ИММУНОТРОПНЫЙ ПРЕПАРАТ

ИММУНОТРОПНЫЙ ПРЕПАРАТ "ТУЛИМКАР"


RU (11) 2236243 (13) C2

(51) 7 A61K35/78, A61K35/64 

(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ 
Статус: по данным на 18.07.2007 - может прекратить свое действие 

--------------------------------------------------------------------------------

(14) Дата публикации: 2004.09.20 
(21) Регистрационный номер заявки: 2001135258/15 
(22) Дата подачи заявки: 2001.12.27 
(24) Дата начала отсчета срока действия патента: 2001.12.27 
(43) Дата публикации заявки: 2003.08.27 
(45) Опубликовано: 2004.09.20 
(56) Аналоги изобретения: RU 2132689 C1, 10.07.1999. RU 2133616 C1, 27.07.1999. RU 2020946 C1, 15.10.1994. RU 2020942 C1, 15.10.1994. CN 1162415, 22.10.1997. CN 1310017, 29.08.2001. DE 4111782, 15.10.1992. 
(72) Имя изобретателя: Тулев Ю.В. (RU); Тулева Н.П. (RU) 
(73) Имя патентообладателя: Тулев Юрий Владимирович (RU); Тулева Надежда Павловна (RU) 
(98) Адрес для переписки: 193144, Санкт-Петербург, ул. 8-я Советская, 46, кв.2, Ю.В. Тулеву 

(54) ИММУНОТРОПНЫЙ ПРЕПАРАТ "ТУЛИМКАР" 
Изобретение относится к фармакологии, а именно к средствам для профилактики и лечения опухолевых заболеваний у инокурабельных больных и при поражении СПИДом. Предложен иммунотропный препарат, представляющий собой мед, полученный путем скармливания пчелам состава, включающего монофлерный мед семейства сложноцветных, содержащий 3-окси-флавон-силибин, экстракт флавоноидных фракций прополиса, экстракт цветов арники, экстракт кубышки желтой, экстракт растений семейства сложноцветных, содержащий 3-окси-флавон-силибин в определенном соотношении. Препарат индуцирует эндогенный -интерферон, обладает антипролиферативной и антиметастатической активностью, способствует увеличению сроков ремиссии и продолжительности жизни у инокурабельных опухолевых больных. 3 з.п. ф-лы, 1 табл. 



ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ


Изобретение относится к области медицины, ветеринарии, а именно к фармакологии, и может быть использовано для профилактики и лечения опухолевых заболеваний у инокурабельных больных и при поражении СПИДом.

Для профилактики и лечения заболевания большое значение имеет индукция эндогенного -интерферона. Эндогенный интерферон обладает большой биологической активностью, что проявляется в противовирусном, противоопухолевом, антипролиферативном и иммуностимулирующем действии.

Однако в настоящее время в качестве индуктора эндогенного -интерферона используются ослабленные живые вирусы и вакцины, которые сами неблагоприятно воздействуют на организм.

Особенно остро встает этот вопрос при лечении хронических больных или аллергиков, которым требуется длительное лечение.

Поэтому в настоящее время возрастает интерес к природным препаратам, не обладающим токсичностью и вызывающим коррекцию иммунной системы.

Наиболее близким по технической сущности к заявляемому является средство, включающее мед, экстракт левзеи и родиолы розовой (Патент СССР 1836094, А 64 R 35/64, 1993).

Известное средство повышает сопротивляемость организма к действию неспецифических повреждающих факторов - радиации и токсинов.

Недостатком известного средства является активирование процесса клеточной пролиферации, способствующей опухолевой трансформации клеток.

Задачей изобретения является создание индуцирующего эндогенный -интерферон иммунотропного препарата, обладающего антипролиферативной и антиметастатической активностью, обеспечивающего увеличение сроков ремиссии и продолжительность жизни у инокурабельных опухолевых больных.

