ИММУНОТРОПНЫЙ ПРЕПАРАТ

ИММУНОТРОПНЫЙ ПРЕПАРАТ "ВИТУЛИН Е"


RU (11) 2236245 (13) C2

(51) 7 A61K35/78, A61K35/64 

(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ 
Статус: по данным на 18.07.2007 - может прекратить свое действие 

--------------------------------------------------------------------------------

(14) Дата публикации: 2004.09.20 
(21) Регистрационный номер заявки: 2001135261/15 
(22) Дата подачи заявки: 2001.12.27 
(24) Дата начала отсчета срока действия патента: 2001.12.27 
(43) Дата публикации заявки: 2003.08.27 
(45) Опубликовано: 2004.09.20 
(56) Аналоги изобретения: RU 2132689 C1, 10.07.1999. RU 2171284 C1, 27.01.2001. RU 2020942 C1, 15.10.1994. WO 92/00086, 10.06.1992. DE 4111782, 15.01.1992. 
(72) Имя изобретателя: Тулев Ю.В. (RU); Тулева Н.П. (RU) 
(73) Имя патентообладателя: Тулев Юрий Владимирович (RU); Тулева Надежда Павловна (RU) 
(98) Адрес для переписки: 193144, Санкт-Петербург, ул. 8-я Советская, 46, кв.2, Ю.В.Тулеву 

(54) ИММУНОТРОПНЫЙ ПРЕПАРАТ "ВИТУЛИН Е" 
Изобретение относится к фармакологии, а именно к средствам для профилактики и лечения иммунодефицитных состояний и нормализации гормонального равновесия. Предложен иммунотропный препарат, представляющий собой мед, полученный путем скармливания пчелам состава, включающего монофлерный мед семейства сложноцветных, содержащий 3-окси-флавон-силибин, экстракт флавоноидных фракций прополиса, экстракт горца птичьего, экстракт цветов кубышки желтой, экстракт трутневого расплода от благополучных по заразным заболеваниям семей в определенном соотношении. Препарат индуцирует эндогенный -, - и -интерферон, обладает противомикробным, противовирусным, фунгицидным действием, способствует нормализации гормонального равновесия и устранению иммунодефицитных состояний организма. 3 з.п. ф-лы, 1 табл. 



ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ


Изобретение относится к области медицины, ветеринарии, а именно к фармакологии, и может использоваться для профилактики и лечения иммунодефицитных состояний организма, нормализации гормонального равновесия, устранения воспалительных процессов в мочеполовой системе, обусловленных вирусами, микробами, грибами, простейшими, и ликвидации дисбактериоза.

Для профилактики и лечения заболевания большое значение имеет индукция эндогенного -, -, -интерферона. Эндогенный интерферон обладает большой биологической активностью, что проявляется в противовирусном, противоопухолевом, антипролиферативном и иммуностимулирующем действии.

Однако в настоящее время в качестве индуктора эндогенного -, -, -интерферона используются ослабленные живые вирусы и вакцины, которые сами неблагоприятно воздействуют на организм.

Особенно остро встает этот вопрос при лечении хронических больных или аллергиков, которым требуется длительное лечение.

Поэтому в настоящее время возрастает интерес к природным препаратам, не обладающим токсичностью и вызывающим коррекцию иммунной системы.

Наиболее близким по технической сущности к заявляемому является средство, включающее мед, прополис, экстракт левзеи и родиолы розовой, экстракт солодки (Патент СССР 1836094, А 64 R 35/64, 1993).

Известное средство повышает сопротивляемость организма к действию неспецифических факторов.

Недостатком известных средств является активирование процесса клеточной пролиферации, которая способствует опухолевой трансформации клеток. Кроме этого, известный препарат содержит пыльцу, которая является сильнейшим аллергеном.

Задачей изобретения является создание иммунотропного препарата индуцирующего эндогенный -, -, -интерферон, обладающего противомикробным, противовирусным, фунгицидным свойством, а также способностью нормализации гормонального равновесия и устранения иммунодефицитных состояний организма.

Поставленная задача достигается иммунотропным препаратом, включающим 98-25 мас.ч. монофлерного меда семейства сложноцветных, содержащего 3-окси-флавон-силибин, 98-25 мас.ч. экстракта горца птичьего, 10-20 мас.ч. экстракта трутневого расплода от благополучных по заразным болезням пчелиных семей, 98-25 мас.ч. экстракта цветов кубышки желтой, 98-25 мас.ч. экстракта флавоноидных фракций прополиса, в частности березового, с последующим фракционированием путем замораживания водного раствора до температуры -60 с последующим размораживанием до 15-30С.

Предпочтительно состав дополнительно содержит до 30 мас.ч. хлорофилла.

