СПОСОБ ПОДБОРА ЛЕКАРСТВЕННЫХ ПРЕПАРАТОВ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ БОЛЬНЫХ ХРОНИЧЕСКИМ ВИРУСНЫМ ГЕПАТИТОМ C

СПОСОБ ПОДБОРА ЛЕКАРСТВЕННЫХ ПРЕПАРАТОВ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ БОЛЬНЫХ ХРОНИЧЕСКИМ ВИРУСНЫМ ГЕПАТИТОМ C


RU (11) 2221243 (13) C1

(51) 7 G01N33/15, G01N33/48 

(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ 
Статус: по данным на 29.08.2007 - прекратил действие, но может быть восстановлен 

--------------------------------------------------------------------------------

(14) Дата публикации: 2004.01.10 
(21) Регистрационный номер заявки: 2002111611/15 
(22) Дата подачи заявки: 2002.04.29 
(24) Дата начала отсчета срока действия патента: 2002.04.29 
(45) Опубликовано: 2004.01.10 
(56) Аналоги изобретения: RU 2150700 C1, 10.06.2000. RU 2132062 C1, 20.06.1999. US 4983514 A, 08.01.1991. DE 4038898 A1, 11.06.1992. WO 97/29370 A1, 14.08.1997. 
(72) Имя изобретателя: Баскович Г.А.; Стельмах В.В.; Шабров А.В.; Радченко В.Г. 
(73) Имя патентообладателя: ГОУВПО Санкт-Петербургская государственная медицинская академия им. И.И.Мечникова 
(98) Адрес для переписки: 195067, Санкт-Петербург, Пискаревский пр., 47, СПбГМА им.И.И.Мечникова, пав.1, патентный отдел 

(54) СПОСОБ ПОДБОРА ЛЕКАРСТВЕННЫХ ПРЕПАРАТОВ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ БОЛЬНЫХ ХРОНИЧЕСКИМ ВИРУСНЫМ ГЕПАТИТОМ C 

Изобретение относится к медицине и может быть использовано при лечении больных хроническим вирусным гепатитом С. Исследуемые препараты вносят в цельную кровь на 5% трилона "Б" в дозе, составляющей 1:5000 от терапевтической, пробы инкубируют при 37oС в течение 1 ч, после инкубирования исследуют тиол-дисульфидные соотношения в цельной и небелковой фракциях крови и при значениях тиол-дисульфидного соотношения в небелковой фракции крови ниже показателей контрольной пробы больному назначают коррекцию показателей антиоксидантной системы организма аевитом в дозе 0,6 г/сут, аскорбиновой кислотой 0,3 г/сут, внутривенными инфузиями 1,5%-ного раствора реамберина 400,0 мл в течение 10-14 дней, после чего подбор тех же лекарственных препаратов проводят повторно, и искомым является препарат, вызывающий увеличение тиол-дисульфидного соотношения цельной фракции крови по сравнению с контрольной пробой. Технический результат: создание более чувствительного способа подбора лекарственных препаратов для лечения больных хроническим вирусным гепатитом С, что обеспечивает улучшение их клинических, биохимических и вирусологических показателей. 4 табл. 


ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ



Изобретение относится к области медицины и может быть использовано при лечении больных хроническим вирусным гепатитом С для подбора лекарственного средства и его наиболее эффективной дозы для конкретного больного.

Известен способ выбора фармакотерапии при дуоденальных язвах (патент РФ 2145226 7, А 61 К 35/141; 31/505; 31/44, 2000 г.), включающий назначение препаратов с учетом показателей желудочной секреции и состояния микроциркуляции в слизистой оболочке пилородуоденальной области. Метод не используется у больных хроническими вирусными гепатитами, что является его недостатком.

Известен способ подбора гомеопатических препаратов по биоэнергетическому принципу (патент РФ 2144380 7, А 61 К 41/00, G 01 N 33/15; 33/483, 2000 г.), заключающийся в том, что пациент выдерживает в ладонях стеклянный стакан с физиологическим раствором и тестируемым препаратом, с последующим сравнением картины кристаллизации. Недостатком метода является значительный субъективизм и ненадежность результатов.

Известен способ определения максимально допустимой терапевтической дозы при низкоинтенсивном лазерном облучении (заявка 98108954/14 от 12.05.98 г., 7 А 61 N 5/06; А 61 В 5/02). Недостатком метода является ограниченная область применения, а также отсутствие данных по использованию метода в гепатологии.

