СПОСОБ МОДЕЛИРОВАНИЯ ПИЕЛОНЕФРИТА

СПОСОБ МОДЕЛИРОВАНИЯ ПИЕЛОНЕФРИТА

RU (11) 2289852 (13) C2

(51) МПК
G09B 23/28 (2006.01) 

(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ 
Статус: по данным на 29.05.2007 - действует 

--------------------------------------------------------------------------------

Документ: В формате PDF 
(14) Дата публикации: 2006.12.20 
(21) Регистрационный номер заявки: 2004138309/14 
(22) Дата подачи заявки: 2004.12.28 
(24) Дата начала отсчета срока действия патента: 2004.12.28 
(43) Дата публикации заявки: 2006.06.10 
(45) Опубликовано: 2006.12.20 
(56) Аналоги изобретения: KALLENIUS G. et al. P-fimbriae of pyelonephritogenic Escherichia coli: significance for reflux and renal scarring-a hypothesis. Infection. 1983, Jan-Feb; 11(1):73. RU 2202834 C2, 20.04.2003. RU 1737495 A1, 30.05.1992. КИРПАТОВСКИЙ В.И. и др. Рефлюксная модель острого восходящего пиелонефрита у крыс. Пленум правления Всероссийского общества
урологов. - М., 1996, с.158-159. LECOMTE F. et al. Treatment of experimental Escherichia coli pyelonephritis in rat by ciprofloxacin in comparison with tobramycin. Scand. J. Infect. Dis. 1990; 22(1):75-8. YAMAMOTO S. et al. The presence of the virulence island containing the usp gene in uropathogenic Escherichia coli is associated with urinary tract infection in an experimental mouse model. J. Urol. 2001, Apr; 165(4):1347-51.

(72) Имя изобретателя: Лоран Олег Борисович (RU); Синякова Любовь Александровна (RU); Косова Инга Владимировна (RU); Пирогов Юрий Сергеевич (RU) 
(73) Имя патентообладателя: Лоран Олег Борисович (RU); Синякова Любовь Александровна (RU); Косова Инга Владимировна (RU); Пирогов Юрий Сергеевич (RU) 
(98) Адрес для переписки: 141100, Московская обл., г. Щелково-3, ул. Ленина, 1, кв.60, Л.А. Синяковой 

(54) СПОСОБ МОДЕЛИРОВАНИЯ ПИЕЛОНЕФРИТА
Изобретение относится к экспериментальной медицине, а именно к экспериментальной урологии и нефрологии, и может быть использовано для моделирования пиелонефрита. Для этого кроликам после нижне-срединной лапаротомии выделяют и перевязывают мочеточник в нижней трети, после чего проксимальнее места перевязки в мочеточник путем пункции вводят 1 мл культуры микроорганизмов Escherichia coli в титре 105 или Chlamydia trachomatis в титре 104, или Ureaplasma urealyticum в титре 104, или эти микроорганизмы в сочетании. При этом перевязывают мочеточник проксимальнее места пункции. Способ обеспечивает получение достоверной модели пиелонефрита при отсутствии инфицирования брюшной полости и послеоперационной раны. 38 ил., 1 табл. 




ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ


Изобретение относится к экспериментальной медицине, а именно к экспериментальной урологии и нефрологии, к способам создания биологических моделей пиелонефрита.

По данным ведущих микробиологов и эпидемиологов, в последние годы наблюдается определенная тенденция к увеличению заболеваемости инфекциями, передающимися половым путем (ИППП). Однако роль возбудителей ИППП в этиологии рецидивирующих инфекций мочевыводящих путей до сих пор не определена. Поэтому изучение роли таких внутриклеточных микроорганизмов как Chlamydia trachomatis, Ureaplasma urealyticum, а также их сочетаний с условно-патогенными возбудителями (Escherichia coli) в развитии инфекций мочевыводящих путей человека приобретает весьма важное значение как в плане диагностики, так и в выборе алгоритма лечения.

В связи с этим представляется актуальным создание такой модели пиелонефрита, которая позволила бы открыть пути для решения указанных проблем.