Используемый монофлерный пчелиный мед, содержащий 3-окси-флавон-силибин, не обладающий токсическим действием, тормозит лектинин индуцированный митогенез. 3-окси-флавон-силибин, содержащийся в экстракте чертополоха колючего, не обладает токсическими свойствами. Указанный экологически чистый монофлерный мед преимущественно очищают путем медленного замораживания водного раствора или раствора, дополнительно содержащего экстракт меда, с концентрацией не более 80 мас.% до температуры примерно -60С с последующим размораживанием до температуры 15-30С. Постепенное изменение температуры позволяет удалить фракции, вызывающие побочные негативные реакции, вызванные компонентами неразрушенных пыльцевых зерен. Такая очистка позволяет получать фракцию монофлерного меда, преимуществом которой является полное отсутствие токсичности и аллергических реакций, проверенное в лабораторных условиях на белых мышах, морских свинках, кроликах и птицах, а также на крупных домашних животных при парентеральном введении. Наличие 3-окси-флавон-силибина в монофлерном меде подтверждают на цыплятах, чувствительных к заражению вирусом саркомы Рауса. Цыплятам с растущими опухолями вводят фракцию пчелиного меда, содержащую 3-окси-флавон-силибин. Только при наличии 3-окси-флавон-силибина наблюдается рассасывание опухолей, уменьшение некроза. У подопытных цыплят наблюдается сухой некроз и постепенное рассасывание опухоли.

Вторым компонентом заявляемого иммунотропного препарата является экстракт горца птичьего, содержащий кремниевые кислоты и флавоноиды, повышающие активность фагоцитоза. Вероятно, кремниевые кислоты, находящиеся в коллоидном состоянии в сочетании с цинком, флавоноидами и дубильными веществами, витаминами С и К улучшают биохимический аппарат биоцидности фагоцитирующей клетки, повышают способность фиксироваться на объекте фагоцитоза и улучшают переваривание объекта фагоцитоза.

Стандартизацию фагоцитирующей активности препарата проводят по иммунохимическим исследованиям сыворотки крови.

Третьим компонентом препарата является экстракт трутневого расплода, в особенности незапечатанного, от благополучных по инфекционным болезням пчел. Экстракт получали экстрагированием 70%-ным водным раствором этилового спирта при 4С в специальном устройстве в течение 16-18 часов с последующей фильтрацией и загущением экстракта до содержания влаги не более 25%. Одновременно стандартизируют препарат по количеству ферамонов в растворе.

Четвертым компонентом предлагаемого препарата является экстракт кубышки желтой, содержащий фенолкарбоновые кислоты, алкалоиды, дубильные вещества, относящиеся к группе интерфероногенов. Иммуностимулирующее действие обусловлено биологической активностью алкалоидов, фенолкарбоновых кислот в сочетании с микроэлементами меди, цинка, марганца. Экстракцию биологически активных веществ осуществляют обработкой 70%-ным водным раствором этилового спирта цветов кубышки желтой, что позволяет полностью отделить экстракт от пектинов, с последующим загущением в вакуумном устройстве до 25%.

Активацию и стандартизацию эндогенного интерферона альфа, бета, гамма подтверждают иммунологическими исследованиями.

Пятым компонентом заявляемого иммунотропного препарата являются флавоноидные фракции прополиса, в особенности березового, предпочтительно разведенные раствором хлорофилла вида “а” и “в”.

Известно, что водорастворимый хлорофилл содержит порфириновые производные преимущественно в виде их комплексов с магнием.

Прополис в своем составе содержит большое количество фенольных структурно-родственных хелатообразующих соединений. Вероятно, фенольные соединения прополиса взаимодействуют с порфириновыми комплексами, включающими магний или металлы переменной валентности, с образованием хелатных соединений, обуславливающих противоопухолевую активность.

Стандартизацию прополиса проводят экспресс-методами, позволяющими при использовании небольшого количества вещества дать характеристику каждой партии. Основу разработанных экспресс-методов составляют цветные реакции 0,1% спиртового раствора прополиса с рядом комплексообразующих реагентов, в частности водными растворами хлорного железа, ацетата меди и ацетата свинца, определяющими наличие и содержание флавоноидов, и 20%-ной щелочью, изомеризующей флавононы, постоянно присутствующие в прополисе. Для характеристики партий прополиса используется различная адсорбируемость его компонентов на окиси алюминия второй степени активности, а также его способность максимально растворяться в смеси хлороформ : ацетон при их массовом соотношении 2:1 соответственно, что в итоге позволяет количественно определить содержание балластной и биологически активных фракций прополиса. Стандартизовать прополис можно и по подавлению роста растений.