Поставленная задача достигается иммунотропным препаратом, представляющим собой экспрессный мед, полученный путем скармливания пчелам состава, включающего 98-25 мас.ч. монофлерного пчелиного меда семейства сложноцветных, содержащего 3-окси-флавон-силибин, и 1-40 мас.ч. экстракта растений семейства сложноцветных, содержащего 3-окси-флавон-силибин и 1-20 мас.ч. экстракта флавоноидных фракций прополиса, в частности березового, 1-2 мас.ч. экстракта подофилла щитовидного, 1-30 мас.ч. экстракта кубышки желтой, 1-20 мас.ч. экстракта цветов армики, с последующим фракционированием путем замораживания водного раствора полученного меда до температуры -60C с последующим размораживанием до 15-30С. Прерапат может содержать до 25 мас.% 3-окси-флавон-силибина.

Используемый экспрессный пчелиный мед, включающий экстракт растений семейства сложноцветных, в частности чертополоха колючего, и содержащий 3-окси-флавон-силибин, флавоноидные фракции прополиса, в частности березового, экстракт подофила щитовидного, экстракт цветов кубышки желтой, не обладает токсическими свойствами, индуцирует выработку эндогенного гамма-интерферона, тормозит лектинин индуцированный митогенез. Кроме этого известно, что 3-окси-флавон-силибин, содержащийся в экстракте чертополоха колючего, и сесквиртерпен, содержащийся в цветах арники, алкалоиды и фенолкарбоновые кислоты, содержащиеся в кубышке желтой, подофиллин, содержащийся в подофилле щитовидном, теряют свои токсические свойства при переработке экспрессного меда пчелами.

Указанный экологически чистый экспрессный пчелиный мед дополнительно очищают путем медленного замораживания водного раствора (-1С/час) до температуры -60С с последующим медленным размораживанием (+1С/час) до температуры 15-30С. Постепенное изменение температуры позволяет удалить белки, вызывающие побочные негативные реакции, которые обусловлены компонентами неразрушенных пыльцевых зерен.

Такая дополнительная очистка позволяет выделить фракции экспрессного пчелиного меда, преимуществом которой является полное отсутствие токсичности и аллергических реакций, проверенное в лабораторных условиях на белых мышах, морских свинках, кроликах, птицах и крупных домашних животных при парентеральном введении.

Наличие 3-окси-флавон-силибина и подофиллина подтверждают опыты на цыплятах с вирусиндуцированными опухолями вируса саркомы Рауса высокой онкогенной активности. У опытных цыплят наблюдается медленное развитие быстрорастущих опухолей и полное их рассасывание.

Наличие гамма-интерферона подтверждается в опытах на телятах при лечении респираторных заболеваний. В опытных группах наблюдается увеличение интерферона в два-три раза по сравнению с контрольной группой.

Экстракцию биологически активных веществ осуществляют обработкой цветущих растений семейства сложноцветных, арники, кубышки желтой и корней растения подофилла щитовидного. Это позволяет полностью очистить биологически активные вещества от пектинов с последующим загущением в вакуумном устройстве до содержания влаги не более 25%. Экстракт может содержать биологически активные вещества до 40 мас.%. Фитоэкстракт может дополнительно содержать витамины по меньшей мере А, Е, РР, F. Экстракт может содержать микроэлементы, по крайней мере Mg, Са, Zn, Ni, Fe, Se. Флавоноидные фракции прополиса разводят раствором хлорофилла вида "а" и "в", которые содержат порфириновые производные преимущественно в виде их компонентов с магнием (Шаронов Ю.А., Шаронова Н.А. Структура и функции гемоглобина - Молекулярная биология, 1975, № 1, т. 9, с.145).

Прополис в своем составе содержит большое количество фенольных структурно-родственных хелатообразующих соединений, обусловливающих противоопухолевую активность.