Известен способ моделирования пиелонефрита путем экспериментального инфицирования обезьян Масаса mulatta, а именно внутрибрюшинного заражения обезьян уреаплазмой. Через 3 недели после заражения наблюдали генерализацию инфекционного процесса: уреаплазму выделяли из мочи, мочевого пузыря, почек, семенников, лимфатических узлов, печени и других органов (Гамова Н.А. Ureaplasma urealyticum: Диагностика и патогенность, автореф. дисс... к. биол. н., М., 1992, с.17).

Аналогичную картину наблюдали при внутрибрюшинном заражении уреаплазмой кроликов.

Однако при использовании данной модели велики сроки наблюдения, не обеспечивается 100% развитие пиелонефрита в эксперименте и отсутствует возможность сравнения патогенного действия различных микроорганизмов на мочевые пути лабораторных животных.

Также известен способ моделирования калькулезного пиелонефрита на собаках путем имплантации в почечную лоханку камня, инфицированного культурой Е.coli, с последующим изучением функциональных, макро- и микроструктурных изменений в почках в сроки 3, 5, 7, 9 и 12 месяцев (Мамаев К.Т. Степень обратимости анатомо-функциональных изменений в почках и реабилитация больных при нефролитиазе и хроническом калькулезном пиелонефрите (экспериментально-клиническое исследование), дисс... к.м.н., Махачкала, 1991, с.46-51).

Однако этот способ позволяет изучать процесс развития пиелонефрита только в одном, частном случае - при наличии камня в лоханке, т.е. не может обеспечить объективной картины в отношении роли различных патогенных агентов, и, кроме того, предполагает слишком длительные сроки наблюдения, что не всегда удобно и возможно.

Известно также моделирование острого цистита у белых беспородных крыс-самок путем введения возбудителя в предварительно перерастянутый избытком физиологического раствора мочевой пузырь по катетеру или при экспериментальном уретрите у обезьян. В качестве возбудителей в этом случае была использована культура Ur.urealyticum (Загребина О.С. Этиологическое значение Ureaplasma urealyticum в развитии воспалительных процессов половых и мочевых органов у женщин, дисс... к.м.н., М., 2001, с.24-26, 37, 40-41).

Учитывая отсутствие подтверждения развития пузырного-мочеточникового рефлюкса и возникновения на этом фоне восходящего пиелонефрита у лабораторных животных, методика внутрипузырного заражения не обеспечивает достоверного сравнения роли различных микроорганизмов в развитии разных вариантов воспалительного процесса в почках. Кроме этого, использование в качестве экспериментальных животных обезьян требует больших материальных затрат.

Известно моделирование пиелонефрита на обезьянах путем атравматичного введения E.coli в мочеточник (Kallenius G. et al. P-fimbriae of pyelonephritogenic Escherichia coli: significance for reflux and renal scarring-a hypothesis // Infection. 1983 Jan-Feb; 11 (1):73-6, abstr. PubMed на сайте http://www.pubmed.com).

Последний способ принят нами за ближайший аналог предлагаемого нами способа.

Способ моделирования пиелонефрита включает введение в мочеточник экспериментального животного культуры микроорганизмов. При этом заболевание моделируют на кроликах. После нижне-срединной лапаротомии выделяют и перевязывают мочеточник в нижней его трети, после чего проксимальнее места перевязки в мочеточник путем пункции вводят культуру микроорганизмов: Escherichia coli, Chlamydia trachomatis, Ureaplasma urealyticum и/или их сочетания и дополнительно перевязывают мочеточник проксимальнее места пункции.

По сравнению с прототипом данный способ также прост, однако, требует гораздо меньших затрат за счет использования в качестве лабораторного животного не обезьяны, а кролика. Кроме того, заявленный способ обеспечивает достоверное, 100% развитие пиелонефрита, поскольку при перевязке мочеточника при оперативном вмешательстве неминуемо нарушение уродинамики, возникновение рефлюкса. В то же время изоляция места пункции путем перевязки мочеточника выше места вкола исключает возможность инфицирования брюшной полости и послеоперационной раны. Тем более, что репаративные способности тканей кролика достаточно велики, что способствует быстрому заживлению раны.

При этом возможность введения животному отдельных видов микроорганизмов и их различных сочетаний позволяет в короткие сроки в рамках одного и того же эксперимента изучать влияние этих инфекционных агентов в сравнительном аспекте на развитие патологических изменений в почке.

