СРЕДСТВО ДЛЯ ЗАЩИТЫ, СОХРАНЕНИЯ И ВОССТАНОВЛЕНИЯ ЛИМФОИДНЫХ ОРГАНОВ ПРИ ВОЗДЕЙСТВИИ ВИБРАЦИИ

СРЕДСТВО ДЛЯ ЗАЩИТЫ, СОХРАНЕНИЯ И ВОССТАНОВЛЕНИЯ ЛИМФОИДНЫХ ОРГАНОВ ПРИ ВОЗДЕЙСТВИИ ВИБРАЦИИ


RU (11) 2233660 (13) C2

(51) 7 A61K31/683, A61P43/00 

(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ 
Статус: по данным на 18.07.2007 - прекратил действие, но может быть восстановлен 

--------------------------------------------------------------------------------

(14) Дата публикации: 2004.08.10 
(21) Регистрационный номер заявки: 2002119595/15 
(22) Дата подачи заявки: 2002.07.17 
(24) Дата начала отсчета срока действия патента: 2002.07.17 
(43) Дата публикации заявки: 2004.02.27 
(45) Опубликовано: 2004.08.10 
(56) Аналоги изобретения: БОБРОВА С.В. Патоморфологическое и клинико-эндоскопическое исследование желудка при вибрационной болезни. Дис. канд. мед. наук. - Новосибирск, 1997, 204 с. RU 2141325 C1, 20.11.1999. 
(72) Имя изобретателя: Боброва С.В. (RU); Ефремов А.В. (RU); Головнев В.А. (RU); Вакулин Г.М. (RU) 
(73) Имя патентообладателя: Новосибирская государственная медицинская академия (RU) 
(98) Адрес для переписки: 630091, г.Новосибирск, Красный пр-т, 52, НГМА, патентоведу 

(54) СРЕДСТВО ДЛЯ ЗАЩИТЫ, СОХРАНЕНИЯ И ВОССТАНОВЛЕНИЯ ЛИМФОИДНЫХ ОРГАНОВ ПРИ ВОЗДЕЙСТВИИ ВИБРАЦИИ 

Изобретение относится к медицине и фармакологии, конкретнее к иммунологии. Заявляемое средство, включающее эссенциальные фосфолипиды, предлагается использовать, в частности, для сохранения и восстановления структуры и функции тимуса, лимфатических узлов, селезенки; для сохранения в них лимфоэпителиальной паренхимы в корковом и мозговом веществе; тимоцитов и клеток лимфатических узлов, селезенки; ультраструктуры митохондрий и гранулярного эндоплазматического ретикулума; ультраструктуры ретикулярных эпителиальных клеток и лимфобластов, Т-лимфоцитов и макрофагов; ультраструктуры гематотимического барьера в тимусе; для замедления трансформации клеток тимуса, селезенки и лимфатических узлов в фибробластоподобные клетки; для активирования в лимфоидных органах неоангиогенеза; оптимизации в них трансэндотелиального обмена; увеличения микропиноцитозной активности эндотелиоцитов, увеличения образования микроворсинок и выростов на люминальных поверхностях эндотелиоцитов; для улучшения белоксинтетической функции клеток данных органов, увеличения количества рибосом в них; оптимизации энергопродуцирующей функции клеток данных органов; для увеличения содержания функционально активной лимфоидной ткани в них, усиления пролиферации лимфоэпителиальной ткани и снижения темпов апоптоза; усиления процессов клеточного обновления; оптимизации секреторной деятельности субклеточных структур, процесса экструзии секрета; для снижения степени инфильтрации тимуса, селезенки и лимфатических узлов плазматическими и эозинофильными гранулоцитами, тучными клетками; для сохранения и восстановления структурно-функциональных параметров эндотелиоцитов кровеносных капилляров тимуса, селезенки и лимфатических узлов; снижения степени периваскулярного и стромального фиброза в тимусе, селезенке и лимфатических узлах, снижения в них количества ретикулярных клеток и микрофиламентов в эндотелиоцитах; уменьшения дегенеративно-дистрофических изменений в тимусе, селезенке и лимфатических узлах; замедления инволютивной перестройки лимфоидных органов; нормализации иммуноструктурного гомеостаза; усиления иммунного ответа на Т-зависимый антиген; активации Т-клеточного звена иммунитета. Изобретение обеспечивает защиту лимфоидных органов от вибрационного повреждающего воздействия. 22 з.п. ф-лы, 34 табл. 


ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ



Изобретение относится к медицине и фармакологии, конкретнее к иммунологии, профпатологии, патофизиологии, клинической фармакологии, и может быть применено как лечебное и профилактическое средство.

Известны средства, например, полифенольные соединения манжетки обыкновенной, применяемые для коррекции структурно-функциональных нарушений, возникающих в лимфоидных органах при воздействии на организм различных повреждающих факторов, таких, например, как экстремальное охлаждение (Обухова Л.А., Селятицкая В.Г. Влияние адаптогенов различной природы на структуру тимуса и морфофункциональное состояние надпочечников // Проблемы клинической и экспериментальной лимфологии: Материалы междунар. конф. - Новосибирск, 1996. - с.185-188), длительное сдавливание тканей (Ефремов А.В. Морфофункциональные особенности лимфатического русла при СДС и его фармакологической коррекции. - Дисс.докт. мед. наук. - Новосибирск, 1992. - 539 с.) и др.

Известны средства, используемые для предупреждения и восстановления клеточных повреждений, возникающих в различных органах и тканях при действии вибрации. Например, препарат милдронат применяют для коррекции структурно-функциональных нарушений, возникающих в слизистой оболочке желудка при вибрационной патологии (Боброва С.В. Патоморфологическое и клинико-эндоскопическое исследование желудка при вибрационной болезни: Дис.канд. мед. наук. - Новосибирск, 1997. - 204 с.).

Нами не обнаружено средств, предназначенных для коррекции и протекции структурно-функциональных нарушений в лимфоидных органах, возникающих (средств для восстановления и сохранения лимфоидных органов) при вибрационном повреждающем воздействии.

Сущность изобретения

Для коррекции и протекции структурно-функциональных нарушений в лимфоидных органах, возникающих при действии вибрации (для защиты, сохранения и восстановления их структуры и функций при повреждающем вибрационном воздействии) предлагается использовать эссенциальные фосфолипиды.

Заявляемое средство предлагается использовать, в частности, для сохранения и восстановления:

- структуры и функции тимуса, лимфатических узлов, селезенки;

- лимфоэпителиальной паренхимы в корковом и мозговом веществе тимуса, лимфатических узлов и селезенки;

- тимоцитов и клеток лимфатических узлов, селезенки;

- ультраструктуры митохондрий и гранулярного эндоплазматического ретикулума в клетках данных органов;

- ультраструктуры ретикулярных эпителиальных клеток и лимфобластов, Т-лимфоцитов и макрофагов в тимусе, селезенке и лимфатических узлах;

- ультраструктуры гематотимического барьера;

- для замедления трансформации клеток тимуса, селезенки и лимфатических узлов в фибробластоподобные клетки;

- для активирования неоангиогенеза в тимусе, селезенке и лимфатических узлах;

- для оптимизации трансэндотелиального обмена в тимусе, селезенке и лимфатических узлах, увеличения в них микропиноцитозной активности эндотелиоцитов, увеличения образования микроворсинок и выростов на люминальных поверхностях эндотелиоцитов;

- для улучшения белоксинтетической функции клеток данных органов, для увеличения количества рибосом в них;

- для оптимизации энергопродуцирующей функции клеток данных органов;

- для увеличения содержания функционально активной лимфоидной ткани в тимусе, селезенке и лимфатических узлах, усиления в них пролиферации лимфоэпителиальной ткани и снижения темпов апоптоза;

- для усиления процессов клеточного обновления в тимусе, селезенке и лимфатических узлах, увеличения митотической активности их клеточных популяций;

- для оптимизации секреторной деятельности субклеточных структур тимуса и лимфатических узлов, оптимизации процесса экструзии секрета, участвующего в иммуногенезе;

- для снижения степени инфильтрации тимуса, селезенки и лимфатических узлов плазматическими и эозинофильными гранулоцитами, тучными клетками;

- для сохранения и восстановления структурно-функциональных параметров эндотелиоцитов кровеносных капилляров тимуса, селезенки и лимфатических узлов;

- для снижения степени периваскулярного и стромального фиброза в тимусе, селезенке и лимфатических узлах, для снижения в них количества ретикулярных клеток и микрофиламентов в эндотелиоцитах;

- для уменьшения дегенеративно-дистрофических изменений в тимусе, селезенке и лимфатических узлах;

- для замедления инволютивной перестройки лимфоидных органов;

- для нормализации иммуноструктурного гомеостаза в лимфоидных органах;

- для усиления иммунного ответа на Т-зависимый антиген;

- для активации Т-клеточного звена иммунитета.

