СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ОБЩЕЙ ВАРИАБЕЛЬНОЙ ГИПОГАММАГЛОБУЛИНЕМИИ

СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ОБЩЕЙ ВАРИАБЕЛЬНОЙ ГИПОГАММАГЛОБУЛИНЕМИИ


RU (11) 2292554 (13) C1

(51) МПК
G01N 33/53 (2006.01)
G01N 33/48 (2006.01) 

(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ 
Статус: по данным на 29.08.2007 - действует 

--------------------------------------------------------------------------------

Документ: В формате PDF 
(14) Дата публикации: 2007.01.27 
(21) Регистрационный номер заявки: 2005123929/15 
(22) Дата подачи заявки: 2005.07.28 
(24) Дата начала отсчета срока действия патента: 2005.07.28 
(45) Опубликовано: 2007.01.27 
(56) Аналоги изобретения: DOBBINS WO. Diagnostic pathology of the intestinal mucosa. Berlin, Springer-Verlag, 1990, 217 р. БОРИСОВА A.M. и др. Общая вариабельная иммунная недостаточность у взрослых и проблемы иммунотерапии. Терапевтический архив, 1998, №5, с.14-20. ЛЕБЕДЕВ К.А. и др. Иммунная недостаточность (выявление и лечение). М., 2003. С.188. BILLI H et al. Common
variable immunodeficiency and total villous atrophy regressive after gluten-free diet. Rev Med Interne. 1997, 18(9), p.724-726, PMID: 9365725, реф., [он-лайн], [найдено 03.07.2006], найдено из базы данных PubMed. DAWSON J et al. Jejunal mucosal enzyme activities, regulatory peptides and organelle pathology of the enteropathy of common variable immunodeficiency. Gut, 1986, 27(3), p.273-277, PMID: 3699546, реф., [он-лайн], [найдено 03.07.2006], найдено из базы данных PubMed. NILSSEN DE et al. Distribution and phenotypes of duodenal intraepithelial gamma/delta Т cells in patients with various types of primary B-cell deficiency. Clin Immunol Immunopathol., 1993, 68(3), p.301-310, PMID: 8103721, реф., [он-лайн], [найдено 03.07.2006], найдено из базы данных PubMed.

(72) Имя изобретателя: Лазебник Леонид Борисович (RU); Гудкова Раиса Борисовна (RU); Парфенов Асфольд Иванович (RU); Потапова Валентина Борисовна (RU); Крумс Лариса Михайловна (RU); Ульянова Валентина Васильевна (RU); Полева Наталья Ивановна (RU); Лычкова Алла Эдуардовна (RU) 
(73) Имя патентообладателя: Лазебник Леонид Борисович (RU); Гудкова Раиса Борисовна (RU); Парфенов Асфольд Иванович (RU); Потапова Валентина Борисовна (RU); Крумс Лариса Михайловна (RU); Ульянова Валентина Васильевна (RU); Полева Наталья Ивановна (RU); Лычкова Алла Эдуардовна (RU) 
(98) Адрес для переписки: 129343, Москва, ул. Амундсена, 11, корп.1, кв.53, А.Э. Лычковой 

(54) СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ОБЩЕЙ ВАРИАБЕЛЬНОЙ ГИПОГАММАГЛОБУЛИНЕМИИ
Изобретение относится к области медицины, а именно к гастроэнтерологии. Сущность способа заключается в том, что у больных определяют показатели иммунитета в сыворотке крови и проводят морфологическое исследование биоптатов тонкой кишки. При значении иммуноглобулина А 0,68 г/л и менее, иммуноглобулина G 6,16 г/л и менее, иммуноглобулина М 0,48 г/л и менее, CD3+ - 49% и менее, CD4+ - 30% и менее, CD8+ - 38% и более, CD20+ - 4% и менее; и при обнаружении очаговой пролиферации энтероцитов, нарушения связей энтероцитов с базальной мембраной, образовании отростков эндотелиальных клеток, пролиферации микрофиламентов в них с формированием войлокоподобной структуры, целиком заполняющей клетку, полиморфизма ядер эндотелиоцитов диагностируют общую вариабельную гипогаммаглобулинемию. Использование способа позволяет повысить точность диагностики общей вариабельной гипогаммаглобулинемии.




ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ


Изобретение относится к области медицины, а именно к гастроэнтерологии, и может быть применено в качестве способа диагностики общей вариабельной гипогаммаглобулинемии.