Способ осуществляют следующим образом.

Материалы и методы экспериментального исследования

Для экспериментального моделирования пиелонефрита был взят кролик, так как анатомия животного такова, что можно легко выделить мочевой пузырь и достичь нижней трети мочеточника при небольшом разрезе над лоном. Диаметр мочеточника позволяет произвести пункцию и ввести 1 мл культуры в просвет. Модель пиелонефрита была создана путем перевязки мочеточника в нижней трети. Использовались кролики породы австралийский гигант-тупонос, женского пола в возрасте от 136 до 152 недель (средний возраст 142 недели) весом от 3200 г до 4000 г (средний вес 3600 г).

В эксперименте использовались клинические штаммы Е.coli, полученные из мочи больных хроническим пиелонефритом; штаммы Chlamydia trachomatis, Ureaplasma urealyticum, полученные из материала уретры и цервикального канала женщин с воспалительными урогенитальными заболеваниями.

Материалом для морфологического исследования служили ткани как пораженной, так и контрлатеральной почки. Для светооптического исследования материал фиксировали в нейтральном забуференном 10% формалине, проводили по спиртам восходящей концентрации и заливали в парафин по общепринятым методикам. Микротомировали с толщиной срезов 5 мкм, депарафировали, окрашивали гематоксилин-эозином, а также микрофуксином по Ван-Гизону.

Забор мочи производился путем пункции мочеточника стерильным инсулиновым шприцем и проводился посев мочи. Для выделения Ureaplasma urealyticum использовался культуральный метод и метод ПЦР, для выделения Chlamydia trachomatis метод ПИФ и ПЦР, производили соскоб из лоханки и мочеточника.

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ МОДЕЛИРОВАНИЕ ПИЕЛОНЕФРИТА НА ФОНЕ УРОГЕНИТАЛЬНЫХ ИНФЕКЦИЙ

Результаты макроскопических и микроскопических исследований экспериментальных животных.

Задачи настоящего раздела работы заключались в:

1) установлении возможности развития пиелонефрита на фоне только специфических возбудителей, наличии неспецифических патогенов и их сочетаний;

2) определении морфологических особенностей развития воспалительного процесса на фоне только специфических возбудителей, при наличии неспецифических патогенов и их сочетаний;

3) определении микробиологической картины воспаления.

Индукция воспалительного процесса

После введения животного в наркоз путем в/м инъекции 2% раствора рометара в дозе 0,2 мл на килограмм веса кролика, 4,0 мл кетанола, производилась нижне-срединная лапаротомия. Мобилизовывали правый мочеточник в нижней трети. На нижнюю треть мочеточника накладывались 2 лигатуры (лавсан 2/0), мочеточник перевязывался дистально. Проксимальнее наложенной лигатуры производилась пункция мочеточника иглой инсулинового шприца, вводилась культура E.coli в титре 105, Chlamydia trachomatis в титре 104, Ureaplasma urealyticum в титре 104 по 1 мл, или их сочетания, после чего мочеточник перевязывался проксимальнее места вкола. Данные представлены в таблице 1.

Таблица 1. 
Характеристика экспериментальных животных 
Вводимая Число кроликов (n=13) 
культура n=3 (группа сравнения) n=2 n=2 n=2 n=2 n=2 
Не вводилась + 
E.coli + 
Ureaplasma urealyticum + 
Chlamydia trachomatis + 
Ureaplasma urealyticum + E.coli + 
Chlamydia trachomatis + E.coli + 


Животных оставляли под наблюдением и через определенные сроки (на 3 и 7 сутки) исследовали с помощью лабораторных и гистологического методов. Для этой цели кроликов выводили из эксперимента путем внутривенного введения избыточного количества тиопентала-натрия. Вскрытие брюшной полости производилось путем снятия швов. Производился забор материала (исследуемая и контрлатеральная почка) для гистологического исследования, соскоб из лоханки и мочеточника на выявление урогенитальных возбудителей, посев мочи.

Макроскопическая и морфологическая характеристика состояния верхних мочевых путей у исследуемых животных

Макроскопическая картина почки кролика в норме: почка бобовидной формы, размерами 4,2×3,0×2,3 см, мочеточник длиной около 8,0×0,2 см, не расширен. Капсула снимается легко, обнажая светло-коричневую, блестящую, гладкую поверхность.

