ИММУНОТРОПНЫЙ ПРЕПАРАТ

ИММУНОТРОПНЫЙ ПРЕПАРАТ "ВИТУЛИН В"


RU (11) 2236244 (13) C2

(51) 7 A61K35/78, A61K35/64 

(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ 
Статус: по данным на 18.07.2007 - может прекратить свое действие 

--------------------------------------------------------------------------------

(14) Дата публикации: 2004.09.20 
(21) Регистрационный номер заявки: 2001135260/15 
(22) Дата подачи заявки: 2001.12.27 
(24) Дата начала отсчета срока действия патента: 2001.12.27 
(43) Дата публикации заявки: 2003.08.27 
(45) Опубликовано: 2004.09.20 
(56) Аналоги изобретения: RU 2132689 C1, 10.07.1999. RU 2133616 C1, 27.07.1999. RU 2020946 С1, 15.10.1994. RU 2020942 C1, 15.10.1994. CN 1162415, 22.10.1997. CN 1310017, 29.08.2001. DE 4111782, 15.10.1992. 
(72) Имя изобретателя: Тулев Ю.В. (RU); Тулева Н.П. (RU) 
(73) Имя патентообладателя: Тулев Юрий Владимирович (RU); Тулева Надежда Павловна (RU) 
(98) Адрес для переписки: 193144, Санкт-Петербург, ул. 8-я Советская, 46, кв.2, Ю.В. Тулеву 

(54) ИММУНОТРОПНЫЙ ПРЕПАРАТ "ВИТУЛИН В" 
Изобретение относится к фармакологии, а именно к средствам для профилактики и лечения вторичных иммунодефицитных состояний и воспалительных процессов вирусной и бактериальной природы. Предложен иммунотропный препарат, представляющий собой мед, полученный путем скармливания пчелам состава, включающего монофлерный мед семейства сложноцветных, содержащий 3-окси-флавон-силибин, флавоноидные фракции прополиса, экстракт горца птичьего, экстракт аронии черноплодной, экстракт зрелых плодов облепихи крушиновидной в определенном соотношении. Препарат индуцирует эндогенный - и -интерферон, активирует клеточный и гуморальный иммунитет, обладает противовоспалительным действием. 3 з.п. ф-лы, 1 табл. 



ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ


Изобретение относится к области медицины, ветеринарии, а именно к фармакологии, и может использоваться для профилактики и терапии острых воспалительных процессов вирусной и бактериальной природы.

Для профилактики и лечения заболевания большое значение имеет индукция эндогенного - и -интерферона. Эндогенный интерферон обладает большой биологической активностью, что проявляется в противовирусном, противоопухолевом, антипролиферативном и иммуностимулирующем действии.

Однако в настоящее время в качестве индуктора эндогенного - и -интерферона используются ослабленные живые вирусы и вакцины, которые сами неблагоприятно воздействуют на организм.

Особенно остро встает этот вопрос при лечении хронических больных или аллергиков, которым требуется длительное лечение.

Поэтому в настоящее время возрастает интерес к природным препаратам, не обладающим токсичностью и вызывающим коррекцию иммунной системы.

Наиболее близким по технической сущности к заявляемому является средство, включающее мед, экстракт левзеи и родиолы розовой (Патент СССР 1836094, А 64 R 35/64, 1993).

Недостатком известного средства является активирование процесса клеточной пролиферации, которая способствует опухолевой трансформации клеток. Кроме того, известный препарат содержит пыльцу, которая является сильным аллергеном.

Задачей изобретения является создание нетаксичного иммунотропного препарата, обладающего противовоспалительным действием, а также способностью активировать клеточный и гуморальный иммунитет.

Поставленная задача достигается иммунотропным препаратом, представляющим собой экспрессный мед, полученный путем скармливания пчелам состава, включающего 98-25 мас.ч. монофлерного меда, содержащего 3-окси-флавон-силибин, экстракта зрелых плодов облепихи крушиновидной 1-35 мас.ч., экстракта аронии черноплодной 1-35 мас.ч., 1-35 мас.ч. экстракта горца птичьего и 1-35 мас.ч. флавоноидных фракций березового прополиса с последующим фракционированием путем замораживания водного раствора меда до -60 и размораживания до 15-30С. Предпочтительно препарат содержит дополнительно до 30 мас.ч. хлорофилла.