Предлагаемый к изобретению препарат получают смешиванием всех указанных компонентов с последующим скармливанием полученного состава отобранным пчелиным семьям на изолированной пасеке в период окончания продуктивного взятка в ульях Додана-Блатта. В отобранных пчелиных семьях предварительно удаляли все рамки с ранее заготовленным медом, а вместо них ставили рамки с сушью. После скармливания отбирали рамки с медом полностью запечатанными. Откачку экспрессного меда проводили на специально изготовленных медогонках, которые исключают контакт меда с металлом и воздухом.

Полученный экспрессный мед освобождают от белковых фракций описанным выше способом, после чего добавляют комплекс компонентов и вновь скармливают пчелам. Предпочтительно этот процесс повторить трижды с целью концентрации составляющих компонентов и обеспечения максимальной биологической очистки заявленного препарата.

Экспрессный мед обеспечивает полную совместимость смеси и защитное действие по отношению к 3-окси-флавон-силибину, кремниевым кислотам, флавоноидам, фенолкарбоновым кислотам, хлорофиллу высших растений.

Препарат может дополнительно содержать комплекс витаминов, содержащий по меньшей мере витамины А, Е, РР, F и микроэлементы, включающие, как правило, Мg, Са, Se, Zn, I, Ni, Fe.

Необходимо отметить, что смесь компонентов препарата по изобретению обладает более выраженным бактериостатическим, противовоспалительным, протистоицидным действием с нормализацией гормонального равновесия, чем отдельно взятые компоненты. Кроме этого, отдельные компоненты препарата разрушаются при длительном хранении, теряя при этом свою биологическую активность. Однако смесь этих же компонентов сохраняется в течение нескольких лет в активном состоянии.

Изобретение иллюстрируется нижеприведенными примерами.

Пример 1

В монофлерный зрелый мед семейства сложноцветных, соответствующий ГОСТ 19792-74, содержащий в своем составе 3-окси-флавон-силибин, добавляют до 30 мас.ч. экстракта травы горца птичьего. Одновременно добавляют в монофлерный мед до 30 мас.ч. экстракта трутневого расплода от здоровых пчелиных семей и экстракта цветов кубышки желтой - 25 мас.ч., флавоноидные фракции прополиса - 25 мас.ч. При этом препарат получен скармливанием пчелиным семьям на изолированной пасеке, как описано выше.

Далее осуществляют фракционирование. Помещают полученный состав в специально изготовленные сосуды, в которых обеспечивается равномерное замораживание и отбор проб. Замораживание осуществляют до -40С. Затем осуществляют медленное размораживание до температуры 18С. Первые фракции, содержащие белок, не используют.

Экстракт получали экстрагированием корней солодки голой 70%-ным водным раствором этилового спирта до полного отделения пектинов с последующим загущением экстракта в вакууме до содержания влаги не более 25% и добавляют в монофлерный мед до 20 мас.ч. Полученную смесь постепенно скармливают отобранным пчелиным семьям на изолированной пасеке.

Препарат согласно изобретению представляет собой фракции экспрессного меда, содержащие 3-окси-флавон-силибин, экстракт травы горца птичьего, экстракт трутневого расплода, экстракт цветов кубышки желтой, экстрат флавоноидных фракций прополиса.

Пример 2

Для приготовления препарата по изобретению использовали 50 мас.ч. монофлерного пчелиного меда, полученного из нектара растений семейства сложноцветных, содержащих 3-окси-флавон-силибин, 20 мас.ч. экстракта травы горца птичьего, 5 мас.ч. экстракта трутневого расплода, 15 мас.ч. экстракта цветов кубышки желтой, 10 мас.ч. флавоноидных фракций березового прополиса. Дополнительно вводили в состав 30 мас.ч. хлорофилла в расчете на 100 мас.ч. смеси.

Полученную смесь трижды скармливают пчелам, последующее фракционирование осуществляют путем замораживания со скоростью - 1С/ч до температуры -60С и размораживания со скоростью - 1С/чс до температуры 30С. Первые фракции, содержащие белок, не использовали.

Пример 3

К препарату, полученному согласно примеру 1, добавляют комплекс витаминов, включающий витамины А, Е, РР, и F и микроэлементы Мg, Са, Se, Zn, I, Ni, Fe в количестве, обычно используемом в таких препаратах. Добавляемые витамины и микроэлементы совместно с имеющимися в экспрессном меде и прополисе обогащают предлагаемый препарат.

Пример 4

Для препаратов, полученных согласно примерам 1-3, проводили определение цитотоксических и ингибирующих опухолевые вирусы доз in vitro в субкультуре клеток куриных эмбриональных фибробластов, зараженных типовыми штаммами вируса саркомы Рауса. Культивирование клеток куриных эмбриональных фибробластов первой генерации с установленным фенотипом с/о (чувствительные к заражению онкогенными вирусами) проводили с использованием среды роста субкультур клеток на основе среды Игла и триптозофосфатного бульона “Дифко” при рН 6-8.