На разрезе - корковое вещество светло-коричневого цвета, мозговое вещество темно-красного цвета (дифференцировано). Чашечно-лоханочная система не расширена, слизистая гладкая, блестящая. Слизистая мочеточника с продольной складчатостью.

Микроскопическая картина: клубочки без дистрофических изменений, отека. Эпителий восходящих, нисходящих петель и собирательных трубочек бледно окрашен, без дистрофических изменений. Эпителий ЧЛС переходный, без дистрофических изменений. Под собственной пластинкой жировая и соединительная ткань обычной гистоструктуры. Сосуды полнокровны.

Макроскопическая и морфологическая характеристика состояния верхних мочевых путей у животных группы сравнения

На 3 сутки почка бобовидной формы, незначительно увеличена в размерах до 4,6×3,7×3,0 см, незначительно расширена до 0,3 см. Капсула снимается легко, обнажая бурого цвета, блестящую, гладкую поверхность.

На разрезе - корковое вещество светло-коричневого цвета, мозговое вещество бурого цвета, дифференцировка коркового и мозгового вещества слабая. Чашечно-лоханочная система умеренно расширена, слизистая гладкая, блестящая. Продольная складчатость мочеточника сохранена.

Морфологическая характеристика: очаговое полнокровие и кровоизлияния в паренхиму почки. Зернистая дистрофия и некробиоз эпителия канальцев и трубочек. Значительное расширение собирательных трубочек, и увеличение в размерах гиалиновых цилиндров. Появление дистрофических изменений как в клубочках, так и в эпителии канальцев и трубочек. Отек подслизистого слоя с явлениями метахромазии. Вакуольная дистрофия в поверхностных слоях переходного эпителия лоханки.

К 7 суткам происходит увеличение почки в размерах до 5,0×3,7×3,3 см, нарастание обструкции (мочеточник 0,5 см, резко расширен). Признаков гнойного процесса не выявлено (капсула снимается легко, обнажая бурого цвета, блестящую, гладкую поверхность). Исчезает дифференцировка коркового и мозгового вещества, чашечно-лоханочная система резко расширена, слизистая гладкая, блестящая, продольная складчатость мочеточника сглажена (фиг.1, 2).

Морфологическая характеристика: выраженные дистрофические и некробиотические изменения в клубочках, в эпителии канальцев и трубочек. Значительное расширение просвета собирательных трубочек. Зернистая дистрофия эпителия чашечек и лоханки с уплощением эпителия. Выраженный отек подэпителиальной клетчатки. Появление метахромазии собственной пластинки слизистой. Кровоизлияния в собственно слизистую с моноцеллюлярными некрозами. Появление единичных плазмоцитов (в подслизистой) и пролиферация фибробластических клеток (процесс склероза) - фиг.3.

Макроскопическая и морфологическая характеристика состояния верхних мочевых путей у животных после введения культуры Е.coli

У животных после введения 1 мл культуры Е.coli в титре >105, на 3 сутки макроскопически почка бобовидной формы, размерами 4,5×3,5×2,5 см, мочеточник длиной около 12,0×0,3 см, расширен. Капсула снимается легко, обнажая тусклую, с единичными апостематозными очагами, диаметром от 0,1 до 1,5 см. На разрезе - корковое и мозговое вещество слабо дифференцировано. Чашечно-лоханочная система незначительно расширена, тусклая с мутными наложениями. Слизистая мочеточника тусклая, продольная складчатость выражена (фиг.4, 5).

Морфологическая характеристика: обширные поля нагноения и распада подслизистого слоя. Микроабсцессы преимущественно в мозговом веществе, единичные в корковом. Единичные поля кровоизлияний в подслизистом слое, появление гранулоцитов. Со стороны слизистой ЧЛС преобладает десквамация эпителия, наложение слизи и гранулоцитарная инфильтрация. В подслизистом слое микроабсцедирование.

