ИММУНОТРОПНЫЙ ПРЕПАРАТ

ИММУНОТРОПНЫЙ ПРЕПАРАТ "ВИТУЛИН А"


RU (11) 2236247 (13) C2

(51) 7 A61K35/78, A61K35/64 

(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ 
Статус: по данным на 18.07.2007 - может прекратить свое действие 

--------------------------------------------------------------------------------

(14) Дата публикации: 2004.09.20 
(21) Регистрационный номер заявки: 2001135263/15 
(22) Дата подачи заявки: 2001.12.27 
(24) Дата начала отсчета срока действия патента: 2001.12.27 
(43) Дата публикации заявки: 2003.08.27 
(45) Опубликовано: 2004.09.20 
(56) Аналоги изобретения: RU 2132689 C1, 10.07.1999. RU 2133616 C1, 27.07.1999. RU 2020946 C1, 15.10.1994. RU 2020942 C1, 15.10.1994. CN 1162415, 22.10.1997. CN 1310017, 29.08.2001. DE 4111782, 15.10.1992. 
(72) Имя изобретателя: Тулев Ю.В. (RU); Тулева Н.П. (RU) 
(73) Имя патентообладателя: Тулев Юрий Владимирович (RU); Тулева Надежда Павловна (RU) 
(98) Адрес для переписки: 193144, Санкт-Петербург, ул. 8-я Советская, 46, кв.2, Ю.В. Тулеву 

(54) ИММУНОТРОПНЫЙ ПРЕПАРАТ "ВИТУЛИН А" 
Изобретение относится к фармакологии, а именно к средствам для профилактики и лечения острых инфекционных заболеваний вирусной и бактериальной природы. Предложен иммунотропный препарат, представляющий собой экспрессный мед, полученный путем скармливания пчелам состава, включающего монофлерный мед семейства сложноцветных, содержащий 3-окси-флавон-силибин, флавоноидные фракции прополиса, экстракт листьев мать-и-мачехи, экстракт цветущего горца птичьего, экстракт цветочных корзинок арники в определенном соотношении. Препарат индуцирует эндогенный -, - и -интерферон, повышает активность фагоцитоза, способствует нормализации самочувствия больного в короткий срок. 3 з.п. ф-лы, 1 табл. 



ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ


Изобретение относится к области медицины, ветеринарии, а именно к фармакологии, и может использоваться для профилактики и терапии острых инфекционных заболеваний вирусной и бактериальной природы.

Для профилактики и лечения заболевания большое значение имеет индукция эндогенного -,-,-интерферона. Эндогенный интерферон обладает большой биологической активностью, что проявляется в противовирусном, противоопухолевом, антипролиферативном и иммуностимулирующем действии.

Однако в настоящее время в качестве индуктора эндогенного -,-,-интерферона используются ослабленные живые вирусы и вакцины, которые сами неблагоприятно воздействуют на организм.

Особенно остро встает этот вопрос при лечении хронических больных или аллергиков, которым требуется длительное лечение.

Поэтому в настоящее время возрастает интерес к природным препаратам, не обладающим токсичностью и вызывающим коррекцию иммунной системы.

Наиболее близким по технической сущности к заявляемому является средство, включающее мед, экстракт левзеи и родиолы розовой (патент СССР 1836094, А 64 R 35/64, 1993). Также известно средство, включающее глицерризиновую кислоту (Т.Н.Драник, Ю.А.Гриневич, Г.М.Дизик. Иммунотропные препараты. - Киев, Здоровья, 1994, с. 22).

Известные средства обладают иммуномодулирующими свойствами и повышают сопротивляемость организма к действию инфекционных факторов.

Недостатком известных средств является активирование процесса клеточной пролиферации, которая способствует опухолевой трансформации клеток. Кроме того, данные препараты не подвергаются биологической очистке и неявляются абсолютно безвредными для парентерального введения.

Задачей изобретения является создание иммунотропного препарата, способного индуцировать эндогенный -,-,-интерферон, повышать активность фагоцитоза для профилактики и терапии острых респираторных болезней.

Поставленная задача достигается иммунотропным препаратом, представляющим собой экспрессный мед, полученный путем скармливания пчелам состава, включающего 98-25 мас.ч. монофлерного меда, содержащего 3-окси-флавон-силибин, экстракта цветочных корзинок арники 1-40 мас.ч., экстракта листьев мать-и-мачехи 1-30 мас.ч., экстракта горца птичьего 1-40 мас.ч., флавоноидной фракции прополиса 1-40 мас.ч., с последующим фракционированием путем замораживания водного раствора меда до температуры -60° с последующим размораживанием до 15-30С. Постепенное изменение температуры позволяет удалить белки, вызывающие побочные негативные реакции, вызванные компонентами пыльцевых зерен. Такая очистка позволяет получить фракцию монофлерного меда с полным отсутствием токсичности и аллергических реакций, проверенным в лабораторных условиях на белых мышах, морских свинках, кроликах, птицах и крупных домашних животных при парентеральном введении.

