ИММУНОТРОПНЫЙ ПРЕПАРАТ

ИММУНОТРОПНЫЙ ПРЕПАРАТ "ВИТУЛИН Д"


RU (11) 2241476 (13) C2

(51) 7 A61K35/78, A61K35/64 

(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ 
Статус: по данным на 18.07.2007 - может прекратить свое действие 

--------------------------------------------------------------------------------

(14) Дата публикации: 2004.12.10 
(21) Регистрационный номер заявки: 2001135259/15 
(22) Дата подачи заявки: 2001.12.27 
(24) Дата начала отсчета срока действия патента: 2001.12.27 
(43) Дата публикации заявки: 2003.08.27 
(45) Опубликовано: 2004.12.10 
(56) Аналоги изобретения: RU 2132689 C1, 10.07.1999. RU 2171284 C1, 27.01.2001. RU 2020942 C1, 15.10.1994. CN 1310017, 29.09.2001. DE 4111782, 15.01.1992. 
(72) Имя изобретателя: Тулев Ю.В. (RU); Тулева Н.П. (RU) 
(73) Имя патентообладателя: Тулев Юрий Владимирович (RU); Тулева Надежда Павловна (RU) 
(98) Адрес для переписки: 193144, Санкт-Петербург, ул. 8-я Советская, 46, кв.2, Ю.В.Тулеву 

(54) ИММУНОТРОПНЫЙ ПРЕПАРАТ "ВИТУЛИН Д"
Изобретение относится к фармакологии, а именно к средствам для профилактики и лечения аллергических, аутогенных, инфекционных и опухолевых заболеваний. Предложен иммунотропный препарат, представляющий собой мед, полученный путем скармливания пчелам состава, включающего монофлерный мед семейства сложноцветных, содержащий 3-окси-флавон-силибин, экстракт флавоноидных фракций прополиса, экстракт солодки голой, экстракт календулы, экстракт зверобоя продырявленного в определенном соотношении. Препарат индуцирует эндогенный - и -интерферон, обладает противоаллергическим, иммуномодулирующим, антиоксидантным, противовоспалительным, антибактериальным действием. 3 з.п. ф-лы, 1 табл.




ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ


Изобретение относится к области медицины, ветеринарии, а именно к фармакологии, и может использоваться для профилактики и лечения аллергических, аутогенных, инфекционных и опухолевых болезней. 

Для профилактики и лечения заболевания большое значение имеет индукция эндогенного -, -интерферона. Эндогенный интерферон обладает большой биологической активностью, что проявляется в противовирусном, противоопухолевом, антипролиферативном и иммуностимулирующем действии.

Однако в настоящее время в качестве индуктора эндогенного -, -интерферона используются ослабленные живые вирусы и вакцины, которые сами неблагоприятно воздействуют на организм.

Особенно остро встает этот вопрос при лечении хронических больных или аллергиков, которым требуется длительное лечение.

Поэтому в настоящее время возрастает интерес к природным препаратам, не обладающим токсичностью и вызывающим коррекцию иммунной системы.

Наиболее близким по технической сущности к заявляемому является средство, включающее мед, прополис, маточное молочко, экстракт солодки и левзеи (патент СССР 1836094, А 64 R 35/64, 1993).

Известное средство повышает сопротивляемость организма к действию неспецифических повреждающих факторов - токсинов и радиации.

Недостатком известного средства является активирование процесса клеточной пролиферации, которая способствует опухолевой трансформации клеток. Кроме того, известный препарат содержит пыльцу, которая является сильным аллергеном.

Задачей изобретения является создание иммунотропного препарата индуцирующего эндогенный - и -интерферон, обладающего противоаллергическим, иммуномодулирующим, антиоксидантным, противовоспалительным, антибактериальным действием.

Поставленная задача достигается иммунотропным препаратом, представляющим собой мед, полученный путем скармливания пчелам состава, включающего 98-25 мас.ч. монофлерного меда семейства сложноцветных, содержащего 3-окси-флавон-силибин, 1-30 мас.ч. экстракта солодки голой, 1-30 мас.ч. экстракта зверобоя продырявленного, 1-30 мас.ч. экстракта календулы, 1-20 мас.ч. экстракта флаваноидных фракций прополиса, с последующим фракционированием путем замораживания водного раствора меда до температуры -60°С и размораживанием до 15-30°С. 

Предпочтительно состав содержит экстракт флаваноидных фракций прополиса березового и дополнительно до 30 мас.ч. хлорофилла. 