На 7 сутки после введения культуры E.coli как макроскопически, так и микроскопически определяются выраженные гнойные изменения. Почка увеличена в размерах до 4,7×3,3×3,0 см, мочеточник длиной около 7,0×0,5 см, резко расширен. Капсула снимается легко, обнажая тусклую, с множественными апостематозными очагами, местами сливными, диаметром от 0,3 до 1,0 см. На разрезе - корковое и мозговое вещество не дифференцировано. Чашечно-лоханочная система значительно расширена, тусклая с мутными наложениями. Слизистая мочеточника тусклая, продольная складчатость отсутствует.

Морфологическая характеристика: нарастание гнойно-деструктивных изменений, обширные поля нагноения и распада подслизистого слоя с микроабсцедированием. Распространение гнойного процесса в корковое вещество с образованием микроабсцессов. Сливные поля кровоизлияний в подслизистом слое, с выраженной воспалительной инфильтрацией. Эпителий ЧЛС слущен в просвет с наложениями слизи (фиг.6).

Макроскопическая и морфологическая характеристика состояния верхних мочевых путей у животных после введения культуры Ureaplasma urealyticum

У животных после введения 1 мл культуры Ureaplasma urealyticum в титре >104, на 3 сутки макроскопически почка незначительно увеличена размерами 4,0×2,7×2,3 см, мочеточник длиной около 10,0×0,4 см, расширен. Капсула снимается легко, обнажая гладкую, блестящую бурую поверхность. На разрезе - корковое и мозговое вещество слабо дифференцировано. Чашечно-лоханочная система незначительно расширена, тусклая, гладкая. Под слизистой лоханки множественные очаги бурого цвета (кровоизлияния). Слизистая мочеточника тусклая, продольная складчатость выражена (фиг.7-9).

Морфологическая характеристика: более выраженный отек подэпителиальной клетчатки с обширными полями кровоизлияний с участками некрозов. Появление макрофагов с цитоплазматическими включениями округлой формы (скопления микроорганизмов). В слизистой ЧЛС выраженная баллонная дистрофия. Единичные гранулоциты (фиг.10).

На 7 сутки после введения 1 мл культуры Ureaplasma urealyticum макроскопически увеличена в размерах до 4,5×3,3×2,4 см, мочеточник длиной около 7,0×0,5 см, расширен. Капсула снимается легко, обнажая гладкую, блестящую бурую поверхность.

На разрезе - корковое и мозговое вещество не дифференцировано. Чашечно-лоханочная система резко расширена, гладкая, блестящая. Продольная складчатость мочеточника сглажена. В месте введения культуры стенка мочеточника уплотнена, пальпируется инфильтрат около 1 см в диаметре (фиг.11-13).

Морфологическая характеристика: единичные некрозы в подэпителиальном слое, наличие макрофагальной реакции. Единичные поля кровоизлияний из лизированных эритроцитов. Имеет место баллонная дистрофия не только в слизистой лоханки и чашечек, но и мочеточника. Это обусловлено, вероятно, способом заражения. Слабовыраженное гранулоцитарное воспаление (фиг.14).

Макроскопическая и морфологическая характеристика состояния верхних мочевых путей у животных после введения культуры Chlamydia trachomatis

У животных после введения 1 мл культуры Chlamydia trachomatis в титре >104, на 3 сутки почка макроскопически незначительно увеличена, размерами 4,8×3,5×2,8 см, мочеточник незначительно расширен до 0,3 мм. Капсула снимается легко, обнажая бурого цвета, блестящую, гладкую поверхность. На разрезе - корковое вещество и мозговое вещество слабо дифференцированы. Чашечно-лоханочная система умеренно расширена, слизистая с мутными наложениями. Слизистая мочеточника с продольной складчатостью (фиг.15-17).

Морфологическая характеристика: очаговое полнокровие и кровоизлияния в паренхиму почки. Зернистая дистрофия и некробиоз эпителия канальцев и трубочек. Стазы эритроцитов в клубочках. Резко сужен просвет между клубочками и капсулой (набухание). Формирование гиалиновых цилиндров в выводных протоках. Эпителий чашечек и лоханки не изменен, выраженный отек подслизистого слоя.

