СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ АЛКОГОЛИЗМА

СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ АЛКОГОЛИЗМА


RU (11) 2092850 (13) C1

(51) 6 G01N33/52 

(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ 
Статус: по данным на 18.07.2007 - прекратил действие 

--------------------------------------------------------------------------------

(14) Дата публикации: 1997.10.10 
(21) Регистрационный номер заявки: 5017469/14 
(22) Дата подачи заявки: 1991.07.16 
(45) Опубликовано: 1997.10.10 
(56) Аналоги изобретения: Авторское свидетельство СССР N 762858, кл. A 61B 10/00, 1980. 
(71) Имя заявителя: Научно-исследовательский институт психического здоровья Томского научного центра СО РАМН 
(72) Имя изобретателя: Дорофеева Л.И.; Семке В.Я.; Галактионов О.К.; Плешаков В.И. 
(73) Имя патентообладателя: Научно-исследовательский институт психического здоровья Томского научного центра СО РАМН 

(54) СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ АЛКОГОЛИЗМА 

Использование: изобретение относится к медицине, а именно к наркологии, и может быть использовано для лабораторной диагностики алкоголизма. Сущность изобретения: в сыворотке крови пациента с сопутствующей соматической патологией определяют активность ферментов - гамма-глутамилтрансферазы, щелочной фосфатазы, альфа-гидроксибутиратдегидрогеназы и содержание холестерина липопротеидов высокой плотности и при одновременном повышении уровней активности гамма-глутамилтрансферазы, щелочной фосфатазы более чем в 1,25 раза и активности альфа-гидроксибутиратдегидрогеназы и концентрации холестерина липопротеидов высокой плотности более чем в 1,15 раза по сравнению с нормой, т.е. соответственно выше 50 Е/л, 175 Е/л и 1,4 ммоль/л, диагностируют алкоголизм. Новым в данном способе является диагностика алкоголизма по повышению уровня показателей сыворотки крови (по отношению к норме) - активности гамма-глутамилтрансферазы, щелочной фосфатазы, альфа-гидроксибутиратдегидрогеназы и содержания холестерина липопротеидов высокой плотности. 1 табл. 


ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ



Изобретение относится к медицине, а именно к наркологии, и может быть использовано для лабораторной диагностики алкоголизма.

Известен способ диагностики алкоголизма путем определения в крови активности гамма-глутамилтрансферазы, отличающийся тем, что с целью повышения точности в крови дополнительно определяют аспартат-аминотрансферазу и аланин-аминотрансферазу и при увеличении активности названных ферментов относительно нормы диагностируют заболевание (а.с. СССР N 762858, 1980 г. прототип).

Способ осуществляют следующим образом.

Кровь для исследования берут из локтевой вены. После образования сгустка (инкубация при 37oC в течение 15 мин) сыворотку крови отделяют повторным центрифугированием при 3000 об/мин в течение 10 мин. Активность ферментов выражают в международных единицах активности на 1 л сыворотки (Е/л), принимают в расчет М-среднюю арифметическую величину активности соответствующих ферментов, вычисленную по показателям контрольной группы здоровых лиц. Заболевание диагностируют путем выявления пределов колебаний величин активности ферментов в динамике обследования. Диагноз алкоголизма 1-й стадии устанавливают при увеличении активности гамма-глутамилтрансферазы (ГГТ) выше 1,7 М, хотя бы в одной из трех проб, и колебаний ее активности в динамике в сторону увеличения или уменьшения не менее чем на 0,6 М; при этом активность аспартат-аминотрансферазы находится в пределах 0,6-1,8 М, а аланин-аминотрансферазы (АЛАТ) 0,7-1,9 М. Диагноз алкоголизма 2-й стадии устанавливают при увеличении активности хотя бы в одной из трех проб ГГТ - более 2,1 М и АСАТ более 1,6 М, причем активность АЛАТ остается в пределах 0,9-2,2 М. Исследование активности АЛАТ проводится для контроля патологии внутренних органов (печени, сердца, почек, поджелудочной железы).

Однако предложенный способ недостаточно специфичен, так как, с одной стороны, позволяет диагностировать в основном наличие алкогольного гепатита, с другой отклонения в активности рассматриваемых ферментов часто встречаются у людей с воспалительными заболеваниями печени, с патологией сердечно-сосудистой системы, но не страдающих алкоголизмом.