Эссенциальные фосфолипиды являются активными действующими веществами препарата эссенциале Н (Справочник Видаль: Лекарственные препараты в России: АстраФармСервис, 2001, стр. Б-719-720).

Фармакологическое действие. Гепатопротектор. Активные вещества “эссенциальные” фосфолипиды (субстанция EPL) являются основными элементами в структуре клеточной оболочки и клеточных органелл печени, в состав EPL входят диглицеридные эфиры холинфосфорной кислоты природного происхождения с преобладанием полиненасыщенных жирных кислот, в основном линолевой (около 70%), линоленовой и олеиновой кислот. EPL в организме оказывает нормализующее действие на метаболизм липидов, белков и на детоксикационную функцию печени; восстанавливает и сохраняет клеточную структуру печени и фосфолипидозависимые энзиматические системы; тормозит формирование соединительной ткани в печени. Показания к применению: жировая дегенерация печени, хронические гепатиты, цирроз печени, нарушения функции печени в результате осложнения при других заболеваниях, радиационный синдром, токсикоз беременности, отравления, псориаз.

Сведения, подтверждающие возможность осуществления изобретения с реализацией назначения

Исследования были проведены на 170 крысах-самцах линии Вистар массой 180-220 мг. Животных подвергали общей вертикальной вибрации в течение 1 часа один раз в сутки (частота 32 Гц, ускорение 50 м\сек2) в специальной клетке, установленной на площадке вибратора от вибростенда ВЭДС-100Б. Выбранные параметры вибрации в эксперименте позволяют вызвать клиническую картину вибрационной патологии, стандартизировать условия проведения морфологических исследований и проследить процессы поражения и восстановления.

Для фармакологической коррекции вибрационного воздействия на организм использовали эссенциальные фосфолипиды (препарат эссенциале Н, („Aventis, Франция-Германия, раствор в ампулах). Введение раствора эссенциальных фосфолипидов крысам осуществляли per os с помощью зонда в дозе 20 мг на 1 кг массы тела ежедневно на протяжении всего периода вибрационной экспозиции. Группе сравнения per os с помощью зонда вводили дистиллированную воду в эквивалентном объеме по той же схеме. В восстановительный период введение препаратов не производилось.

В каждой из групп исследования была подгруппа интактных животных (контрольная подгруппа), не подвергавшихся воздействию вибрации и не получавших ни эссенциальных фосфолипидов, ни дистиллированной воды. Животные были распределены по группам исследования следующим образом:

- группа 1 - острое однократное воздействие. Животных этой группы подвергали вибрации однократно в течение 1 часа. Сразу после воздействия вибрации часть животных (12 особей, подгруппа 1.1) получала препарат эссенциальных фосфолипидов, другие животные (10 особей, подгруппа 1.2) - получали дистиллированную воду, контрольная подгруппа (1.3) состояла из 10 особей. На следующие сутки всех животных забивали;

- группа 2 - хроническое воздействие вибрации на протяжении 10 суток. Животных подвергали вибрации (1 час один раз в сутки) на протяжении 10 суток. Ежедневно, сразу после воздействия вибрации, 12 особей (подгруппа 2.1) получали эссенциальные фосфолипиды, 10 особей (подгруппа 2.2) - дистиллированную воду, контрольная подгруппа (2.3) состояла из 10 особей. На 11-е сутки животных забивали;

- группа 3 - хроническое воздействие вибрации на протяжении 30 суток. Животных подвергали вибрации (1 час один раз в сутки) на протяжении 30 суток. Ежедневно, сразу после воздействия вибрации 12 особей (подгруппа 3.1) получали эссенциальные фосфолипиды, 10 особей (подгруппа 3.2) -дистиллированную воду, контрольная подгруппа (3.3) состояла из 10 особей. На 31-е сутки животных забивали;

- группа 4 - хроническое воздействие вибрации на протяжении 30 суток плюс 30-суточный восстановительный период. Животных подвергали вибрации (в течение 1 часа 1 раз в сутки) на протяжении 30 суток. Ежедневно, сразу после воздействия вибрации, 12 животных (подгруппа 4.1) получали эссенциальные фосфолипиды, 10 особей (подгруппа 4.2) - дистиллированную воду, контрольная подгруппа состояла из 10 особей. После 30-суточного воздействия вибрации животные жили еще 30 суток, не получая ни эссенциальных фосфолипидов, ни воды, после чего их забивали;

- группа 5 - хроническое воздействие вибрации на протяжении 30 суток плюс 60-суточный восстановительный период. Животных подвергали вибрации (в течение 1 часа 1 раз в сутки) на протяжении 30 суток. Ежедневно, сразу после воздействия вибрации, 12 животных (подгруппа 5.1) получали эссенциальные фосфолипиды, 10 особей (подгруппа 5.2) - дистиллированную воду, в контрольной подгруппе было 10 особей. После 30-суточного воздействия вибрации животные жили еще 60 суток, не получая ни эссенциальных фосфолипидов, ни воды, после чего их забивали.

Забой животных проводили декапитацией в одно и тоже время суток с 10 до 11 часов утра. В каждой группе объектом исследования служили центральный лимфоидный орган (тимус) и периферический (подвздошный лимфатический узел). В качестве контроля были взяты указанные органы интактных животных.

Подготовку образцов органов, планирование и проведение морфометрических исследований выполняли в соответствии со ставшими общепринятыми принципами и методами, опубликованными в ряде отечественных и зарубежных работ (Шахламов В.А. Количественный электронно-микроскопический анализ в современной цитологии //Арх. анатомии, гистологии и эмбриологии. - 1968. - 54. №6. - С.89-95; Христолюбова Н.Б. К истории развития стереометрических методов и вывод основных формул //Применение стереологических методов в цитологии. - Новосибирск, 1974. - С.5-10; Автандилов Г.Г. Проблемы патогенеза и патологоанатомической диагностики болезней в аспектах морфометрии. М.: Медицина, 1984. 156с.; Автандилов Г.Г., Невзоров В.П., Невзорова О.Ф. Системный стереометрический анализ ультраструктур клеток. Кишинев: Штиинца, 1984. 168с.; Непомнящих Л.М., Лушникова Е.Л., Непомнящих Г.И. Морфометрия и стереология гипертрофии сердца. - Новосибрск: Наука, 1986. 303с.; Weibel E.R. Stereological methods. Practical method for biological morphometry // Academic Press.-London; New York; Toronto; Sudney; San Francisco, 1979. №1. P.47-50; Weibel E.R., Staubli W., Ghadi H.R., Hess F.A. Corelated morphometric and biochemical studies on the liver cell. Morphometric model, stereologic methods and normal morphometric. Date for rat liver //J. Cell Biol. 1969. №1. P.68-9).

