ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ И ПРОИЗВОДНЫЕ L-АМИНОКИСЛОТ, ОБЛАДАЮЩИЕ ГЕПАТОПРОТЕКТОРНЫМ ДЕЙСТВИЕМ

ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ И ПРОИЗВОДНЫЕ L-АМИНОКИСЛОТ, ОБЛАДАЮЩИЕ ГЕПАТОПРОТЕКТОРНЫМ ДЕЙСТВИЕМ


RU (11) 2131247 (13) C1

(51) 6 A61K31/195, C07C229/00, C07C229/08 

(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ 
Статус: по данным на 17.09.2007 - действует 

--------------------------------------------------------------------------------

(14) Дата публикации: 1999.06.10 
(21) Регистрационный номер заявки: 96114425/14 
(22) Дата подачи заявки: 1996.07.31 
(45) Опубликовано: 1999.06.10 
(56) Аналоги изобретения: FR 2305977 A1, 03.12.76. GB 1507951 A, 19.04.78. FR 2408347 A1, 13.07.79. RU 2024256 C1, 15.12.94. RU 2054431 C1, 20.01.96. 
(71) Имя заявителя: Всероссийский научный центр по безопасности биологически активных веществ (RU); Скачилова Софья Яковлевна (RU); Радкевич Людмила Александровна (RU); Бак Зу Так (KR) 
(72) Имя изобретателя: Сернов Л.Н.(RU); Скачилова С.Я.(RU); Радкевич Л.А.(RU); Ермакова Г.А.(RU); Остапчук Н.В.(RU); Пынько Н.Э.(RU); Бак Зу Так (KR); Юн Гил Зу (KR); Лян П.М.(RU) 
(73) Имя патентообладателя: Всероссийский научный центр по безопасности биологически активных веществ (RU); Скачилова Софья Яковлевна (RU); Радкевич Людмила Александровна (RU); Бак Зу Так (KR) 
(98) Адрес для переписки: 142450, Московская обл., Ногинский р-н, пос.Старая Купавна, ул.Кирова, 23, ВНЦ БАВ, Сектор патентно-лицензионной работы 

(54) ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ И ПРОИЗВОДНЫЕ L-АМИНОКИСЛОТ, ОБЛАДАЮЩИЕ ГЕПАТОПРОТЕКТОРНЫМ ДЕЙСТВИЕМ 

Фармацевтическая композиция и новые производные L-аминокислот предназначены для использования в медицине при лечении и профилактике заболеваний печени. Задача изобретения - расширение ассортимента гепатопротекторных средств. Композиция содержит эффективное количество соединения формулы I





(CH2)2COOH, H или R вместе с атомом углерода, к которому он присоединен, и с R1 образует пятичленный цикл



R1= Н, СОСН3 или образует совместно с R указанный пятичленный цикл; X отсутствует или равен Mg,







НО-(СН2)2-СН2NН2 или НО-(СН2)2-СН2-N(СН3)2 при условии, что R и R1 одновременно не равны Н и если Х отсутствует, то R



где R1=СОСН3.

Производные L-аминокислоты имеют формулу I. 2 с. и 2 з.п.ф-лы, 2 табл. 


ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ



Изобретение относится к области медицины и органического синтеза и касается фармкомпозиции гепатопротекторного действия, а также входящих в нее новых соединений - производных аминокислот.

Известны фармкомпозиции, обладающие гепатопротекторной активностью, содержащие в качестве активного начала аминокислоты и/или их производные.

В патенте (1) описано защитное средство для печени, содержащее L-аспарагиновую кислоту, L-аргинин и, при необходимости, сахар (сорбит).

В патенте (2) заявлены составы, содержащие L-аминокислоты и окси- и/или кетокислоты. Составы предназначены, в основном, для предотвращения ацидоза печени и почек в послеоперационный период.

Известна композиции (раствор гепатопротекторного действия), содержащая производные аминокислот и целевые добавки (редуцирующие сахара) (3).