Вероятно, фенольные соединения прополиса взаимодействуют с порфириновыми комплексами, включающими селен, магний или металлы переменной валентности, с образованием хелатных соединений, обуславливающих активацию Т- и В-клеточного иммунитета. Фитоэкстракт подофилла щитовидного тормозит митотическую активность быстрорастущих опухолей. Индуцированный с помощью экстрактов цветов кубышки желтой и арники, эндогенный гамма-интерферон осуществляет активацию противовирусного, антипролиферативного и противоопухолевого действия, а также активацию макрофагов и естественных киллеров.

Стандартизацию прополиса проводят экспресс-методами, позволяющими при использовании небольшого количества вещества дать характеристику каждой приготовленной партии. Основу разработанных экспресс-методов составляют цветные реакции 0,1% спиртового раствора прополиса с рядом комплексообразующих реагентов, в частности водными растворами хлорного железа, ацетата меди и ацетата свинца, определяющими наличие и содержание флавоноидов, и 20%-ной щелочью, изомеризующей флавононы, постоянно присутствующие в прополисе. Для характеристики каждой партии прополиса используется различная адсорбируемость его компонентов на окиси алюминия второй степени активности, а также его способность максимально растворяться в смеси хлороформ: ацетон при их массовом соотношении 2:1 соответственно, что в итоге позволяет количественно определить содержание балластной и биологически активной фракции прополиса. Стандартизировать прополис можно и по подавлению роста растений.

Предлагаемый по изобретению препарат получают смешиванием всех указанных компонентов с последующим скармливанием полученной смеси пчелиным семьям на изолированной пасеке по специально разработанной технологии в период окончания взятка в стандартных ульях Дадана-Блатта. В отобранных пчелиных семьях предварительно удаляли все рамки с медом, а вместо них ставили рамки со светлой сушью. После скармливания отбирали рамки с медом, только полностью запечатанные. Откачку меда проводили на специальных медогонках, которые исключают контакт экспрессного меда с металлом и кислородом воздуха.

Полученный экспрессный мед освобождают от белковых фракций описанным выше способом, после чего в него вносят все компоненты и вновь скармливают пчелам. Предпочтительно этот процесс повторяют трижды с целью концентрирования компонентов и обеспечения максимальной биологической очистки заявляемого препарата.

Экспрессный мед обеспечивает полную совместимость смеси и защитное действие по отношению к 3-окси-флавон-силибину, подофиллину, флавоноидным фракциям прополиса, хлорофиллу из высших растений, фенолкарбоновым кислотам, сесквиртерпену. Препарат может дополнительно содержать комплекс витаминов, содержащий по меньшей мере витамины А, Е, РР, F и микроэлементы Mg, Se, Ca, Zn, Ni, Fe.

Необходимо отметить, что смесь компонентов препарата по изобретению обладает более выраженным противоопухолевым и антиметастатическим действием, чем отдельно взятые компоненты.

При парентеральном введении (внутримышечно) увеличивается концентрация -интерферона в сыворотке крови в 2 раза по сравнению с исходными данными, увеличивается на 2 lg2 титр специфических вируснейтрализующих антител к типовым штаммам вируса саркомы Рауса, что приводит к ингибированию роста опухолей.

Кроме того, отдельные компоненты препарата разрушаются при длительном хранении, теряя при этом свою биологическую активность. Однако смесь этих же компонентов сохраняется в течение нескольких лет в активном состоянии.

Изобретение иллюстрируется нижеприведенными примерами.

Пример 1.

В монофлерный зрелый мед семейства сложноцветных, соответствующий ГОСТ 19792-74, содержащий в своем составе 3-окси-флавон-силибин, добавляют до 30 мас.ч. экстракта цветущих растений этого же семейства.

Экстракт получали экстрагированием растений 70%-ным водным раствором этилового спирта до полного отделения пектинов с последующим загущением экстракта в вакууме до содержания влаги не более 25%.

Одновременно добавили в мед фитоэкстракт подофилла щитовидного 2 мас.ч., экстракт цветов кубышки желтой - 40 мас.ч., флавоноидные фракции прополиса - 20 мас.ч.