Тимус очищали от окружающей жировой ткани и взвешивали на торсионных весах. Для светооптического исследования органы фиксировали в жидкости Теллесницкого, обезвоживали в серии спиртов возрастающей концентрации и заливали в смесь гомогенизированного парафина с воском. С помощью ротационного микротома изготавливали серийные или полусерийные срезы толщиной 10 мкм и окрашивали их гематоксилином Майера и эозином. Для изучения клеточного состава тимуса и подвздошных лимфатических узлов часть срезов толщиной 5 мкм окрашивали азуром (В) и эозином (Y) (Serva). Срезы заключали в бальзам.

Для определения абсолютных объемов тимуса и лимфатических узлов и их отдельных структурно-функциональных зон использовали морфометрический метод, предложенный Ю.И. Бородиным, А.Ю. Летягиным, В.Н. Григорьевым (Бородин Ю.И., Летягин А.Ю., Григорьев В.Н. Способ определения количества лимфоидных элементов в лимфатических узлах. Авторское свидетельство №1629791 (СССР) // Бюллетень изобретений. 1991. №7).

Морфометрию проводили на срезах толщиной 10 мкм, окрашенных гематоксилином и эозином. Для исследования брали каждый 15 срез из полной серии срезов с целого органа. Каждая структурно-функциональная зона учитывалась отдельно. Морфометрию проводили методом точечного счета с помощью стандартной сетки (256 точек), вмонтированной в окуляр микроскопа Jenamed Hystology.

Сетку предварительно откалибровывали с помощью объект-микрометра в абсолютных размерах и определяли площадь, представленную одной точкой в квадратном миллиметре, разделив площадь, ограниченную всей тест-системой (тест-система для морфометрических исследований), на количество точек в тест-системе. Переход к объему, представленному одной точкой тест-системы, осуществляли путем умножения предыдущей величины (площадь зоны одной точки) на среднюю толщину среза и отношение общего количества срезов к числу срезов, использованных для исследования. Расчет абсолютного объема каждой структуры производили, умножая суммарное (со всех исследованных срезов) количество точек, попавших на данную структуру, на объем, представленный одной точкой тест-системы.

Срезы тимуса морфометрировали при увеличении в 16 раз, выделяли следующие структурно-функциональные зоны: корковое вещество, мозговое вещество, капсулу и междольковые перегородки. Подсчитывали все тельца Гассаля на срезах с целого органа, а затем рассчитывали их количество на стандартную площадь - 10 мм2.

Срезы подвздошных лимфатических узлов морфометрировали при увеличении в 32 раза. Выделяли следующие структурно-функциональные зоны: капсулу, краевой синус, в корковом веществе первичные и вторичные лимфоидные узелки с выделением в последних герминативного центра и короны, межузелковую зону, глубокую кору (паракортикальную зону), в мозговом веществе мозговые тяжи и мозговые синусы.

Клеточный состав тимуса и лимфатических узлов изучали на срезах толщиной 5 мкм, окрашенных азуром В и эозином Y. При увеличении в 1000 раз (объектив 100 - масляная иммерсия, окуляр 10) подсчитывали абсолютное количество разных видов клеток на стандартной площади 9000 мкм2. Дифференцировали иммунобласты, средние и малые лимфоциты, незрелые и зрелые плазматические клетки, клетки Мотта, клетки с фигурами митозов, клетки с пикнотическим ядром, ретикулярные клетки (в тимусе эпителиальные клетки), макрофаги, моноциты, эозинофильные гранулоциты, тучные клетки. Подсчет клеток проводили: в тимусе в субкапсулярной зоне и внутренней зоне коркового вещества и в мозговом веществе; в лимфатических узлах в герминативных центрах вторичных лимфоидных узелков, глубокой коре и мозговых тяжах. В связи с тем, что в тимусе тучные клетки располагаются преимущественно в соединительнотканной строме, подсчет их проводили в 10 полях зрения, площадью 22500 мкм2, дифференцировали тучные клетки с разной степенью дегрануляции (0-III). Для всех морфометрических данных определяли абсолютные показатели.

Методика электронной микроскопии. Для электронно-микроскопического исследования материал (образцы подвздошных лимфатических узлов, тимуса) забирали в соответствии с требованиями, предъявляемыми к препаративным процедурам по их подготовке, взятию, измельчению и фиксации для электронной микроскопии (Пиз Д. Гистологическая техника в электронной микроскопии. - М., Изд-во иностранной литературы, 1963. - 164 с.; Уикли Б. Электронная микроскопия для начинающих. - М.: Мир, 1975. - 324 с.; Миронов А.А., Комиссарчик Я.Ю., Миронов В.А. Методы электронной микроскопии в биологии и медицине. СПб: Наука, 1994). Кусочки органов менее 1 мм3 фиксировали в 4% параформальдегидном изотоническом 0,1М фиксаторе на фосфатном буфере Миллонига при рН 7,4 (Millonig G. Advantages of a phosphate buffer for OsО4 solutions in fixation. J. Appl. Physics. - 1961. - Vol. 32. - P.1637-1639) при температуре тающего льда в течение 2 часов. Затем после промывки в течение 15 мин в охлажденном буфере Миллонига образцы в течение 1 ч дополнительно фиксировались также на холоде в 1% осмиевом фиксаторе на 0,2 М какодилатном буфере (рН 7,4) с добавлением в него 1,5% ферроцианида калия (White D.L., Мазurkiewicз J.E., Barmett R.J. A chemical mechanism for tissue staining by osmium tetroxide-ferrocyanide mixtures. J. Histochem and Cytochem. - 1979. - Vol. 27. - №7. P.1084-1091) - с целью обеспечения процесса последовательного одноэлектронного восстановления OsО4 до неокисленнго состояния, для избирательного контрастирования субклеточных структур, в том числе и цитоскелета клеток. После дегидратации образцов в спиртах возрастающей концентрации образцы заключались в эпон-812 (Lugt J.H. Improvements in epoxy resin embedding methods. - J. Biophys. Biochem. Cyt. - 1961. - Vol. 9. - P.409-414).

Ультратонкие срезы толщиной 35-45 нм получали на ультратоме LKB-8800, контрастировали вначале насыщенным водным раствором уранилацетата (Watson M.L. Staining of tissue sections for electron microscopy with heavy metals. - J. Biophys. Biochem. Cyt. - 1958. - Vol. 4. - P.475-478) при 40С в течение 40 мин, а затем цитратом свинца (Reynolds E.S. The use of lead citrate at high pH as an electronopague stain in electron microscopy // J. Cell Biol. 1963. - Vol. 17. - P. 208-212) при комнатной температуре в атмосфере азота в течение 20 мин. После напыления углеродом в вакууме (Бирюзова В.Н. и др. Электронно-микроскопические методы исследования биологических объектов. - М., Изд-во Академии наук СССР, 1963. - 200 с.) контрастированные срезы изучались с помощью электронных микроскопов JEM-7A, JEM-100S / SEG, JEM-1010. Изучению ультратонких срезов предшествовало исследование в световом микроскопе полутонких срезов (1 микрон), окрашенных толуидиновым синим (Миронов А.А., Комиссарчик Я.Ю., Миронов В.А. Методы электронной микроскопии в биологии и медицине. - СПб: Наука, 1994) с целью прицельной ультратомии выбираемых на них различных зон исследуемых органов.

Эпителиоциты тимуса и эндотелиоциты кровеносных капилляров (по 20 клеток на каждую группу) морфометрировали при конечном увеличении в 30000 раз с помощью многоцелевой открытой тестовой системы. Определяли объемные, поверхностные и численные плотности органоидов, включений, везикулярных структур (табл. 1).

Методы статистической обработки. Цифровой материал обрабатывали с использованием методов вариационной статистики (Плохинский Н.А. Биометрия. - М.: Изд-во МГУ, 1970. - 367с.; Тюрин Ю.Н., Макаров А.А. Анализ данных на компьютере. - М.: Инфра-М, 1995. - 384 с.).

Расчеты проводили с помощью табличного процессора Excel 5,0 на компьютере IBM PC/AT - Pentium.