В качестве производных аминокислот композиция содержит 0,06 - 0,4% мас. /об. раствора N-ацил-L-триптофана и/или N-ацил-L-пролина. Кроме того, композиция может дополнительно содержать другие аминокислоты, известные как гепатотропные агенты.

Эта композиция выбрана в качестве ближайшего аналога предлагаемой.

Задачей изобретения явилось расширение ассортимента гепатопротекторных средств.

Эта задача решена за счет того, что фармацевтическая композиция, обладающая гепатопротекторной активностью, содержит в качестве активного начала эффективное количество нового соединения - производного L-аминокислоты формулы I





(CH2)2COOH, H или R вместе с атомом углерода, к которому он присоединен, и с R1 образует пятичленный цикл



R1=H, COСH3 или образует совместно с R указанный пятичленный цикл,

X отсутствует или равен Mg,







HO-(CH2)2-CH2NH2 или HO-(CH2)2-CH2-N(CH3)2, при условии, что R и R1 одновременно не равны H и если X отсутствует, то R



где R1 = COСH3.

Фармацевтическая композиция может представлять собой порошок, таблетки, гранулы, капсулы и др. лекарственные формы, принятые в фармации, которые получают известными в этой области технологиями.

В качестве целевых добавок могут быть такие, как жидкие и твердые наполнители, вкусовые компоненты, стабилизаторы и т.п.

Композиция может дополнительно включать уже известные гепатопротекторные агенты, например L-аминокислоты (L-аспарагиновую кислоту, L-аргинин, L-триптофан, L-треонин и др.).

В соответствии с изобретением заявлены новые соединения - производные аминокислот формулы I, приведенной выше, которые обладают гепатопротекторным действием.

Известны синтетические соединения, обладающие гепатопротекторным действием, относящиеся к различным химическим классам.

В медицинской практике в качестве субстанции гепатотропного действия применяют производные оротовой кислоты (препарат "Гепатофальк"), производные силибинина (препарат "Легалон") и др. (4).

Синтез этих субстанций трудоемок, поэтому препараты этих классов дороги.

Задачей изобретения явилось создание новых соединений, обладающих гепатопротекторным действием. Эта задача решена синтезом производных L-аминокислот, содержащих азотистые и диазотистые гидроксил- и карбонилзамещенные основания, формулы I.

Синтез заявленных соединений основан на использовании доступного и недорогого сырья и отличается простотой.

Заявленные соединения получают следующим образом.

Исходные L-аминокислоты подвергают ацилированию или циклизации, или гидроксиметилированию, на основе полученных соединений синтезируют производные L-аминокислот с различными основаниями.

Структура новых соединений подтверждена данными ИК-спектров и элементного анализа. Соединения охарактеризованы температурами плавления. Данные о структуре полученных соединений и их константах представлены в табл. 1.

Изобретение иллюстрируют примеры получения новых соединений и содержащих их композиций.

Пример 1. Четвертичная соль N-ацетилглицина и амида 5-оксо-пирролидин-2-карбоновой кислоты.

0,8 г (0,006 моль) Амида 5-оксо-пирролидин-2-карбоновой кислоты и 0,95 г (0,006 моль) N-ацетилглицина растворяют в 35 мл изопропилового спирта при перемешивании и температуре 50oC в течение 1 ч, кристаллизуют 10 ч при 5 - 7oC. Осадок промывают изопропиловым спиртом, эфиром. Сушат при 60oC. Получают 1,1 г (0,0047 моль) соединения.

Выход: 79,6%.

ИК-спектр, см-1: 3450, 3370, 3200, 3100, 1940, 1900, 1710, 1685.

Вычислено, %: C 44,08; H 6,12; N 14,10.

Найдено, %: C 44,15; H 6,00; N 14,60.

Пример 2. Четвертичная соль N-ацетилглицина и 4-аминофенола.

Получают по методике, аналогичной в примере 3.

Выход: 25%.

Температура плавления 161 - 163oC.

ИК-спектр, см-1: 3300, 3170, 3055, 2710, 2580, 2150, 1650, 1605, 1565, 1500.

Вычислено, %: C 53,09; H 6,24; N 12,38.

