ИЗОБРЕТЕНИЕ
Патент Российской Федерации RU2145088 

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЭФФЕКТИВНОСТИ ТЕРАПИИ У БОЛЬНЫХ ХРОНИЧЕСКИМ УРЕТРОГЕННЫМ ПРОСТАТИТОМ 

Имя изобретателя:  Бобрик А.В.; Дубенский В.В.; Давыдова И.Б.; Слюсарь Н.Н.
Имя патентообладателя: Тверская медицинская академия; Бобрик Алексей Владимирович; Дубенский Валерий Викторович; Давыдова Ирина Борисовна; Слюсарь Николай Николаевич 
Адрес для переписки: 170642, Тверь, ул.Советская, 4, Тверская медицинская академия 
Дата начала действия патента:  1999.03.31 

Изобретение относится к медицине, а именно к венерологии и урологии. Способ включает исследование секрета предстательной железы и цельной крови. Методом тонкослойной хроматографии проводят определение содержания фосфоинозитидов до и после лечения. Снижение уровня фосфоинозитидов в секрете предстательной железы на 20-30%, а в венозной крови на 50-70% свидетельствует об эффективности проводимой терапии и благоприятном прогнозе заболевания, неизменное содержание или повышение уровня фосфоинозитидов - о неэффективности терапии и неблагоприятном течении заболевания. 

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Изобретение относится к медицине, а именно к венерологии и урологии.

Хронический простатит является одной из сложных медико-социальных проблем ввиду широкой распространенности, трудности его диагностики и лечения. Вместе с тем, до настоящего времени не разработаны объективные, высокоинформативные методы контроля за эффективностью проводимого лечения у данного контингента больных. В результате нередко имеет место неадекватная терапия, отсутствует возможность прогнозирования течения заболевания, наблюдается высокая частота рецидивов.

В клинической практике при оценке эффективности терапии врач наиболее часто ориентируется на изменение характера жалоб больного (уменьшение болезненных и дизурических симптомов, улучшение общего состояния), а также на нормализацию размеров, формы и консистенции предстательной железы, определяемых при ректальном пальцевом обследовании. Однако, высокая степень субъективизма приводит к значительному расхождению в оценке жалоб и пальпаторных данных.

Основным лабораторным признаком эффективности терапии хронического простатита (Рекомендации научной группы ВОЗ, 1984 г., с. 12-15) является снижение лейкоцитоза в секрете предстательной железы до 10 или менее лейкоцитов в поле зрения при увеличении микроскопа в 400 раз. Однако, при массаже в первую очередь выделяется содержимое непораженных простатических долек из-за нарушения физико-химических свойств секрета и повышения его вязкости, обусловленного воспалительным процессом. Таким образом, отрицательные результаты однократного исследования секрета еще не означают, что в предстательной железе нет патологических изменений и поэтому исследование секрета необходимо проводить многократно, что в определенной степени снижает диагностическую ценность метода.

Известен ультразвуковой способ оценки эффективности проводимой терапии хронического простатита (Кулагина Л.М. Комплексное этапное лечение больных уретропростатитами с учетом ультразвуковых и цитохимических исследований. Автореф. дисс. КМН, М, 1995). Однако, УЗИ позволяет оценить лишь размеры, форму предстательной железы, ее соотношение с другими органами малого таза, в определенной степени структуру железы, наличие конкрементов, кист, участков фиброза. Данный метод не несет сколько либо значимой информации о функциональном состоянии предстательной железы и поэтому не позволяет достоверно проводить контроль за лечением больных.

Прототипом заявляемого способа является способ диагностики хронического простатита и оценки эффективности проводимой терапии по определению антиоксидантной активности в секрете предстательной железы и сыворотке крови (Ильин И. И. , Глузмин М.И., Волчегорский И.А. О возможности применения показателей антиокислительной активности для диагностики хронического простатита. Вестник дерматологии и венерологии, 1991, N 2, с. 19-20). Однако, данные изменения возникают вследствие активации нейтрофильных лейкоцитов в очаге воспаления, что приводит к продукции свободных радикалов кислорода, обуславливающих тканевую альтерацию. Поэтому даже при наличии выраженных изменений в предстательной железе, но при уменьшении лейкоцитоза происходит и нормализация антиоксидантной активности. По всей вероятности, данный показатель является непосредственным отражением остроты воспаления и не имеет прогностической ценности.