Известен также способ диагностики алкоголизма путем определения среднего объема эритроцитов и активности в крови гамма-глутамилтрансферазы, отличающийся тем, что с целью повышения точности диагностики на ранних стадиях заболевания кровь для исследования забирают в период времени с 8 до 10 или с 14 до 16 ч, дополнительно определяют в сыворотке крови общую активность лактатдегидрогеназы и при одновременном увеличении среднего объема эритроцитов, гамма-глутамилтрансферазы и лактатдегидрогеназы с 8 до 10 ч соответственно выше 88,1 мкм3, 20,4 Е/л, 187 Е/л, с 14 до 16 ч соответственно выше 100 мкм3, 40,4 Е/л, 78 Е/л диагностируют алкоголизм (В.П. Латенков. Авт. св. СССР N 1337055, кл. A 61 B 10/00, 1987 г.).

В представленном способе диагностики обращается внимание на биоритмические циркадные изменения биохимических показателей крови, но не учитывается влияние на них соматических нарушений.

Цель изобретения повышение точности диагностики алкоголизма у больных с сопутствующей соматической патологией.

Указанная цель достигается тем, что в сыворотке крови определяют активность ферментов гамма-глутамилтрансферазы, щелочной фосфатазы, альфа-гидроксибутиратдегидрогеназы и содержание холестерина в составе липопротеинов высокой плотности. При повышении активности гамма-глутамилтрансферазы, щелочной фосфатазы более чем в 1,25 раза и активности альфа-гидроксибутиратдегидрогеназы и концентрации холестерина липопротеинов высокой плотности более чем в 1,15 раза по сравнению с нормой, т.е. соответственно выше 50 Е/л, 175 Е/л, 140 Е/л и 1,4 ммоль/л, диагностируют алкоголизм.

Новым в данном способе является диагностика алкоголизма по повышению уровня показателей сыворотки крови (по отношению к норме) активности гамма-глутамилтрансФеразы, щелочной фосфатазы, альфа-гидроксибутиратдегидрогеназы, щелочной фосфатазы, альфа-гидроксибутиратдегидрогеназы и содержания холестерина липопротеидов высокой плотности.

Способ осуществляют следующим образом.

Кровь (5-10 мл), взятая из локтевой вены с 8 до 9 ч, после 15-минутной инкубации при 37oC центрифугируется при 3000 об/мин в течение 10 мин, после чего отделяется сыворотка. Активность ферментов и концентрация липопротеидов высокой плотности определяется с помощью стандартных наборов "Лабсистем" (Финляндия) или "Лахема" (Чехословакия) на биохимическом анализаторе или любом спектрофотометре, фотоколориметре. Для проведения анализа содержания холестерина липопротеидов высокой плотности предварительно из сыворотки крови осаждают липопротеиды низкой и очень низкой плотности смесью, содержащей 4% фосфорно-вольфрамовую кислоту и 0,5 М раствор хлористого магния в расчете 0,1 мл осаждающей смеси на 1 мл сыворотки. После ЗО-минутного охлаждения в ледяной бане (0oC) и центрифугирования при 4000 об/мин в течение 15 мин полученную прозрачную надосадочную жидкость используют для определения концентрации холестерина липопротеидов высокой плотности с помощью стандартных наборов определения холестерина. При увеличении уровня показателей сыворотки крови активности гамма-глутамилтрансферазы, щелочной фосфатазы более чем в 1,25 раза и активности альфа-гидроксибутиратдегидрогеназы, концентрации холестерина липопротеидов высокой плотности более чем в 1,15 раза по сравнению с нормой, т.е. соответственно выше 50 Е/л, 175 Е/л, 140 Е/л и 1,4 ммоль/л, диагностируют алкоголизм.

Пример 1. Больной, 38 лет. Кровь из вены взята с 8 до 9 ч. В сыворотке крови с помощью наборов "Лабсистем" определили биохимические показатели. Результаты анализа: активность гамма-глутамилтрансферазы 54,2 Е/л, щелочной фосфатазы 250 Е/л, альфа-гидроксибутиратдегидрогеназы 159 Е/л, концентрация холестерина липопротеидов высокой плотности 1,6 ммоль/л. Все тесты превышают соответствующие значения нормы. Следовательно, у больного сформирован алкогольный абстинентный синдром, можно поставить диагноз: алкоголизм. Клинически данному больному был поставлен диагноз: алкоголизм второй стадии.

Пример 2. Больной, 43 года. Кровь взята с 8 до 9 ч. В сыворотке крови с помощью наборов "Лабсистем" определены биохимические показатели. Результаты анализа: активность гамма-глутамилтрансферазы 52,5, щелочной фосфатазы - 96,2, альфа-гидроксибутиратдегидрогеназы 117,4, холестерина липопротеидов высокой плотности 1,6 ммоль/л. Поскольку активности ферментов щелочной фосфатазы и альфа-гидроксибутиратдегидрогеназы остаются в пределах нормы, нельзя утверждать о сформировавшемся у обследуемого алкогольного абстинентного синдрома и ставить диагноз: алкоголизм. Клинически больному выставлен диагноз: злоупотребление алкоголем.

