СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ГИПОСПЕРМАТОГЕНЕЗА И АТРОФИИ СПЕРМАТОГЕННЫХ КЛЕТОК ЯИЧКА

СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ГИПОСПЕРМАТОГЕНЕЗА И АТРОФИИ СПЕРМАТОГЕННЫХ КЛЕТОК ЯИЧКА


RU (11) 2199117 (13) C2

(51) 7 G01N33/48 

(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ 
Статус: по данным на 05.10.2007 - прекратил действие 

--------------------------------------------------------------------------------

(14) Дата публикации: 2003.02.20 
(21) Регистрационный номер заявки: 2001101406/14 
(22) Дата подачи заявки: 2001.01.15 
(24) Дата начала отсчета срока действия патента: 2001.01.15 
(45) Опубликовано: 2003.02.20 
(56) Аналоги изобретения: KALISNIK M. Stereology in human morphology. Acta stereol., 1992, Vol., 11, №1, р. 35-39. RU 2109483 С1, 27.04.1998. RU 2052202 С1, 10.01.1996. SU 1097276 А, 15.06.1984. 
(71) Имя заявителя: Рязанский государственный медицинский университет им. акад. И.П. Павлова 
(72) Имя изобретателя: Астраханцев А.Ф.; Соловьев А.А. 
(73) Имя патентообладателя: Рязанский государственный медицинский университет им. акад. И.П. Павлова 
(98) Адрес для переписки: 391000, г. Рязань, ул. Высоковольтная, 9, РязГМУ, патентный отдел 

(54) СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ГИПОСПЕРМАТОГЕНЕЗА И АТРОФИИ СПЕРМАТОГЕННЫХ КЛЕТОК ЯИЧКА 

Изобретение относится к медицине, а именно к гистологии. Больным с секреторным бесплодием, признаками атрофии яичка и гидроцеле с нарушением репродуктивной функции производят биопсию яичек открытым способом под местным обезболиванием. Биоптат размером 0,3х0,3 см фиксируют в жидкости Буэна, обезвоживают в спиртах восходящей крепости, заливают в парафин-целлоидин. Гистологические срезы толщиной 5-7 мкм окрашивают гемотоксилином и эозином. Микроскопическое исследование осуществляют с помощью микроскопа "МИКМЕД-1" - (ЛОМО) при общем увеличении оптической системы х 420,0. При морфометрическом исследовании производят подсчет сустентоцитов на 30 строго поперечных срезах семенных канальцев гистологического препарата. В тех же канальцах производят подсчет общего количества клеток сперматогенной ткани. Рассчитывают индекс сперматогенеза как соотношение сустентоциты/клетки сперматогенной ткани. Результаты оценивают по таким признакам: снижение индекса сперматогенеза до 10-90%, снижение индекса сперматогенеза более 90%, при этом в 1 случае диагностируют гипосперматогенез, во 2 случае диагностируют атрофию сперматогенных клеток яичка. Способ обеспечивает повышение достоверности и объективизации диагностики. 2 табл. 


ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ



Изобретение относится к медицине, а именно к гистологии, и может быть использовано в диагностике гипосперматогенеза и атрофии сперматогенных клеток яичка у мужчин с бесплодием.

Нарушение сперматогенеза у инфертильных мужчин - сложная и трудная для клинического и морфологического исследования проблема. Работ, посвященных объективному морфометрическому анализу эпителиосперматогенного слоя мужских половых желез с целью диагностики различных форм нарушения сперматогенеза, крайне мало.

Известен способ диагностики снижения активности сперматогенеза путем подсчета процента измененных канальцев по отношению ко всем канальцам в 2-6 полях зрения у бесплодных мужчин (А.И.Лысенко, 1991). Он включает в себя:

1. Биопсию яичка (по показаниям).

2. Морфометрическое изучение биоптата, включающее в себя подсчет процента измененных канальцев, по отношению ко всем канальцам в 2-6 полях зрения.

3. В зависимости от процента измененных канальцев, а также клеточного состава канальцев выделение двух форм нарушения сперматогенеза:

А) гипосперматогенез (1-2-3 ст.);

Б) асперматогенез.

Минимальное количество пораженных семенных канальцев, при которых диагностируется гипосперматогенез - 10% (А.И.Лысенко, 1991).