По наиболее близкой технической сущности в качестве прототипа выбрали способ скрининга лекарственных препаратов для конкретного больного, включающий культивирование цельной гепаринизированной крови больного в присутствии водных растворов препаратов сравнения, выделение клеточной фракции крови, анализ соотношения SH- и SS-групп в клеточной фракции крови и выбор в качестве целевого препарата с наибольшим соотношением SH- и SS-групп (патент РФ 2150700, G 01 N 33/15, 2000 г.), для лечения вирусных, онкологических, аутоиммунных и иных заболеваний.

Недостатком способа является низкий процент положительных реакций крови больных на исследуемые препараты, т.е. недостаточная чувствительность способа.

Задачей настоящего изобретения является разработка более чувствительного способа подбора лекарственных препаратов для лечения больных хроническим вирусным гепатитом С.

Поставленная задача решается тем, что исследуемые препараты вносят в цельную кровь в дозе, составляющей 1:5000 от терапевтической, в качестве антикоагулянта используют раствор трилона "Б". Пробы инкубируют в течение 1 ч при температуре 37oC. После инкубирования исследуют тиол-дисульфидные соотношения в цельной и небелковой фракциях крови и при значениях тиол-дисульфидного соотношения в небелковой фракции ниже показателей контрольной пробы больному назначают коррекцию антиоксидантной системы организма препаратами антиоксидантного действия, после чего подбор тех же лекарственных средств проводят повторно. В качестве приоритетного выбирают препарат, вызывающий увеличение тиол-дисульфидного соотношения цельной крови по сравнению с контрольной пробой.

Способ осуществляется следующим образом: к 1 мл цельной крови, содержащей антикоагулянт (0,02 мл. 5% раствора трилона "Б" на физиологическом растворе) добавляют тестируемые препараты в необходимых дозах (дозировка in vitro рассчитывается исходя из 1:5000 от терапевтической), в контрольную пробирку добавляется растворитель, смеси инкубируют 1 ч при температуре 37oC.

По нашим данным, степень ответа на противовирусную терапию больных ХВГ С зависит от значения тиол-дисульфидного соотношения небелковой фракции крови, при снижении которого, на наш взгляд, целесообразно проведение антиоксидантной коррекции с целью повышения чувствительности больных к противовирусным препаратам.

После инкубации определяют тиол-дисульфидное соотношение как отношение сульфгидрильных (SH-) к дисульфидным (SS-) группам в цельной и небелковой фракциях крови. Определение (SH-) и (SS-) групп осуществляют методами прямого и обратного амперометрического титрования в одной пробе (В.В. Соколовский. Тиол-дисульфидное соотношение крови как показатель неспецифической резистентности организма. // Учебное пособие. - СПб.-1996).

Для определения тиол-дисульфидного соотношения в цельной крови пробы крови гемолизируют в 0,1% растворе трилона "Б" (рН 7,0) в соотношении: 1 часть крови и 19 частей раствора трилона "Б" смешивают, помещая в холодильник (+4oС - +5oС) и через 30 мин центрифугируют для осаждения разрушенных клеток в течение 15 мин при 6000 об/мин. Надосадочную жидкость (гемолизат) используют в работе.

В сосуд для титрования (бюкс, стеклянная чашка на 30-40 мл) вносят 25-30 мл аммиачного буфера. Помещают сосуд на магнитную мешалку, погружают в исследуемый раствор платиновый электрод и свободный конец солевого мостика, включают в сеть микроамперметр, опускают в центр сосуда капсулу с магнитом и начинают ее вращение со скоростью, исключающей разбрызгивание раствора. Дозатором отмеривают в сосуд 0,2 мл гемолизата. После того как стрелка микроамперметра примет стабильное положение, начинают титрование. Добавляя по 0,5 (0,1) мл 110-3 М раствора AgNO3. После каждой очередной порции ждут, чтобы стрелка остановилась, отмечают сооответствующее ее положению число делений шкалы и продолжают титрование. По достижении конечной его точки первая же очередная порция титранта вызывает заметный скачок силы тока и отклонение стрелки на большую, нежели прежде величину. Сделав после этого еще 4-5 измерений, титрование прекращают, и по его результатам графическим способом находят количество нитрата серебра, затраченного на титрование раствора, и рассчитывают содержание -SH- групп.