Пример 3. Больной, 28 лет. В анамнезе больного черепно-мозговая травма с потерей сознания.

Кровь из вены взята с 8 до 9 ч утра. В сыворотке крови с помощью наборов "Лабсистем" определили биохимические показатели. Результаты анализа: активность гамма-глутамилтрансферазы 44 Е/л, щелочной фосфатазы 387 Е/л, альфа-гидроксибутиратдегидрогеназы 142 Е/л, холестерина липопротеидов высокой плотности 3,55 ммоль/л, все тесты превышают соответствующие значения нормы и в большей степени увеличена активность щелочной фосфатазы, что и характерно для данной сопутствующей соматической патологии, что свидетельствует о развитии алкоголизма у обследуемого больного. Клинически представленному больному был поставлен диагноз алкоголизм второй стадии.

Пример 4. Больной, 38 лет. В анамнезе миокардиодистрофия.

Кровь из вены взята с 8 до 9 ч утра. В сыворотке крови с помощью наборов "Лабсистем" определили биохимические показатели. Результаты анализа: активность гамма-глутамилтрансферазы 58 Е/л, щелочной фосфатазы 240 Е/л, альфа-гидроксибутиратгидрогеназы 150 Е/л, холестерина липопротеидов высокой плотности 1,72 ммоль/л. Все тесты превышают соответствующие значения нормы, что свидетельствует о формировании алкогольного абстинентного синдрома, стержневого признака алкоголизма. Клинически больному был поставлен диагноз: алкоголизм второй стадии.

Предложенный способ диагностики предварительно был апробирован на экспериментальном материале белых беспородных крысах-самцах, содержавшихся в течение 10 мес. на 15% этаноле в качестве единственного источника питья со сформированной физической зависимостью от алкоголя (Буров Ю.В. 1982 г.). В сыворотке крови алкоголизированных крыс по сравнению с контрольными, содержавшимися на воде в качестве источника питья, отмечается выраженная активация вышеуказанных ферментов гамма-глутамилтрансферазы, щелочной фосфатазы и альфа-гидроксибутиратдегидрогеназы с достоверностью P < 0,05 (см. таблицу). Активность ферментов у крыс, хронически интоксифицированных этанолом, в среднем равна следующим значениям: гамма-глутамилтрансфераза - 16,572,40 Е/л, щелочная фосфатаза 174,0113,70, альфа-гидроксибутиратдегидрогеназа 690,7516,30 Е/л, что в 1,25; 1,5 и 1,25 раза больше по сравнению с контролем (соответственно активности ферментов составляют 13,242,31; 115,1815,51 и 554,7224,6 Е/л), на основании чего устанавливается физическая зависимость от этанола. Точность установления физической зависимости по активности гамма-глутамилтрансферазы равна 44% щелочной фосфатазы 70% и альфа-гидроксибутиратдегидрогеназы 60% (см. таблицу).

В биохимических исследованиях крови человека показатели варьируют в широких пределах в зависимости от возраста, индивидуальных особенностей организма, функционального состояния и других факторов. По литературным данным за норму принимаются следующие значения: для гамма-глутамилтрансферазы 5-50 Е/л (Методические указания по применению биохимических методов исследования на анализаторе ФП-901), 26,3 21,4 (5-45) Е/л (Eckardt, 1981), 5515 Е/л (Мизрахи Л. М. 1987); для щелочной фосфатазы 80-295 Е/л (Методические указания), 60,922,8 (20-120) Е/л (Eckardt, 1981); для альфа-гидроксибутиратдегидрогеназы 55-140 Е/л (методические указания), 9814 Е/л (Мизрахи Л.М. и др. 1987); для холестерина липопротеидов высокой плотности до 1,16 ммоль/л (Методические указания), 1-2 ммоль/л (Бородкин Е.А. 1989).