Найдено, %: C 53,10; H 6,30; N 12,25.

Пример 3. Четвертичная соль N-ацетил-L-глутаминовой кислоты и 4-аминофенола.

2,1 г (0,019 моль) 4-Аминофенола при перемешивании растворяют в смеси 35 мл этилового спирта и 1 мл воды. К полученному раствору при нагревании и перемешивании добавляют 3,5 г (0,019 моль) N-ацетил-L-глутаминовой кислоты. Раствор очищают активным углем. Растворитель удаляют в вакууме. Выпавшие кристаллы перекристаллизовывают из этилового спирта, сушат при 50oC. Получают 0,8 г (0,0027 моль) соединения.

Выход: 14,2%.

Температура плавления 138 - 139oC (с разложением).

ИК-спектр, см-1: 3250, 2700 - 2400, 2170, 1940 - 1880, 1705, 1630, 1605, 1520, 1500.

Вычислено, %: C 52,41; H 6,07; N 9,38.

Найдено, %: C 52,63; H 6,37; N 9,45.

Пример 4. Четвертичная соль N-ацетил-L-глутаминовой кислоты и 3-метил-1-оксиметилпиразола.

К раствору 1,12 г (0,01 моль) 3-метил-1-оксиметилпиразола в 20 мл этилового спирта примешивают раствор, содержащий 1,89 г (0,01 моль) N-ацетил-L-глутаминовой кислоты и 8 мл воды, перемешивают 2 часа, упаривают до 1/8 первоначального объема, отфильтровывают, сушат, получают 2,85 г соединения.

Выход: 95,2%.

Температура плавления 182 - 183oC.

ИК-спектр, см-1: 3230, 3090, 1860 - 1960, 1695, 1540.

Вычислено, %: C 47,83; H 6,36; N 13,95.

Найдено, %: C 47,95; H 6,20; N 14,16.

Пример 5. Четвертичная соль N-ацетил-L-глутаминовой кислоты и амида 5-оксо-пирролидин-2-карбоновой кислоты.

2 г (0,016 моль) Амида-5-оксо-пирролидин-2-карбоновой кислоты и 3 г (0,016 моль) N-ацетил-L-глутаминовой кислоты растворяют в 50 мл изопропилового спирта при перемешивании и при 70 - 75oC в течение часа. Раствор очищают активным углем, отгоняют в вакууме 15 - 20 мл растворителя и кристаллизуют в течение 12 ч. Выпавшие кристаллы отфильтровывают, сушат при 70oC. Получают 4,8 г (0,015 моль) соединения.

Выход: 93,7%.

Температура плавления 169 - 173oC.

ИК-спектр, см-1: 3420, 3375, 3250, 3185, 3095, 1950 - 1920, 1690, 1665, 1635, 1545.

Вычислено, %: C 45,72; H 5,75; N 13,33.

Найдено, %: C 45,42; H 6,04; N 13,24.

Пример 6. Четвертичная соль N-ацетил-L-глутаминовой кислоты и 2,6-дигидрокси-5-гидроксиметил-4-метилпиримидина.

3,3 г (0,021 моль) 2,6-Дигидрокси-5-гидроксиметил-4- метилпиримидина растворяют при 50 - 60oC и перемешивают в 100 мл 50% этилового спирта. К полученному раствору постепенно добавляют 4 г (0,021 моль) N-ацетил-L-глутаминовой кислоты. Раствор перемешивают 15 мин и очищают активным углем. Выпавшие кристаллы отфильтровывают, сушат при 50oC. Получают 6 г (0,0174 М) соединения.

Выход: 83%.

Температура плавления 196oC (с разложением).

ИК-спектр, см-1: 3485, 3250, 3090, 2800, 1940, 1700, 1630, 1600, 1560.

Вычислено, %: C 45,21; H 5,64; N 12,17.

Найдено, %: C 45,04; H 5,47; N 12,21.

Пример 7. Четвертичная соль L-глутаминовой кислоты и 2,6-дигидрокси-5-гидроксиметил-4-метилпиримидина.

