СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ ПЕЧЕНОЧНОЙ НЕДОСТАТОЧНОСТИ ПРИ ХРОНИЧЕСКИХ ЗАБОЛЕВАНИЯХ ПЕЧЕНИ

СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ ПЕЧЕНОЧНОЙ НЕДОСТАТОЧНОСТИ ПРИ ХРОНИЧЕСКИХ ЗАБОЛЕВАНИЯХ ПЕЧЕНИ


RU (11) 2063760 (13) C1

(51) 6 A61K35/407, A61K33/00 

(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ 
Статус: по данным на 06.08.2007 - прекратил действие 

--------------------------------------------------------------------------------

(14) Дата публикации: 1996.07.20 
(21) Регистрационный номер заявки: 93020961/14 
(22) Дата подачи заявки: 1993.05.27 
(45) Опубликовано: 1996.07.20 
(56) Аналоги изобретения: Авторское свидетельство СССР N 1202508, кл. А 61 M 1/14, 1985. 
(71) Имя заявителя: Акционерное общество "Путь"; Центральный научно-исследовательский институт гастроэнтерологии 
(72) Имя изобретателя: Бруслик В.Г.; Логинов А.С.; Сперанский М.Д.; Лившиц М.И.; Уша Б.В.; Гладских Л.В. 
(73) Имя патентообладателя: Акционерное общество "Путь"; Центральный научно-исследовательский институт гастроэнтерологии 

(54) СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ ПЕЧЕНОЧНОЙ НЕДОСТАТОЧНОСТИ ПРИ ХРОНИЧЕСКИХ ЗАБОЛЕВАНИЯХ ПЕЧЕНИ 

Изобретение относится к медицине, а именно к гепатологии и может быть использовано при лечении печеночной недостаточности при хронических заболеваниях печени, а также может найти применение в хирургических отделениях для предоперационной подготовки больных, инфекционных, реанимационных отделениях и интенсивной терапии. Изобретение состоит в том, что взвесь изолированных гепатоцитов в растворе Хенкса вводят в желудочно-кишечный тракт перорально в дозе 2 мл на 100 г/массы при концентрации 2107 клеток в мл. через 2 дня на 3-й до наступления устойчивой ремиссии. Препарат вводят больному за 30 - 40 мин до приема пищи, при этом до и после введения больной должен выпить по 0,5 стакана минеральной воды. Предлагаемый способ позволяет значительно удешевить и упростить лечение за счет отказа от сложных, громоздких и дорогостоящих манипуляций, известных для лечения печеночной недостаточности. 


ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ



Изобретение относится к медицине, а именно к гепатологии и может быть использовано при лечении печеночной недостаточности при хронических заболеваниях печени, а также может найти применение в хирургических отделениях для предоперационной подготовки больных, инфекционных, реанимационных отделениях и интенсивной терапии.

В настоящее время печеночная недостаточность при хронических заболеваниях печени требует значительных усилий и современных лекарственных средств для своего лечения. Лекарственные средства часто оказываются неэффективными и летальность в данном случае достигает высоких цифр. При поражении печени развивается недостаточность многих функций органа одновременно. Современная терапия не располагает возможностями одновременного замещения нескольких функций печени. Так если проводится детоксикация организма (методом перфузии детоксикационных растворов, диализа или сорбции), то нет возможности одновременно синтезировать витамины или коррегировать белковый спектр плазмы путем введения тех или иных компонентов при внутривенной перфузии растворов.

Решение проблемы путем пересадки донорской печени дает малый эффект из-за чрезвычайно высокой чувствительности пересаженной печени к гипоксии и, как следствие, очень быстрой ее гибели, кроме того, технических трудностей при выполнении этой операции, недостатка донорских органов.

Более перспективны в настоящее время методы, которые сочетают в себе детоксикационный эффект путем пропускания крови, лимфы, плазмы, биологической жидкости через сорбенты, АИП, перитонеальный диализ. Более значительный эффект в детоксикационной функции печени был получен при использовании клеточной взвеси изолированных гепатоцитов посаженных на сорбенты (Маргулис М. С. Еруфимов А.С и др. 1985), а также при клеточном гемодиализе (Бруслик В.Г. и др. 1975) и клеточном перитонеальном диализе (Островерхов Г.Е. Бруслик В. Г. Берелавичус В.Ю. Шиманко и.и. и др. 1979), которые позволили существенно снизить процент неблагоприятных результатов. Однако эти методы имеют и свои недостатки: нужна специальная аппаратура, специально подготовленный персонал, они сложны при выполнении хирургических манипуляций по выделению и катетеризации сосудов и обеспечению экстракорпорального кровотока.