На 7 сутки после введения 1 мл культуры Chlamydia trachomatis макроскопически почка увеличена в размерах до 4,5×3,0×3,0 см, мочеточник значительно расширен 0,4 см. Капсула снимается легко, обнажая бурого цвета, блестящую, гладкую поверхность. На разрезе - корковое вещество светло-коричневого цвета, мозговое вещество бурого цвета (слабо дифференцировано). Чашечно-лоханочная система резко расширена, слизистая гладкая, блестящая. Слизистая мочеточника со сглаженной продольной складчатостью (фиг.18, 19).

Морфологическая характеристика (фиг.20): выраженное расширение дистальных и проксимальных канальцев, чуть менее выраженное в собирательных трубочках. Воспаления нет и дистрофических изменений эпителия тоже нет. В канальцах наличие округлых образований, неравномерно окрашенных в фиолетовый цвет (кальцинаты).

Макроскопическая и морфологическая характеристика состояния верхних мочевых путей у животных после введения культуры Ureaplasma urealyticum в сочетании с культурой E.coli

У животных после введения 1 мл культуры Ureaplasma urealyticum в титре >104 и 1 мл культуры E.coli титре >105, на 3 сутки макроскопически почка резко увеличена в размерах до 5,0×3,5×3,5 см, мочеточник значительно расширен. Капсула снимается легко, обнажая неравномерно окрашенную серо-бурую поверхность с множественными апостемами диаметром от 0,1 до 1 см. На разрезе - корковое и мозговое вещество не дифференцировано. Чашечно-лоханочная система резко расширена, выполнена беловато-серыми хлопьевидными массами. Слизистая мочеточника со сглаженной продольной складчатостью (фиг.21-23).

Морфологическая характеристика: обширные поля нагноения и распада подслизистого слоя. Микроабсцессы не только в мозговом, но и в корковом слое, а также в собирательных трубочках. Единичные поля кровоизлияний в подслизистом слое, появление гранулоцитов. Со стороны слизистой ЧЛС преобладает слущивание, наложение слизи и гранулоцитарная (воспалительная) инфильтрация на фоне баллонной дистрофии. В подслизистом слое микроабсцедирование (фиг.24).

На 7 сутки после введения 1 мл культуры Ureaplasma urealyticum в титре >104 и 1 мл культуры Е.coli в титре >10 5 почка также увеличена в размерах, 4,6×3,5×3,2 см, мочеточник значительно расширен. Капсула снимается легко, обнажая неравномерно окрашенную серо-бурую поверхность с множественными апостемами диаметром от 0,1 до 1 см.

На разрезе - корковое и мозговое вещество дифференцировано. Чашечно-лоханочная система умеренно расширена, с единичными подслизистыми кровоизлияниями, выполнена беловато-серыми хлопьевидными массами. Слизистая мочеточника со сглаженной продольной складчатостью (фиг.25-27).

Морфологическая характеристика - на 7 сутки формируются абсцессы в корковом и мозговом веществе, сохраняется баллонная дистрофия эпителия ЧЛС, происходит гнойное расплавление подслизистого слоя лоханки и чашечек. Выраженная гранулоцитарная инфильтрация (фиг.28, 29).

Макроскопическая и морфологическая характеристика состояния верхних мочевых путей у животных после введения культуры Chlamydia trachomatis в сочетании с культурой Е.coli.

У животных после введения 1 мл культуры Chlamydia trachomatis в титре >10 4 и 1 мл культуры Е.coli в титре >105, на 3 сутки макроскопически почка увеличена в размерах до 5,6×4,0×3,6 см, мочеточник расширен. Капсула снимается легко, обнажая гладкую поверхность с мелкими желтоватыми вкраплениями. На разрезе - корковое и мозговое вещество дифференцировано. Чашечно-лоханочная система незначительно расширена, с гладкой блестящей поверхностью. Слизистая мочеточника со сглаженной продольной складчатостью (фиг.30-32).

Морфологическая характеристика: картина апостематозного пиелонефрита. Обширные поля нагноения и распада подслизистого слоя. Микроабсцессы преимущественно в мозговом веществе, единичные в корковом. Единичные поля кровоизлияний в подслизистом слое, появление гранулоцитов. Со стороны слизистой ЧЛС преобладает слущивание, наложение слизи и гранулоцитарная (воспалительная) инфильтрация. В подслизистом слое микроабсцедирование. Отсутствие лимфоидной инфильтрации, наличие кальцинатов в небольшом количестве.

