ПРОТИВОВИРУСНОЕ СРЕДСТВО НА ОСНОВЕ ИНТЕРФЕРОНА ЧЕЛОВЕЧЕСКОГО ЛЕЙКОЦИТАРНОГО В ВИДЕ ГЕЛЯ

ПРОТИВОВИРУСНОЕ СРЕДСТВО НА ОСНОВЕ ИНТЕРФЕРОНА ЧЕЛОВЕЧЕСКОГО ЛЕЙКОЦИТАРНОГО В ВИДЕ ГЕЛЯ


RU (11) 2302881 (13) C2

(51) МПК
A61K 38/21 (2006.01)
A61K 9/06 (2006.01)
A61P 31/12 (2006.01) 

(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ 
Статус: по данным на 27.09.2007 - действует 

--------------------------------------------------------------------------------

Документ: В формате PDF 
(14) Дата публикации: 2007.07.20 
(21) Регистрационный номер заявки: 2005128447/15 
(22) Дата подачи заявки: 2005.09.13 
(24) Дата начала отсчета срока действия патента: 2005.09.13 
(43) Дата публикации заявки: 2007.03.20 
(45) Опубликовано: 2007.07.20 
(56) Аналоги изобретения: WO 83/01198 А1, 14.04.1983. ЕР 0080879 А2, 08.06.1983. RU 2172180 С1, 20.08.2001. ЕА 002562 В1, 27.06.2002. JP 09157183 A, 17.06.1997. 
(72) Имя изобретателя: Зайнутдинова Фагиля Нафтаховна (RU); Лукманова Клара Абдулловна (RU); Аюпова Гульнара Вазиховна (RU); Нигматуллин Тимирбек Газизович (RU); Ибрагимова Альмира Идрисовна (RU); Мальханов Владимир Борисович (RU); Кагиров Ильгиз Миргазимович (RU) 
(73) Имя патентообладателя: Федеральное государственное унитарное предприятие "Научно-производственное объединение по медицинским иммунобиологическим препаратам "МИКРОГЕН" Министерства Здравоохранения Российской Федерации (RU) 
(98) Адрес для переписки: 119021, Москва, Зубовский б-р, 4, ФГУП "НПО"Микроген" МЗ РФ, патентно-лицензионный отдел 

(54) ПРОТИВОВИРУСНОЕ СРЕДСТВО НА ОСНОВЕ ИНТЕРФЕРОНА ЧЕЛОВЕЧЕСКОГО ЛЕЙКОЦИТАРНОГО В ВИДЕ ГЕЛЯ
Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности и касается противовирусного средства в форме геля, содержащего интерферон лейкоцитарный человеческий, а в качестве гелеобразующей основы 2%-ный раствор сополимера стирола и малеинового ангидрида при следующем соотношении компонентов средства, в 1 г содержится: интерферон концентрированный - 5000-10000 ME; нипагин - 0,002-0,004 г; основа - все остальное. Средство обладает высокой активностью, нетоксично, обладает противовирусным, иммуномодулирующим, противовоспалительным, регенерирующим действием и может применяться в офтальмологии, дерматологии, гинекологии, хирургии для местного применения при лечении вирусных заболеваний. 2 табл.




ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ


Изобретение относится к медицине, биотехнологии и касается лекарственных форм, содержащих интерферон человеческий лейкоцитарный (ИФН) и может использоваться в офтальмологии, дерматологии, гинекологии, хирургии для местного применения.

Интерферон - важное звено в адаптационно-приспособительных механизмах микроорганизма при поддержании его гомеостаза. Показано, что биологическая активность ИФН направлена против всех известных РНК- и ДНК-содержащих вирусов, бактерий [1].

Учитывая накопленный в последние годы опыт применения препаратов интерферона, возникла необходимость повышения их эффективности за счет создания лекарственных форм для местного применения.