В таблицах приведены значения М±m, указана достоверность различий между исследованными показателями по t - критерию (Стьюдента).

Примечание: Обозначение и размерность параметров приведены согласно рекомендациям Международного стереологического общества (Weibel E.R. Stereological methods. Practical method for biological morphometry // Academic Press.London; New York; Toronto; Sudney; San Francisco, 1979. - №1.-P.47-50).

Данные, полученные при воздействии вибрации на фоне введения дистиллированной воды (табл. 2-18), свидетельствуют, что по мере увеличения продолжительности вибрационного воздействия происходило нарастание дистрофических изменений в эпителиальных клетках тимуса и эндотелиоцитах кровеносных капилляров, структурных компонентах подвздошных лимфатических узлов аналогично изменениям в группе животных, подвергнутых вибрации без коррекции. Эти изменения были связаны с отечными явлениями в клетках, набуханием органоидов, снижением белоксинтетической функции клеток и кератинизацией эпителиоцитов значительным накоплением в цитоплазме филаментов, затруднением процесса секреции. Для больших медуллярных клеток было характерно снижение секреторной активности объемные плотности секреторных вакуолей значительно снижались. Результаты исследования свидетельствуют, что введение дистиллированной воды значительно не влияло на структурную организацию тимуса и подвздошных лимфатических узлов животных, подвергнутых действию вибрации.

В восстановительный период, через 30 и 60 суток после прекращения вибрационного воздействия на фоне введения дистиллированной воды, в ультраструктурной организации эпителиальных клеток тимуса происходили структурные изменения, свидетельствующие о процессах внутриклеточной регенерации. Увеличивался объем и количество митохондрий, возрастали объемы, занимаемые мембранами гранулярного эндоплазматического ретикулума. Возрастали, хотя и оставались в некоторых клетках ниже уровня контроля, численные плотности прикрепленных и свободных полисомальных рибосом. Сохранялась значительная кератинизация цитоплазмы эпителиальных клеток, связанная с накоплением филаментов (табл. 2-18).

В эндотелиоцитах кровеносных капилляров коркового вещества лимфатических узлов при воздействии вибрации на фоне введения дистиллированной воды происходило нарастание дистрофических изменений клеток, связанных со снижением белоксинтетической функции и уменьшением трансэндотелиального обмена (табл. 17). В постконтактном периоде в эндотелиоцитах кровеносных капилляров коркового вещества лимфатических узлов не происходило в полной мере восстановления белоксинтетической и транспортной функции клеток, количество рибосом достоверно было снижено, сохранялось снижение микропиноцитозной активности эндотелиоцитов (табл. 18). Введение дистиллированной воды не привносило достоверных изменений в структурную организацию эндотелиоцитов кровеносных капилляров лимфатических узлов животных, подвергнутых общей вибрации.

Таким образом, при изучении структурно-функциональных изменений паренхиматозных клеток и стромальных компонентов лимфоидных органов при воздействии вибрации на фоне введения дистиллированной воды и в восстановительном периоде было выявлено, что дистиллированной вода не оказывает положительного влияния на структурно-клеточные параметры в тимусе и лимфатических узлах и не может служить в качестве протективного и корригирующего средства при дестабилизирующем воздействии вибрации.

Изучение эффективности фармакологической коррекции с помощью эссенциальных фосфолипидов, возникающих при вибрации клеточных и субклеточных изменений в лимфоидных органах, показало следующее.

Общий объем тимуса при однократной вибрации на фоне использования препарата эссенциальных фосфолипидов достоверно снижался. К 30 суткам действия вибрации на фоне введения эссенциальных фосфолипидов данный показатель был достоверно выше уровня контроля (табл. 19). Объем коркового вещества через сутки после однократного воздействия вибрации снижался, затем имел тенденцию к восстановлению и к 30 суткам вибрационной экспозиции на фоне введения эссенциальных фосфолипидов полностью достигал объема такового показателя контрольных животных. Объем мозгового вещества тимуса был достоверно ниже через сутки после однократного действия вибрации на фоне введения эссенциальных фосфолипидов. В дальнейшем объем мозгового вещества не имел достоверных отличий от контроля. Массовый индекс тимуса практически не изменился. Объем соединительнотканной стромы на протяжении всего периода вибрации на фоне введения эссенциальных фосфолипидов не превышал уровень контроля.

Изучение клеточного состава показало, что в субкапсулярной зоне тимуса у животных данной экспериментальной группы плотность клеточных элементов на стандартной площади максимально снижалась на 10 сутки, а к 30 суткам хотя и имела тенденцию к увеличению, но не достигала интактного уровня. Количество иммунобластов после однократной вибрации снизилось (табл. 20). К 30 суткам количество иммунобластов в субкапсулярной зоне тимуса превышало уровень контрольных животных. Если численность средних лимфоцитов на фоне введения эссенциальных фосфофолипидов в первые сутки лишь имела тенденцию к снижению, то на 10 сутки опыта их количество было достоверно меньше уровня контроля. К 30 суткам численность средних лимфоцитов была уже в пределах нормы. Количество малых лимфоцитов достоверно снижалось на 10 и 30 сутки воздействия вибрации на фоне введения эссенциальных фосфолипидов. Митотическая активность клеточных элементов в субкапсулярной зоне к 30 суткам достоверно увеличивалась. При этом количество гибнущих клеток имело достоверные различия с уровнем контроля на 30 сутки. В данной зоне коркового вещества тимуса численность эпителиальных клеток на протяжении всего периода вибрации на фоне введения эссенциальных фосфолипидов определялась в пределах исходных показателей. Количество плазматических клеток достоверно увеличивалось на 10 и 30 сутки эксперимента по отношению к соответствующему показателю контроля. Численность эозинофилов субкапсулярной зоны тимуса достоверно возрастала только к 30 суткам.

Во внутренней зоне коркового вещества тимуса при действии вибрации на фоне введения эссенциальных фосфолипидов также увеличивалось содержание молодых форм лимфоидных клеток (табл. 21). Количество иммунобластов достоверно превышало контрольное значение, причем в наибольшей мере на 30 сутки. Количество средних лимфоцитов достоверно увеличивалось на 1,10 и 30 сутки эксперимента. Численность малых лимфоцитов во внутренней зоне коркового вещества тимуса достоверно снижалось только на 10 сутки, в остальные сроки действия вибрации на фоне введения эссенциальных фосфолипидов достоверных различий в их количестве с интактным уровнем не было выявлено. В целом общее количество лимфоидных клеток значительно возрастало на 30 сутки вибрационной экспозиции на фоне коррекции эссенциальными фосфолипидами. Численность клеток с фигурами митозов имела тенденцию к увеличению на ранних этапах воздействия вибрации на фоне введения эссенциальных фосфолипидов, достигая достоверных различий на 30 сутки.

Содержание макрофагов возрастало на протяжении всего периода воздействия вибрации на фоне коррекции эссенциальными фосфолипидами и было достоверно выше контрольного уровня. Количество эпителиальных клеток имело тенденцию к возрастанию по срокам эксперимента. Эозинофилы были выявлены только к 30 суткам вибрации на фоне введения эссенциальных фосфолипидов.

В мозговом веществе тимуса плотность клеточных элементов на стандартной площади достоверно увеличивалась на 10 и 30 сутки относительно соответствующих показателей контроля (табл. 22). Общая численность клеток лимфоидного ряда была также достоверно выше на 10 и 30 сутки действия вибрации на фоне коррекции эссенциальными фосфолипидами. Количество иммунобластов достоверно возрастало к концу периода действия вибрации на фоне введения эссенциальных фосфолипидов. Численность средних лимфоцитов достоверно возрастала уже с 10 суток эксперимента, а малых лимфоцитов - с 1 суток на фоне введения эссенциальных фосфолипидов. Количество клеток с фигурами митозов было достоверно выше на всех сроках вибрации при введении эссенциальных фосфолипидов. Численность гибнущих клеток хотя и несколько возрастала, но все же она не была столь высокой, как при действии вибрации без коррекции эссенциальными фосфолипидами, при введении дистиллированной воды (табл. 5). Количество макрофагов в мозговом веществе достоверно превышало контрольное значение. Число эпителиальных клеток достоверно увеличивалось на 1 сутки, а далее имело тенденцию к возрастанию. Количество плазматических клеток имело тенденцию к увеличению на ранних сроках эксперимента, на 30 сутки воздействия вибрации при введении эссенциальных фосфолипидов их количество было достоверно выше контроля, но ниже, чем при введении дистиллированной воды (табл. 22, 5). Эозинофилы в мозговом веществе тимуса на фоне фармакологической коррекции были выявлены лишь в незначительном количестве на 10 и 30 сутки эксперимента.