На 7 сутки после введения 1 мл культуры Chlamydia trachomatis в титре >104 и 1 мл культуры Е.coli в титре >10 5, макроскопически почка резко увеличена в размерах до 6,8×4,6×3,7 см, мочеточник расширен до 0,5 см. Капсула снимается легко, обнажая гладкую поверхность. На разрезе - корковое и мозговое вещество слабо дифференцировано. Чашечно-лоханочная система резко расширена, слизиста мутная, с беловатыми наложениями. Слизистая мочеточника со сглаженной продольной складчатостью. В месте введения культур имеет место инфильтрат, плотный, спаянный с окружающей клетчаткой (фиг.33-36).

Морфологическая характеристика (фиг.37, 38): диффузное отложения кальцинатов в большом количестве в корковом и мозговом слоях. Диффузно-очаговая лимфоидная инфильтрация с образованием лимфоидных фолликулов без герментативных центров, с примесью лейкоцитов (лимфо-лейкоцитарная инфильтрация). Лоханочный эпителий частично слущен, некротизирован. В подэпителиальном слое ЧЛС выраженная гранулоцитарная инфильтрация. В корковом веществе единичные микроабсцессы с большим количеством эозинофильных гранулоцитов. Кровоизлияний нет.

Таким образом, у животных группы сравнения на фоне обструкции мочеточника воспалительных изменений в чашечно-лоханочной системе и паренхиме почки ни макроскопически, ни микроскопически не выявлено, имело место развитие дистрофических изменений, пролиферация фибробластических клеток.

При введении культуры Е.coli к 3 суткам появляются множественные микроабсцессы в мозговом и единичные очаги в корковом веществе. Появление гранулоцитов в подслизистом слое свидетельствует о наличии гнойного воспаления, в том числе и в стенке чашечно-лоханочной системы.

К 7 суткам развивался массивный гнойный пиелонефрит с поражением коркового вещества.

При введении только культуры Ureaplasma urealyticum уже на 3 сутки в клетках слизистой чашечно-лоханочной системы выявлена баллонная дистрофия, более обширные очаги некрозов, чем в группе сравнения, что коррелирует с данными литературы. Выявлено наличие макрофагальной реакции, макрофагов, внутри которых обнаружены в большом количестве атипичные возбудители. На 7 сутки появляется макрофагальная реакция и явления баллонной дистрофии и в мочеточнике, что, на наш взгляд, обусловлено способом инфицирования (на фоне обструкции ретроградный способ инфицирования), т.е. первоначальное возникновение лоханочно-почечных рефлюксов, а не пузырно-мочеточниковых). В отличие от пиелонефрита, вызванного Е.coli, имеются лишь единичные гранулоциты, что свидетельствует о достаточно вялой воспалительной реакции.

При сочетании Ureaplasma urealyticum и Е.coli уже на 3 сутки на фоне баллонной дистрофии определяются микроабсцессы как в корковом, так и мозговом слое почки и затрагивают выделительную систему (собирательные трубочки). Таких изменений на 3 сутки мы не наблюдали ни в модели с изолированной E.coli, ни при введении изолированной культуры Ureaplasma urealyticum. На 7 сутки формируются сливные абсцессы в корковом и мозговом слое и происходит гнойное расплавление подслизистого слоя ЧЛС. Гранулоцитарная реакция выраженная. Деструктивные изменения в данном случае более выраженные, чем при введении изолированной культуры E.coli.

При введении изолированной культуры Chlamydia trachomatis существенных изменений в чашечно-лоханочной системе и паренхиме в ранние сроки не выявлено по сравнению с контрольной группой, на 7 сутки отмечалось появление кальцинатов в канальцах.

При сочетании введения культур Chlamydia trachomatis и E.coli на 7 сутки обращало на себя внимание формирование диффузно-очаговой лимфоидной инфильтрации с образованием лимфоидных фолликулов без герментативных центров, что свидетельствовало о начале развития хронического процесса в ранние сроки. В корковом и мозговом веществе определялись эозинофильные гранулоциты как проявление аллергической реакции тканей на наличие специфического возбудителя. Увеличилось количество кальцинатов в канальцах.