Известна мазь с интерфероном человеческим лейкоцитарным «Интерон», содержащая человеческий лейкоцитарный интерферон очищенный и дифильную основу, включающую вазелин и поверхностно-активные вещества (ПАВ) [2]. Вазелин как основа плохо смешивается с водой, лекарственные вещества из вазелина практически не всасываются, поэтому мази на основе вазелина используются для поверхностного действия. Они на поверхности кожи образуют плотную пленку, нарушают газообмен, возможны аллергические реакции. Кроме того, гидрофобная основа затрудняет контакт со слизистыми оболочками, поэтому применение мазей с жировыми основами на слизистой не дает высокого эффекта. Гидрофильная основа способствует хорошему впитыванию, что очень удобно при частом употреблении.

Известен интерфероновый гель - набор, включающий лиофильно высушенный интерферон и гелеобразователь Poloxamer [3]. В этом изобретении используется сложный тароупаковочный материал. Компоненты упакованы во флакон со съемной крышкой и гибкий резервуар отдельно. Компоненты смешиваются непосредственно перед употреблением, что увеличивает число дополнительных технологических приемов, выполняемых потребителем. Используется импортный гелеобразователь (Poloxamer), сведения о котором отсутствуют в Государственном реестре лекарственных средств России. В нашем изобретении используются отечественный гелеобразователь.

Известно «Противовирусное средство в мазевой форме на основе интерферона - альфа 2», содержащее рекомбинантный интерферон на гидрогелевой основе гидрата окиси алюминия с добавкой поливинилового спирта [4].

Известно противовирусное средство на основе рекомбинантного интерферона в виде мази, геля, суппозитория, крема, линимента. Основу геля образует сплав полиэтиленоксида-400 и полиэтиленоксида-4000 с добавлением раствора стабилизатора из нипагина и поливинилпирролидона, а также антиоксиданта из Трилона Б и бутилокситолуола. Добавляют диметилсульсоксид [5].

Известен лекарственный гель с рекомбинантным интерфероном и витамином Е, содержащий дополнительно метионин, бензойную кислоту, лимонную кислоту, альбумин сывороточный человеческий, спирт этиловый, глицерин и др. [6].

Известна «Фармацевтическая композиция для лечения и профилактики генитального герпеса, хронической паппиломы вирусной инфекции и профилактики рака шейки матки (варианты)». Гель имеет следующий состав: интерферон - 50000-500000 ME в мл, сывороточный альбумин - 1-2 мг/мл, Е - аминокапроновая кислота - 0,05-0,15 г/мл, рибофлавин - 0,04-0,06 г/мл, карбоксиметилцеллюлоза - 8,0 г, глицерин - 20,0 г, PBS- буфер до 200 мл [7]. Данный препарат является наиболее близким к изобретению по сущности и выбран в качестве прототипа.

Рекомбинантные интерфероны, являясь продуктами одного реконструированного гена, всегда однокомпонентны, что обуславливает и соответствующий потенциал их терапевтической активности. Недостаток применения препаратов на основе рекомбинантного интерферона - вероятность накопления нейтрализующих противоинтерфероновых антител, а также потенцирования различных осложнений [8]. Природный интерферон в отличие от рекомбинантного является натуральным препаратом и содержит весь спектр цитокинов, продуцируемых в процессе интерфероногенеза в их естественном соотношении, он не обладает антигенными свойствами и не вызывает сенсибилизации при длительном и многократном введении.

Задачей изобретения является создание нового лекарственного средства в форме геля, содержащего интерферон человеческий лейкоцитарный, обладающего пролонгированным противовирусным, иммуномодулирующим, антибактериальным, противовоспалительным и регенерирующим действием, не вызывающего сенсибилизации при длительном и многократном введении.

Технический результат - сокращение сроков лечения вирусных поражений кожи и слизистых. Технический результат - хорошая фиксация и равномерное распределение в слезной жидкости, не нарушает рефракции - в случае глазного геля.

Поставленная задача достигается тем, что заявляемый гель для местного применения при лечении вирусных поражений кожи и слизистых содержит интерферон лейкоцитарный человеческий и гелевый агент - сополимер стирола с малеиновым ангидридом (ССМА) при следующем соотношении компонентов в 1 г смеси: интерферон концентрированный - 5000-10000 ME; консервант 0,002-0,004 г; 2%-ный водный раствор сополимера стирола с малеиновым ангидридом - остальное.