Таким образом, известные способы оценки эффективности проводимой терапии у больных хроническим простатитом имеют существенные недостатки, поскольку не позволяют проводить высокоинформативный контроль за лечением данного контингента больных.

Авторы предлагают способ определения эффективности проводимой терапии у больных хроническим простатитом на основании анализа показателей, отражающих общие закономерности развития воспалительного процесса и позволяющего прогнозировать дальнейшее течение заболевания. С этой точки зрения особого внимания заслуживают представители класса фосфолипидов - фосфоинозитиды (ФИ). Они выполняют в организме роль "вторичных мессенджеров", т.е. соединений, через которые опосредуется регуляторный сигнал в клетку, например, воздействие гормона или лекарственного вещества. Существуют единичные зарубежные исследования, указывающие на роль ФИ в регуляции контрактильности гладкой мускулатуры предстательной железы (Eckert-RE et al. Regulation of prostatic smooth muscle contractility by intracellular second messengers: implications for the conservative treatment of benign prostatic hyperplasia. , Urol-Int. 1995; 54(1), p. 6-21) и в поддержании антибактериальной функции эпителиальных клеток урогенитального тракта (Marnihardt-W et al. Host defense within the urinary tract. II. Signal transducing events activate the uroepithelial defense. Pediatr-Nephrol. 1996 Oct; 10(5): 573-7). Однако, определение содержания этих соединений в секрете предстательной железы и венозной крови для оценки эффективности терапии хронического простатита ранее не проводилось.

Сущность изобретения состоит в том, что способ определения эффективности проводимой терапии у больных хроническим простатитом включает исследование секрета предстательной железы и цельной крови, а отличается тем, что методом тонкослойной хроматографии проводят определение содержания фосфоинозитидов до и после лечения. При этом снижение уровня ФИ в секрете предстательной железы на 20-30%, а в венозной крови на 50-70% свидетельствует об эффективности проводимой терапии и благоприятном прогнозе заболевания, неизменный уровень или повышение ФИ свидетельствует о неэффективности терапии и неблагоприятном течении заболевания.

Использование изобретения позволяет получить следующий результат: способ обладает высокой точностью и объективностью и позволяет определять ФИ и при малейших изменениях их концентрации. Точность способа составляет 95,2%.

Способ является неинвазивным. Высокая информативность способа позволяет проводить объективный контроль за эффективностью проводимой терапии и дает возможность осуществлять прогнозирование течения заболевания на основе сравнения объективных показателей секрета предстательной железы и цельной крови, обеспечивает назначение адекватной терапии и способствует значительному снижению рецидивов. Способ позволяет своевременно предупреждать прогресирование заболевания и назначать адекватную терапию.