Используемый монофлерный мед, содержащий 3-окси-флавон-силибин, не обладает токсическим действием и тормозит лектинин, индуцированный митогенез, 3-окси-флавон-силибин содержится в экстракте чертополоха колючего и не обладает токсическими свойствами (Т.Н.Драник, Ю.А.Гриневич, Г.М.Дизик Иммунотропные препараты. - Киев, Здоровье, 994, с. 212). Указанный экологически чистый монофлерный мед очищают путем медленного замораживания водного раствора или раствора, дополнительно содержащего экстракт меда с концентрацией не более 80 мас.% до температуры примерно -60°С с последующим размораживанием. Постепенное изменение температуры позволяет удалить белки, вызывающие побочные негативные реакции, вызванные компонентами неразрушенных пыльцевых зерен. Такая очистка позволяет получить фракцию монофлерного меда, преимуществом которой является полное отсутствие токсичности и аллергических реакций, проверенное в лабораторных условиях на белых мышах, морских свинках, кроликах и птицах, а также на крупных домашних животных при парентеральном введении.

Наличие 3-окси-флавон-силибина в монофлерном меде семейства сложноцветных подтверждают на цыплятах, чувствительных к заражению вирусом саркомы Рауса. Цыплятам с растущими опухолями вводят экстракт монофлерного меда, содержащий 3-окси-флавон-силибин. Только при наличии 3-окси-флавон-силибина наблюдается рассасывание опухолей, уменьшение некроза. В подопытной группе цыплят наблюдается сухой некроз и постепенное рассасывание опухоли.

Вторым компонентом предлагаемого препарата является экстракт цветущих растений зверобоя продырявленного, содержащий флавоноиды, фенолкарбоновые кислоты, дубильные и смолистые вещества, стимулирующий фагоцитоз, уплотнение клеточных мембран, обладающий противоаллергическим действием. 

Экстракцию биологически активных веществ осуществляют обработкой 70%-ным водным раствором этилового спирта цветущих растений для полного отделения экстракта от пектинов, с последующим загущением в вакуумном устройстве до содержания влаги не более 25%. Экстракт может содержать до 30 мас.ч. флавоноидов и фенолкарбоновых кислот.

Вторым компонентом предлагаемого препарата является экстракт солодки голой, содержащей производные глицирризиновой кислоты, флавоноиды, стероиды, обладающие свойством коррекции гуморального иммунитета, а также противовоспалительным, антимикробным, противоаллергическим действием.

Экстракцию биологически активных веществ осуществляют обработкой 70%-ным водным раствором этилового спирта измельченных корней солодки голой, что позволяет полностью отделить экстракт от пектинов, с последующим загущением в вакуумном устройстве до содержания влаги не более 25%. Экстракт может содержать производные глицирризиновой кислоты и флавоноиды до 20 мас.ч.

Третьим компонентом является экстракт календулы. 

Четвертым компонентом заявляемого иммунотропногого препарата являются флавоноидные фракции прополиса, в частности березового, предпочтительно разведенные раствором хлорофила вида “а” и б”. 

Известно, что водорастворимый хлорофилл содержит порфириновые производные преимущественно в виде их комплексов с магнием (Шлык А.А. Проблемы биосинтеза хлорофиллов. Минск, 1971).

Прополис в своем составе содержит большое количество фенольных структурно-родственных хелатообразующих соединений. Вероятно, фенольные соединения прополиса взаимодействуют с порфириновыми комплексами, включающими магний или металлы переменной валентности, с образованием хелатных соединений, обуславливающих противоопухолевую активность.

Стандартизацию прополиса проводят экспресс-методами, позволяющими при использовании небольшого количества вещества дать характеристику каждой приготовленной партии. Основу разработанных экспресс-методов составляют цветные реакции 0,1% спиртового раствора прополиса с рядом комплексообразующих реагентов, в частности водными растворами хлорного железа, ацетата меди и ацетата свинца, определяющими наличие и содержание флавоноидов, и 20%-ной щелочью, изомеризующей флавононы, постоянно присутствующие в прополисе. Для характеристики партий прополиса используется различная адсорбируемость его компонентов на окиси алюминия второй степени активности, а также его способность максимально растворяться в смеси хлороформ:ацетон при их массовом соотношении 2:1 соответственно, что в итоге позволяет количественно определить содержание балластной и биологически активной фракции прополиса. Стандартизировать прополис можно и по подавлению роста растений.

Предлагаемый по изобретению препарат получают смешиванием всех указанных компонентов с последующим скармливанием полученного состава отобранным пчелиным семьям на изолированной пасеке в период окончания продуктивного взятка в ульях Дадана-Блатта. В отобранных пчелиных семьях предварительно удаляли все рамки с ранее заготовленным медом, а вместо них ставили рамки с сушью. После скармливания отбирали рамки с медом полностью запечатанными. Откачку меда проводили на специальных медогонках, исключающих контакт экспрессного меда с металлом и воздухом.

