МОНОКЛОНАЛЬНОЕ АНТИТЕЛО ПРОТИВ V-ИНТЕГРИНОВ (ВАРИАНТЫ), ЕГО ПОЛУЧЕНИЕ (ВАРИАНТЫ) И ИСПОЛЬЗОВАНИЕ, ГИБРИДОМА, ПОЛИПЕПТИД, ДНК

МОНОКЛОНАЛЬНОЕ АНТИТЕЛО ПРОТИВ V-ИНТЕГРИНОВ (ВАРИАНТЫ), ЕГО ПОЛУЧЕНИЕ (ВАРИАНТЫ) И ИСПОЛЬЗОВАНИЕ, ГИБРИДОМА, ПОЛИПЕПТИД, ДНК


RU (11) 2205223 (13) C2

(51) 7 C12P21/08, C07K16/00, A61K39/395, C12N15/13, C12N15/16, C12N5/12 

(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ 
Статус: по данным на 10.08.2007 - действует 

--------------------------------------------------------------------------------

(14) Дата публикации: 2003.05.27 
(21) Регистрационный номер заявки: 95121105/13 
(22) Дата подачи заявки: 1995.12.19 
(24) Дата начала отсчета срока действия патента: 1995.12.19 
(31) Номер конвенционной заявки: 94120165.9 
(32) Дата подачи конвенционной заявки: 1994.12.20 
(33) Страна приоритета: EP 
(43) Дата публикации заявки: 1998.02.27 
(45) Опубликовано: 2003.05.27 
(56) Аналоги изобретения: WO 9320229 А, 14.10.1993. WO 9222653 А, 23.12.1992. 
(71) Имя заявителя: МЕРК ПАТЕНТ ГМБХ (DE) 
(72) Имя изобретателя: МИТХАНС Франсеск (ES); ПИУЛАТС Хауме (ES); РОСЕЛЬ Элизабет (ES); АДАН Хауме (ES); ГУДМАН Саймон (GB); ХАН Даяне (US) 
(73) Имя патентообладателя: МЕРК ПАТЕНТ ГМБХ (DE) 
(74) Патентный поверенный: Лебедева Наталья Георгиевна 
(98) Адрес для переписки: 129010, Москва, ул. Б.Спасская, 25, стр.3, ООО "Юридическая фирма Городисский и Партнеры", пат.пов. Н.Г. Лебедевой, рег.№ 112 

(54) МОНОКЛОНАЛЬНОЕ АНТИТЕЛО ПРОТИВ V-ИНТЕГРИНОВ (ВАРИАНТЫ), ЕГО ПОЛУЧЕНИЕ (ВАРИАНТЫ) И ИСПОЛЬЗОВАНИЕ, ГИБРИДОМА, ПОЛИПЕПТИД, ДНК 

Изобретение относится к иммунобиотехнологии и касается новых моноклональных антител, способов их получения с использованием гибридомной технологии и осУр3-интегрина или витронектина в качестве антигена, полипептидов, представляющих легкую и тяжелую цепи антител и ДНК, кодирующие эти полипептиды. Показана возможность использования антител в составе фармацевтической композиции для лечения опухолей, в частности меланомы, а также для диагностики локализации и роста опухоли. Моноклональное антитело, в частности 17Е6, обладает следующими свойствами: взаимодействует с V-цепью V-интегринов человека, блокирует прикрепление клеток, содержащих V-интегрины к субстрату интегринов, нарушает установленное взаимодействие клетка-матрикс, вызываемое V-интегринами, блокирует развитие опухоли и не проявляет цитотоксической активности. Использование новых моноклональных антител позволяет блокировать функции интегриновой цепи человека и, как следствие, развитие опухоли. 11 с. и 3 з.п. ф-лы, 52 ил., 3 табл. 


ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ



Текст описания в факсимильном виде (см. графическую часть). 


ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ



1. Моноклональное антитело против V-интегринов человека, обладающее следующими свойствами: реагирует только с V-цепью V-интегринов человека, блокирует прикрепление клеток, содержащих V-интегрин, к субстрату интегрина, нарушает установившееся взаимодействие клетка-матрикс, вызываемое V-интегринами, блокирует развитие опухоли и не проявляет цитотоксической активности, которое содержит аминокислотные последовательности, кодируемые ДНК, нуклеотидная последовательность которых соответствует открытой рамке считывания областей FR и определяющих комплементарность областей (CDR) легкой цепи - положения 21-127 на Фиг. 17а, соответствующие аминокислотам 21-127 последовательности SEQ ID No. 1 - и тяжелой цепи - положения 20-137 на Фиг. 17b, соответствующие аминокислотам 1-118 последовательности SEQ ID No. 9.

2. Моноклональное антитело по п. 1, отличающееся тем, что субстратом интегрина является витронектин, фибронектин или фибриноген.

3. Моноклональное антитело по п. 1, отличающееся тем, что оно блокирует развитие меланомы.

4. Гибридомная клеточная линия 2-72-17Е6, депонированная под номером DSM АСС2160, способная продуцировать моноклональное антитело по пп. 1-3.

5. Моноклональное антитело против V-интегринов человека, продуцируемое гибридомной линией клеток по п. 4.

6. Полипептид, имеющий аминокислотную последовательность, кодируемую ДНК, соответствующей открытой рамке считывания областей FR, определяющих комплементарность областей (CDR) легкой цепи - положения 21-127 на Фиг. 17а, соответствующие аминокислотам 21-127 последовательности SEQ ID No. 1.

7. Полипептид, имеющий аминокислотную последовательность, соответствующую областям 20-137 на Фиг. 17b тяжелой цепи, и которая соответствует аминокислотам 20-137 последовательности SEQ ID No. 9.

8. Последовательность ДНК, имеющая нуклеотидную последовательность, соответствующую открытой рамке считывания областей FR, и кодирующая полипептид по п. 6.

9. Последовательность ДНК, имеющая нуклеотидную последовательность, соответствующую открытой рамке считывания областей FR, и кодирующая полипептид по п. 7.

10. Фармацевтическая композиция для лечения опухоли, содержащая моноклональное антитело по любому из пп. 1-3 и 5 и фармацевтически приемлемый носитель.

11. Фармацевтическая композиция, охарактеризованная в п. 10, используемая в качестве диагностического средства для установления локализации и роста опухолей, предпочтительно меланомы.

12. Способ получения моноклонального антитела, охарактеризованного в любом из пп. 1-3, отличающийся тем, что мышей иммунизируют очищенным V3-интегрином, отбирают методом ELISA клоны, связывающиеся с очищенным V3-рецептором, и получают специфическую гибридомную клеточную линию, продуцирующую указанное моноклональное антитело.

13. Способ по п. 12, отличающийся тем, что указанным интегрином является рецептор витронектина.

14. Способ получения моноклонального антитела, охарактеризованного в п. 5, отличающийся тем, что мышей иммунизируют очищенным витронектином, отбирают методом ELISA клоны, связывающиеся с очищенным рецептором витронектина, и получают гибридомную клеточную линию, охарактеризованную в п. 4, продуцирующую указанное моноклональное антитело.