Используемый монофлерный пчелиный мед не обладает токсическими свойствами, тормозит лектинин индуцированный митогенез. Кроме этого, известно, что 3-окси-флавон-силибин содержится в экстракте чертополоха колючего и не обладает токсическими свойствами (Т.Н. Драник, Ю.А. Гриневич, Г.М. Дизик. Иммунотропные препараты. - Киев: Здоровье, 1994, с.212). Указанный экологически чистый монофлерный мед преимущественно очищают путем медленного замораживания водного раствора или раствора, дополнительно содержащего экстракт меда, с концентрацией не более 80 мас.%, постепенное изменение температуры позволяет удалить белки, вызывающие побочные негативные реакции, которые вызывают компоненты неразрушенных пыльцевых зерен. Такая очистка позволяет получать фракцию монофлерного меда с полным отсутствием токсичности и аллергических реакций, проверенным в лабораторных условиях на белых мышах, морских свинках, кроликах и птицах, а также на крупных домашних животных при парентеральном введении.

Наличие 3-окси-флавон-силибина в монофлерном меде семейства сложноцветных подтверждают в опытах на цыплятах, чувствительных к заражению вирусом саркомы Рауса. Цыплятам с растущими опухолями вводят фракцию монофлерного меда, содержащую 3-окси-флавон-силибин. Только при наличии 3-окси-флавон-силибина наблюдается рассасывание опухолей, уменьшение некроза. У подопытных цыплят наблюдается в дальнейшем сухой некроз и постепенное рассасывание опухоли.

Вторым компонентом заявляемого иммунотропного препарата является экстракт зрелых плодов облепихи крушиновидной. Экстракт может содержать флавоноиды (флавоноловые агликоны с примесью гликозидов) до 30 мас.%. В опытах на крысах подтверждалась нетоксичность данного компонента, а также его противовоспалительная активность и мембраностабилизирующее действие.

Третьим компонентом заявляемого иммунотропного препарата является экстракт зрелых плодов аронии черноплодной.

Экстракт может содержать антоцианы и цианидин до 20 мас.%.

Четвертым компонентом заявляемого иммунотропного препарата является экстракт горца птичьего, содержащего кремниевые кислоты и флавоноиды.

Экстракцию биологически активных веществ осуществляют обработкой 70%-ным водным раствором этилового спирта измельченных цветущих растений, что позволяет полностью отделить экстракт от пектинов, с последующим загущением в вакуумном устройстве до содержания влаги не более 25%.

Пятым компонентом заявляемого иммунотропного препарата являются флавоноидные фракции прополиса березового, предпочтительно разведенные раствором хлорофилла вида “а” и “в”.

Известно, что водорастворимый хлорофилл содержит порфириновые производные преимущественно в виде их комплексов с магнием (Шаронов Ю.А., Шаронова Н.А. Структура и функции гемоглобина. Молекулярная биология, 1975, №1. т.9, с. 145) (Шлык А.К. Проблемы биосинтеза флавоноидов).

Прополис в своем составе содержит большое количество фенольных структурно-родственных хелатообразующих соединений. Вероятно, фенольные соединения прополиса взаимодействуют с порфириновыми комплексами, включающими магний или металлы переменной валентности, с образованием хелатных соединений, обусловливающих противоопухолевую активность.

Стандартизацию прополиса проводят экспресс-методом, позволяющем при использовании небольшого количества вещества дать характеристику каждой партии. Основу разработанных экспресс-методов составляют цветные реакции 0,1%-ного спиртового раствора прополиса с рядом комплексообразующих реагентов, в частности водными растворами хлорного железа, ацетатом меди и ацетатом свинца, определяющими наличие и содержание флавоноидов, и 20%-ной щелочью, изомеризующей флавоноиды, постоянно присутствующие в прополисе. Для характеристики каждой партии прополиса используется различная адсорбируемость его компонентов на окиси алюминия второй степени активности, а также его способность максимально растворяться в смеси хлороформ : ацетон при их массовом соотношении 2:1 соответственно, что в итоге позволяет количественно определить содержание балластной и биологически активной фракции прополиса. Стандартизовать прополис можно и по подавлению роста растений.

Получаемый по изобретению препарат получали смешиванием всех указанных компонентов с последующим скармливанием полученного состава отобранным пчелиным семьям на изолированной пасеке в период окончания продуктивного взятка в ульях Дадана-Блатта. В отобранных пчелиных семьях предварительно удаляли все рамки с ранее заготовленным медом, а вместо них ставили рамки с сушью. После скармливания отбирали рамки с медом полностью запечатанными. Откачку меда проводили на специально изготовленных медогонках, которые исключали контакт экспрессного меда с металлом и воздухом.

Полученный мед освобождают от белковых фракций описанным выше способом путем замораживания-оттаивания, после чего его вновь скармливают пчелам с добавлением компонентов. Предпочтительно этот процесс повторить три-четыре раза с целью концентрирования составляющих компонентов и обеспечения максимальной биологической очистки заявленного препарата.

