СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНОЙ ДОБАВКИ ДЛЯ КОСМЕТИЧЕСКИХ СРЕДСТВ

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНОЙ ДОБАВКИ ДЛЯ КОСМЕТИЧЕСКИХ СРЕДСТВ


RU (11) 2225718 (13) C2

(51) 7 A61K35/62, A61K7/00 

(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ 
Статус: по данным на 17.09.2007 - действует 

--------------------------------------------------------------------------------

(14) Дата публикации: 2004.03.20 
(21) Регистрационный номер заявки: 2001119854/15 
(22) Дата подачи заявки: 2001.07.19 
(24) Дата начала отсчета срока действия патента: 2001.07.19 
(43) Дата публикации заявки: 2003.10.20 
(45) Опубликовано: 2004.03.20 
(56) Аналоги изобретения: RU 2153325 C1, 27.07.2000. RU 2116783 C1, 10.08.1998. US 5538740 A, 23.07.1996. FR 2219774 A1, 27.09.1974. BASKOVA I.P. et al. Hirudin from leech heads and whole leeches and "pseudohirudin" from leech bodies. Thromb. Res., 1983, 1, 30(5), р. 459-467. 
(72) Имя изобретателя: Никонов Г.И. (RU); ЛАТРИЛЛЬ Жак Георг (FR) 
(73) Имя патентообладателя: Никонов Геннадий Иванович (RU); ЛАТРИЛЛЬ Жак Георг (FR) 
(98) Адрес для переписки: 115478, Москва, Каширское ш., 24, корп.2, Институт иммунологии Минздрава России, пат.пов. Т.П.Ивановой, рег.№ 134 

(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНОЙ ДОБАВКИ ДЛЯ КОСМЕТИЧЕСКИХ СРЕДСТВ 

Изобретение относится к медицине, а именно к косметологии, и может быть использовано при производстве косметических средств с лечебно-профилактическими свойствами. Способ включает экстрагирование продукта, полученного из медицинской пиявки, подвергнутой предварительному голоданию и замораживанию, при этом замороженную медицинскую пиявку размельчают, экстрагируют охлажденным до +4С раствором этилового спирта в соотношении 1:1 и выделяют жидкую фазу, полученный экстракт освобождают от спиртовой составляющей и доводят рН до нейтральных значений. Технический результат: способ обеспечивает повышение биологической активности целевого, получаемого из медицинской пиявки за счет устранения возможности комплексообразования БАВ на балласте и сохранения активности БАВ, в том числе биоэнергомодулирующих свойств. 


ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ



Изобретение относится к медицине, а именно к косметологии, и может быть использовано при производстве косметических средств с лечебно-профилактическими свойствами.

Известно, что в процессе своей жизнедеятельности медицинская пиявка (Hirudo medicinalis) вырабатывает широкий спектр биологически активных веществ (БАВ): гирудин, ингибитор калликреина плазмы крови, бделлины, эглины, гиалуронидазу, дестабилазный комплекс, липазы, простагландины и др.

В зависимости от способов обработки медицинской пиявки и выделения того или иного комплексов БАВ могут быть получены препараты с различными свойствами, обеспечивающими направленное воздействие на организм человека.

Известен способ получения биологически активной добавки (БАД) для косметических средств (1) путем замораживания медицинских пиявок с последующей лиофилизацией, экстрагированием порошка лиофильно высушенных медицинских пиявок и выделением надосадочной жидкости. Полученная известным способом БАД оказывает некоторое влияние на белково-липидный обмен в коже, но также обладает и значительным протеолитическим действием, что приводит к снижению собственной ферментативной активности клетки кожи и нередко вызывает аллергический ответ. При этом лиофильное высушивание пиявок и измельчение лиофилизата до порошкообразного состояния не способствует высвобождению и сохранению БАВ, которые в процессе экстрагирования вместе с балластными веществами переходят в осадок. И, как следствие, полученная известным способом БАД не обладает достаточной степенью активности из-за низкого содержания веществ, обеспечивающих стимуляцию белково-липидного обмена в коже и подкожной клетчатке, и полной утраты продуктов, обладающих антистрессорным и биоэнергетическим действием.