Способ осуществляется следующим образом: из 0,8 мл цельной крови, либо 0,4 мл секрета предстательной железы экстрагировали липиды смесью хлороформ-метанол (1: 2). Затем фильтровали в пробирки и осадок на фильтре трижды промывали смесью хлороформ-метанол (2:1), содержащей 0,5% HCl по объему. К фильтрату добавляли 2-3 мл 0,02% раствора хлористого кальция до образования двух фаз: хлороформной и водно-метаноловой, затем 1-2 минуты встряхивали и добавляли 2 мл хлороформа. После четкого расслоения верхнюю фазу отсасывали. Оставшиеся в верхней фазе липиды экстрагировали 2 мл хлороформа. Объединенный хлороформный экстракт промывали смесью хлороформ-метанол-0,02% хлорида кальция (3: 48:47) и затем упаривали досуха в токе азота и растворяли в 20-25 мкл смеси хлорофом-метанол 2:1. Нанесенный методом осаждения слой адсорбента высушивали на воздухе, далее 15 минут активизировали в сушильном шкафу при температуре 120oC и разделяли на 14 дорожек шириной 4-5 мм. Исследуемый липидный материал в количестве 10-14 мкг наносили на пластинку, помещенную в плоскую стеклянную камеру для проточной хроматографии. Время хроматогрофирования фосфолипидов в системе хлороформ-метанол- 7н. аммиак (13: 7: 1) составило 60-70 минут, из которых 15 минут был проток. При этом исследуемая фракция фосфоинозитидов (Rf=0,44) четко отделялась от расположенных рядом фосфатидилсеринов (Rf=0,59) и фосфатидилхолинов (Rf=0,34). Идентификацию фосфолипидных фракций проводили с помощью цветных тестов, значений Rf и свидетелей фирмы "Sigma" (США). Хроматограммы после высушивания сжигались над хромовой смесью в специальном эксикаторе, помещенном в сушильный шкаф при температуре 200oC на 30 минут. Уровень содержания ФИ определяли денситометрическим методом. Для этих целей использовали денситометр "БИАН-170", позволяющий анализировать тонкослойные хроматограммы. Перед нанесением исследуемого экстракта слой силикагеля разделяли на 12-15 узких полос по 4-5 мм каждая. При таких условиях распределение анализируемого вещества происходило только по ходу растворителя, исключая возможность продольной сорбции. Распределение липидного материала в пятне соответствовало гауссовой кривой и обеспечивало пропорциональность между количеством ФИ и площадью их пиков. При этом имелась возможность в стандартных условиях анализировать на каждой пластинке одновременно до 15 проб. Для построения калибровочной кривой использовался стандартный препарат фосфатидилинозитов фирмы "Sigma" (США), который наносился на отдельные полосы силикагеля так, чтобы концентрация липидного фосфора составляла 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 мкг соответственно. После хроматографии пластинка проявлялась над раствором хромовой смеси при температуре 200oC в течение 30 минут, затем денситометрировалась. По данным денситометрии строилась калибровочная кривая. ФИ определяли в диапазоне концентраций от 0,2 до 8,0 мкг. После сжигания исследуемых проб в парах хромовой смеси обугленное вещество переносили в колбочки с 0,5 мл азотной кислоты. Содержимое колбочек выпаривали в пламени спиртовки, после чего их продолжали прогревать до прекращения выделения бурых паров. В остывшие колбочки помещали 1,0 мл 2% раствора аскорбиновой кислоты на 10% трихлоруксусной кислоты и тщательно встряхивали. Затем приливали 0,5 мл 1% молибдата аммония, через 2 минуты - 1,0 мл смеси лимонно-кислых мышьяковистых солей, перемешивали и для развития устойчивой окраски оставляли на 1 час. Калориметрирование проводили с помощью калориметра-нефелометра КФК-2-УХЛ 4,2 при длине волны 670 нм. Одновременно с исследуемыми растворами калориметрировались "холостые" пробы, не содержащие фосфора, и стандартные растворы, содержащие 0,1 мг фосфора. Расчет содержания фосфора осуществляли путем сравнения оптических плотностей анализируемых и стандартных растворов. Результаты выражали в мг%.

При этом уровень содержания ФИ у здоровых мужчин в секрете предстательной железы составил от 3,0 до 3,7 мг%, а в цельной крови от 18 до 25 мг%. У больных хроническим простатитом уровень ФИ в секрете предстательной железы составил от 4,2 до 4,8 мг%, а в цельной крови от 40 до 53 мг%. После проведения курса комплексного лечения производится пальцевое трансректальное исследование предстательной железы, микроскопическое исследование секрета железы, а также повторно определяется содержание ФИ в секрете предстательной железы и в крови. При этом осуществляется сравнительный анализ названных биохимических показателей до и после проведенного курса лечения. Уменьшение уровня фосфоинозитидов в секрете предстательной железы до значений ниже 4,0 мг%, а в периферической крови до 30 мг% или ниже свидетельствует об эффективности проведенной терапии и благоприятном течении заболевания. Если же после проведенной терапии не происходит снижения уровня ФИ до указанных значений, это свидетельствует о неэффективности проведенного курса терапии и высокой вероятности скорого клинического рецидива заболевания, что требует коррекции и продолжения лечения. Данный способ применен у 56 больных.

Пример Больной К., 32 года (амбулаторная карта N 556), обратился в лечебно-диагностический центр Тверской государственной медицинской академии с жалобами на ноющие боли в промежности и нижней части живота, ощущение зуда в мочеиспускательном канале, учащенные позывы на мочеиспускание, некоторое снижение полового влечение и преждевременную эякуляцию. Около 6 лет назад перенес острый уретрит, к врачу не обращался, лечился самостоятельно - сделал несколько инъекций бициллина. Выделения прекратились. Однако, через несколько месяцев стал беспокоить дискомфорт в области промежности. В течение этих лет неоднократно получал лечение длительными курсами антибиотиков. Рецидивы заболевания возникали 4-5 раз в год.