Полученный в результате мед освобождают от белковых фракций, описанным выше способом путем замораживания и размораживания, после чего его вновь скармливают пчелам. Предпочтительно этот процесс проводить трехкратно с целью концентрирования составляющих компонентов и обеспечения максимальной биологической очистки заявляемого препарата.

Полученный мед обеспечивает полную совместимость смеси и защитное действие по отношению к 3-окси-флавон-силибину, флавоноидным фракциям прополиса, хлорофиллу высших растений, фенолкарбоновым кислотам, глицерризиновой кислоте.

Препарат может дополнительно содержать комплекс витаминов, содержащий по меньшей мере витамины А, Е, РР, F и микроэлементы, включающие, как правило, Мg, Са, Se, Zn, Ni, Fe, I.

Необходимо отметить, что смесь компонентов препарата по изобретению обладает более выраженным противоаллергическим, иммуномодулирующим, противовоспалительным действием, чем отдельно взятые компоненты.

Кроме этого, отдельные компоненты препарата разрушаются при длительном хранении, теряя при этом свою биологическую активность. Однако смесь этих же компонентов сохраняется в течение нескольких лет в активном состоянии.

Изобретение иллюстрируется нижеприведенными примерами.

Пример 1.

В монофлерный зрелый мед семейства сложноцветных, соответствующий ГОСТ 19792-74, содержащий в своем составе 3-окси-флавон-силибин, добавляют до 25 мас.ч. экстракта корней солодки голой. Экстракт получали экстрагированием растений 70%-ным водным раствором этилового спирта с последующим загущением в вакуумном устройстве до содержания влаги не более 25%.

Одновременно добавляют в монофлерный мед до 20 мас.ч. флавоноидных фракций прополиса и до 30 мас.ч. экстракта календулы.

Полученную смесь постепенно скармливают отобранным пчелиным семьям на изолированной пасеке, как описано выше.

Далее осуществляют фракционирование, помещают полученный состав в специально изготовленные сосуды, в которых обеспечивается равномерное замораживание и отбор проб. 

Замораживания осуществляют -40°С. Затем осуществляют медленное размораживание до температуры 18°С. Первые фракции, содержащие белок, не используют.

Препарат согласно изобретению представляет собой фракцию монофлерного меда, содержащую 3-окси-флавон-силибин, экстракт корней солодки голой, экстракт цветов зверобоя продырявленного и флавоноидные фракции прополиса и экстракт календулы.

Пример 2.

Для приготовления препарата по изобретению использовали 50 мас.ч. монофлерного пчелиного меда, полученного из нектара растений семейства сложноцветных, содержащего 3-окси-флавон-силибин и хиноны, 15 мас.ч. экстракта корней солодки голой, содержащей производные глицирризиновой кислоты и флавоноиды, 20 мас.ч. экстракта цветущих растений зверобоя продырявленного, содержащих флавоноиды и фенолекарбоновые кислоты, 15 мас.ч. экстракта флавоноидных фракций прополиса березового и 15 мас.ч. экстракта календулы. Дополнительно вводили в состав до 30 мас.ч. хлорофилла в расчете на 100 мас.ч. смеси.

Полученную смесь дважды скармливали пчелам, последующее фракционирование осуществляли путем замораживания со скоростью -1°С/час до температуры -60°С и размораживания также со скоростью -1°С/час до температуры 30°С. Первые фракции, содержащие белок, не использовали.

Пример 3.

К препарату, полученному согласно примеру 1, добавляют комплекс витаминов, включающий витамины А, Е, РР, F и микроэлементы Мg, Са, Se, Zn, Ni, Fe, I в количестве, обычно используемом в таких препаратах. Добавленные витамины и микроэлементы совместно с имеющимися в прополисе и экспрессном меде витаминами и микроэлементами обогащают предлагаемый препарат.

Пример 4.

Для препаратов, полученных согласно примерам 1-3, проводили определение цитотоксических и ингибирующих опухолевые вирусы доз in vitro в субкультуре клеток куриных эмбриональных фибробластов, зараженных типовыми штаммами вируса саркомы Рауса. Культивирование клеток куриных эмбриональных фибробластов первой генерации с установленным фенотипом с/о (чувствительные к заражению онкогенными вирусами) проводили с использованием среды роста субкультур клеток на основе среды Игла и триптозофосфатного бульона “Дифко” при рН 6-8.

Для стандартизации препарата по данным 5-7 опытов устанавливали методом разведения препарата следующие дозы:

1. Цитотоксическая доза должна быть не ниже 150 мкг/мл (ЦТД 50/мл).

2. Ингибирующая опухолевую трансформацию клеток доза (индекс ингибиции) должна быть не ниже 1,3±0,2 lg ОД 50/мл (онкогенных доз).

3. Концентрация экстракта цветущих растений семейства сложноцветных - пределах 250 мкг/мл.

