день заболевания.

2. Решетов Ю.В., 65 лет, и/б №5195

Дs: основной: ишемический инсульт в правой среднемозговой артерии при гипертонической болезни.

Осложнения: отек и дислокация головного мозга

Соп.дs: последствия ишемического инсульта в правой СМА.

1-й день - уровень CD95-лимфоцитов 25%.

У больного отмечаются высокие цифры СD95-лимфоцитов, что соответствует неблагоприятному течению инсульта. Летальный исход у больного наступил на 3 сутки от начала ишемического инсульта. 



ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ


Способ прогнозирования течения ишемического инсульта, включающий исследование крови, отличающийся тем, что в венозной крови способом иммунофенотипирования лимфоцитов на 1, 10, 21-й день от момента развития ишемического инсульта, определяют средний уровень CD95-лимфоцитов в %, при значении уровня С095-лимфоцитов на 1-й день более (7,2±2,8)% и возврате к норме на 21-й день прогнозируют благоприятный исход, при уровне СD95-лимфоцитов выше (7,2±2,8)% и сохранении среднего уровня показателя на 21-й день - прогнозируют благоприятный прогноз для жизни и неблагоприятный для восстановления неврологического дефицита, а при значении среднего показателя CD95-лимфоцитов выше (29,12±3,1)% - прогнозируют неблагоприятный прогноз для жизни.