Известен способ диагностики общей вариабельной гипогаммаглобулинемии. принятый за аналог, включающий определение иммуноглобулинов основных классов А, М, G (Walker-Smith J.A., McDonald. Intestinal lymphoid cells. Digest Dis Sci 1987. 32(7):782-791).

Известен способ диагностики общей вариабельной гипогаммаглобулинемии. принятый за прототип, включающий определение уровня В-лимфоцитов и при дефиците В-системы диагностирование общей вариабельной гипогаммаглобулинемии (Dobbins W.O. Diagnostic patology of the intestinal mucosa. Berlin et al., 1990. - 217 p.). Однако использование одного показателя в качестве диагностического признака не является строго специфичным признаком для общей вариабельной гипогаммаглобулинемии.

Целью изобретения является повышение точности диагностики общей вариабельной гипогаммаглобулинемии.

Технический результат достигается тем, что определяют показатели иммунитета в сыворотке крови и проводят морфологическое исследование биоптатов тонкой кишки и при значении иммуноглобулина А 0,68 г/л и менее, при значении иммуноглобулина G 6,16 г/л и менее, при значении иммуноглобулина М 0,48 г/л и менее, CD3+ - 49% и менее, CD4+ - 30% и менее, CD8+ - 38% и более. CD20+ - 4% и менее: и при обнаружении очаговой пролиферации энтероцитов, нарушения связей этероцитов с банальной мембраной, образовании отростков эндотелиальных клеток, пролиферации микрофиламентов в них с формированием войлокоподобной структуры, целиком заполняющей клетку, полиморфизма ядер эндогелиоцитов диагностируют общую вариабельную гипогаммаглобулинемию.

Способ осуществляется следующим образом.

При поступлении больного обращают внимание на наличие очаговых инфекций - бронхиты, отиты, синуситы, пилонефрит, аднексит и проявлений аутоиммунных заболеваний - гемолитической анемии, аутоиммунной лейкопении, тромбоцитопении, аутоиммунного тиреоидита.

Выясняют, была ли потеря массы тела в условиях полноценного питания и есть ли проявления полигиновитаминоза (кровоточивость десен, выпадение волос, изменение ногтей) и нарушения минерального обмена (гипокальцемические судороги, боли в костях, как проявление остеопении или остеопороза), проявления полигландулярной недостаточности (гипофизарный субнанизм, гипофункция щитовидной и половых желез). Дефицит фолиевой кислоты приводит к возникновению чувства жжения и болезненности в языке и во рту, возникает глосит и афтозный стоматит с последующей атрофией сосочков языка. На деснах, слизистой оболочке щек определяются пузырьки беловатого цвета, склонные к изъязвлению с развитием афт.

При рентгенологическом контрастном исследовании тонкой кишки на фоне складок слизистой видны мелкие округлые четко очерченные дефекты наполнения 0,3-0,4 см, интенсивность которых нарастает в дистальном направлении. Отмечайся неравномерное заполнение отделов тонкой кишки, сегментация и фрагментация столба контрастной взвеси и наличие жидкости и слизи в просвете кишки.

Определяют показатели иммунитета сыворотки крови и при значении иммуноглобулина A 0,68 г/л и менее, при значении иммуноглобулина G 6,16 г/л и менее, при значении иммуноглобулина М 0,48 г/л и менее, CD3+ - 49% и менее. CD4+ - 30% и менее, CD8+ - 38% и более, CD20+ - 4% и менее ставят предварительный диагноз общей вариабельной гипогаммаглобулинемии.

Проводят морфологическое исследование биоптатов тонкой кишки. В собственной пластинке тонкой кишки определяют наличие лимфоидных узелков диаметром от 1-3 до 5 мм, создающих характерный рельеф слизистой оболочки в виде узловой лимфоидной гиперплазии; развитие этой гиперплазии становится причиной появления приступообразных болей в животе.

Глубина крипт остается нормальной, составляя 1/3 высоты ворсин, высота ворсин уменьшается и рельеф слизистой сглаживается. Количество плазматических клеток в собственной пластинке уменьшено, встречаются единичные межэпителиальные лимфоциты.