Известно, что продукты жизнедеятельности медицинской пиявки могут оказывать биоэнергетическое влияние на организм человека (2). При этом установлено, что в зависимости от дозы воздействия медицинской пиявкой можно получить тонизирующий или расслабляющий эффект, но пиявку в качестве “лекарственного препарата” трудно дозировать, а потому применение живых пиявок с этой целью не всегда достигает желаемого эффекта. Кроме того, пиявка имеет непосредственный контакт с кровью пациента и не исключена возможность инфицирования больного, что ограничивает применение пиявок в медицинской практике.

Наиболее близким из известных к описываемому изобретению является способ получения биологически активной добавки для косметических средств (3) путем экстрагирования гомогената медицинских пиявок. Известный способ предполагает переработку живой медицинской пиявки и выделение комплекса биологически активных соединений, направленных на стимулирование белково-липидного обмена, а также обладающих некоторой антиоксидантной и антистрессорной активностью. Однако известный способ не решает задачи максимального высвобождения компонент с собственной активностью. Так, значительная часть БАВ, продуцируемых медицинской пиявкой, адсорбируется на клетках стенки пищеварительного тракта, мышечных клетках, на балластных веществах кутикулы пиявки и на основном сорбенте - клетках стенки бактерии-симбионата (Aeromonas hirudims) пиявок, образует с ними прочные связи и не переходит в жидкую фазу в процессе экстрагирования, утрачивая свойства ингибировать ферменты. К числу таких БАВ, которые претерпевают необратимую инактивацию, принадлежат и нейромедиаторы - вещества, отвечающие за направленность антистрессорного действия и обусловливающие биоэнергетическую активность. Это приводит к тому, что для целевого продукта, произведенного по известной технологии, характерны недостаточно высокий уровень стимуляции белкового обмена, проявление такого нежелательного эффекта, как накопление суммарных липидов в коже (нарушение метаболизма липидов), низкая активность БАВ, обладающих антиоксидантным и противовоспалительным действием, низкая эффективность и однонаправленность антистрессорного действия, а также полное отсутствие биоэнергомодулирующего влияния на объект воздействия. Загрязнение конечного состава известной БАД балластными веществами и прежде всего продуктами жизнедеятельности (эндо- и экзопептидазами) бактерии-симбионата пиявки (Aeromonas hirudunis) увеличивают ее протеолитическую активность, что является нежелательным фактором воздействия на клетки кожи и в значительной степени провоцирует аллергический ответ.

Кроме того, известный способ получения БАД для косметических средств предусматривает предварительное промывание пиявки дистиллированной водой или физиологическим раствором и просушивание медицинских пиявок перед гомогенизацией, что приводит к потерям пенных БАВ в результате непроизвольного выброса секрета слюнных желез.

Таким образом, технический результат, получаемый при реализации описываемого изобретения, состоит в повышении биологической активности целевого продукта, получаемого из медицинской пиявки, за счет устранения возможности комплексообразования БАВ на балласте и сохранения активности БАВ, в том числе обладающих биоэнергомодулирующим действием.

Указанный технический результат достигается тем, что в способе получения биологически активной добавки для косметических средств путем экстрагирования продукта из медицинской пиявки последнюю предварительно подвергают голоданию в течение не менее тридцати дней, затем пиявку замораживают, замороженную массу размельчают, экстрагируют спиртовым раствором и выделяют жидкую фазу, полученный экстракт освобождают от спиртовой составляющей и доводят рН до нейтральных значений.

С целью длительного хранения полученный препарат лиофильно высушивают.

В процессе продолжительного голодания происходит синтез и накопление БАВ в количестве, способном проявлять биоэнергомодулирующее действие, гомогенизация пиявок в замороженном состоянии позволяет сохранить активность БАВ и прежде всего нейромедиаторов, а экстрагирование полученной пиявочной массы спиртовым раствором обеспечивает разобщение комплекса балласта с нейромедиаторами и другими БАВ, а следовательно, высвобождение последних и получение продукта с новыми свойствами.