Изменения тучноклеточной популяции в тимусе при воздействии общей вибрации на фоне введения эссенциальных фосфолипидов заключались в следующем. Соотношение между различными формами тучных клеток, установившееся во время введения эссенциальных фосфолипидов, существенно не изменялось (табл. 23). По сравнению с контролем у животных данной группы абсолютное число и доля тучных клеток с дегрануляцией II степени к концу 30 суток имели тенденцию к уменьшению (табл. 23).

Количество тучных клеток с III степенью дегрануляции не имело достоверных отличий от контроля. Содержание телец Гассаля в мозговом веществе не имело достоверных отличий по сравнению с исходными показателями (табл. 19).

При однократном воздействии вибрации в ультраструктурной организации светлых эпителиальных клеток увеличивалось достоверно к 30 суткам количество прикрепленных рибосом. Содержание филаментов достоверно снижалось на 10 и 30 сутки. Достоверно возрастала объемная плотность митохондрий на 10 и 30 сутки (табл. 24);

Морфометрические исследования больших медуллярных клеток выявили снижение в 2 раза объемной плотности секреторных вакуолей после первых суток и в четыре и более раз после 10 и 30 суток соответственно. Цистерны гранулярного эндоплазматического ретикулума были несколько расширенными. Цифровые показатели рибосом имели тенденцию к увеличению по срокам вибрационной экспозиции (табл. 25).

В структурной организации кровеносных капилляров тимуса выделяли светлые и темные эндотелиальные клетки. Отмечали повышенное содержание микропиноцитозных везикул. Возрастали объемные плотности: базальных - на 80%, люминальных - на 55%, цитоплазматических - на 30%, суммарная объемная плотность всех везикул в клетке - на 53% (табл. 26). Митохондрии были набухшими, с небольшим количеством крист, их объемная плотность по срокам эксперимента возрастала. Между эндотелиоцитами присутствовали все типы контактов конец в конец, наложения и интердигитации.

Морфометрическое исследование подвздошных лимфатических узлов выявило тенденцию к увеличению их общего объема на фоне коррекции эссенциальными фосфолипидами на протяжении всего периода вибрации по сравнению с контрольными показателями (табл. 27). При этом объемы как коркового, так и мозгового вещества определялись в пределах нормы. В показателях объема первичных лимфоидных узелков, по сравнению с уровнем контроля, достоверных различий не было выявлено. Объем же вторичных лимфоидных узелков достоверно возрастал к 30 суткам действия вибрации на фоне коррекции эссенциальными фосфолипидами по сравнению с интактным уровнем. Очень важно отметить, что объем глубокой коры на 1 сутки имел тенденцию к снижению, а уже к 10 суткам возрастал, хотя не имел достоверных различий с уровнем контроля. Объем площади межузелковой зоны не имел достоверных различий с контролем.

Как видно из таблицы 27, морфометрическое исследование большинства структур подвздошных лимфатических узлов не выявило достоверных изменений их микроанатомической организации в ответ на воздействие вибрации на фоне коррекции эссенциальными фосфолипидами.

Исследование клеточного состава подвздошных лимфатических узлов показало, что в герминативных центрах плотность клеточных элементов на единицу площади не имела достоверных отличий с контролем. Количество иммунобластов на протяжении всего периода вибрации при введении эссенциальных фосфолипидов имело тенденцию к увеличению, по сравнению с контрольным уровнем (табл. 28). Численность средних лимфоцитов достоверно увеличивалась к 30 суткам эксперимента. Количество малых лимфоцитов достоверно увеличивалось уже к 10 суткам действия вибрации при введении эссенциальных фосфолипидов. Клетки с фигурами митозов имели тенденцию к увеличению на протяжении всего периода вибрации по сравнению с контролем. Численность макрофагов не имела достоверных различий с таковым показателем уровня интактных животных.

Клеточный состав глубокой коры подвздошных лимфатических узлов изменялся следующим образом. Плотность клеточных элементов на единицу площади достоверно возрастала преимущественно на 10 сутки действия вибрации на фоне коррекции эссенциальными фосфолипидами (табл. 29). Количество иммунобластов, малых и средних лимфоцитов достоверно возрастало, по сравнению с уровнем контроля, начиная с 10 суток эксперимента. Количество клеток с фигурами митозов в глубокой коре подвздошных лимфатических узлов имело тенденцию к увеличению на протяжении всего срока действия вибрации при введении эссенциальных фосфолипидов. Количество макрофагов было достоверно увеличено на протяжении всего срока вибрации, по сравнению с исходными показателями. Численность ретикулярных клеток не имела достоверных отличий с контролем.

В мозговых тяжах подвздошного лимфатического узла плотность клеточных элементов на стандартной площади не имела достоверных различий с уровнем контроля на протяжении всего периода действия вибрации на фоне коррекции эссенциальными фосфолипидами (табл. 30). Количество средних лимфоцитов достоверно увеличивалось на 10 сутки, в остальные периоды достоверных отличий в данном показателе с контролем не выявлено. Численность незрелых плазматических клеток и клеток Мотта достоверно возрастала к 30 суткам вибрационной экспозиции. При исследовании количества плазмобластов, зрелых плазматических клеток и ретикулярных клеток была выявлена тенденция к их увеличению на протяжении периода вибрации по сравнению с контролем. Митотическая активность имела тенденцию к возрастанию в мозговых тяжах подвздошных лимфатических узлов по срокам эксперимента, по сравнению с контролем. Численность гибнущих клеток достоверно была выше такового показателя у интактных животных, но меньше, чем у животных при действии вибрации на фоне введения дистиллированной воды, не получавших коррекцию эссенциальными фосфолипидами (табл. 30, 16). Количество макрофагов, моноцитов и эозинофилов было достоверно выше уровня контроля на протяжении всего периода эксперимента (моноцитов на 10 и 30 сутки), однако эти значения были ниже, чем у животных, получавших дистиллированную воду и не получавших эссенциальные фосфолипиды (табл. 30, 16).

При изучении структурной организации эндотелиоцитов обменных микрососудов коркового вещества подвздошных лимфатических узлов при воздействии общей вибрации в течение 1, 10 и 30 сут. на фоне введения препарата эссенциале Н не происходило достоверных изменений объемных плотностей митохондрий, ГЭР при морфометрическом исследовании (табл. 31).

На первые сутки действия вибрации снижалась на 33% численная плотность свободных полисомальных рибосом. В это же время достоверных отличий от контрольных значений объемной плотности микропиноцитозных везикул (кроме базальных) не получено. В остальные сроки вибрации изменялись соотношения микропиноцитозных везикул в клетках, а их объемные плотности значительно не отличались от показателей в контроле (табл. 31).

В восстановительный период как на ранние (30 суток), так и на поздние (60 суток) сроки на фоне введения эссенциальных фосфолипидов выявлено при морфометрическом исследовании тимуса (табл. 19) достоверное увеличение общего объема органа, объема мозгового вещества, по сравнению с таковыми при вибрационных нагрузках на фоне введения дистиллированной воды. Следует отметить, что по всем вышеперечисленным показателям на всем протяжении восстановительного периода достоверных различий с контрольным уровнем не выявлено. Объем соединительнотканной стромы также мало отличался от контрольных цифр.