Электронно-микроскопически поверхность тонкой кишки характеризуется нарушением взаимодействия эпителия с базальной мембраной. Это проявляется очаговой пролиферацией энтероцитов, отличающихся низкой дифференцировкой и наличием отростков в поверхности, обеспечивающих сохранение межэпителиальных связей. Вблизи таких эпителиоцитов межэпителиальные лимфоциты отсутствуют и отмечаются нарушения связей энтероцитов с базальной мембраной, что приводит к отслойке эпителиального пласта а определенном протяжении с последующей атрофией деэпителизированных ворсин. В стромальных клетках собственной пластинки выявлена деформация перинуклеарного пространства, характеризующегося широким соединением с канальцами и полостями гранулярной эндоплазматической сети, что отражает нарушение внутриклеточных формообразовательных процессов. Отмечаются изменения формы целого ряда клеток: макрофаги, гладкомышеные клетки, тучные клетки, эндотелиоциты кровеносных сосудов; на их поверхности образуются несвойственные этим клеткам широкие длинные выросты, лишенные органелл: на поверхности эндотелиалиальных клеток образующиеся отростки имеют ответвления различной длины и ширины, нередко с узкими перетяжками, что свидетельствует о их возможном отделении. В эндотелиоцитах отмечается пролиферация микрофиламентов, формирующих плотную войлокоподобную структуру, заполняющую целиком клетку. В эндотелиальных клетках отмечается полиморфизм ядер, а также плотные включения с тонкофибриллярной структурой.

При обнаружении очаговой пролиферации энтероцитов, нарушения связей энтероцитов с базальной мембраной, образовании отростков эндотелиальных клеток, пролиферации микрофиламентов в них с формированием войлокоподобной структуры, целиком заполняющей клетку, полиморфизма ядер эндотелиоцитов в сочетании с изменениями иммунологического статуса диагностируют общую вариабельную гипогаммаглобулинемию.

Способ поясняется следующими примерами.

Пример 1.

Больной К., 18 лет поступил с жалобами на боли в области правого уха. болезненное мочеиспускание, похудание, выпадение волос, судороги и быструю утомляемость. При отоларингоскопическом исследовании у больного выявлен правосторонний отит, в анализе мочи лейкоциты покрывают все поле зрения, что свидетельствует о наличии пилонефрита.

При рентгенологическом контрастном исследовании тонкой кишки на фоне складок слизистой видны мелкие округлые четко очерченные дефекты наполнения 0,3 см. интенсивность которых нарастает в дистальном направлении; определяются неравномерное заполнение отделов тонкой кишки, сегментация и (фрагментация столба контрастной взвеси и наличие жидкости и слизи в просвете кишки.

Определяют показа гели иммунитета сыворотки крови: значение иммуноглобулина А - 0,68 г/л, иммуноглобулина G - 6,16 г/л, значение иммуноглобулина М - 0,48 г/л, CD3+ -49%, CD4+ -30%, CD8+ -38%, CD20+ -4% и ставят предварительный диагноз общей вариабельной гипогаммаглобулинемии.

Проводят морфологическое исследование биошатов тонкой кишки. В собственной пластинке тонкой кишки определяют наличие лимфоидных узелков диаметром от 1-3 мм, создающих характерный рельеф слизистой оболочки в виде узловой лимфоидной гиперплазии.

Глубина крипт нормальна, составляя 1/3 высоты ворсин, высота ворсин уменьшена и рельеф слизистой сглажен. Количество плазматических клеток в собственной пластинке уменьшено, встречаются единичные межэпителиальные лимфоциты.

Электронно-микроскопически поверхность тонкой кишки характеризуется очаговой пролиферацией энтероцитов, отличающихся низкой дифференцировкой и наличием отростков в поверхности. Вблизи таких эпителиоцитов межэпителиальные лимфоциты отсутствуют и отмечаются нарушения связей энтероцитов с базальной мембраной, это приводит к отслойке эпителиального пласта на определенном протяжении с последующей атрофией деэпителизированных ворсин. В стромальных клетках собственной пластинки выявлена деформация перинуклеарного пространства, характеризующегося широким соединением с канальцами и полостями гранулярной эндоплазматической сети. Отмечаются изменения формы макрофагов, гладкомышечных клеток, тучные клетки, эндотелиоциты кровеносных сосудов; на их поверхности выявлены широкие длинные выросты, лишенные органелл; на поверхности эндотелиалиальных клеток образующиеся отростки имеют ответвления различной длины и ширины, нередко с узкими перетяжками. В эндотелиоцитах отмечается пролиферация микрофиламентов, формирующих плотную войлокоподобную структуру, заполняющую целиком клетку. В эндотелиальных клетках отмечается полиморфизм ядер, а также плотные включения с тонкофибриллярной структурой.