4,2 г (0,027 моль) 2,6-Дигидрокси-5-гидроксиметил-4- метилпиримидина растворяют при перемешивании в 150 мл 15%-ного этилового спирта и нагревании до 50oC. К полученному раствору порциями добавляют 4 г (0,027 моль) L-глутаминовой кислоты фармакопейной. Раствор перемешивают 15 мин, очищают активным углем. Растворитель удаляют в вакууме до 1/4 первоначального объема. Выпавшие кристаллы отфильтровывают и сушат. Получают 6 г (0,0198 моль) соединения.

Выход: 72,5%.

Температура плавления 217oC.

ИК-спектр, см-1: 3485, 3200, 3095, 3040, 2720, 2645, 2570, 2465, 1955, 1705, 1695, 1615, 1485.

Вычислено, %: C 43,56; H 5,64; N 13,86.

Найдено, %: C 43,71; H 5,80; N 13,83.

Пример 8. Четвертичная соль N-ацетилглицина и 5-оксо-2-пирролидинамидо-1-метанола.

4,1 г (0,026 моль) 5-Оксо-2-пирролидинамидо-1-метанола и 3 г (0,026 моль) N-ацетилглицина растворяют в 105 мл этилового спирта при 50oC. Перемешивают 15 мин. Растворитель удаляют в вакууме. После фильтрации и сушки осадка получают 7 г (0,025 моль) соединения.

Выход: 97,8%.

Температура плавления 112 - 116oC.

Пример 9. Четвертичная соль N-ацетил-L-глутаминовой кислоты и 3-аминопропанола.

К 13,6 г (0,072 моль) N-Ацетил-L-глутаминовой кислоты постепенно добавляют 5,4 г (0,072 моль) 3-аминопропанола. Полученный гомогенный раствор используют для приготовления 20, 30 и 50%-ных водных растворов.

Пример 10. Четвертичная соль N-ацетил-L-глутаминовой кислоты и 3-(диметиламино)пропанола.

Получают аналогично соединению примера 9.

Пример 11. - (Бензимидазолил)-(2)-L -- ацетиламиномасляная кислота -тригидрат.

Суспензию 10 г (0,039 моль) - (бензимидазолил)-(2)-L -- аминомасляной кислоты в 17 мл воды нагревают до 65 - 70oC. При этой температуру и интенсивном перемешивании приливают 15 мл (16,23 г; 0,159 моль) уксусного ангидрида. Конец реакции определяют по отсутствию окрашивания пробы реакционной массы с раствором нингидрина. Избыток уксусной кислоты упаривают в вакууме. После охлаждения и перекристаллизации из воды получают 6,0 г (0,234 моль) - (бензимидазолил)-(2)-L -- ацетиламиномасляной кислоты.

Выход: 60%.

Температура плавления 155 - 157oC.

ИК-спектр, см-1: 3550, 3440, 3250, 2720 - 2480, 1720, 1630 - 1610, 1550.

[]2D0 = + 28 (6H HCl).

Вычислено, %: C 49,51; H 6,70; N 13,22.

Найдено, %: C 50,70; H 6,22; N 13,22.

ТСХ (н-бутанол : уксусная кислота : пиридин : вода) = 30 : 6 : 20 : 24; Rf 0,63.

Пример 12. Магниевая соль - (бензимидазолил)-(2)-L -- аминомасляной кислоты, декагидрат.

К смеси 1,74 г (0,046 моль) - (бензимидазолил)-(2)-L -- аминомасляной кислоты и 1,33 г (0,023 моль) магния гидроокиси приливают 110 мл воды, перемешивают при 85 - 90oC до полного растворения, выдерживают 2 ч. Полученный раствор очищают углем, упаривают до 1/4 первоначального объема и приливают после охлаждения 100 мл ацетона. Выделившийся маслообразный продукт обрабатывают 20 мл ацетона. Растворитель удаляют в вакууме. Кристаллы сушат в вакууме при 55 - 60oC. Получают 8,85 г (0,013 моль) соединения.

Выход: 56,5%.