Полученную смесь постепенно скармливали пчелиным семьям на изолированной пасеке, как описано выше.

Далее осуществляют фракционирование. Помещают полученный состав в специальные сосуды, в которых обеспечиваются равномерное замораживание и отбор необходимых проб. Замораживание осуществляют до -40С. Затем осуществляют медленное размораживание до температуры +18С. Первые фракции, содержащие белок, не использовали.

Препарат согласно изобретению представляет собой фракции экспрессного меда, содержащие 3-окси-флавон-силибин, флавоноидные фракции прополиса, экстракт растений семейства сложноцветных, содержащий 3-окси-флавон-силибин, экстракт подофилла щитовидного, экстракт кубышки желтой.

Пример 2.

Для приготовления препарата по изобретению использовали 20 мас.ч. экстракта цветущих растений семейства сложноцветных, содержащих 3-окси-флавон-силибин, 54 мас.ч. монофлерного пчелиного меда, содержащего 3-оксо-флавон-силибин, 10 мас.ч. флавоноидных фракций березового прополиса, 1 мас.ч. экстракта подофила щитовидного, 15 мас.ч. экстракта кубышки желтой.

Полученную смесь трехкратно скармливают пчелиным семьям, получают зрелый экспрессный мед, далее его фракционируют путем постепенного замораживания со скоростью -1С/час до температуры -60С и размораживания со скоростью -1С/час до температуры 30С. Первые фракции, содержащие белок, не используются.

Пример 3.

Препарат готовят в соответствии с примером 1, но дополнительно вводят экстракт цветов арники в количестве 10 мас.ч. на 100 мас.ч. препарата. Используют экстракт, содержащий 25% влаги.

Пример 4.

К препарату, полученному согласно примеру 1, добавляют комплекс витаминов А, Е, PP, F и микроэлементы Mg, Se, Zn, Ni, Fe в количестве, обычно используемым в таких препаратах.

Пример 5.

Для препаратов, полученных согласно примерам 1-4, проводили определение цитотоксических и ингибирующих опухолевые вирусы доз in vitro в субкультуре клеток куриных эмбриональных фибробластов, зараженных типовыми штаммами вируса саркомы Рауса. Культивирование клеток куриных эмбриональных фибробластов первой генерации с установленным фенотипом с/о (чувствительные к заражению онкогенными вирусами) проводили с использованием среды роста субкультур клеток на основе среды Игла и триптозофосфатного бульона “Дифко” при рН 6-8.

Для стандартизации препарата по данным 5-7 опытов устанавливали методом разведения препарата следующие дозы.

1. Цитотоксическая доза должна быть не ниже 125 мкг/мл (ЦТД50/мл).

2. Ингибирующая опухолевую трансформацию клеток доза (индекс ингибиции) должна быть не ниже 1,50,2 lg ОД50/мл (онкогенных доз).

Пример 6.

Больной М. - 50 лет, диагноз при поступлении - аденокарцинома тонкого отдела кишечника, интоксикация, слабость. Перед операцией назначен курс активной неспецифической иммунотерапии с применением препарата, полученного по примеру 1 в дозе 0,025 мл/кг веса в течение 30 суток с интервалом 2 суток. Для введения препарата использовали систему разбавителей, включающую микроэлементы Mn, Cu, Zn, Со, Cr, Al, Se, Ni, I, макроэлементы К, Са, Mg, Fe, флавоноидные фракции прополиса, экстракт череды трехраздельной, экстракт горца птичьего до 10 мас.ч. на 100 мас.ч. воды. Затем операбельное удаление опухолей. Наступила стойкая ремиссия. Метастазов нет в течение года.

Пример 7.

Больная - 62 года, диагноз при поступлении - рак головного мозга. Отмечались выраженные признаки интоксикации, головные боли. Проводится ежемесячно в течение года курс активной иммунотерапии с применением препарата в дозе 0,03 мл/кг веса с интервалом в двое суток. Каждый курс по 27 дней. Исчезли головные боли, признаки интоксикации, рост опухоли не наблюдается.