Биологически активная добавка для косметических средств, полученная в соответствии с настоящим изобретением, содержит следующие ингредиенты: гиалуронидазу, гирудин, липосому (дестабилазный комплекс, структурированный в липосому), стабильный аналог простациклина (6-keto-PGF1), ингибиторы трипсина, плазмина, тромбина и нейтральных протеаз гранулоцитов, липазу, холестерин-эстеразу, а также нейромедиаторы, синтезируемые гигантскими нервными ганглиями медицинских пиявок (5 гидрокситриптамин, ацетилхолин, GABA, серотонин, дофамин, вещество Р, вазоактивный полипептид, энкефалин).

Полученная композиция БАВ позволяет стимулировать белковый обмен и повысить уровень суммарных липидов в коже, обладает выраженной антистрессорной и биоэнергомодулирующей активностью, не проявляя при этом протеолитической активности, раздражающего или аллергизирующего действия.

Примером конкретного применения биологически активной добавки, полученной по способу согласно настоящему изобретению, в препаратах антистрессорного и биоэнергомодулирующего действия могут служить биокомплексы в композиции “Т” и в композиции “Р” в виде таблеток для ванн, содержащие следующие ингредиенты:

- вариант “Т” - целевой продукт (0,3%), бикарбонат натрия (sodium bicarbonate), лимонная кислота (citric acid), цитрат натрия (monosodium citrate), декстран (dexstrin), наполнитель (PEG-150), лаванда (lavandula officinalis) - 1%, розмарин (rosemarinus officialis) - 1%, сахар, консерванты (С1 41090, C1 17200),

- вариант “Р” - целевой продукт (0,6%), бикарбонат натрия (sodium bicarbonate), лимонная кислота (citric acid), цитрат натрия (monosodium citrate), декстран (dexstrin), наполнитель (PEG-150), artemisia vulgaris (0,6%), эвкалипт (eucaliptus globulus) - 1,4%, сахар, консерванты (C1 41090, C1 19140).

Описываемый способ получения БАД для косметических средств осуществляют следующим образом.

Медицинские пиявки, не получавшие питания не менее 30 дней, замораживают посредством жидкого азота, замороженную массу измельчают до состояния тонкого порошка на ледяной бане и смешивают с охлажденным до +4С раствором этилового спирта в соотношении 1:1, после чего выделяют жидкую фазу, спирт выпаривают и доводят величину рН полученного продукта до нейтральных значений, которые в оптимальном варианте составляют 7,4-7,9.

Выделение жидкой фазы осуществляют любым известным способом, например центрифугированием, фильтрованием или отстаиванием. Полученный целевой продукт в жидком состоянии используют непосредственно в качестве БАД для косметической продукции. С целью длительного хранения продукт может быть подвергнут дополнительной обработке - лиофильному высушиванию с последующим диспергированном до порошкообразного состояния.

При переработке медицинских пиявок в количестве 500 штук (общим весом порядка 600 г) описываемым способом получают 650 мл целевого продукта. После лиофилизации и диспергирования получают 25 г порошкообразной БАД.

Приведенные ниже примеры содержат экспериментальную оценку эффективности биологически активной добавки для косметических средств, полученной в соответствии с настоящим изобретением.

Пример. 1 Изучение раздражающего и аллергизирующего действия БАД, ее подострой токсичности, влияния накожных длительных аппликаций препарата на морфологические структуры кожи и печени экспериментальных животных (по методу Е.Ивлевой).

Исследования проводились на 90 половозрелых морских свинках, находящихся на обычном рационе питания. Полученную по способу согласно настоящему изобретению жидкую БАД наносили на кожу морских свинок ежедневно в течение 30 дней в концентрации 0,001%(n=30), 0,01%(n=30) и 0,1%(n=15). В качестве контроля животным апплицировали 0,85% раствор NaCl (физиологический раствор, n=15).

Установлено, что полученная жидкость не обладает раздражающим и аллергизирующим действием на кожу, не оказывает отрицательного действия на морфологические структуры кожи и печени, не вызывает общетоксического действия на организм подопытных животных. Животные не отставали в прибавлении веса от контрольных, были активны, подвижны, имели блестящую шерсть, хороший аппетит. При анализе влияния препарата-прототипа установлено аллергизирующее действие на кожу животных, которое выражалось в нарушении пигментации отдельных участков кожи и расчесывании кожи. Таким образом, полученные результаты свидетельствуют об отсутствии отрицательного воздействия полученного комплекса БАВ на состояние кожи экспериментальных животных.