ССМА - редкосшитый водонабухающий полимер, не оказывает местного раздражающего действия на кожу и слизистые оболочки глаз (ТУ 6-01-02274010913-01). Внешний вид 2%-ного водного раствора ССМА представляет собой прозрачный или слегка мутноватый гель. Сополимер стирола с малеиновым ангидридом известен как средство для лечения герпетического кератита [9].

Интерфероновые гели на основе ССМА обладают суммарным двойным противовирусным действием за счет ССМА и интерферона.

Природный интерферон является натуральным препаратом и содержит весь спектр цитокинов, продуцируемых в процессе интерфероногенеза в их естественном соотношении, он не обладает антигенными свойствами и не вызывает сенсибилизации при длительном и многократном введении.

При местном применении человеческого лейкоцитарного интерферона активизируются местные клеточные и гуморальные иммунологические механизмы, заметно повышается уровень естественной резистентности, нормализуется микробиоценоз. Регенерирующее действие препарата обусловлено активизацией интерфероном местных иммунологических механизмов.

Примеры получение геля.

Пример 1. ССМА 2 г растворяют в 70 мл воды для инъекций, оставляют для набухания на 1 час, стерилизуют текучим паром, добавляют интерферон концентрированный с активностью 30000-40000 ME до концентрации 5000 ME в 1 г получаемого геля. Добавляют 0,2 г нипагина. Доводят объем до 100 мл водой для инъекций.

Пример 2. ССМА 2 г растворяют в 70 мл воды для инъекций, оставляют для набухания на 1 час, стерилизуют текучим паром, добавляют интерферон концентрированный с активностью 30000-40000 ME до концентрации 10000 ME в 1 г получаемого геля. Добавляют 0,4 г нипагина. Доводят объем до 100 мл водой для инъекций.

Получаемый по предлагаемому изобретению гель использовали для лечения экспериментального герпетического кератита кроликов. Эта модель удобна и информативна, т.к. легко воспроизводится, дает четкие результаты терапевтической эффективности, коррелирующие с противовирусной активностью испытуемого препарата. Использовали кроликов породы «Шиншилла» с массой тела 2,0-2,5 кг. Эксперименты проводили на 6 группах животных (по 3 кролика - 6 глаз в каждой группе). Первую группу составили нелеченные экспериментальные животные (контроль), вторую группу - леченные раствором интерферона с активностью 10000 МЕ/мл путем инстилляций в конъюнктивальную полость, третья группа получала заявляемый гель, содержащий 5000 МЕ/мл интерферона, четвертая группа получала заявляемый гель, содержащий 10000 МЕ/мл интерферона, пятая группа получала гель ССМА и шестая группа - получала 3% мазь Зовиракс (ацикловир, 9-(2-Гидрокси)этоксиметилгуанин; Великобритания, Glaxo Smith Kline). Перед заражением оба глаза анестезировали 0,5% раствором дикаина путем его инстилляций в конъюнктивальную полость. Инъекционной иглой наносили поверхностные линейные насечки (в слои эпителия роговицы) в виде 3 взаимно перпендикулярных полос. Для заражения использовали культуральную жидкость, содержащую вирус простого герпеса (ВПГ), штамм L2 с активностью 103,5 ТЦЦ5о / 0,1 мл на культуре клеток Vero. Клинико-биомикроскопическое исследование развития клинической картины герпетического кератита проводили с помощью щелевой лампы SL-5 KOWA (Япония).

Для определения степени тяжести течения клинической картины у экспериментальных животных нами была разработана бальная система (табл.1), основанная на оценке биомикроскопической картины переднего отдела глаз, пораженных ВПГ. Результаты исследования оценивали по степени тяжести течения экспериментального герпетического кератита в баллах. Сравнительная оценка терапевтической активности заявляемого геля представлена в таблице 2.