Для стандартизации препарата по данным 5-7 опытов устанавливали методом разведения препарата следующие дозы:

1. Цитотоксическая доза должна быть не ниже 155 мкг/мл (ЦТД50/мл).

2. Индекс ингибиции должен быть не ниже 1,5 lg ±0,2 ОД 50/мл (онкогенных доз).

3. Концентрация экстракта цветущих растений семейства сложноцветных в пределах 200 мкг/мл.

Пример 5

Больная Н., 32 года, диагноз при поступлении - мастопатия. Иммунологическими исследованиями и ферментным анализом установлено снижение иммунологической реактивности организма, снижение в сыворотке крови интерферона альфа, бета, гамма, фагоцитарной активности и нарушение гормонального равновесия. Больной была назначена активная неспецифическая иммунотерапия с использованием заявляемого препарата. Доза препарата была 0,03 мл/кг с интервалом двое суток в течение 40 суток. Повторный иммунологический анализ показал, что иммунологическая активность организма была в пределах нормы и одновременно наблюдали улучшение гормонального равновесия. Больной был назначен повторный курс активной неспецифической иммунотерапии в аналогичной дозе. После повторного курса длительной активной иммунотерапии наблюдали улучшение клинического состояния и стабилизацию гуморального и клеточного иммунитета. Оперативного вмешательства не проводили.

Пример 6

Больная С., 28 лет, диагноз при поступлении - мастопатия. При иммунологическом обследовании установлено вторичное иммунодефицитное состояние: снижение фагоцитарной активности, нарушение гормонального равновесия, снижение количества интерферона. Больной была назначена активная неспецифическая иммунотерапия с использованием заявляемого препарата. Доза препарата 0,03 мл/кг с интервалом в двое суток. Проведено два курса активной иммунотерапии по 30 суток каждый. Повторный иммунологический анализ показал резкое улучшение иммунологической реактивности организма: повышение в 2,5 раза альфа-, бета- и гамма-интерферона, активация микро- и макрофагов, снижение уровня билирубина. После двух курсов активной иммунотерапии оперативное вмешательство не проводили.

Пример 7

Проверка эффективности заявляемого препарата проводилась при мастопатиях с клиникой выраженного иммунодепрессивного состояния на двух группах больных женщин с мастопатиями, которым предстояло оперативное вмешательство. Опытной группе из 12 больных была назначена активная неспецифическая иммунотерапия с использованием заявляемого препарата. Проведено три курса активной иммунотерапии в дозе 0,03 мл/кг с интервалом в двое суток. Каждый курс проводился в течение месяца. Перерыв между курсами 5-6 суток.

Контрольная группа 12 женщин с мастопатиями иммунотропный препарат не применяли. Больным проводили курс гормональной традиционной терапии. Результаты приведены в таблице. Из таблицы видно, что в опытной группе больных наблюдали усиление иммунологической реактивности организма в два раза по сравнению с контрольной, где наблюдали незначительное увеличение показателей. Больные из опытной группы в дальнейшем не нуждались в хирургическом вмешательстве, по сравнению с контрольной группой. Не было выявлено ни одного случая непереносимости препарата и возникновения побочных явлений.

Заявляемый иммунотропный препарат может быть с успехом применен для профилактики и лечения больных латентными инфекциями, которые с трудом поддаются лечению традиционными средствами. Кроме того, препарат может использоваться как для парентерального, так и для орального, наружного и местного применения (интраназального, конъюктивального, вагинального).





ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ


1. Иммунотропный препарат, индуцирующий эндогенный -, - и -интерферон, характеризующийся тем, что он представляет собой мед, полученный путем скармливания пчелам состава, включающего монофлерный мед семейства сложноцветных, содержащий 3-окси-флавон-силибин, экстракт флавоноидных фракций прополиса, экстракт горца птичьего, экстракт цветов кубышки желтой, экстракт трутневого расплода от благополучных по заразным болезням семей при соотношении, мас.ч.:

Монофлерный мед семейства сложноцветных,

содержащий 3-окси-флавон-силибин 25-98

Экстракт флавоноидных фракций прополиса 25-98

Экстракт горца птичьнго 25-98

Экстракт цветов кубышки желтой 25-98

Экстракт трутневого расплода от благополучных

по заразным болезням семей 1-20

с последующим фракционированием путем замораживания водного раствора меда до температуры -60С и размораживанием до 15-30С.

2. Иммунотропный препарат по п.1, отличающийся тем, что состав дополнительно содержит в качестве флафоноидных фракций прополиса фракции прополиса березового.

3. Иммунотропный препарат по п.1, отличающийся тем, что состав дополнительно содержит до 30 мас.ч хлорофилла.

4. Иммунотропный препарат по п.1, отличающийся тем, что он дополнительно содержит комплекс витаминов А, Е, РР, F и микроэлементы Mg, Se, I, Zn, Ni и Fe.