Обнаружение очаговой пролиферации энтероцитов, нарушения связей энтероцитов с базальной мембраной, образования отростков эндотелиальных клеток. пролиферации микрофиламентов в них с формированием войлокоподобной структуры, целиком заполняющей клетку, полиморфизма ядер эндогелиоцитов в сочетании с изменениями иммунологического статуса позволяет диагностировать у него общую вариабельную гипогаммаглобулинемию.

Пример 2

Больная С., 23 лет поступила с явлениями бронхитам аднексита и аутоиммунного тиреоидита. Больная пониженного питания, несмотря на сбалансированный рацион питания. Отмечается кровоточивость десен и изменение ногтей, боли в костях, олигоменаррея.

При рентгенологическом контрастном исследовании тонкой кишки на фоне складок слизистой видны мелкие округлые четко очерченные дефекты наполнения 0,4-0,5 см, неравномерное заполнение отделов тонкой кишки, сегментация и фрагментация столба контрастной взвеси.

Определяют показатели иммунитета сыворотки крови и при значении иммуноглобулина А 0,58 г/л, при значении иммуноглобулина G 5,97 г/л, при значении иммуноглобулина М 0,42 г/л, CD3+ -44%, CD4+ -25%, CD8+ -42%, CD20+ -2% предварительный диагноз общей вариабельной гипогаммаглобулинемии.

Проводят морфологическое исследование биоптатов тонкой кишки. В собственной пластинке тонкой кишки определяют наличие лимфоидных узелков диаметром 4-5 мм.

Глубина крипт остается нормальной, составляя 1/3 высоты ворсин, высота ворсин уменьшена и рельеф слизистой сглажен. Количество плазматических клеток в собственной пластинке уменьшено, встречаются единичные межэпителиальные лимфоциты.

Электронно-микроскопически поверхность тонкой кишки характеризуется очаговой пролиферацией энтероцитов, отличающихся низкой дифференцировкой и наличием отростков в поверхности. Вблизи эпителиоцитов межэпителиальные лимфоциты отсутствуют и отмечены нарушения связей энтероцитов с базальной мембраной, отмечается отслойка эпителиального пласта на определенном протяжении. В стромальных клетках собственной пластинки выявлена деформация перинуклеарного пространства, характеризующегося широким соединением с канальцами и полостями гранулярной эндоплазматической сети. Отмечаются изменения формы целого ряда клеток: макрофаги, гладкомышеные клетки, тучные клетки, эндотелиоциты кровеносных сосудов: на их поверхности образуются несвойственные этим клеткам широкие длинные выросты лишенные органелл; на поверхности эндотелиалиальных клеток образующиеся отростки имеют ответвления различной длины и ширины, нередко с узкими перетяжками, что свидетельствует о их возможном отделении. В эндотелиоцитах отмечается пролиферация микрофиламентов, формирующих плотную войлокоподобную структуру, заполняющую целиком клетку. В эндотелиальных клетках отмечается полиморфизм ядер, а также плотные включения с тонкофибриллярной структурой.

При обнаружении очаговой пролиферации энтероцитов, нарушения связей энтероцитов с базальной мембраной, образовании отростков эндотелиальных клеток, пролиферации микрофиламентов в них с формированием войлокоподобной структуры, целиком заполняющей клетку, полиморфизма ядер эндотелиоцитов в сочетании с изменениями иммунологического статуса диагностируют общую вариабельную гипогаммаглобулинемию.

Катамнестическое наблюдение и лечение выявили высокую точность постановки диагноза у данной больной.

Согласно предложенному способу проведена диагностика общей вариабельной гипогаммаглобулинемии у 23 больных из 26 обследованных. Катамнестическое наблюдение в течение 1-1,5 лет подтвердило правильность постановки диагноза.


ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

Способ диагностики общей вариабельной гипогаммаглобулинемии, включающий проведение иммунологического и морфологического исследования, отличающийся тем, что определяют показатели иммунитета в сыворотке крови и проводят морфологическое исследование биоптатов тонкой кишки и при значении иммуноглобулина А 0,68 г/л и менее, при значении иммуноглобулина G 6,16 г/л и менее, при значении иммуноглобулина М 0,48 г/л и менее, CD3+ - 49% и менее, CD4+ - 30% и менее, CD8+ - 38% и более, CD20+ - 4% и менее и при обнаружении очаговой пролиферации энтероцитов, нарушении связей энтероцитов с базальной мембраной, образовании отростков эндотелиальных клеток, пролиферации микрофиламентов в них с формированием войлокоподобной структуры, целиком заполняющей клетку, полиморфизма ядер эндотелиоцитов диагностируют общую вариабельную гипогаммаглобулинемию.