Полученный мед обеспечивает полную совместимость смеси и защитное действие по отношению к 3-окси-флавон-силибину, флавоноловым аглинанам, антоцианам, кремниевым кислотам и флавоноидам, а также флавоноидным фракциям прополиса березового. Препарат может дополнительно содержать комплекс витаминов, содержащий по крайней мере витамины А, Е, РР, F и микроэлементы Мg, Se, I, Ca, Zn, Ni, Fe.

Необходимо отметить, что смесь компонентов препарата по изобретению обладает более выраженным бактериостатическим, противовоспалительным свойствами, чем отдельно взятые препараты.

Кроме этого, отдельные компоненты препарата разрушаются при длительном хранении, теряя при этом свою биологическую активность. Однако смесь этих же компонентов сохраняется в течение нескольких лет в активном состоянии.

Изобретение иллюстрируется нижеприведенными примерами.

Пример 1.

В монофлерный зрелый мед, полученный из нектара растений семейства сложноцветых, соответствующий ГОСТ 19792-74, содержащий в своем составе 3-окси-флавон-силибин, добавляют до 15 мас.ч. экстракта зрелых плодов облепихи крушиновидной.

Одновременно добавляют экстракт горца птичьего до 10 мас.ч. Экстракты получали экстрагированием 70%-ным водным раствором этилового спирта до полного отделения пектинов с последующим загущением экстракта в вакууме до содержания влаги не более 25%.

Одновременно добавляют в монофлерный мед до 15 мас.ч. флавоноидных фракций прополиса.

Полученную смесь постепенно скармливают отобранным пчелиным семьям на изолированной пасеке.

Далее проводят фракционирование, помещают полученный состав в специально изготовленные сосуды, в которых обеспечиваются равномерное замораживание и отбор проб. Затем осуществляют медленное размораживание до +18С. Первые фракции, содержащие белок, не используют.

Препарат согласно изобретению представляет собой фракции экспрессного меда, содержащие 3-окси-флавон-силибин, экстракт зрелых плодов облепихи крушиновидной, экстракт зрелых плодов аронии черноплодной, экстракт горца птичьего и флавоноидные фракции прополиса.

Пример 2.

Для приготовления препарата по изобретению использовали 50 мас.ч. монофлерного пчелиного меда, содержащего 3-окси-флавон-силибин, 15 мас.ч. экстракта зрелых плодов облепихи крушиновидной, экстракт зрелых плодов аронии черноплодной 10 мас.ч, экстракта горца птичьего 10 мас.ч., флавоноидные фракции прополиса березового 15 мас.ч. Дополнительно вводили в состав 30 мас.ч. хлорофилла в расчете на 100 мас.ч. смеси.

Полученную смесь трехкратно скармливают пчелам с добавлением компонентов с целью концентрации и последующим фракционированием смеси путем замораживания со скоростью 1С/ч до -60С и размораживания со скоростью 1С/ч до 30С. Первые фракции, содержащие белок, не используют.

Пример 3.

К препарату, полученному согласно примеру 1, добавляют комплекс витаминов, включающий витамины А, Е, РР, и F и микроэлементы Мg, Se, I, Zn, Ni, Fe в количестве, обычно используемом в таких препаратах.

Пример 4

Для препаратов, полученных согласно примерам 1-3, проводили определение цитотоксических и ингибирующих опухолевые вирусы доз in vitro в субкультуре клеток куриных эмбриональных фибробластов, зараженных типовыми штаммами вируса саркомы Рауса. Культивирование клеток куриных эмбриональных фибробластов первой генерации с установленным фенотипом с/о (чувствительные к заражению онкогенными вирусами) проводили с использованием среды роста субкультур клеток на основе среды Игла и триптозофосфатного бульона “Дифко” при рН 6-8.

Для стандартизации препарата по данным 5-7 опытов устанавливали методом разведения препарата следующие дозы::

1. Цитотоксическая доза должна быть не ниже 125 мкг/мл (ЦТД 50/МЛ)

2. Индекс ингибиции - должен быть не ниже 1,3±0,2 lg ОД50/мл (онкогенных доз)

3. Концентрация экстракта цветущих растений семейства сложноцветных в пределах 250 мкг/мл.

Пример 5.

Больной Т., 66 лет, диагноз при поступлении - фронтит и искривление носовой перегородки. Иммунологическими исследованиями установлено: недостаточность гуморального и клеточного иммунитета. Выявлено снижение уровня альфа-, бета- интерферона в крови и уменьшение количества нейтрофилов. Больному назначена активная неспецифическая иммунотерапия с использованием заявляемого иммунотропного препарата по примеру 2 в дозе 0,03 мл/кг в течение 35 дней с интервалом в трое суток. Повторный анализ крови, проведенный через 14 дней после окончания курса активной иммунотерапии, показал, что основные показатели гуморального и клеточного иммунитета были в норме, и наблюдали улучшение клинического состояния.