Наличие 3-окси-флавон-силибина в монофлерном меде, полученном из нектара растений семейства сложноцветных, подтверждают на цыплятах, чувствительных к заражению вирусом саркомы Рауса. Цыплятам с растущими опухолями вводят фракции монофлерного меда, содержащего 3-окси-флавон-силибин. Только при наличии 3-окси-флавон-силибина наблюдается рассасывание опухолей, уменьшение некроза. У подопытных цыплят в дальнейшем наблюдается сухой некроз опухоли и постепенное ее рассасывание.

Вторым компонентом препарата является экстракт цветочных корзинок арники, содержащих эфирные масла и полисахариды. Экстракцию биологически активных веществ осуществляют обработкой 70%-ным водным раствором этилового спирта цветочных корзинок арники с последующим загущением в вакууме до содержания влаги не более 25%. Экстракт может содержать эфирные масла и полисахариды до 20 мас.ч.

Третьим компонентом препарата является экстракт листьев мать-и-мачехи, содержащих полисахариды, дубильные вещества, каратиноиды, стимулирующие выработку интерферона и обладающие противовоспалительным действием. Экстракцию биологически активных веществ осуществляют обработкой измельченных листьев 70%-ным водным раствором этилового спирта с последующим загущением в вакууме до содержания влаги не более 25%. Экстракт может содержать полисахариды, дубильные вещества, каратиноиды до 25 мас.ч.

Четвертым компонентом препарата является экстракт растения горца птичьего, содержащего кремневые кислоты и флавоноиды. Экстракцию биологически активных веществ осуществляют обработкой 70%-ным водным раствором этилового спирта цветущих растений для полного отделения экстракта от пектинов, с последующим загущением в вакууме до содержания влаги не более 25%. Экстракт может содержать флавоноиды и кремневые кислоты до 30 мас.ч.

Пятым компонентом препарата являются флавоноидные фракции прополиса в частности березового, предпочтительно разведенные раствором хлорофилла вида “а” и “в”. Водорастворимый хлорофилл содержит порфириновые производные, преимущественно в виде их комплексов с магнием. Прополис в своем составе содержит большое количество фенольных структурно-родственных хелатообразующих соединений. Вероятно, фенольные соединения прополиса взаимодействуют с порфириновыми комплексами, включающими магний или металлы переменной валентности, с образованием хелатных соединений, обуславливающих противоопухолевую активность.

Стандартизацию прополиса проводят экспресс-методом, позволяющем при использовании небольшого количества вещества дать характеристику каждой партии. Основу разработанных экспресс-методов составляют цветные реакции 0,1%-ого спиртового раствора прополиса с рядом комплексообразующих реагентов, в частности водными растворами хлорного железа, ацетатом меди и ацетатом свинца, определяющими наличие и содержание флавоноидов, и 20%-ной щелочью, изомеризующей флавононы, постоянно присутствующие в прополисе.

Для характеристики каждой партии прополиса используется различная адсорбируемость его компонентов на окиси алюминия второй степени активности, а также его способность максимально растворяться в смеси хлороформ: ацетон при их массовом соотношении 2:1 соответственно, что позволяет количественно определить содержание балластной и биологически активной фракции прополиса. Стандартизовать прополис можно и по подавлению роста растений.

Получаемый по изобретению препарат получают смешиванием всех указанных компонентов с последующим скармливанием полученного состава отобранным пчелиным семьям на изолированной пасеке в период окончания продуктивного взятка в стандартных ульях Дадана-Блатта. В отобранных пчелиных семьях предварительно удаляли все рамки с ранее заготовленным медом, а вместо них ставили рамки с сушью. После скармливания отбирали рамки с медом полностью запечатанные. Откачку меда проводили на специально изготовленных медогонках, исключающих контакт экспрессного меда с металлом и воздухом.

Полученный экспрессный мед освобождают от белковых фракций описанным выше способом, после чего его вновь скармливают пчелам с добавлением всех компонентов. Предпочтительно этот процесс повторить трижды с целью концентрирования составляющих компонентов и обеспечения максимальной биологической очистки заявленного препарата.

Экспрессный мед обеспечивает полную совместимость смеси и защитное действие по отношению к 3-окси-флавон-силибину, полисахаридам, каратиноидам, флаваноидам, кремневым кислотам и хлорофиллу высших растений.