В исследованиях за норму принимались показатели контрольной группы, 30 доноров, мужчин в возрасте 25 50 лет с эпизодическим употреблением алкоголя. Средние значения используемых биохимических показателей контрольной группы входят в диапазон общепринятых норм (см. таблицу). В сыворотке крови обследованных доноров активность гамма-глутамилтрансферазы составила 34,3 - 48,3 Е/л, у 6 человек наблюдалось повышение активности фермента более чем в 1,5 раза, что составляет 20% от общего количества. Итак, специфичность способа диагностики алкоголизма по прототипу, т.е. наличие отрицательного результата, установление отсутствия алкоголизма у лиц с эпизодическим употреблением алкоголя, равна 80% По предложенному способу диагностики алкоголизма специфичность равна 83% так как у 5 человек (17%), нерегулярно употребляющих спиртное, может быть диагностирован алкоголизм. По тестам предложенного способа кроме вышеназванного фермента определяли активность щелочной фосфатазы, у обследованных доноров она составляет 130,1-151,3 Е/л, причем возрастание активности фермента в 1,25 раза наблюдалось у 7 из 25 мужчин. Активность альфа-гидроксибутиратдегидрогеназы находилась в пределах 109,5-125,5 Е/л, возрастание отмечено у 9 человек из 30 обследованных. Концентрация холестерина липопротеидов высокой плотности у доноров составляет 1,04-1,40 ммоль/л, причем у 10 из 25 человек превышает 1,40 ммоль/л.

Предложенный способ диагностики апробирован на 67 больных алкоголизмом, мужчин в возрасте 25 50 пет, проходивших курс антиалкогольной терапии в отделении клинической и профилактической наркологии НИИ психического здоровья ТНЦ АМН СССР.

Исследованы сопоставительные данные по определению биохимических показателей, характерных для метода прототипа и предложенного способа диагностики алкоголизма у доноров и больных алкоголизмом без выраженной соматической патологии и с сопутствующими соматическими заболеваниями печени, желудка, легких, сердечно-сосудистой системы. У больных алкоголизмом без сопутствующей соматической патологии активность гамма-глутамилтрансферазы составляет в среднем 55,2 17,9 Е/л, из 10 обследованных лиц у 9 значения фермента больше, чем в 1,5 раза нормы, у 12 больных этой группы активность фермента в 1,25 раза больше нормы. Согласно методу-прототипу, у 9 из 16 обследованных людей может быть диагностирован алкоголизм, т.е. чувствительность метода, наличие положительного результата составляет 33% Активность щелочной фосфатазы у больных алкоголизмом без сопутствующей патологии равна в среднем 275,846,7, у 12 из 16 мужчин этой группы наблюдалось возрастание активности этого фермента более чем в 1,25 раза по сравнению с нормой, что соответствует чувствительности, равной 75% Активность альфа-гидроксибутиратдегидрогеназы у этих же больных составила в среднем 132,513,4 Е/л, что соответствует чувствительности 62% Содержание холестерина липопротеидов высокой плотности составляет в среднем 1,430,39 ммоль/л, у 6 из 8 обследованных больных алкоголизмом без сопутствующей патологии обнаружено превышение 1,4 ммоль/л, что в 1,15 раза больше средней нормы, следовательно, чувствительность данного показателя равна 75%

Общий положительный эффект, т.е. диагностирование алкоголизма у данной группы больных по предложенному способу диагностики, составил 62% что на 24% выше, чем по методу-прототипу.

У пациентов с сопутствующим алкогольным поражением печени по методу-прототипу алкоголизм диагностировался у 17 из 24 человек (71%), по предложенному методу положительный эффект равен 58% При анализе данных тестов у больных алкоголизмом с различной соматической патологией (заболевания сердечно-сосудистой системы, легких, желудочно-кишечного тракта) по способу-прототипу положительный эффект составил 33% по предложенному способу диагностики 44%

Таким образом, способ диагностики алкоголизма по прототипу эффективен при сопутствующих заболеваниях печени, но теряет чувствительность у людей без выраженной соматической патологии и больных различными непеченочными соматическими заболеваниями. С целью исключения влияния соматических заболеваний на биохимические показатели крови человека и повышения чувствительности диагностики при отсутствии алкогольного поражения печени вместо одного параметра (активности гамма-глутамилтрансферазы), используемого в методике прототипа, в предложенном способе диагностики применяется 4 показателя. За счет этого заявленный способ диагностики обладает большей специфичностью и чувствительностью, эффективен как при отсутствии соматической патологии, так и при различных сопутствующих заболеваниях и может быть использован для широкого скрининга на выявление алкоголизма. 


ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ



Способ диагностики алкоголизма, включающий исследование сыворотки крови, отличающийся тем, что у пациентов с сопутствующей соматической патологией определяют активность щелочной фосфатазы, гамма-глутамилтрансферазы, альфа-гидроксибутиратдегидрогеназы и уровень холестерина липопротеидов высокой плотности и при повышении значения первого и второго показателей более чем в 1,25 раза, а третьего и четвертого показателей более чем в 1,15 раза относительно нормы диагностируют алкоголизм.