Для определения -SS- групп методом обратного амперометрирования в этой же пробе после определения -SH- групп, не прерывая перемешивания раствора, в сосуд для титрования вносят 200 мг сульфита натрия (осторожно насыпая навеску в центр сосуда для титрования) и после того, как стрелка примет стабильное положение (примерно через 3-5 мин), начинают титровать исследуемую пробу 510-4 М раствора унитиола, добавляя его в реакционную смесь по 0,05 до конечного объема 0,5 мл. По завершении титрования количество дисульфидных групп находят графическим способом.

Тиол-дисульфидное соотношение цельной крови рассчитывают как отношение концентраций -SH- групп к концентрациям -SS-групп. Для определения тиол-дисульфидного соотношения в небелковой фракции крови белки осаждают 5% метафосфорной кислотой (хранить в холодильнике не более 7 дней), смешивая ее в равных количествах с гемолизатом крови, после чего смесь центрифугируют в течение 15 мин при 6000 об/мин. На титрование берут 2 мл надосадочной жидкости и определяют в ней -SH- и -SS-группы так же, как и в цельной крови. Тиол-дисульфидное соотношение небелковой фракции крови рассчитывают как отношение концентраций в небелковой фракции крови -SH-групп к -SS-группам. В случае обнаружения показателей тиол-дисульфидного соотношения в небелковой фракции крови ниже показателей контрольной пробы, больному назначают антиоксидантную терапию, включающую прием аевита 0,6 г/сут, внутривенное назначение раствора аскорбиновой кислоты 0,3 г/сут и 1,5% раствора Реамберина 400,0 мл на протяжении 10-14 дней.

После проведения антиоксидантной коррекции проводят повторный подбор противовирусных препаратов и в качестве искомого выбирают препарат, вызывающий увеличение тиол-дисульфидного соотношения в цельной крови по сравнению с контрольной пробой.

Отличительными существенными признаками являются:

1. В качестве антикоагулянта используют 5% раствор трилона "Б", что способствует связыванию в пробах крови ионов железа и тем самым обеспечивает стабилизацию перекисных и свободно-радикальных процессов в условиях in vitro при инкубации проб крови.

2. Тиол-дисульфидные соотношения определяют в цельной и небелковой фракциях крови. По нашим данным, степень ответа на противовирусную терапию больных ХВГ зависит от значения тиол-дисульфидного соотношения небелковой фракции крови, при снижении которого, на наш взгляд, целесообразно проведение антиоксидантной коррекции с целью повышения чувствительности больных к противовирусным препаратам.

3. При тиол-дисульфидном соотношении в небелковой фракции крови ниже показателей контрольной пробы больному проводят антиоксидантную коррецию с использованием препаратов с антиоксидантным действием: аевит 0,6 г/сут, аскорбиновая кислота 0,3 г/сут, внутривенные инфузии 400,0 мл 1,5% раствора реамберина в течение 10-14 дней.

4. После антиоксидантной коррекции повторно проводят подбор лекарственных средств и в качестве искомого выбирают препарат, способствующий повышению тиол-дисульфидного соотношения в цельной крови по сравнению с показателями в контрольной пробе.

В основу способа положена гипотеза, что низкая чувствительность больных к противовирусным препаратам может быть связана с недостаточностью функциональной активности системы интерферона, в частности, блокадой рецепторов или дефектом рецепторного аппарата интерферон-продуцирующих клеток. Известно, что у больных хроническими вирусными гепатитами наблюдается дисфункция системы мононуклеарных фагоцитов, основными проявлениями которой является резкое повышение уровня провоспалительных цитокинов, истощение ферментного и субстратного звеньев антиоксидантной системы сыворотки крови, дисбаланс системы интерферона. В то же время доказана низкая эффективность монотерапии -интерфероном при ХВГС: частота устойчивого ответа не превышела 6% при лечении в течение 6 мес и 13% - в течение 12 мес. Эффективность монотерапии ХВГС, вызванного генотипом вируса 1b, достаточно распространенного в России, еще ниже и составляет всего 2-7% (Радченко В.Г., Шабров А.В. и др. Хронические заболевания печени, СПб, 2000).