Общим существенным признаком аналога и заявленного способа является выделение различных форм нарушений сперматогенеза у бесплодных мужчин.

Однако при аналоговом способе диагностики нарушений сперматогенеза, учитывается лишь процент измененных канальцев и не берется во внимание количественная оценка самих сперматогенных клеток, что делает данный способ недостаточно точным и информативным. Кроме того, при данном способе изучается множество косвенных признаков, по которым судят об изменениях в канальцах (количество клеточных слоев от базальной мембраны к просвету менее 4-5; уменьшенный диаметр канальцев; утолщенная базальная мембрана и т.д.), что предполагает исследование недостаточно достоверным.

Наиболее близким по технической сущности к заявленному является морфометрический способ изучения биоптатов яичка, основанный на подсчете количества сперматогенных клеток на строго поперечных срезах семенных канальцев гистологического препарата (Kalisnik M., 1992; Luciani J.M., 1990; Skakkeback N.E.).

Общим существенным признаком прототипа и заявляемого способа является количественное исследование клеточного состава семенных канальцев.

Однако прототипный способ неточен: подсчет количества сперматогенных клеток дает лишь общую информацию о состоянии эпителиосперматогенного слоя и не позволяет отдифференцировать формы нарушения сперматогенеза.

В основу изобретения поставлена задача усовершенствования способа диагностики снижения активности сперматогенеза путем введения дополнительных этапов исследования и критериев оценки результатов, что обеспечит повышение достоверности диагностики.

Поставленная задача решается тем, что в способе, включающем морфометрическое изучение биоптатов яичка, основанном на подсчете количества клеток сперматогенного эпителия на строго поперечных срезах семенных канальцев гистологического препарата, новым является то, что на 30 строго поперечных срезах семенных канальцев гистологического препарата определяется общее количество сустентоцитов и общее количество клеток сперматогенной ткани, рассчитывается индекс сперматогенеза как соотношение сустентоциты / клетки сперматогенной ткани, в зависимости от показателя индекса сперматогенеза нарушения сперматогенеза (снижение активности сперматогенеза) подразделяются на гипосперматогенез и атрофию сперматогенных клеток яичка.

Результаты оценивают по следующим признакам.

1. Снижение индекса сперматогенеза на 10-90%.

2. Снижение индекса сперматогенеза более чем на 90%, при этом в 1 случае диагностируется гипосперматогенез, во 2 случае диагностируется атрофия сперматогенных клеток яичка.

Причинно-следственная связь между совокупностью заявляемых признаков и достигаемым техническим результатом заключается в следующем.

1. Расчет индекса сперматогенеза как соотношение сустентоциты/клетки сперматогенной ткани обеспечивает комплексность оценки, объективизирует исследование.

2. Разделение нарушений сперматогенеза на формы в зависимости от показателя индекса сперматогенеза: гипосперматогенез и атрофию сперматогенных клеток яичка увеличивает информативность исследования и повышает достоверность диагностики.

Оценка результатов осуществляется по следующим признакам.

1. Снижение индекса сперматогенеза на 10-90%.

2. Снижение индекса сперматогенеза более чем на 90%, объективизирует диагностику и делает ее комплексной.

Определение в 1 случае гипосперматогенеза, во 2 - атрофию сперматогенных клеток яичка, увеличивает информативность и достоверность диагностики.

Разработка способа диагностики гипосперматогенеза и атрофии сперматогенных клеток яичка проведено в два этапа.

I этап - разработка диагностических признаков гипосперматогенеза и атрофии сперматогенных клеток яичка осуществлена при обследовании 24 мужчин в возрасте 22-35 лет. Из них 7 пациентов (3 группа) с секреторным бесплодием, и признаками атрофии яичек, и 7 с гидроцеле, у которых имелись нарушения репродуктивной функции (2 группа). Всем пациентам производилась биопсия и морфометрия биоптатов яичек, рассчитывался индекс сперматогенеза. За основу нормального показателя индекса сперматогенеза для данной возрастной группы принят показатель, полученный при биопсировании тестикул у 10 трупов мужчин 22-35 лет, репродуктивного периода, у которых на момент исследования были дети и отсутствовали признаки эндокринной патологии и хронической интоксикации (1 группа), (см. табл.1).