Лечение животных проводили через 24 часа после инфицирования роговицы кролика ВПГ ежедневно 3 раза в сутки: в конъюнктивальную полость инстиллировали по 1-2 капли интерферона или закладывали заявляемый гель или основу или мазь Зовиракс.

Терапевтическая эффективность заявляемого геля по примерам 1 и 2 характеризовалась меньшей выраженностью клинических проявлений герпетического кератоконъюнктивита и увеита. Так, при использовании заявляемого геля степень тяжести экспериментального герпетического поражения оценивали в пределах от 1,23±0,1 до 1,3±0,1 балла, тогда как в контроле 1,85±0,2 и в группе животных, получавших ССМА 1,45±0,1 балла.

При сравнительной оценке терапевтической эффективности исследуемых веществ по тяжести клинического течения герпетического кератита на 5 сутки установили, что в этот срок после заражения заявляемый гель обладал противогерпетической активностью по сравнению с контролем и основой (р<0,05) табл. [2]. Разработанные гели не уступали по биологической активности препарату «Зовиракс».

Источники информации

1. Интерфероновый статус, препараты интерферона в лечении и профилактике инфекционных заболеваний и реабилитации больных. Под. ред. С.С.Афанасьева, Г.Г.Онищенко, В.А.Алешкина и др. / Москва, 2005. - 767 с.

2. RU №2141819 C1 6, A61K 9/06. 1999.11.27.

3. US №4469228.

4. RU №2159609 С2, А61К 9/06, 38/21. 27.11.2000.

5. RU №2150291С1 7, А61К 38/21. 2000.06.10.

6. RU №2184564 С2 7, А61К 38/21. 2002.07.10.

7. RU №2180593 С1 7, А61К 38/19, А61К 38/21. 2002.03.20

8. Волкова Л.В. «Природные -интерфероны и антибактериальный пептидный комплекс: технология получения, новые лекарственные формы, оценка эффективности» / Автореф. дисс. д.м.н., Пермь, 2004. - 41 с.

9. RU №2135187 C1, A61K 31/765. 1999.08.27.

Таблица 1 
Система бальной оценки степени тяжести герпетического поражения оболочек глаза кроликов 
Оболочка глаза Клинико-биологическая картина герпетического поражения Баллы 
Конъюнкт Не выявлена 0 
Умеренная гиперемия, инфильтрация конъюнктивы 1 
Выраженная гиперемия, инфильтрация, умеренно отделяемое 2 
Выраженная гиперемия, инфильтрация, обильно отделяемое 3 
Роговица Не поражена 0 
Единичные точечные звездчатой формы инфильтраты 1 
Инфильтрация на протяжении и вокруг насечек 1,5 
Инфильтрация оптической зоны 1/3 роговицы изъязвления эпителия по длине 2,5 
Инфильтрация 1/2 всей роговицы, изъязвления по всей роговице 3,0 
Глубокий инфильтрат 4,0 
Радужка Без изменений 0 
Единичные новообразованные сосуды 1 
Новообразованные сосуды занимают 1/2 площади 2 
Новообразованные сосуды занимают всю радужку, отек радужки 3 
Новообразованные сосуды занимают всю радужку, отек радужки, задние синехии 4 


Таблица 2 
Сравнительная оценка терапевтической активности заявляемого геля при экспериментальном герпетическом поражении глаза кроликов 
№ п/п Группа экспериментальных животных Степень тяжести герпеса глаза 
1 Контроль 1,85±0,2 
2 Интерферон 1,7±0,2 
3 Заявляемый гель по примеру №1 1,3±0,1 
4 Заявляемый гель по примеру №2 1,23±0,1 
5 ССМА 1,45±0,1 
6 Зовиракс 1,3±0,2 





ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ


Противовирусное средство в виде геля, включающее интерферон и основу, отличающееся тем, что оно содержит интерферон лейкоцитарный человеческий, в качестве основы содержит сополимер стирола с малеиновым ангидридом при следующем соотношении компонентов в 1 г смеси: интерферон концентрированный 5000-10000 ME, нипагин 0,002-0,004 г, 2%-ный раствор сополимера стирола с малеиновым ангидридом - остальное.