Известен также способ лечения печеночной недостаточности путем введения клеток в подкожную клетчатку клеточный подкожный диализ (Бруслик В.Г. и др. Авт. свид. N 1202593, кл. А 61М 1/14, 1985), который предупреждает осложнения. Этот способ не требует специальной аппаратуры по выполнению, технически прост, но все-таки требует хирургических манипуляций.

Целью изобретения является упрощение способа лечения путем приближения живых, функционирующих печеночных клеток к месту метаболических процессов, т.е. к депо токсических веществ, находящихся в кишке.

Цель достигается тем, что взвесь изолированных гепатоцитов вводится в желудочно-кишечный тракт перорально в дозе 2 мл на 100 г/массы при концентрации 2.107 клеток в мл. через 2 дня на третий до наступления устойчивой ремиссии.

Для осуществления способа были проведены экспериментальные обоснования, которые составили 3 подопытные группы: 1 группа (120 здоровых крыс) поиск оптимальной дозы клеточной взвеси; II группа (160) оценка результатов лечения животных экспериментальным поражением печени; III группа (30) изучение судьбы перорально введенных изолированных клеток.

Так в первой группе здоровым животным через зонд, установленный в желудок, вводили различные дозы клеточной взвеси (0,5; 1,0; 2,0; 3,0; 4,0; 8,0; 10,0; 12,0 мл на 100 г/массы животного), что не вызывало развития каких-либо осложнений и изменений в их состоянии. Животные оставались активны, употребляли пищу. Повторные введения осуществляли через каждые два дня на третий. Допустимая доза на здоровых животных колеблется в больших пределах.

2-ая группа животных с моделью токсического гепатита, которую создавали путем пероральной затравки животных ССl4 на растительном масле, спустя сутки или двое получали перорально клеточную взвесь гепатоцитов, как и в 1-й группе. На животных с моделью заболевания (2-я группа) минимальной дозой клеточной взвеси, при которой получали стабильный терапевтический эффект (снижение процента летальности и продолжительности жизни опытных животных) было 2 мл клеточной взвеси на 100 г массы животного при концентрации 20 млн/мл. Аналогичные результаты мы получили и при использовании других доз 3, 4, 5, 6, 7 мл клеточной взвеси на 100 г массы животного. При анализе материалов мы пришли к выводу, что с увеличением дозы результаты лечения животных не изменялись, а белковая нагрузка увеличилась, что может влиять на течение заболевания и аллергизацию организма. Поэтому доза 2 мл на 100 г массы может быть принять за минимальную терапевтическую. При увеличении дозы свыше 7 мл (8,0, 9, 10, 11, 12, 14 мл) мм отмечали снижение терапевтического эффекта, что и явилось основанием выбора минимальной дозы. Как правило, в контрольной группе при затравке ССl4 гибло 73,3 80% животных и средняя продолжительность их жизни составляла 6,3 8,1 дн. При использовании изолированных гепатоцитов для лечения животных с экспериментальным поражением печени, процент гибели животных снижается до 33,3% а средняя продолжительность жизни их возрастала до 17,1 19,6 дн. Таким образом, было установлено, что используемые изолированные клетки оказывают терапевтический эффект при экспериментальном поражении печени, что позволило сделать вывод о целесообразности перорального введения изолированных гепатоцитов для лечения печеночной недостаточности.

Не менее важным вопросом для нас явилась судьба введенных перорально изолированных гепатоцитов. Было проведено 2 п/группы опытов на здоровых животных и животных с экспериментальным поражением печени. За животными осуществлялся контроль и животные забивались через определенные временные интервалы. Расчетную дозу клеточной массы, окрашивали 0,2% раствором метиленовой сини и через зонд вводили в желудок, затем через час осуществляли забой первой крысы. До 1,5 2 часов клетки находились в желудке, а затем переходили в 12-ти перстную кишку, тощую, подвздошную и т.д. К исходу 2-х суток клетки находились в прямой кишке. У животных с экспериментальным поражением печени движение клеточной массы было более быстрым через 1,5 суток клетки находились уже в прямой кишке. Провести подсчет количества гепатоцитов в желудочно-кишечном тракте-химусе нам не удалось и поэтому сделать вывод о степени разрушения клеток в различных отделах желудочно-кишечного тракта не представляется возможным в настоящее время. Однако проведение подсчета темных и светлых клеток в кишечном химусе и их соотношение свидетельствует о том, что по мере продвижения их по желудочно-кишечному тракту, количество темных клеток увеличивается по отношению к светлым клеткам, а следовательно идет разрушение их и степень разрушения гепатоцитов также увеличивается.

Таким образом, проведенные экспериментальные исследования на животных в третьей группе, позволяют сделать вывод о том, что гепатоциты проходят желудочный барьер и попадают в ниже лежащие отделы кишечной трубки, сроки продвижения колеблются в пределах 1,5 2 суток, по мере продвижения клеточной массы по желудочно-кишечному тракту они разрушаются, но какая масса гепатоцитов доходит до прямой кишки, в настоящее время сказать трудно, но в мазках с прямой кишки, в массе микробной флоры находятся и светлые клетки. Следовательно, какой-то процент их доходит и до прямой кишки.