Изучение клеточного состава субкапсулярной зоны тимуса в отдаленный период показало, что все показатели (кроме содержания макрофагов) не имели достоверных отличий как на ранние (30 суток), так и на поздние (60 суток) сроки восстановительного периода по сравнению с контрольным уровнем (табл. 20).

Во внутренней зоне коркового вещества общая плотность клеточных элементов на стандартной площади достоверно возрастала на 30 сутки восстановительного периода, а к 60 суткам достоверные отличия с уровнем контроля отсутствовали (табл. 21). При этом количество молодых форм лимфоидного ряда увеличивалось. Численность иммунобластов была достоверно выше на протяжении всего восстановительного периода, по сравнению с исходными показателями.

Количество средних лимфоцитов к 60 суткам восстановительного периода достигало исходного уровня. Количественные значения малых лимфоцитов во внутренней коре обнаруживали тенденцию к увеличению, но оставались в пределах уровня контроля. Цифровые показатели клеток с фигурами митозов, численный состав гибнущих клеток, макрофагов на протяжении всего восстановительного периода определялись в пределах нормы. Число эпителиальных клеток имело тенденцию к снижению, но было еще достоверно выше уровня контроля. Количество плазматических клеток в конце восстановительного периода было достоверно меньше уровня контроля. Эозинофилы во внутренней зоне коркового вещества определялись преимущественно на ранних сроках восстановительного периода (30-е сутки).

В мозговом веществе тимуса плотность клеточных элементов не имела достоверных отличий от таковых показателей контрольной группы к концу восстановительного периода (табл. 22). Количество иммунобластов и малых лимфоцитов определялось в пределах контрольных значений. Численность средних лимфоцитов на протяжении всего срока восстановительного периода имела тенденцию к снижению, но оставалась достоверно выше уровня контроля. Митотическая активность и число погибающих клеток достоверно превышали таковые показатели у интактных животных. Численность макрофагов, эпителиальных и плазматических клеток не имела достоверных отличий, по сравнению с уровнем контроля. Эозинофилы на всех сроках восстановительного периода в мозговом веществе тимуса при превентивном использовании эссенциальных фосфолипидов не выявлялись.

Количество тучных клеток на стандартной площади в восстановительный период в основном не имело достоверных отличий по сравнению с контролем (табл. 23). Доля тучных клеток с дегрануляцией II и III степени была достоверно выше контрольного уровня только на ранних сроках (30 сутки) восстановительного периода. Количество телец Гассаля в мозговом веществе не имело достоверных отличий, по сравнению с контролем.

Исследование микроциркуляторного русла в тимусе показало, что объемная плотность кровеносных капилляров не превышала таковой показатель в контроле и к позднему восстановительному периоду составила 1,94 ± 0,12%. Объемная плотность посткапиллярных венул в тимусе к концу позднего восстановительного периода на фоне коррекции эссенциальными фосфолипидами не имела достоверных отличий с контролем (3,02±0,11%).

Следует отметить, что наиболее выраженный протективный эффект при использовании эссенциальных фосфолипидов проявлялся в периоде реабилитации - раннем и позднем восстановительном периоде, к 30 - 60 суткам после прекращения вибрационной экспозиции. Если в группе контроля в эти сроки еще не фиксировались признаки субклеточного восстановления капиллярной сети коркового вещества, то при фармакологической коррекции эссенциальными фосфолипидами они уже наблюдались.

В ранний восстановительный период (30 суток) в препаратах крыс, подвергавшихся воздействию вибрации на фоне коррекции эссенциальными фосфолипидами, при изучении ультраструктурной организации электронно-микроскопически выявлялись реконструктивные изменения в секреторных эпителиальных клетках коры тимуса. Отмечалось появление новых мелких, плотных, с округлыми очертаниями секреторных гранул и снижение плотности крупных, старых гранул. Наблюдалась активация антигензахватывающей функции этих клеток, что проявлялось в поглощении из внеклеточной среды осмиофобного материала, выявляемого в цитоплазме клеток в виде светлых гладких пузырьков. Прилежащие к таким клеткам Т-лимфоциты характеризовались фестончатой формой ядер, что, видимо, может быть связанным с активацией антигензахватывающей функции клеток, как известно, находящейся в обратной зависимости от способности снижать активность Т-клеток в иммунном ответе.

В рассматриваемый период наблюдения отмечалась тенденция к нормализации пространственных параметров тройных составляющих элементов капилляров. В них наблюдались гиперплазия и гипертрофия клеток эндотелия с появлением в них скоплений пиноцитозных пузырьков, что указывало на улучшение трансэндотелиального транспорта веществ. Явления гиперплазии материала базальных мембран снижались.

Через 30 суток после прекращения вибрационного воздействия на фоне коррекции эссенциальными фосфолипидами отмечали мозаичность в структурной организации эпителиоцитов тимуса. Иногда встречались клетки, особенно в перисептальной области, с признаками набухания митохондрий и редукцией крист. Однако в структуре светлых эпителиальных клеток тимуса сохранялись изменения, связанные с возрастанием в 3 раза объемной плотности мембран гранулярного эндоплазматического ретикулума, в 3,7 раза объемной плотности вторичных лизосом (табл. 32).

Морфометрические исследования больших медуллярных клеток выявили возрастание в 2 раза объемной плотности митохондрий. Объемная плотность мембран гранулярного эндоплазматического ретикулума была повышена более чем в 2 раза. Численная плотность свободных полисомальных рибосом была снижена на 24%. Объемная плотность секреторных вакуолей не отличалась от значений в контроле. Объемная плотность филаментов не имела достоверных различий с контрольной группой (табл. 33).

В структурной организации кровеносных капилляров выделяли светлые и темные эндотелиальные клетки. Между эндотелиоцитами присутствовали все типы контактов - конец в конец, наложения и интердигитации. Митохондрий возрастали в количестве и их объемная плотность повышалась достоверно в 2,3 раза уже в ранний восстановительный период. Численная плотность прикрепленных рибосом сохранялась ниже уровня в контроле на 34%, а полисомальных рибосом - не отличалась от значений в контроле. В то же время возрастали объемные плотности микропиноцитозных везикул на 60% - базальных, на 66% - люминальных, на 52% - цитоплазматических и на 58% - суммарная объемная плотность всех везикул в клетке (табл. 34).

Возрастало количество микроворсинок люминальной поверхности эндотелиоцитов на 18%.

Ультраструктурные особенности Т-лимфоцитов характеризовались значительно реже встречавшимися повреждениями плазмалемм и нарушениями, свойственными им после многократно повторяющихся воздействий вибрации.

Положительный эффект коррекции эссенциальными фосфолипидами нашел отражение и в улучшении структурно-функциональных качеств ретикулярных эпителиальных клеток тимуса. Со стороны межуточного соединительнотканного матрикса тимуса наблюдалась тенденция к уменьшению толщины пучков коллагеновых фибрилл.

В поздний восстановительный период (60 сут) на фоне превентивного использования эссенциальных фосфолипидов впервые обнаружены клетки ретикулярного эпителия, в которых наряду с крупными старыми нетранспортабельными гранулами выявлялись новые, мелкие, очевидно новообразованные гранулы, преимущественно в зоне комплекса Гольджи, ответственного за накопление секретируемых продуктов. При этом отмечалось появление большого числа рибосом в цитоплазме клеток - свидетельство повышения их синтетической функции. Т-лимфоциты характеризовались нормализацией ультраструктурных составляющих. Сравнительно редко выявлялись Т-клетки с дефектами плазмалемм.

Поздний восстановительный период (60 сут) на фоне превентивного использования эссенциальных фосфолипидов во время вибрационной экспозиции характеризовался снижением или нивелированием патологически измененных особенностей капилляров, нормализацией специфики гематотимического барьера. В капиллярах отмечались гиперплазия и гипертрофия клеток эндотелия с появлением в них скоплений пиноцитозных пузырьков, что указывает на улучшение трансэндотелиального транспорта веществ. Значительно реже встречались поврежденные Т-клетки и макрофаги, фагоцитирующая активность их была менее выражена.