Препарат может дополнительно содержать комплекс витаминов, содержащий по крайней мере витамины А, Е, PP, F и микроэлементы Мg, Se, Zn, Ni, Fe.

Необходимо отметить, что смесь компонентов препарата по изобретению обладает более выраженным бактериостатическим, иммуногенным, противоопухолевым действием, чем отдельно взятые препараты.

Кроме этого, отдельные компоненты препарата разрушаются при длительном хранении, теряя при этом свою биологическую активность. Однако смесь этих же компонентов сохраняется в течение нескольких лет в активном состоянии.

Изобретение иллюстрируется нижеприведенными примерами.

Пример 1.

В монофлерный зрелый мед семейства сложноцветных, соответствующий ГОСТ 19792-74, содержащий в своем составе 3-окси-флавон-силибин добавляют до 10 мас.ч. экстракта цветочных корзинок арники. Экстракт получали экстрагированием цветочных корзинок 70%-ным водным раствором этилового спирта до полного отделения пектинов с последующим загущением экстракта в вакууме до содержания влаги не более 25%.

Одновременно добавляют в монофлерный мед до 20 мас.ч. экстракта листьев мать-и-мачехи. Экстракт получали экстрагированием измельченных листьев мать-и-мачехи 70%-ным водным раствором этилового спирта до полного отделения пектинов с последующим загущением экстракта в вакууме до содержания влаги не более 25%.

Одновременно добавляют в мед до 20 мас.ч. флавоноидных фракций прополиса и до 10 мас.ч. экстракта горца птичьего.

Полученную смесь постепенно скармливают отобранным пчелиным семьям на изолированной пасеке, как описано выше.

Далее осуществляют фракционирование, помещают полученный состав в специально изготовленные сосуды, в которых обеспечивается равномерное замораживание и отбор проб.

Замораживание осуществляют до -40С. Затем осуществляют медленное размораживание до температуры +18С. Первые фракции, содержащие белок, не используют.

Препарат согласно изобретению представляет собой фракцию экспрессного меда, содержащего 3-окси-флавон-силибин, экстракт цветочных корзинок арники, экстракт листьев мать-и-мачехи, флавоноидные фракции прополиса, экстракт горца птичьего.

Пример 2.

Для приготовления препарата по изобретению использовали монофлерный пчелиный мед, содержащий 3-окси-флавон-силибин 50 мас.ч., 10 мас.ч. экстракта цветочных корзинок арники, 20 мас.ч. экстракта листьев мать-и-мачехи, 10 мас.ч. экстракта горца птичьего, 10 мас.ч. флавоноидных фракций березового прополиса. Дополнительно вводили в состав 20 мас.ч. хлорофилла в расчете на 100 мас.ч.

Полученную смесь трижды скармливают пчелам, последующее фракционирование осуществляют путем замораживания со скоростью - 1С/час до температуры -60С и размораживания со скоростью 1С/час до температуры 30С. Первые фракции, содержащие белок, не использовали.

Пример 3.

Препарат готовят в соответствии с примером 1, но дополнительно вводят комплекс витаминов, включающий витамины А, Е, РР, F и микроэлементы Мg, Se, Ca, Zn, Ni, Fe. Добавляемые витамины и микроэлементы совместно с имеющимися в прополисе и экспрессном меде обогащают предлагаемый препарат.

Пример 4.

Для препаратов, полученных согласно примерам 1-3, проводили определение цитотоксических и ингибирующих опухолевые вирусы доз in vitro в субкультуре клеток куриных эмбриональных фибробластов, зараженных типовыми штаммами вируса саркомы Рауса.

Культивирование клеток куриных эмбриональных фибробластов первой генерации с установленным фенотипом с/о (чувствительные к заражению онкогенными вирусами) проводили с использованием среды роста субкультур клеток на основе среды Игла и триптозофосфатного бульона “Дифко” при рН 6-8.

Для стандартизации препарата по данным 5-7 опытов устанавливали методом разведения препарата следующие дозы:

1. Цитотоксическая доза должна быть не ниже 125 мкг/мл (ЦТД50/мл)

2. Индекс ингибиции должна быть не ниже 1,3±0,2 lg ОД50/мл (онкогенных доз)

3. Концентрация экстракта цветущих растений семейства сложноцветных - пределах 250 мкг/мл.

Пример 5.