Вместе с тем, нарушение функциональной активности рецепторов гормонов, ферментов и других белковых структур могут быть вызваны сдвигами окислительно-восстановительного гомеостаза внутренней среды организма вследствие различных внешних и внутренних факторов, в том числе и приема различных лекарственных средств (Л. Л. Гончарова, Л.А. Покровская, И.Н. Ушкова и др. Роль антиоксидантных механизмов в реакциях организма на действие низкоинтенсивного лазерного излучения // Межд. Мед. Обзоры. -1999. -Т.2, - 1.-С. 15-19.; В.Г. Радченко, Г.А. Баскович, В.В. Стельмах. Реамберин в комплексной терапии хронических гепатитов. Мир медицины. СПб., 2001, 9-10. -С.19-22; В. Г. Радченко, Г. А. Баскович, В.В. Стельмах. Антигипоксанты в гепатологии. Актуальные вопросы внутренних болезней. Материалы итоговой конференции кафедры внутренних болезней, 2, посвященной 95-летию д.м.н. А.А. Кедрова. СПб, 2002. -С. 52-53). Значительный вклад в поддержании окислительно-восстановительного гомеостаза информативным показателем состояния которого является тиол-дисульфидное соотношение цельной крови, вносят компоненты субстратного звена антиоксидантной системы организма (В.В. Соколовский. Тиол-дисульфидное соотношение крови как показатель неспецифической резистентности организма. // Учебное пособие. -СПб. -1996). Своевременная коррекция нарушений в антиоксидантной системе организма путем введения в организм препаратов антиоксидантного действия способстует нормализации функциональной активности различных белковых структур. Тиол-дисульфидное соотношение небелковой фракции крови является показателем восстановительного потенциала тиолового звена антиоксидантной системы организма (В.Г. Маймулов, В.А. Дадали, Г.А. Баскович и др. Коррекция дезадаптационных состояний с помощью природных адаптогенов //Пособие для врачей. -СПб., 1999).

Представленный способ подбора лекарственных препаратов применен у 36 больных хроническим вирусным гепатитом С. В качестве примера приводятся выписки из историй болезней.

Пример 1

История болезни 10860.

Больной Б., 22 лет.

Диагноз: Хронический вирусный гепатит С, репликативная фаза, с умеренной активностью, фиброзом 3 степени, начальными признаками портальной гипертензии.

Сопутствующий: Хронический гастродуоденит, вне обострения, недостаточность кардии. Варикозное расширение вен правой нижней конечности.

При поступлении предъявлял жалобы на слабость, снижение работоспособности, болевой синдром в правом подреберье.

Болен в течение 2 лет. Периодически принимал гепатопротекторы, на протяжении предыдущих 8 мес получал комбинированную противовирусную терапию, биохимической и вирусологической ремиссии не наблюдалось.

Объективно при поступлении: состояние удовлетворительное, кожные покровы чистые, обычной окраски, склеры субиктеричны. Пульс 70 уд/мин, ритмичный. АД 120/70 мм рт. ст. Тоны сердца ясные, ритмичные, соотношение тонов не изменено. Печень увеличена, выступает из-под края реберной дуги на 2,0 см, селезенка не пальпируется.

При обследовании: эритроциты 4,251012/л, гемоглобин 156 г/л, цветовой показатель 0,93, лейкоциты 4,25109/л, тромбоциты 187,22109/л, СОЭ 3 мм/ч, АсАТ 0,17 ммоль/л, АлАТ 1,30 ммоль/л, билирубин 16,0 мкмоль/л, ЩФ 66 ЕД/л, ГГТП 18,7 ЕД/л, тимоловая проба 1,5 ВСЕ, альбумины - 54%, гаммаглобулины - 19%. ПЦР-ВГС, анти-HCV антитела в сыворотке крови положительные.

При морфологическом исследовании печени: дольковая архитектоника сохранена, зернистая и очаговая гидропическая дистрофия гепатоцитов, умеренный полиморфизм ядер. Немногочисленные фокальные и ступенчатые некрозы гепатоцитов. Слабый фиброз центральных вен. Лимфоидная инфильтрация синусоидов. Портальные тракты незначительно расширены и фиброзированы с началом формирования септ, большинство с густой лимфоидной инфильтрацией синусоидов. Индекс гистологической активности (ИГА, Knodell) 12 баллов, фиброз 2 степени.

Результаты первичных исследований влияния реаферона (интерферон-2b, "Вектор фарм", Россия) и циклоферона (НТФФ "Полисан", Санкт-Петербург) на тиол-дисульфидное соотношение цельной и небелковой фракции крови данного больного свидетельствуют о снижении тиол-дисульфидного соотношения во всех пробах с обоими исследуемыми препаратами. В связи с чем больному проводилась антиоксидантная коррекция, включающая назначение аевита 0,6 г/сут, аскорбиновой кислоты 0,3 г/сут, внутривенных инфузий 400,0 мл 1,5% раствора реамберина в течение 10 дней. При повторном исследовани реакции крови на реаферон, интрон-А и циклоферон, после проведенной антиоксидантной коррекции, выявлялось нарастание тиол-дисульфидного соотношения цельной фракции крови и тиол-дисульфидного соотношения небелковой фракции крови в пробах с реафероном в дозах 1, 2 и 5 млн. ME, в пробах с интроном в дозе 3 и 5 млн. ME и циклофероном в исследуемых дозах по сравнению с контролем. Оптимальными препаратами в соответствии с результатами исследований тиол-дисульфидного соотношения и этиологией заболевания был выбран реаферон в дозе 2 млн. ME (тиол-дисульфидное соотношение цельной крови повысилось с 1,62 до 3,15; по сравнению с контрольной пробой - 2,86 и циклоферон 0,25 г/сут.