При морфометрических исследованиях препаратов тимуса, проведенных на 60 сутки после прекращения общего вибрационного воздействия на фоне введения эссенциальных фосфолипидов, в светлых эпителиальных клетках отмечали возрастание в 2,8 раза объемной плотности митохондрий, при этом увеличивались как размеры органоидов, так и их количественные характеристики в клетке. Объемная плотность мембран гранулярного эндоплазматического ретикулума увеличивалась с 3,0±0,24 до 6,1±2,70. Численное выражение филаментов в клетках на фоне коррекции эссенциальными фосфолипидами не отличалось достоверно от исходных показателей (табл. 32).

В структуре больших медуллярных клеток повышенной оказалась объемная плотность митохондрий - в 2,9 раза, что было связано с возрастанием их количества и размеров. Численные плотности прикрепленных и свободных полисомальных рибосом не отличались от значений в контроле. Объемная плотность секреторных вакуолей соответствовала контрольным значениям (табл. 33).

В ультраструктуре эндотелиоцитов кровеносных капилляров отмечали возрастание числа митохондрий, при этом их объемная плотность достоверно возрастала более чем в 2 раза. Численные плотности прикрепленных и свободных полисомальных рибосом не отличались от значений в контроле. Объемные плотности микропиноцитозных везикул, отражающих транспортные процессы в эндотелиоцитах, увеличивались. Объемная плотность базальных везикул была выше на 60%, люминальных микропиноцитозных везикул - на 66%, цитоплазматических - на 52%, а суммарная объемная плотность везикул в клетке - на 58%. Отражением активации обменных процессов между интерстицием и кровеносными капиллярами было возрастание числа выростов и микроворсинок на люминальной поверхности эндотелиоцитов более чем в 2 раза (табл. 34).

Морфометрическое исследование подвздошных лимфатических узлов в восстановительном периоде показало, что все количественные показатели существенно не изменились и в основном были близки к таковым у контрольных животных (табл. 27).

Аналогичное состояние отмечали в клеточном составе герминативных центров подвздошных лимфатических узлов в восстановительном периоде при введении эссенциальных фосфолипидов. Все абсолютные показатели были близки к контрольным цифрам (табл. 28).

В зоне глубокой коры только лишь количество иммунобластов на ранних сроках (30 сутки) восстановительного периода были достоверно больше, чем таковой показатель у интактных животных (табл. 29). Большинство абсолютных показателей существенно не отличались от контроля.

В мозговых тяжах подвздошных лимфатических узлов были отмечены следующие изменения клеточного состава (табл. 30). Количество незрелых плазматических клеток и клеток с пикнотическими ядрами не имело достоверных отличий с показателями контрольной группы после 60 суток. К концу позднего восстановительного периода численность моноцитов и эозинофилов в мозговых тяжах достоверно уменьшалась, по сравнению с контролем. Остальные показатели не имели достоверных отличий от контроля.

Протективное применение у животных эссенциальных фосфолипидов существенно снижало субклеточные повреждения во всех клеточных составляющих тимуса, что нашло отражение в наблюдаемой картине сохранности ультраструктуры Т-лимфоцитов и лимфобластов, в которых повышалось количество свободных рибосом, появлялись неизмененные каналы гранулярного эндоплазматического ретикулума, хотя и определялись еще незначительные расширения перинуклеарных пространств. У некоторых клеток ретикулярного эпителия обнаруживалось снижение осмиофилии секреторных гранул, что служит отражением процессов дегрануляции и, по-видимому, выхода тимопоэтических пептидов во внеклеточную среду. Количество митохондрий с неравномерной плотностью матрикса и расширенных каналов гранулярного эндоплазматического ретикулума снижалось.

Четко прослеживалась тенденция к уменьшению процессов фиброзирования, проявлений реактивного склероза стромы. Диффузные разрастания коллагенового остова лимфатических узлов, характерные для вибрационного поражения, вследствие модифицирующих эффектов эссенциальных фосфолипидов частично редуцировались, оставляя лишь небольшие пучки фибрилл.

Изучение структурной организации эндотелиоцитов обменных микрососудов коркового вещества подвздошных лимфатических узлов в восстановительном периоде через 30 и 60 сут после прекращения вибрационного воздействия на фоне превентивного использования препарата эссенциальных фосфолипидов продемонстрировало положительную динамику со стороны клеточных и субклеточных показателей. В структуре эндотелиоцитов кровеносных капилляров лимфатических узлов животных, которым вводили эссенциальные фосфолипиды, через 30 суток после прекращения вибрации отмечали возрастание численной плотности прикрепленных рибосом на 44%. Численная плотность свободных полисомальных рибосом была повышенной на 21% к 60-м суткам восстановления (табл. 34). Изменялось соотношение базальных и люминальных микропиноцитозных везикул.

Таким образом, полученные морфометрические данные свидетельствуют, что в восстановительный период, через 30 и 60 суток после прекращения общего вибрационного воздействия на фоне введения эссенциальных фосфолипидов, в ультраструктурной организации эпителиальных клеток тимуса происходили структурные изменения, свидетельствующие о большей активности процессов внутриклеточной регенерации, чем без использования фармакологической коррекции эссенциальными фосфолипидами. Увеличивался объем и количество митохондрий, возрастали площади, занимаемые мембранами гранулярного эндоплазматического ретикулума. Восстанавливались численные плотности прикрепленных и свободных полисомальных рибосом. Кератинизация цитоплазмы эпителиальных клеток, связанная с накоплением филаментов, имела тенденцию к снижению. Структурные изменения в эндотелиоцитах кровеносных капилляров тимуса свидетельствовали об активации транспортных процессов возрастали объемные плотности микропиноцитозных везикул, на люминальной поверхности эндотелиоцитов происходило образование микроворсинок и выростов. В эндотелиоцитах кровеносных капилляров коркового вещества лимфатических узлов при воздействии общей вибрации на фоне введения эссенциальных фосфолипидов через 30 и 60 суток после прекращения вибрационного воздействия происходило практически полное восстановление ультраструктурной организации с возрастанием белоксинтетической функции клеток.

Протективное использование у крыс эссенциальных фосфолипидов в ходе тридцатидневной вибрационной экспозиции способствовало укорочению сроков эффективной восстановительной реабилитации подопытных животных и более раннему наступлению нормализации структурно-функциональных параметров поврежденных ранее вибрацией клеточных и субклеточных образований лимфатических узлов. Сохранялась зональность, меньшей или большей степени выраженности субклеточных восстановительных проявлений в различных компартментах лимфатических узлов при значительном расширении зон с нормальными ультраструктурными особенностями.

В меньшей степени отмечали набухание органоидов, в меньшей степени снижалась белоксинтетическая функция клеток. Следует отметить, что кератинизация эпителиоцитов - накопление в цитоплазме филаментов не возрастала в ходе эксперимента в группе с фармакологической коррекцией эссенциальными фосфолипидами. Следовательно, использование эссенциальных фосфолипидов оказывало протективное действие на структурную организацию эпителиоцитов тимуса, способствовало более полному сохранению их структуры на субклеточном уровне организации.

В эндотелиоцитах кровеносных капилляров лимфатических узлов при воздействии общей вибрации на фоне введения эссенциале Н не происходило значительных изменений клеток.

Таким образом, при воздействии вибрации на фоне введения эссенциальных фосфолипидов на протяжении всего эксперимента не происходило существенных изменений структурной организации ткани как тимуса, так и лимфатических узлов. Прием эссенциальных фосфолипидов с лечебно-профилактической целью препятствует формированию субклеточных изменений, определяющих проникновение в корковое вещество тимуса антигенов, В-лимфоцитов, трансформирующихся в плазматические клетки, и эозинофилов. Определяемая при коррекции эссенциальными фосфолипидами выраженная сохранность ультраструктуры крист и матрикса митохондрий, структур гранулярной эндоплазматической сети в тимоцитах, эпителиальных клетках, вероятнее всего, свидетельствует об улучшении энергетической и белоксинтетической функций клеток в результате цитопротекторных свойств препарата.