Больная С., 29 лет, диагноз при поступлении - вирусный гепатит. Иммунологическими исследованиями подтверждена недостаточность гуморального иммунитета: снижение уровня альфа-, бета-, гамма-интерферона, а также комплемента и лизодима. Назначена активная неспецифическая иммунотерапия с исследованием заявляемого иммунотропного препарата по примеру 1 в дозе 0,03 мл/кг с интервалом в трое суток в течение 60 дней. По истечении 12 суток после иммунотерапии было проведено повторное иммунологическое исследование. Все основные показатели гуморального иммунитета пришли в норму: альфа-, бета-, гамма-интерферон, комплемент и лизоцин. Больная клинически здорова.

Пример 6.

Больная, 27 лет, диагноз при поступлении - хроническая интоксикация после проведенной хемиотерапии с применением цитостатиков. Иммунологическими исследованиями установлено снижение уровня альфа-, бета-, гамма-интерферона, комплемента и лизоцима.

Больной назначена активная неспецифическая иммунотерапия с применением средства по примеру 2 в дозе 0,03 мл/кг с интервалом в трое суток в течение 40 дней. Для разведения препарата готовили разбавитель, включающий апирогенную ионообменную воду, микроэлименты Mn, Cu, Zn, Co, Cr, Al, Se, Ni, I, макроэлементы К, Са, Мg, Fe, флавоноидные фракции прополиса, экстрат череды трехраздельной, до 10 мас.ч. на 100 мас.ч. воды. После 12 суток после проведенного курса иммунотерапии было проведено повторное иммунологическое исследование. Все основные показатели пришли в норму: увеличение в два раза количества альфа-, бета-, и гамма-интерферона в крови и увеличение активности комплемента и лизоцима от 1,5 дл 2,5 раз. Наблюдали клиническое выздоровление.

Пример 7.

Больной С., 47 лет, диагноз при поступлении - хроническая интоксикация после перенесенной антибиотикотерапии. Иммунологическими исследованиями установлено: недостаточность гуморальных факторов неспецифической резистентности организма; снижение выработки интерферона, комплемента, лизоцима. Кроме того, выявлено снижение уровня нейтрофилов и моноцитов. Больному назначена активная неспецифическая иммунотерапия с применением иммунотропного препарата в дозе 0,03 мл/кг в течение 35 дней с интервалом в трое суток. Повторный анализ крови через 12 дней после иммунотерапии показал,что основные показатели гуморального и клеточного иммунитета были в пределах нормы. Наблюдали стойкое улучшение.

Пример 8.

Проверка эффективности заявляемого препарата проводилась при лечении и профилактике иммунодефицитных состояний после переболевания вирусным гепатитом. Лечение проводили на двух группах больных по 15 человек каждая. Результаты исследований приведены в таблице.

В опытных группах у больных наблюдали резкое усиление гуморального иммунитета > 100% по сравнению с исходными данными. В контрольной группе показатели достоверно ниже. При сочетании применения иммунотропного препарата с традиционным методом терапии также наблюдали отличные результаты. Не было установлено ни одного случая токсичности и непереносимости заявленного препарата.

Данный препарат повышает выработку интерферона в 2 раза, комплемента и лизоцима в 2-2,5 раза; наблюдается коррекция гуморального и клеточного иммунитета; препарат способствует восстановлению функции печени; клиническая картина болезни сокращается, самочувствие больного нормализуется в короткий срок и предотвращается количество осложнений после переболевания респираторными болезнями.

Препарат может использоваться как для парентерального, так и для орального, наружного и местного применения (интраназального, коньюктивального, вагинального).





ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ


1. Иммунотропный препарат, индуцирующий -, - и -интерферон, характеризующийся тем, что он представляет собой экспрессный мед, полученный путем скармливания пчелам состава, включающего монофлерный мед семейства сложноцветных, содержащий 3-окси-флавон-силибин, экстракт листьев мать-и-мачехи, экстракт цветущего горца птичьего, экстракт цветочных корзинок арники, флавоноидные фракции прополиса при соотношении, мас.ч.:

Монофлерный мед,

содержащий 3-окси-флавон-силибин 25-98

Экстракт листьев мать-и-мачехи 1-30

Экстракт горца птичьего 1-40

Экстракт цветочных корзинок арники 1-40

Флавоноидные фракции прополиса 1-40

с последующим фракционированием путем замораживания водного раствора полученного меда до температуры -60С и размораживанием до 15-30С.

2. Препарат по п.1, отличающийся тем, что состав дополнительно содержит до 20 мас.ч. хлорофилл на 100 мас.ч. состава.

3. Препарат по пп.1 и 2, отличающийся тем, что он дополнительно содержит комплекс витаминов А, Е, РР, F и микроэлементы Mg, Se, Zn, Ni, Fe.

4. Препарат по пп.1-3, отличающийся тем, что состав содержит в качестве флафоноидных фракций прополиса флавоноидные фракции березового прополиса.