ИК-спектр, см-1: 3050 - 3400, 2750 - 2500, 1580 - 1650.

Вычислено, %: C 41,22; H 6,92; N 13,11; Mg 3,90.

Найдено, %: C 41,52; H 6,66; N 12,78; Mg 3,90.

ТСХ (н-бутанол : уксусная кислота : пиридин : вода) = 30 : 6 : 20 : 24; Rf 0,49.

Пример 13. Четвертичная соль 5-оксо-пирролидин-2-карбоновой кислоты и 4-аминофенола.

Суспензию 3,5 г (0,032 моль) 4-аминофенола в 180 мл изопропилового спирта нагревают до 50 - 60oC при перемешивании до полного растворения. К полученному раствору порциями добавляют 4,2 г (0,032 моль) 5-оксо-пирролидин-2-карбоновой кислоты. Раствор очищают активным углем и упаривают в вакууме до 1/4 первоначального объема. Получают 5,5 г (0,023 моль) соединения.

Выход: 71,9%.

Температура плавления 125 - 127oC.

ИК-спектр, см-1: 3255, 2700 - 2550, 2120, 1905, 1670, 1670, 1630, 1595, 1550, 1505.

Вычислено, %: C 55,46; H 5,92; N 11,76.

Найдено, %: C 55,60; H 6,00; N 11,90.

Пример 14. 5-Оксо-пирролидинкарбоксамидо-1-метанол.

К 12 г (0,094 моль) амида 5-оксо-пирролидин-2-карбоновой кислоты приливают 13,5 мл формалина и 2 мл водного раствора аммиака. Смесь нагревают до 100oC и выдерживают 1,5 ч. При охлаждении образуется кристаллический осадок. После фильтрации и сушки получают 4,8 г (0,03 моль) 5-оксо-пирролидинкарбоксамидо-1-метанола.

Выход: 32,3%.

Температура плавления 125 - 127oC.

ИК-спектр, см-1: 3310, 3200, 3070, 1670, 1550.

Вычислено, %: C 45,20; H 5,34; N 17,61.

Найдено, %: C 45,23; H 5,60; N 17,22.

Пример 15. Фармацевтическая композиция, содержащая новое вещество, обладающее гепатопротекторным действием, г:

Четвертичная соль N-ацетил-L-глутаминовой кислоты и 4-аминофенола - 20,0

Метиловый эфир 4-оксибензойной кислоты (Нипагин M) - 0,033

Пропиловый эфир 4-оксибензойной кислоты (Нипагин П) - 0,017

Сорбит - 1,0

Вода, мл - До 100

Пример 16. Фармацевтическая композиция, содержащая новое вещество, обладающее гепатопротекторным действием, г:

- (Бензимидазолил)-(2)-L -- ацетиламиномасляная кислота - тригидрат - 20,0

Метиловый эфир 4-оксибензойной кислоты (Нипагин M) - 0,033

Пропиловый эфир 4-оксибензойной кислоты (Нипагин П) - 0,017

Ксилит - 1,0

Вода, мл - До 100

Исследования гепатопротекторной активности у заявленных соединений и фармкомпозиции проводились in vivo на модели острого токсического гепатита у мышей, вызванного четыреххлористым углеродом (CCl4). Использовались беспроводные белые мыши-самцы массой 20 - 22 г.

Модель острого токсического гепатита вызывалась однократным внутрибрюшинным введением четыреххлористого углерода в дозе 1,5 ДЛ50 (полуторалетальная доза) в виде 50%-ного раствора в вазелиновом масле.

Испытуемые химические соединения вводили однократно внутрибрюшинно за 1 ч до введения гепатотоксина в дозе 25 мг/кг массы тела.

В качестве препаратов сравнения использовали отечественный гепатопротектор Силибор и Эссенциале (Югославия по лицензии фирмы Nattermann, Германия). Испытуемые химические соединения и препараты сравнения вводили в крахмальной слизи (5% раствор).

В каждой экспериментальной группе использовали от 6 до 20 мышей. Группы животных препаратов сравнения и модели гепатита были объединены из нескольких экспериментов. Каждая из объединенных групп животных препаратов сравнения и модели гепатита содержала не менее 6 мышей.