Лечение: наряду с парентеральным назначением рибоксина, витаминов группы В, эссенциале больному, дополнительно до назначения противовирусных лекарственных средств проводилась коррекция антиоксидантной недостаточности: назначался аевит 0,6 г/сут, аскорбиновая кислота 0,3 г/сут, внутривенные инфузии 400,0 мл 1,5% раствора реамберина в течение 14 дней. После проведенной терапии состояние больного улучшилось: исчезли проявления астеновегетативного синдрома, нивелировался болевой синдром в правом подреберье.

При повторном обследовании: эритроциты 4,971012/л, гемоглобин 160 г/л, цветовой показатель 0,97, лейкоциты 4,45109/л, СОЭ 13 мм/ч, АсАТ 0,26 ммоль/л, АлАТ 0,42 ммоль/л, билирубин 10 мкмоль/л, ЩФ 91 ЕД/л, ГГТП 23 ЕД/л, тимоловая проба 2,5 ВСЕ, альбумины - 48%, гаммаглобулины - 18%. Спустя 6 мес ПЦР-ВГС сыворотки крови отрицательная.

Пример 2

История болезни 19183.

Больная И., 62 лет.

Диагноз: Хронический вирусный гепатит С, репликативная фаза, с умеренной активностью, фиброзом 2 степени, начальными признаками портальной гипертензии.

Сопутствующий: Хронический гастродуоденит, вне обострения, скользящая грыжа пищеводного отдела диафрагмы. Хронический панкреатит, вне обострения. Дискинезия желчевыводящих путей. Ишемическая болезнь сердца, атеросклеротический кардиосклероз. НК 1 ст. Гипертоническая болезнь 2 стадии.

При поступлении предъявляла жалобы на слабость, снижение работоспособности, болевой синдром в правом подреберье, тошноту, чувство горечи во рту, неустойчивый стул.

Больна в течение 3 лет. Периодически принимала гепатопротекторы, получает противовирусную терапию 6 мес, без эффекта.

Объективно при поступлении: состояние удовлетворительное, кожные покровы чистые, обычной окраски, склеры субиктеричны. Пульс 68 уд/мин, ритмичный. АД 140/90 мм рт. ст. Тоны сердца ясные, ритмичные, соотношение тонов не изменено. Печень увеличена, выступает из-под края реберной дуги на 1,5 см, селезенка не пальпируется. При обследовании: эритроциты 3,74>195>1012/л, гемоглобин 140 г/л, цветовой показатель 1,0, лейкоциты 6,1109/л, СОЭ 12 мм/ч, АсАТ 0,42 ммоль/л, АлАТ 1,18 ммоль/л, билирубин 16,0 мкмоль/л, ЩФ 66 ЕД/л, тимоловая проба 3,5 ВСЕ. ПЦР-ВГС, анти-HCV антитела в сыворотке крови положительные.

По данным ультразвукового исследования органов брюшной полости признаки дискинезии желчевыводящих путей, хронического панкреатита, по данным радиоизотопного исследования печени - диффузные изменения печени, гепатомегалия, накопление радиофарм-препарата в селезенке 35%, начальные признаки портальной гипертензии.