Пример 2. Изучение токсичности полученного препарата проводилось также на примере применения таблеток для ванн. Для этого в течение 21 дня ежедневно купали животных (белые беспородные крысы - самцы весом 200-220 г, n=25) в 0,1% растворе БАД, полученной описываемым способом.

Общетоксического, раздражающего или сенсибилизирующего воздействия на организм животных не наблюдалось. При вскрытии животных патологических изменений внутренних органов (почки, легкие, селезенка, сердце) не выявлено.

Пример 3. Испытания накожного действия препарата проводились на добровольцах из числа клинически здоровых людей без отягощенного аллергологического анамнеза, в возрасте 30-65 лет (n=50) при применении таблеток для ванн.

Испытуемые принимали по 10 ванн с таблетками “Т” или “R” с интервалом через два дня.

Отмечено, что курсовое применение таблеток для ванн смягчает кожу, улучшает микроциркуляцию крови в подкожном слое, способствует заживлению мелких трещин, делает кожу мягкой и эластичной.

Пример 4. Изучение содержания общего растворимого белка в коже.

Исследования проводились по стандартному методу Д.Бейли.

Полученный по способу в соответствии с описываемым изобретением жидкий продукт наносили на кожу экспериментальных животных по методике и в режиме аналогично описанному в примере 1.

Установлено, что полученная БАД увеличивает содержание общего белка в концентрации 0,001% - на 13,2%, в концентрации 0,01% - на 75,7%, в концентрации 0,1% - на 121,4%.

У животных, получающих физиологический раствор, этот показатель не изменялся.

Пример 5. Изучение суммарных липидов в коже.

Воздействие полученным препаратом на исследуемых животных проводили по методике, аналогичной описанной в примере 1, содержание суммарных липидов определялось по общепринятой методике Хуэрго.

Установлено, что полученная БАД увеличивает содержание липидов в концентрации 0,001% - на 9,4%, в концентрации 0,01% - на 18,4%, в концентрации 0,1% - на 37,2%.

При использовании физиологического раствора этот показатель увеличился на 3,1%.

Полученные результаты свидетельствуют о выраженном влиянии исследуемого препарата на метаболизм липидов, обусловленным избирательным воздействием описываемого комплекса БАВ на свободные липиды.

Пример 6. Изучение антистрессорного действия БАД.

Испытания проводились на группе добровольцев, состоящей из 22 человек обоего пола в возрасте от 17 до 72 лет, из которых 10 человек (45%) оценивали свое состояние нормальным (отсутствие нервозности, морального утомления и т.д.), 17 человек (77%) жаловались на физическую усталость, 7 человек (32%) - на нервозность, 9 человек (41%) - на моральное утомление, нежелание общения, 5 человек (23%) - на состояние раздражительности, агрессивности.

Испытуемые принимали ванны с растворенными в них таблетками “Т” или “Р” или в качестве контроля с плацебо. Интервал между процедурами не менее 3 суток. Водные процедуры проводились в условиях комфортной температуры продолжительностью 15-20 мин в вечернее время за 1 ч до естественного сна. Состояние пациентов оценивалось до принятия ванны, в течение 1 часа после процедуры и последующие 2-3 суток.

Состояние испытуемых, принимавших ванны с таблетками “Р”, характеризовалось полным исчезновением раздражительности, наступлением умиротворенности, исчезновением физической усталости. Практически все испытуемые отмечают исчезновение физических болей, связанных с большими нагрузками на мышцы, травмами или ушибами. Сон после принятия ванн спокойный, продолжительный, без пробуждения.

Нарастание сонливости во время процедуры наблюдалось у 57% испытуемых (43% сразу после приема ванны заснули), у 84% испытуемых наступало быстрое засыпание (на трудное засыпание пожаловались 14%).