Пример 6.

Больной Д., 62 года, диагноз при поступлении - гайморит. Иммунологическими исследованиями установлено, что у больного наблюдали снижение гуморального иммунитета, снижение количества интерферона: альфа-, бета-; комплемента и лизоцима, а также уменьшение количества нейтрофилов. Больному назначена активная неспецифическая иммунотерапия с использованием заявляемого иммунотропного препарата по примеру 2. Доза препарата 0,03 мл/кг с интервалом в трое суток в течение 45 дней. Для разведения препарата готовили разбавитель, включающий апирогенную ионообменную воду, микроэлементы Mn, Cu, Zn, Co, Cr, Al, Se, Ni, I, макроэлементы К, Са, Мg, Fe, флавоноидные фракции прополиса, экстрат череды трехраздельной до 10 мас.ч. на 100 мас.ч. воды. По окончании активной иммунотерапии у больного повторно был проведен иммунологический анализ крови. У больного был в норме гуморальный и клеточный иммунитет и наблюдалось улучшение клинического состояния больного. Неприятных ощущений не наблюдали.

Пример 7.

Больная С., 35 лет, диагноз при поступлении - синусит. Проведены иммунологические исследования, которые показали снижение гуморального и клеточного иммунитета. Назначена активная неспецифическая иммунотерапия с использованием заявляемого препарата по примеру 1 в дозе 0,03 мл/кг в течение 45 дней с интервалом в двое суток. Через 12 дней после окончания активной иммунотерапии у больной повторно было проведено иммунологическое обследование. Основные показатели гуморального и клеточного иммунитета были в пределах нормы, и наступило улучшение клинического состояния больной. Неприятных ощущений не наблюдали.

Пример 8.

Проверка эффективности заявляемого препарата проводилась при лечении двух групп больных с установленным диагнозом: фронтит и искривление носовой перегородки с воспалительными процессами. В каждой группе было по 12 человек. Результаты исследований приведены в таблице. В опытной группе наряду с местным лечением применялась активная неспецифическая иммунотерапия с использованием заявляемого иммунотропного препарата в дозе 0,03 мл/кг с интервалом в двое суток. В контрольной группе применяли местное лечение.

Из таблицы видно, что при сочетании применения иммунотропного препарата "ВИТУЛИН В" с традиционным местным лечением получен высокий положительный эффект и нормализовались клеточный и гуморальный иммунитет.

Препарат может быть с успехом использован на разной стадии воспалительного процесса, т.к. повышается выработка эндогенного интерферона, комплемента и лизоцима, происходит коррекция гуморального и клеточного иммунитета, повышение фагоцитоза, уплотнение клеточных мембран и стенок сосудов; функция печени восстанавливается, в связи с чем клинические признаки болезни исчезают в короткий срок и больной выздоравливает.

Заявляемый препарат может быть с успехом применен на разной стадии воспалительных процессов, так как повышается выработка эндогенного интерферона, комплемента и лизоцима, происходит коррекция гуморального и клеточного иммунитета, активация фагоцитоза, уплотнение клеточных мембран, восстановление функции печени, что позволяет эффективно и без осложнений провести лечение хронических больных.

Препарат может использоваться как для парентерального, так и для орального, наружного и местного применения (интраназального, коньюнктивального, вагинального).





ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ


1. Иммунотропный препарат, индуцирующий эндогенный - и -интерферон, характеризующийся тем, что он представляет собой мед, полученный путем скармливания пчелам состава, включающего монофлерный мед, содержащий 3-окси-флавон-силибин, экстракт горца птичьего, экстракт аронии черноплодной, экстракт зрелых плодов облепихи крушиновидной, флавоноидные фракции прополиса при соотношении, мас.ч.:

Монофлерный мед,

содержащий 3-окси-флавон-силибин 25-98

Экстракт зрелых плодов облепихи крушиновидной 1-35

Экстракт аронии черноплодной 1-35

Экстракт горца птичьего 1-35

Флавоноидные фракции прополиса 1-35

с последующим фракционированием путем замораживания водного раствора полученного меда до температуры -60С и размораживанием до 15-30С.

2. Препарат по п.1, отличающийся тем, что состав дополнительно содержит до 30 мас.ч. хлорофилла на 100 мас.ч. состава.

3. Препарат по пп.1 и 2, отличающийся тем, что состав содержит в качестве флафоноидных фракций прополиса флавоноидные фракции березового прополиса.

4. Препарат по пп.1-3, отличающийся тем, что он дополнительно содержит комплекс витаминов А, Е, РР, F и микроэлементы Mg, Se, I, Zn, Ni, Fe.