Первичное исследование влияния реаферона и циклоферона на тиол-дисульфидное соотношение цельной крови выявило повышение данного показателя для реаферона в дозе 1 и 2 млн. ME (тиол-дисульфидное соотношение 4,0 и 3,8 соответственно, по сравнению с контролем - 3,0), в то время как показатели тиол-дисульфидного соотношения небелковой фракции крови были снижены при всех тестируемых дозах реаферона по сравнению с контролем. Инкубирование крови с циклофероном показало низкие значения тиол-дисульфидного соотношения при всех тестируемых дозах как в цельной крови, так и в небелковой фракции крови по сравнению с контролем. После проведения антиоксидантной терапии, включающей назначение аевита 0,6 г/сут, аскорбиновой кислоты 0,3 г/сут, внутривенных инфузий 400,0 мл 1,5% раствора реамберина в течение 14 дней, повторное исследование реакции крови больной на эти же препараты свидетельствовало о повышении тиол-дисульфидного соотношения цельной крови в пробах с реафероном в дозах 1, 2 и 3 млн. ME (с 4,0; 3.8; 2.28 до 4,2; 4,67; 4,18 по сравнению с контролем 4,0); в небелковой фракции крови отмечалось повышение тиол-дисульфидного соотношения в пробах с реафероном в тех же дозах. Оптимальной дозой выбрана доза в 2 млн. ME (тиол-дисульфидное соотношение цельной крови нарастало с 3,8 до 4,67).

Лечение: наряду с парентеральным назначением рибоксина, витаминов группы В, эссенциале больной дополнительно проводилась коррекция антиоксидантной недостаточности до назначения противовирусных лекарственных средств: назначался аевит 0,6 г/сут, аскорбиновая кислота 0,3 г/сут, внутривенные инфузии 400,0 мл 1,5% раствора реамберина в течение 10-14 дней. После проведенной терапии состояние больной улучшилось: уменьшились проявления астеновегетативного синдрома, болевого синдрома в правом подреберье.

При повторном обследовании: эритроциты 3,851012/л, гемоглобин 133 г/л, цветовой показатель 0,95, лейкоциты 4,3109/л, СОЭ 8 мм/ч, АсАТ 0,39 ммоль/л, АлАТ 0,78 ммоль/л, билирубин 10 мкмоль/л, ЩФ 66 ЕД/л, ГГТП 18 ЕД/л, тимоловая проба 2,5 ВСЕ. ПЦР-ВГС сыворотки крови отрицательная спустя 6 мес.

Пример 3

История болезни 18888.

Больной П., 19 лет.

Диагноз: Хронический вирусный гепатит С, репликативная фаза, с минимальной активностью, фиброзом 2 степени, начальными признаками портальной гипертензии.

Сопутствующий: Язвенная болезнь 12-перстной кишки, рубцовая деформация 12-перстной кишки, вне обострения. Мочекаменная болезнь. Хронический пиелонефрит, вне обострения.

При поступлении предъявлял жалобы на слабость, снижение работоспособности, болевой синдром в области правого подреберья, снижение веса.

Болен в течение 2 лет. Не лечился.

Объективно при поступлении: состояние удовлетворительное, кожные покровы чистые, обычной окраски, склеры субиктеричны. Пульс 72 уд/мин, ритмичный. АД 120/85 мм рт. ст. Тоны сердца ясные, ритмичные, соотношение тонов не изменено. Печень увеличена, выступает из-под края реберной дуги на 1,5 см, селезенка не пальпируется. При обследовании: эритроциты 3,61012/л, гемоглобин 103 г/л, цветовой показатель 0,81, лейкоциты 3,9109/л, тромбоциты 91,7109/л, СОЭ 4 мм/ч, АсАТ 0,06 ммоль/л, АлАТ 3,2 ммоль/л, билирубин 17,0 мкмоль/л, ГГТП 15,0 ЕД/л, тимоловая проба 3,0 ВСЕ, альбумины - 55%, гаммаглобулины - 16%. ПЦР-ВГС, анти-HCV антитела в сыворотке крови положительные.

При морфологическом исследовании печени: дольковая архитектоника сохранена, зернистая и гидропическая дистрофия гепатоцитов, умеренный полиморфизм ядер. Немногочисленные фокальные и ступенчатые некрозы гепатоцитов. Слабый фиброз центральных вен, умеренная лимфоидная инфильтрация синусоидов. Портальные тракты умеренно расширены и фиброзированы с началом формирования септ. Индекс гистологической активности (ИГА, Knodell) 13 баллов, фиброз 2 степени.

Исходно исследование влияния реаферона и циклоферона показало увеличение тиол-дисульфидного соотношения в пробах с реафероном в дозах 2 и 3 млн. ME в цельной крови (увеличение с 2,61 до 2,75 и 3,1 соответственно по сравнению с контролем) и в небелковой фракции крови (увеличение с 2,74 до 3,0 и 3,4 соответственно по сравнению с контролем), в связи с чем антиоксидантная коррекция больному не проводилась. Оптимальным противовирусным препаратом, учитывая природу этиопатогена (вирус гепатита С), был назначен реаферон в дозе 3 млн. ME.