Пример 8.

Больной Н. - 75 лет, диагноз при поступлении - рак легких, метастазы в лимфатические узлы. Наблюдали выраженные признаки интоксикации. Больному назначена химиотерапия и одновременно курс активной иммунотерапии в течение 30 суток. Неприятных ощущений не наблюдали. Использовали препарат по изобретению, полученный согласно примеру 2, в дозе 0,025 мл/кг с интервалом в двое суток в течение месяца.

Пример 9.

Больной С. - 68 лет, диагноз при поступлении - аденокарцинома предстательной железы, метастазы. Отмечались выраженные признаки интоксикации и боли. Больному назначена химиотерапия и одновременно курс активной иммунотерапии с применением иммунотропного препарата. Использовали препарат по изобретению, полученный согласно примеру 2 в дозе 0,03 мл/кг с интервалом в двое суток в течение 35 суток. Неприятных ощущений и признаков интоксикации не наблюдали. У инокурабельных больных происходит замедление роста опухолей, снижение интоксикации организма, снижается болевой синдром, увеличивается продолжительность и комфортабельность жизни.

Пример 10

Проверка эффективности заявляемого препарата проводилась при лечении хронических инокурабельных опухолевых больных. Лечение проводили методом парентерального введения согласно изобретению в дозе 0,03 мл/кг с интервалом в двое суток в течение 30 дней.

Клинические испытания иммунотропного препарата проведены на двух группах больных с клиническими признаками интоксикации, иммунодефицитным состоянием. Результаты проведенных исследований приведены в таблице.

В опытной группе наблюдали уменьшение признаков интоксикации, ослабление болевых ощущений, улучшение иммунологических показателей.

Препарат может быть использован на различных стадиях опухолевого роста и особенно у инокурабельных больных, т.к. повышается иммунологическая реактивность организма. Кроме парентерального введения препарат может быть использован для орального, наружного и местного применения (интраназального, конъюнктивального, вагинального).

Опухоли I и II стадии исчезают бесследно; в III (конец) и IV стадии наблюдается уменьшение метастаз, снижение болевого синдрома, ослабление цитотоксического действия химических препаратов, легче переносится химиотерапия, наблюдается длительная ремиссия при лейкозе, значительно продлевается нормальная жизнь больных. 



ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ


1. Иммунотропный препарат, индуцирующий эндогенный -интерферон, характеризующийся тем, что он представляет собой мед, полученный путем скармливания пчелам состава, включающего монофлерный мед семейства сложноцветных, содержащий 3-окси-флавон-силибин, экстракт цветов арники, экстракт кубышки желтой, экстракт растений семейства сложноцветных, содержащий 3-окси-флавон-силибин, экстракт флавоноидных фракций прополиса при соотношении, мас.ч.:

Монофлерный мед

семейства сложноцветных,

содержащий 3-окси-флавон-силибин 25-98

Экстракт растений

семейства сложноцветных,

содержащий 3-окси-флавон-силибин 1-40

Экстракт цветов арники 1-20

Экстракт кубышки желтой 1-30

Экстракт подофилла щитовидного 1-2

Экстракт флавоноидных фракций прополиса 1-20

с последующим фракционированием путем замораживания водного раствора полученного меда до температуры -60С и размораживанием до 15-30С.

2. Препарат по п.1, отличающийся тем, что состав содержит до 20 мас.% 3-окси-флавон-силибина.

3. Препарат по пп.1 и 2, отличающийся тем, что состав содержит в качестве флафоноидных фракций прополиса флавоноидные фракции березового прополиса.

4. Препарат по пп.1-3, отличающийся тем, что он дополнительно содержит комплекс витаминов А, Е, РР, F и микроэлементы Mg, Se, Ca, Zn, Ni, Fe.