В последующие дни испытуемые отмечали отсутствие раздражительности (100%), отсутствие сонливости (93%), хорошее, оптимистическое настроение (75%), чувство отдохнувшего тела (79%). Испытуемых характеризовали свое состояние как комфортное (85%). На снижение физической утомляемости и повышение работоспособности обратили внимание 75% лиц, принимавших ванны с описываемой БАД, а 25% отметили нормальное рабочее состояние.

После проведения серии процедур с таблетками “Т” 77% испытуемых засвидетельствовали ощущение бодрости, 93% - отсутствие сонливости, 80% - четкую мыслительную активность, 100% - отсутствие раздражительности, 80% - пониженную физическую утомляемость, 90% - исчезновение ранее ощущаемых физических болей, 71% - чувство внутреннего комфорта.

Состояние испытуемых в последующие дни характеризовалось отсутствием раздражительности, повышением работоспособности, большинство лиц, принимавших процедуры, указали на появившееся чувство отдохнувшего тела, чувство морального комфорта, отсутствие общей напряженности.

После приема ванн с плацебо 57% испытуемых ощущали сонливость, 67% - некоторую физическую расслабленность, в остальном ни после приема ванн, ни в последующие дни состояние пациентов относительно начального практически не изменилось.

Пример 7. Изучение биоэнергомодулирующего действия.

Исследования проводились в отделении неврологии кафедры внутренних болезней факультета фундаментальной медицины Государственного университета.

Для исследования из числа добровольцев отобрали 20 женщин и 10 мужчин в возрасте 35-45 лет. Все пациенты за месяц до начала и во время исследования не принимали лекарственные препараты по объективным показателям, установленным лечащими врачами. Исследования проводились в трех группах пациентов, одна из которых принимала обычные ванны, другая - с биокомплексом “Р”, а пациенты третьей группы принимали ванны с биокомплексом “Т”. Процедуры проводились при температуре воды 38С, ежедневно в течение 4 дней.

Измерения тревожности как свойства личности и как состояния в определенный момент проводилась по методике Спилгергера. Определялась личностная и реактивная тревожность. Пациента считали пригодным для исследования, если по уровню тревожности личностные свойства относились к умеренно-тревожной группе (31-45 баллов по тесту Спилбергера). Дальнейшее анкетирование проводили на следующий день после окончания цикла водных процедур. Каждому пациенту производили трехкратное измерение вегетативно-гормонального статуса с помощью компьютерной программы “Heart-rate-variability” непосредственно перед приемом ванны, сразу после ванны и через час после приема ванны. Для каждого пациента оценивали разницу между фоновым и часовым измерением вегетативно-гормонального тонуса по показателям частоты сердечных сокращений, вариабельности интервала R-R, мощности гормональной, симпатической и парасимпатической части спектра.

В результате приема обычной ванны частота сердечных сокращений (ЧСС) по отношению к фоновым значениям понизилась на 11%. После проведения процедур с комплексом “Р” наблюдалось снижение ЧСС на 13%, а после приема ванн с комплексом “Т” статистически достоверно изменений ЧСС не установлено. Вариабельность интервала R-R обычная тепловая ванна увеличивает на 5%. Комплексы “Р” и “Т” не изменяют этот показатель.

Увеличение гормональной зоны спектра обычной тепловой процедурой составило 8%. Применение комплекса “Р” значительно (на 21%) увеличивало мощность гормональной зоны спектра, таблетки “Т” повторяли эффект обычной тепловой ванны.

Мощность симпатического влияния обычная тепловая ванна снижала на 7%. Препараты с БАД, полученной по описываемому способу, в равной степени - на 11% вызывали уменьшение активности симпатической нервной системы.

Установлен эффект влияния полученной описываемым способом БАД на парасимпатическую часть вегетативной нервной системы. Так, обычная тепловая процедура и ванны с биокомплексом “Т” несущественно (на 2 и 5% соответственно) уменьшают мощность этой части спектра, а ванны с биокомплексом “Р” снижают этот показатель на 22%, что свидетельствует о релаксирующем эффекте комплекса “Р”. У пациентов, принимавших ванны с комплексом “Р”, после окончания процедур отмечено снижение уровня тревожности до 25-31 по тесту Спилгергера. У лиц, принимавших процедуры с комплексом “Т”, такого снижения не выявлено.