Кожные покровы чистые, обычной окраски. Наружные половые органы развиты правильно. Губки уретры несколько гиперимированы, свободных выделений нет. Предстательная железа при пальцевом трансректальном исследовании диффузно увеличена, консистенция - тестоватая, центральная бороздка сглажена. Пальпация болезненна.

При уретроскопии - явления переходного инфильтрата в задней уретре, уретральный аденит, калликулит. Трансабдоминальное УЗИ - увеличение размеров и неоднородная эхоструктура предстательной железы. В соскобах из уретры - лейкоциты до 15-17 в п/зрения, плоский эпителий в значительном количестве. Методом прямой иммунофлюоресценции найдены хламидии и уреаплазмы. В секрете предстательной железы - лейкоциты до 30-40 в п/зрения, лецитиновые зерна в небольшом количестве, нарушение феномена кристаллизации 1 ст.

Уровень ФИ в цельной венозной крови - 50,61 мг%, в секрете предстательной железы - 4,73 мг%.

Диагноз: Хламидиоз. Уреаплазмоз. Хронический простатит. Хронический уретрит. Калликулит.

Назначено лечение: Тактивин, Эскузан, Доксициклин в терапевтических дозировках в течение 10 дней, трансректальная электростимуляция на аппарате "ИФС" ежедневно, на курс 10 процедур. Одновременно проводилась и соответствующая терапия партнерши больного, у которой выявлен такой же спектр инфекций.

После окончания данного тура лечения достигнуто полное прекращение боли и дизурических расстройств отмечена нормализация количества лейкоцитов в соскобах из уретры и секрете предстательной железы; значительное уменьшение размеров предстательной железы, повышение ее тонуса. Уровень фосфоинозитидов в венозной крови снизился до 42,45 мг%, в секрете предстательной железы - 4,32 мг%. При контрольной уретроскопии отмечается снижение интенсивности воспалительных изменений в области семенного бугорка, однако сохраняются явления переходного инфильтрата.

Учитывая недостаточное снижение уровня фосфоинозитидов, а также сохранение патологических изменений в области мочеиспускательного канала, после 3-х дневного интервала назначен II тур лечения: Рулид, Простатилен, трансуретральная электролазерная стимуляция предстательной железы - через день, N 10.

К окончанию II курса больной отмечает значительное повышение общего жизненного тонуса, восстановление либидо и эякуляции. При трансректальном исследовании - железа не увеличена, слабоболезненная, центральная бороздка выявляется, консистенция плотноэластическая. Анализ секрета железы - лейкоциты 2-3 в поле зрения, лецитиновые зерна в значительном количестве, феномен кристаллизации сохранен. Уровень фосфоинозитидов в цельной венозной крови - 25.56 мг%, в секрете предстательной железы - 3,21 мг%. Контрольные микроскопические исследования через 11 дней, 1 месяц и 2 месяца не выявили в соскобах из уретры хламидий и уреаплазм. Эндоскопическое исследование уретры спустя 1 месяц патологии не обнаружило. Спустя 6 месяцев после прохождения курса лечения содержание фосфоинозитидов в цельной венозной крови - 22,62 мг%, в секрете предстательной железы - 3,34 мг%. В данный период наблюдения рецидивов заболевания у пациента не возникало.

Таким образом, предлагаемый метод определения эффективности терапии у больных хроническим уретрогенным простатитом позволяет осуществлять высокоинформативный контроль за лечением данного контингента больных, производить необходимую коррекцию терапии и прогнозировать дальнейшее течение заболевания. 

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

Способ определения эффективности терапии у больных хроническим уретрогенным простатитом, включающий исследование секрета предстательной железы и цельной крови, отличающийся тем, что методом тонкослойной хроматографии проводят определение содержания фосфоинозитидов до и после лечения, снижение уровня фосфоинозитидов в секрете предстательной железы на 20 - 30%, а в венозной крови на 50 - 70% свидетельствует об эффективности проводимой терапии и благоприятном прогнозе заболевания, неизменный уровень или повышение фосфоинозитидов свидетельствует о неэффективности терапии и неблагоприятном течении заболевания.

Версия для печати
Дата публикации 08.06.2007гг


вверх