После проведенной терапии состояние больного улучшилось: исчезли проявления астеновегетативного синдрома, нивелировался болевой синдром в правом подреберье, уменьшились размеры печени.

При обследовании: эритроциты 3,991012/л, гемоглобин 140 г/л, цветовой показатель 1,0, лейкоциты 6,6109/л, СОЭ 5 мм/ч, АсАТ 0,39 ммоль/л, АлАТ 0,40 ммоль/л, билирубин 10 мкмоль/л, ЩФ 66 ЕД/л, ГГТП 23 ЕД/л, тимоловая проба 2,5 ВСЕ, альбумины - 48%, гаммаглобулины - 18%. ПЦР-ВГС сыворотки крови отрицательная.

При повторном морфологическом исследовании печени: дольковая архитектоника сохранена, зернистая и очаговая гидропическая дистрофия гепатоцитов, умеренный полиморфизм ядер. Единичные фокальные некрозы гепатоцитов. Слабый фиброз центральных вен, слабая лимфоидная инфильтрация синусоидов. Портальные тракты умеренно расширены и фиброзированы с началом формирования септ. Индекс гистологической активности (ИГА, Knodell) 8 баллов, фиброз 2 степени.

Биохимические, вирусологические данные, а также влияние лекарственных препаратов на тиол-дисульфидное соотношение цельной (1) и небелковой фракции крови (2) больных ХВГ С, инкубируемых с противовирусными препаратами по используемому способу, представлены в таблицах 1, 3.

Пример 4 - способ-прототип

История болезни 5456.

Больная Н., 52 лет.

Диагноз: Хронический вирусный гепатит С, с умеренной активностью, фиброзом 2 степени, начальными признаками портальной гипертензии.

Сопутствующий: Хронический гастродуоденит, вне обострения.

Диффузный фиброаденоматоз молочных желез.

При поступлении предъявляла жалобы на слабость, повышенную утомляемость, снижение работоспособности, болевой синдром в области правого подреберья.

Больна в течение 5 лет. До 1999 года эпизодически принимала гепатопротекторы. Получает противовирусную терапию на протяжении 4 мес, без эффекта.

Объективно при поступлении: состояние удовлетворительное, кожные покровы чистые, обычной окраски, склеры субиктеричны. Пульс 72 уд/мин, ритмичный. АД 120/80 мм рт.ст. Тоны сердца приглушены, ритмичные, соотношение тонов не изменено. Печень увеличена, выступает из-под края реберной дуги на 2,0 см, селезенка не пальпируется. При обследовании: эритроциты 4,231012/л, гемоглобин 136 г/л, цветовой показатель 0,97, лейкоциты 4,3109/л, тромбоциты 211,5109/л, СОЭ 19 мм/ч, АсАТ 0,33 ммоль/л, АлАТ 1,18 ммоль/л, билирубин 15,0 мкмоль/л, ГГТП 55,9 ЕД/л, тимоловая проба 7,0 ВСЕ, альбумины - 54%, гаммаглобулины - 18%. ПЦР-ВГС, анти-HCV антитела в сыворотке крови положительные.

При морфологическом исследовании печени: дольковая архитектоника сохранена, зернистая, гидропическая, баллонная и очаговая крупнокапельная дистрофия гепатоцитов, выраженный полиморфизм ядер. Немногочисленные фокальные некрозы гепатоцитов. Слабый фиброз центральных вен, умеренная лимфоидная инфильтрация синусоидов. Портальные тракты умеренно расширены и фиброзированы с началом формирования септ, большинство с небольшой лимфо-макрофагальной инфильтрацией. Индекс гистологической активности (ИГА, Knodell) 12 баллов, фиброз 2 степени.

При исследовании влияния реаферона и циклоферона на тиол-дисульфидное соотношение клеточной фракции крови и ее небелковой части было отмечено, что при всех исследуемых дозах реаферона -SH/SS- соотношение клеточной фракции крови повышалось и в пробе с циклофероном в дозе 0,25 г при одновременном снижении тиол-дисульфидного соотношения в небелковой фракции клеток крови для обоих препаратов. Следуя рекомендациям метода-прототипа и ориентируясь только на значение -SH/SS- клеточной фракции, препаратом выбора был сделан реаферон в дозе 2 млн. ME, антиоксидантной коррекции не проводилось.

После проведенного курса противовирусной терапии не было достигнуто вирусологического ответа: в сыворотке крови сохранялась репликативная фаза вируса гепатита С методом ПЦР.