Резюмируя экспериментальную часть исследований, можно сказать, что выявлены различия в течении воспалительного процесса, вызванного только атипичными возбудителями, или их сочетанием с неспецифическим возбудителем.

Воспалительный процесс в верхних мочевых путях, вызванный Ureaplasma urealyticum у экспериментальных животных, имеет следующие особенности:

1) наличие баллонной дистрофии в эпителии ЧЛС, развивающейся в ранние сроки,

2) отсутствие выраженной гранулоцитарной реакции.

Данные, полученные в эксперименте, коррелируют с данными литературы, те же изменения получены при внутрипузырном введении культуры Ureaplasma urealyticum крысам. Ureaplasma urealyticum реализует свои патогенные свойства через мембранную патологию, что, в свою очередь, приводит к формированию клеточных вакуолей и в дальнейшем - к колликвационному некрозу. Все вышеизложенное способствует повышению проницаемости клеток и более быстрому и выраженному развитию воспаления при попадании в лоханку условно-патогенных возбудителей.

Учитывая длительное и бессимптомное течение хламидийной инфекции, в сроки проведения эксперимента (3 и 7 сутки) не представилось возможным выявить характерных изменений в паренхиме и ЧЛС почки за исключением отложений кальцинатов в канальцах. При сочетанном введении культуры Chlamydia trachomatis и E.coli происходит формирование диффузно-очаговой лимфоидной инфильтрации с образованием лимфоидных фолликулов без герментативных центров, появляются эозинофильные гранулоциты. Вышеизложенное позволяет сделать вывод о том, что E.coli является своеобразным катализатором размножения элементарных телец Chlamydia trachomatis, что подтверждено данными культурального исследования.

Микробиологическая характеристика возбудителей.

При микробиологическом исследовании мочи, полученной от экспериментальных животных, в группе сравнения на 3 сутки роста флоры не выявлено, на 7 сутки выявлена споровая палочка, которая не вызывает инфекционного процесса у кроликов.

При введении E.coli на 3 и 7 сутки выявлена E.coli в титре 5×106. При введении изолированных культур атипичных возбудителей посев мочи стерильный. При сочетанном ведении культуры E.coli с атипичными возбудителями в посевах мочи выявлена E.coli в титре 106-5×107.

В соскобах из лоханки и мочеточника, при введении культуры Ureaplasma urealyticum возбудитель был выявлен у животных только на 7 сутки методом ПЦР, культуральным методом возбудитель выявлен не был.

При сочетании Ureaplasma urealyticum с E.coli возбудитель выделен не был, что, вероятно, связано с наличием гноя и слизи в лоханке, что затрудняет получение клеточных элементов при заборе материала. По данным литературы, при введении U.urealyticum параллельно с Proteus mirabilis для изучения роли U.urealyticum в генезе камнеобразования чаще всего развивался пиелонефрит. При этом Proteus в отличие от U.urealyticum повторно выделяли из мочевых путей (Grenabo L. et.al., 1988; Larsson P.A. etal., 1989).

При введении культуры Chlamydia trachomatis как изолированно, так и в сочетании с Е.coli возбудитель был выделен методом ПЦР так же на 7 сутки, методом ПИФ возбудитель не выявлен. Выделение возбудителя только на 7 сутки, вероятно, связано с циклом развития микроорганизмов и с техникой забора.

Таким образом, заявленный способ достаточно прост, позволяет использовать дешевую модель и при этом получить 100% развитие пиелонефрита в короткие сроки, обеспечивает возможность сравнительного изучения влияния конкретных видов микроорганизмов на развитие определенных морфологических вариантов данного заболевания.




ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ


Способ моделирования пиелонефрита, включающий введение в мочеточник экспериментального животного культуры микроорганизмов, отличающийся тем, что заболевание моделируют на кроликах, при этом после нижнесрединной лапаротомии выделяют и перевязывают мочеточник в нижней трети, после чего проксимальнее места перевязки в мочеточник путем пункции вводят 1 мл культуры микроорганизмов Escherichia coli в титре 105, или Chlamydia trachomatis в титре 104, или Ureaplasma urealyticum в титре 104 или их сочетания и дополнительно перевязывают мочеточник проксимальнее места пункции.