Приведенные данные свидетельствуют о том, что биокомплекс “Р” оказывает успокаивающее, биоэнергетическое действие, а биокомплекс “Т”, содержащий в 2 раза меньше БАД, полученной по описываемому способу, обладает достаточно выраженным тонизирующим, биоэнергетичесим действием.

Таким образом, имеет место разнонаправленное, в зависимости от дозы БАД, биоэнергетическое действие полученного продукта. Этот факт подтверждает биоэнергомодулирующие свойства БАД, полученной описываемым способом.

Пример 8. Изучение релаксирующего биоэнергетического действия продукта.

Исследования проводили в составе комплексного лечения больных опийной наркоманией. Для клинического исследования было отобрано 40 больных наркоманией опийной формы в возрасте от 18 до 36 лет. Больные были разделены на 2 группы по 20 человек.

По результатам клинических, биохимических и инструментальных данных среди больных первой группы у 17 пациентов диагностирована наркомания второй стадии, у троих - наркомания первой стадии опийной формы. Среди больных второй группы наркомания второй стадии диагностирована у 19 человек, наркомания первой стадии - у одного человека.

Для проведения базисной терапии использовались следующие группы препаратов: нейролептики - аминазин, галоперидол, левомепромазин; транкливизаторы - диазепам, феназепам; снотворные - радедорм, реладорм; проводилась детоксикация - гемодез-нео, физиологические растворы глюкозы, хлорида натрия.

Больным первой группы дополнительно к базисной методике после купирования острых проявлений абстинентного синдрома назначались ванны с комплексом “Р” по 5 ванн через день. Курс лечения повторяли дважды с интервалом в одну неделю. Состояние пациентов оценивалось во время, в течение часа после приема ванны и после проведения курса назначенной терапии.

Все испытуемые отмечали уменьшение или полное исчезновение болей в суставах и мышцах, а головных болей - уже во время первой-второй процедуры. После проведения 3-4 сеансов (через 7-8 дней от начала лечения) 17 пациентов из 20 отметили уменьшение астении, стабилизацию сна, улучшение настроения, нормализацию аппетита, уменьшение раздражительности, вспыльчивости, снижение влечения к аддитивным веществам, редукцию вегетативных проявлений абстинентного синдрома, а к концу первого курса водных процедур с комплексом “Р” аналогичная положительная динамика отмечалась уже у всех пациентов первой группы. Отрицательных побочных явлений в связи с применением упомянутых водных процедур не отмечено.

Среди пациентов второй группы, получавших только базисную терапию, процесс затихания клинической симтоматики протекал гораздо медленнее и к 10-14 дню от начала лечения некоторое улучшение состояния по перечисленным выше параметрам отмечалось лишь у 10 пациентов, а к концу 4-й недели - у 18 пациентов.

Приведенные исследования свидетельствуют об эффективном релаксирующем биоэнергетическом действии БАД, полученной способом в соответствии с настоящим изобретением.

Таким образом, полученный описываемым способом комплекс БАВ стимулирует белковый и липидный обмен в коже, обладает выраженным антистрессорным и бноэнергомодулирующим действием, не проявляет раздражающего и аллергизирующего действия на кожу. Упомянутый продукт предназначен для использования в качестве биологически активной добавки для косметических средств, прежде всего для лечебно-косметических препаратов антистрессорного действия, и может быть применен профилактики нарушений психосоматического статуса человека, а также в комплексном лечении опийной наркомании.

Источники информации

1. Патент РФ №2113843, МКИ А 61 К 7/48, 1998.

2. Авторское свидетельство СССР, №1552420, МКИ А 61 К 35/62.

3. Патент РФ №2153325, МКИ А 61 К 7/48, 2000. 


ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ



Способ получения биологически активной добавки для косметических средств, включающий экстрагирование продукта, полученного из медицинской пиявки, подвергнутой предварительному голоданию и замораживанию, отличающийся тем, что замороженную медицинскую пиявку размельчают, экстрагируют охлажденным до +4С раствором этилового спирта в соотношении 1:1 и выделяют жидкую фазу, полученный экстракт освобождают от спиртовой составляющей и доводят рН до нейтральных значений.