При обследовании: эритроциты 5,41012/л, гемоглобин 139 г/л, цветовой показатель 0,97, лейкоциты 5,4109/л, СОЭ 12 мм/ч, АсАТ 0,33 ммоль/л, АлАТ 0,78 ммоль/л, билирубин 28 мкмоль/л, ЩФ 76 ЕД/л, ГГТП 55,9 ЕД/л, тимоловая проба 11 ВСЕ. ПЦР-ВГС сыворотки крови положительная.

Данные по прототипу представлены в таблицах 2 и 4. В этих случаях мы полностью воспроизвели способ скрининга лекарственных средств, выбранного в качестве прототипа. Дополнительно для подтверждения значимости соотношения -SH и -SS групп в небелковой фракции клеток крови, после определения соотношения -SH и -SS-групп в клеточной фракции больного, мы исследовали это соотношение в небелковом центрифугате гемолизата клеток крови, полученного путем осаждения белков 5% метафосфорной кислотой, добавляя ее в равное количество гемолизата клеток крови.

Заявляемый способ подбора лекарственных препаратов применялся у 36 больных хроническим вирусным гепатитом С. Из них мужчины составляли 71,42%, женщины - 28,58%. Средний возраст больных: 31,58,6 лет.

Группу сравнения составили 15 больных ХВГС, сопоставимых полу и возрасту, выраженности активности и стадии фиброзирования в печени, которым не проводилась антиоксидантная коррекция.

Диагноз верифицировался вирусологически: больным определялись анти-HCV-AB, РНК-ВГС в сыворотке крови методом полимеразной цепной реакции, морфологическое исследование печени по Мангини. В динамике оценивались: биохимические показатели крови, клинический анализ крови, вирусологические маркеры.

По заявляемому способу чувствительность больных ХВГ С к реаферону, интрону-А и циклоферону составила 36, 33 и 10% соответственно, в то время как по способу-прототипу чувствительность к реаферону - 37,5%, а к индуктору интерферона - неовиру - 59,1%. После проведения антиоксидантной коррекции процент чувствительных пациентов с ХВГ С составил для реаферона и интрона-А - 100%, циклоферона - 42,86%, что подтверждается повышением клинической эффективности проводимой противовирусной терапии.

Заявляемый способ улучшает клинические, биохимические и вирусологические показатели больных хроническим вирусным гепатитом С. По заявляемому способу, представленному в таблице 1, после проведения начального курса противовирусной терапии у больных ХГС происходило снижение проявлений цитолитического, мезенхимально-воспалительного синдромов. Приведенные выписки из историй болезни показывают, что с помощью предложенного способа достигается повышение эффективности противовирусной терапии у больных хроническими вирусными гепатитами, по сравнению с прототипом, путем повышения чувствительности способа скрининга лекарственных препаратов для противовирусной терапии, включающего коррекцию существующей недостаточности антиоксидантной системы крови препаратами с атиоксидантным действием. Подбор противовирусных средств с учетом тиол-дисульфидного соотношения небелковой фракции крови (табл. 3.) позволяет повысить чувствительность заявляемого способа по сравнению со способом прототипом на 64% при тестировании препаратов интерферона-2b. С помощью заявляемого способа достигалось повышение степени ответа на противовирусную терапию у больных хроническим вирусным гепатитом, ранее не ответивших на стандартный курс противовирусной терапии. Первичный биохимический и вирусологический ответ составил 27,27%, биохимическая ремиссия достигалась у 54,55% больных. Процент лиц, не ответивших на противовирусную терапию, составил 18,18%, в то время как по способу прототипа 100% (р<0,001). 


ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ



Способ подбора лекарственных препаратов для лечения больных хроническим вирусным гепатитом С, характеризующийся тем, что исследуемые препараты вносят в цельную кровь на 5% трилона Б в дозе, составляющей 1: 5000 от терапевтической, и инкубируют при 37°С в течение часа, после инкубирования определяют тиол-дисульфидные ссоотношения в цельной и небелковой фракциях крови и при значениях тиол-дисульфидного соотношения в небелковой фракции крови ниже показателей контрольной пробы больному назначают антиоксидантную коррекцию аевитом в дозе 0,6 г/сут, аскорбиновой кислотой 0,3 г/сут, внутривенными инфузиями 1,5%-ного раствора реамберина 400,0 мл в течение 10-14 дней, после чего подбор тех же лекарственных препаратов проводят повторно и искомым является препарат, вызывающий увеличение значений тиол-дисульфидного соотношения в цельной фракции крови по сравнению с контрольной пробой.