В нашем исследовании превентивное использование эссенциальных фосфолипидов в период вибрационных нагрузок значительно снижает субклеточные признаки повреждения тимуса, способствует восстановлению гематотимического барьера и иммуно-структурного гомеостаза вследствие повышения устойчивости клеточных мембран к продолжающейся вибрационной экспозиции. Реконструктивное влияние на различные параметры фиксируемых клеточных и субклеточных нарушений реализуется, несомненно, ввиду оптимизации процессов внутриклеточной репаративной регенерации.

При использовании с целью цитопротекции эссенциальных фосфолипидов наблюдался выраженный положительный эффект, заключающийся в иммуномодулирующем, мембранотропном, антиоксидантном, антифибропластическом действиях, приводящий путем оптимизации метаболических внутриклеточных процессов, энергетического и пластического обменов к восстановлению естественного фенотипа клеток. Полученные нами данные позволяют рекомендовать цитопротекторный препарат эссенциальных фосфолипидов с целью коррекции сдвигов в иммуноструктурном гомеостазе, для восстановления и предупреждения клеточных и субклеточных повреждений, клеточных мембран в тимусе.

Таким образом, превентивное использование эссенциальных фосфолипидов во время вибрационных нагрузок снижает субклеточные признаки повреждения тимуса, способствует активации процессов неоангиогенеза, восстановлению гематотимического барьера, иммуноструктурного гомеостаза, гомеостаза тканей (гомеоморфоза). Реконструктивное влияние препарата реализуется вследствие оптимизации процессов внутриклеточной репаративной регенерации, трансэндотелиального обмена, улучшения белоксинтетической и энергетической функций клеток тимуса и проявляется нормализацией ультраструктуры митохондрий, гранулярного эндоплазматического ретикулума в тимоцитах и эпителиоцитах, ультраструктуры ретикулярных эпителиальных клеток, Т-лимфоцитов, замедлением трансформации клеток тимуса в фибробластоподобные клетки.

Ответная реакция лимфоидной ткани лимфатических узлов на вибрационные воздействия на фоне корригирующих фармакологических мероприятий проявлялась в снижении степени инфильтрации капсулы плазматическими и эозинофильными гранулоцитами, тучными клетками, что свидетельствует о снижении темпов активации В-зависимых иммунологических реакций и об уменьшении степени тканевых повреждений при вибрации. На основании анализа тканевых и клеточных реакций в тимусе и лимфатических узлах выявлен иммуномодулирующий эффект у эссенциальных фосфолипидов, опосредуемый гуморальными факторами, выделяемыми клетками лимфоидных органов, в результате чего существенно усиливается развитие иммунного ответа на Т-зависимый антиген. Характерна значительная сохранность и восстановление структурно-функциональных параметров эндотелиоцитов кровеносных капилляров коркового вещества лимфатических узлов с возрастанием белоксинтетической функции, снижение степени периваскулярного и стромального фиброза.

Эссенциальные фосфолипиды модулируют морфологические эквиваленты вибрационных повреждений, минимизируя возникающие проявления дисметаболического синдрома. Благоприятное влияние эссенциальных фосфолипидов на цитоархитектонику лимфоидных органов, энергетический и пластический обмен различного типа клеток позволяет рекомендовать в качестве патогенетически обоснованного метода профилактики и терапии с целью коррекции сдвигов в иммуноструктурном гомеостазе в органах лимфатической системы. 


ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ



1. Применение эссенциальных фосфолипидов в качестве средства для защиты, сохранения и восстановления структуры и функции лимфоидных органов при воздействии вибрации.

2. Применение по п.1, отличающееся тем, что оно предназначено для защиты, сохранения и восстановления структуры и функции тимуса, лимфатических узлов, селезенки.

3. Применение по п.2, отличающееся тем, что оно предназначено для защиты, сохранения и восстановления структуры и функции лимфоэпителиальной паренхимы в корковом и мозговом веществе тимуса, лимфатических узлов и селезенки.

4. Применение по п.3, отличающееся тем, что оно предназначено для защиты, сохранения и восстановления структуры и функции тимоцитов и клеток лимфатических узлов, селезенки.

5. Применение по п.4, отличающееся тем, что оно предназначено для защиты, сохранения и восстановления ультраструктуры митохондрий и гранулярного эндоплазматического ретикулума в клетках данных органов.

6. Применение по п.2, отличающееся тем, что оно предназначено для защиты, сохранения и восстановления ультраструктуры ретикулярных эпителиальных клеток и лимфобластов, Т-лимфоцитов и макрофагов в тимусе, селезенке и лимфатических узлах.

7. Применение по п.2, отличающееся тем, что оно предназначено для защиты, сохранения и восстановления ультраструктуры гематотимического барьера.

8. Применение по п.2, отличающееся тем, что оно предназначено для замедления трансформации клеток тимуса, селезенки и лимфатических узлов в фибробластоподобные клетки.

9. Применение по п.2, отличающееся тем, что оно предназначено для активации неоангиогенез в тимусе, селезенке и лимфатических узлах.

10. Применение по п.2, отличающееся тем, что оно предназначено для оптимизации трансэндотелиального обмена в тимусе, селезенке и лимфатических узлах, увеличения в них микропиноцитозной активности эндотелиоцитов, увеличения образования микроворсинок и выростов на люминальных поверхностях эндотелиоцитов.

11. Применение по п.2, отличающееся тем, что оно предназначено для улучшения белоксинтетической функции клеток данных органов, увеличения количества рибосом в них.

12. Применение по п.2, отличающееся тем, что оно предназначено для оптимизации энергопродуцирующей функции клеток данных органов.

13. Применение по п.3, отличающееся тем, что оно предназначено для увеличения содержания функционально активной лимфоидной ткани в тимусе, селезенке и лимфатических узлах, усиления в них пролиферации лимфоэпителиальной ткани и снижения темпов апоптоза.

14. Применение по п.2, отличающееся тем, что оно предназначено для усиления процессов клеточного обновления в тимусе, селезенке и лимфатических узлах, увеличения митотической активности их клеточных популяций.

15. Применение по п.4, отличающееся тем, что оно предназначено для оптимизации секреторной деятельности субклеточных структур тимуса и лимфатических узлов, оптимизации процесса экструзии секрета.

16. Применение по п.2, отличающееся тем, что оно предназначено для снижения степени инфильтрации тимуса, селезенки и лимфатических узлов плазматическими и эозинофильными гранулоцитами, тучными клетками.

17. Применение по п.2, отличающееся тем, что оно предназначено для сохранения и восстановления структурно-функциональных параметров эндотелиоцитов кровеносных капилляров тимуса, селезенки и лимфатических узлов.

18. Применение по п.8, отличающееся тем, что оно предназначено для снижения степени периваскулярного и стромального фиброза в тимусе, селезенке и лимфатических узлах, снижения в них количества ретикулярных клеток и микрофиламентов в эндотелиоцитах.

19. Применение по п.2, отличающееся тем, что оно предназначено для уменьшения дегенеративно-дистрофических изменений в тимусе, селезенке и лимфатических узлах.

20. Применение по п.1, отличающееся тем, что оно предназначено для замедления инволютивной перестройки лимфоидных органов.

21. Применение по п.2, отличающееся тем, что оно предназначено для нормализации иммуноструктурного гомеостаза.

22. Применение по п.21, отличающееся тем, что оно предназначено для усиления иммунного ответа на Т-зависимый антиген.

23. Применение по п.22, отличающееся тем, что оно предназначено для активации Т-клеточного звена иммунитета.