II этап - апробация полученных признаков у 19 пациентов 22-35 лет с секреторным бесплодием, признаками атрофии яичек (4 группа - 12 человек) и гидроцеле с нарушением репродуктивной функции (5 группа - 8 человек), а также определение информативности и достоверности разработанных диагностических признаков.

По завершении I этапа исследования разработаны диагностические признаки гипосперматогенеза и атрофии сперматогенных клеток яичка.

На II этапе, при обследовании пациентов 4 и 5 групп, которым выполнялась биопсия и морфометрия биоптатов яичек, а также рассчитывался индекс сперматогенеза, диагноз атрофии сперматогенных клеток яичка (индекс сперматогенеза более 90%) поставлен 11 из 12 пациентов 4 группы, что составляет 91%. Всем пациентам 5 группы поставлен диагноз - гипосперматогенез (см. табл. 2).

На I и II этапах исследования как наиболее диагностически значимые определены признаки 1 и 2.

Таким образом, существенные признаки обеспечивают повышение достоверности диагностики гипосперматогенеза (снижение индекса сперматогенеза до 10-90%) до 100%, атрофии сперматогенных клеток яичка (снижение индекса сперматогенеза более 90%) до 91%, ее объективизацию, комплексность и высокую информативность.

Предлагаемый способ диагностики осуществляется следующим образом.

Биопсия яичек производится открытым способом, под местным обезболиванием по показаниям. Биоптат размером 0,30,3 см фиксируется в жидкости Буэна, обезвоживается в спиртах восходящей крепости, заливается в парафин-целлоидин. Гистологические срезы толщиной 5-7 мкм окрашиваются гемотоксилином и эозином.

Микроскопическое исследование осуществляется с помощью микроскопа "МИКМЕД - 1" - (ЛОМО) при общем увеличении оптической системы х 420,0.

Методика диагностики гипосперматогенеза и атрофии сперматогенных клеток яичка.

1. Производится подсчет сустентоцитов на 30 строго поперечных срезах семенных канальцев гистологического препарата.

2. В тех же канальцах производится подсчет общего количества сперматогенных клеток.

3. Рассчитывается индекс сперматогенеза как соотношение сустентоциты / клетки сперматогенной ткани.

4. Производится объективный анализ полученных результатов:

а) Полученный в результате исследования индекс сперматогенеза сравнивается с нормальным показателем для данной возрастной группы.

б) Определяются, оцениваются диагностические признаки гипосперматогенеза и атрофии сперматогенных клеток яичка:

1. Снижение индекса сперматогенеза до 10 - 90%.

2. Снижение индекса сперматогенеза более 90%.

При этом в 1 случае диагностируется гипосперматогенез, во 2 случае атрофия сперматогенных клеток яичка.

ИСТОЧНИКИ ИНФОРМАЦИИ

1. Лысенко А.И., Кирпатовский И.Д. Анализ морфологических классификаций повреждения яичка при мужском бесплодии. // Арх. Патологии. - 1991. - Т. 53, 12. - С. 63-67.

2. Kalisnik M. Stereology in human morphology // Acta stereol.. - 1992. - Vol. 11, 1.- Р. 35-39. - прототип.

3. Luciani J.M., Guichaoua M.R. L' incidense des anomalies chromosomigues de structure sur la spermatogenese chez 1' homme // Reprod., nutr.. dev.. - 1990. - Vol. 30, Suppl. 1. - P. 95-103.

4. Skakkeback N.E. a. Heller C.G. Quantification of human seminiferous epithelium. Y. Histological studies in twenty - one fertile men with normal chromosome complements. J. Reprod. Fert., 1973. v. 32. 3, p. 379-389. 


ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ



Способ диагностики гипосперматогенеза и атрофии сперматогенных клеток яичка путем проведения морфометрического исследования биоптата, отличающийся тем, что на строго поперечных срезах семенных канальцев гистологического препарата определяют индекс сперматогенеза, являющийся отношением числа всех сперматогенных клеток к числу сустентоцитов (клеток Сертоли), и оценивают результаты: при уменьшении индекса сперматогенеза от 10 до 90% диагностируется гипосперматогенез, а при уменьшении более 90% - атрофия сперматогенных клеток яичка.