Гепатозащитный эффект оценивали по выживаемости мышей в течение 4 суток. Степень гепатозащитного эффекта выражали в процентах и определяли отношением числа выживших к общему числу животных в группе:

(Число выживших животных/Число животных в группе) 100.

Острую токсичность при внутрибрюшинном введении изучали на беспородных белых мышах-самцах, используя экспресс-метод (5). За среднесмертельную (ЛД50) принимается наименьшая доза, вызвавшая гибель животного.

Результаты исследования представлены в табл.2.

Из табл. 2 видно, что выживаемость мышей на 1,5-летальной дозе CCl4 у испытуемых химических соединений была различна и колебалась с 7 до 47%. Некоторые соединения обладали выживаемостью, сравнимой (30% и менее) с препаратами сравнения Силибором и Эссенциале.

Острая токсичность изученных соединений лежит в диапазоне доз 1000 - 1500 мг/кг.

Источники информации

1. Патент Франции 2494113, A 61 K 31/195, 1982.

2. Патент Франции 2317919, A 61 K 31/195, 1977.

3. Патент Франции 2305977, A 61 K 31/195, 1976.

4. Радбиль О. С. Фармакотерапия в гастроэнтерологии: Справочник. - М.: Медицина, 1991. - с. 211

5. Deichmann W.B., Le Blanc T.J. - J. Industr. Hyg. Toxicol. - 1943. - v. 25. - N 9. - p. 415 - 417. 


ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ



1. Фармацевтическая композиция, обладающая гепатопротекторным действием, содержащая в качестве активного начала производное L-аминокислоты и фармацевтически приемлемые целевые добавки, отличающаяся тем, что в качестве производного L-аминокислоты она содержит эффективное количество одного или нескольких соединений формулы I





(CH2)2COOH, H или R вместе с атомом углерода, к которому он присоединен, и с R1 образует пятичленный цикл



R1 = H, COCH3 или образует совместно с R указанный пятичленный цикл;

X отсутствует или равен Mg, 

HO-(CH2)2-CH2NH2 или HO-(CH2)2-CH2-N(CH3)2, при условии, что R и R1 одновременно не равны H и если X отсутствует, то R -



где R1 = COCH3.

2. Композиция по п.1, отличающаяся тем, что производным L-аминокислоты является соединение, выбранное из группы, включающей четвертичную соль N-ацетилглицина и амида 5-оксипирролидин-2-карбоновой кислоты, четвертичную соль N-ацетилглицина и 4-аминофенола, четвертичную соль N-ацетил-L-глутаминовой кислоты и 3-метил-1-оксиметилпиразола, четвертичную соль N-ацетил-L-глутаминовой кислоты и амида 5-оксопирролидин-2-карбоновой кислоты, четвертичную соль N-ацетил-L-глутаминовой кислоты и 2,6-дигидрокси-5-гидроксиметил-4-метилпиримидина, четвертичную соль L-глутаминовой кислоты и 2,6-дигидрокси-5-гидроксиметил-4-метилпиримидина, четвертичную соль N-ацетилглицина и 5-оксо-2-пирролидинамидо-1-метанола, четвертичную соль N-ацетил-L-глутаминовой кислоты и 3-аминопропанола, четвертичную соль N-ацетил-L-глутаминовой кислоты и 3-(диметиламино)пропанола, -(бензимидазолил)-(2)-L--ацетиламиномасляную кислоту-тригидрат, магниевую соль -(бензимидазолил)-(2)-L--аминомасляной кислоты-декагидрат, четвертичную соль 5-оксо-пирролидин-2-карбоновой кислоты и 4-аминофенола, четвертичную соль N-ацетил-L-глутаминовой кислоты и 4-аминофенола, 5-оксо-2-пирролидинкарбоксамидо-1-метанол.

3. Производные L-аминокислоты формулы I по п.1.

4. Производные L-аминокислоты по п.3, представляющие собой соединения, выбранные из группы, указанной в п.2.