Пример 5.

Больной С., 62 лет, диагноз при поступлении - вторичное иммунодефицитное состояние с аллергическим синдромом и поражением кожи лица, подтвержденное иммунологическими анализами. Применен курс активной неспецифической иммунотерапии с применением заявленного иммунотропного препарата. Курс лечения проводили в течение 35 дней, препарат вводили внутримышечно в дозе 0,025 мл/кг с интервалом в двое суток. В результате лечения стали исчезать клинические синдромы болезни и больному назначен повторный курс иммунотерапии в аналогичной дозе.

Пример 6

Больная Н., 36 лет, диагноз при поступлении - иммунодефицитное состояние с аллергическим синдромом и поражением кожи лица и тела. Заболевание подтверждено иммунологическими анализами. Проведены 3 курса активной неспецифической иммунотерапии. Каждый курс по 30 дней. Препарат вводили внутримышечно в дозе 0,03 мл/кг с интервалом в двое суток. В результате иммунотерапии исчезли полностью клинические признаки болезни, иммунограмма в пределах нормы.

Для разведения препарата готовили разбавитель, включающий апирогенную ионообменную воду, микроэлементы Mn, Cu, Zn, Co, Cr, Al, Se, Ni, I, макроэлементы К, Са, Mg, Fe, флавоноидные фракции прополиса, экстракт череды трехраздельной до 10 мас.ч. на 100 мас.ч. воды.

Пример 7.

Больная К., 28 лет, диагноз при поступлении - аллергия с клиникой поражения кожи тела. Заболевание подтверждено иммунологическими анализами. Назначены 3 курса активной иммунотерапии с применением иммунотропного препарата. Каждый курс проводили в течение 35 дней, препарат в дозе 0,03 мл/кг вводили внутримышечно с интервалом в двое суток. Через 10 дней после последнего курса иммунотерапии проведен повторный иммунологический анализ, который показал, что иммунорегуляторный индекс был в пределах нормы, иммуноглобулины также были в пределах нормы. Клинические признаки болезни не отмечали.

Пример 8.

Проверка эффективности заявляемого препарата проводилась при лечении иммунодефицитных состояний организма с клинической картиной аллергии. Лечение проводили на двух группах больных по 12 человек каждая и контрольная группа с применением традиционных методов терапии. Результаты исследований приведены в таблице. Из таблицы видно, что основные иммунологические показатели у больных были выше нормы. После длительной активной иммунотерапии показатели иммунорегуляторных индексов были в норме. Значительные отклонения в иммуноглобулинах всех классов также нормализовались. В контрольной группе у больных после того, как клинические признаки исчезли, еще наблюдались изменения в иммунологических показателях (повышенный иммунорегуляторный индекс, повышенное содержание в сыворотке крови иммуноглобулинов). При длительном применении иммунотропного препарата не наблюдали случаев непереносимости и токсичности.

Заявляемый иммунотропный препарат может быть с успехом применен для коррекции иммунной системы у больных, трудно поддающихся лечению обычными средствами.

Данный препарат восстанавливает функцию печени, вызывает коррекцию гуморального и клеточного иммунитета, повышает содержание интерферона, комплемента и лизоцина в крови в 2-2,5 раза, в связи с чем, клиническая картина у больного исчезает полностью.

Препарат может использоваться как для парентерального, так и для орального, наружного и местного применения (интраназального, коньюктивального, вагинального). 






ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ


1. Иммунотропный препарат, индуцирующий эндогенный - и -интерферон, характеризующийся тем, что он представляет собой мед, полученный путем скармливания пчелам состава, включающего монофлерный мед семейства сложноцветных, содержащий 3-окси-флавонсилибин, экстракт флавоноидных фракций прополиса, экстракт солодки голой, экстракт календулы и экстракт зверобоя продырявленного при соотношении, маc.ч.:

Монофлерный мед семейства сложноцветных,

содержащий 3-окси-флавон-силибин 25-98

Экстракт флавоноидных фракций прополиса 1-20

Экстракт солодки голой 1-30

Экстракт календулы 1-30

Экстракт зверобоя продырявленного 1-30

с последующим фракционированием путем замораживания водного раствора меда до температуры -60°С и размораживанием до 15-30°С.

2. Иммунотропный препарат по п.1, отличающийся тем, что состав дополнительно содержит в качестве флафоноидных фракций прополиса фракции прополиса березового.

3. Иммунотропный препарат по п.1, отличающийся тем, что состав дополнительно содержит до 30 маc.ч. хлорофилла.

4. Иммунотропный препарат по п.1, отличающийся тем, что он дополнительно содержит микроэлементы Mg, Se, I, Zn, Ni и Fe и комплекс витаминов А, Е, РР и F.