Таким образом, клетки, проходят желудочно-кишечный тракт, могут проявлять свои детоксикационные свойства, о чем свидетельствует и терапевтический эффект у животных с экспериментальным поражением печени. Кроме того, продолжительность их продвижения по желудочно-кишечному тракту говорит о сроках повторного введения клеточной массы для лечения. Все это явилось экспериментальным обоснованием для использования этого метода в клинической практике.

Способ осуществляется следующим образом. Взвесь гепатоцитов после выделения помещали во флаконы со средой 199, в каждом мл которой находится 20 млн клеток (2.107), что составляет 20 25 мл клеточного осадка во флаконе. Рассчитывают исходную дозу для каждого больного и после отстаивания (центрифугирования) сливают надосадочную жидкость и во флакон с клетками заливают стерильный раствор Хенкса и осадок хорошо размешивают. Клеточная взвесь отстаивается и вновь сливают надосадочную жидкость. Такую манипуляцию повторяют 3 4 раза с тем, чтобы удалить разрушенные клетки, остатки клеток, энтеробактерии, находящиеся в клеточной взвеси. Клеточный осадок 20 25 мл разводят раствором Хенкса до 100 мл объема и рекомендуют выпить больному за 30 40 мин. до приема пищи, при этом до и после приема клеточной взвеси больной должен выпить по 0,5 стакана минеральной воды. Такую манипуляцию повторяют через каждые 2 дня на 3-й день до получения устойчивой ремиссии.

Клинический пример. Больная У.З.А. 52 лет. поступила в ЦНИИ Гастроэнтерологии 6.05.1988 года (и/б 2832) с диагнозом: Цирроз печени вирусной этиологии, активный с умеренно выраженным холестазом. Язвенная болезнь с локализацией процесса в луковице 12-перстной кишки в фазе ремиссии. Хронический гастрит.

При поступлении больная жаловалась на боли, в эпигастральной области и правом подреберье, слабость, кожный зуд, плохой сон, носовые кровотечения, похудание. Около 5 лет назад стала отмечать покраснение ладоней, а через некоторое время и появление телеангиэктазий. При обследовании был диагностирован хронический активный гепатит. По этому поводу лечилась в ЦНИИГ в 1986 г.

Объективно при осмотре правильного телесложения, удовлетворительного питания, на коже верхнего пояса расширенная сосудистая сеть, сосудистые звездочки, печеночные ладони. В легких и сердце без особенностей. Язык слегка обложен, живот несколько вздут, мягкий, болезненный в правом подреберье. Печень по краю реберной дуги, уплотнена. Венозные коллатерали по бокам живота. Гастродуоденоскопия. Хронический гастрит. УЗИ. Диффузное поражение печени. Спинтиграфия печени с коллоидным раствором Тс-99м признаки диффузного заболевания печени. Пункция печени. Заключение. По косвенным признакам преимущественно микромодулярный цирроз печени, активный на фоне крупнокапельной жировой дистрофии.

При биохимических исследованиях отмечается билирубинемия до 27,5 мкмоль/л, где непрямая фракция билирубина составляет 21,5 мкмоль/л. Также отмечается повышенная щелочная фосфотаза до 182 мкмоль/л, снижено процентное соотношение альбумина. Больной проводили лечение: эссенциале, метацин, альмагель, смесь Бурже, витамины группы В, родедорм, липоевая кислота, auk -фосфат, гемодез, гидролизат казеина. Однако состояние больной оставалось без существенных изменений и поэтому решено больной использовать перорально взвесь изолированных гепатоцитов. Определяли дозу для больной из раствора ее массы тела (62 кг). На каждый кг массы необходимо 20 мл клеточной взвеси на среде 199 при концентрации 2107 в 1 мл.

Таким образом, больной необходимо 1240 мл клеточной взвеси, что составляет 2,5 флакона со средой 199, но в данном конкретном случае было взято 2 флакона. Отстаивали и сливали надосадочную жидкость и во флаконы с клетками заливали стерильный раствор Хенкса и осадок во флаконах хорошо размешивали. Клеточную взвесь отстаивали (центрифугировали) и вновь сливали надосадочную жидкость. Такую манипуляцию повторяли 3 4 раза с тем, чтобы удалить разрушенные клетки, остатки клеток, энтеробактерии, находящиеся в клеточной взвеси. Клеточный осадок с двух флаконов сливали (25 + 25 мл) и разводили раствором Хенкса до 100 мл объема и рекомендовали выпить больной за 30 40 мин до приема пищи. При этом больная до и после приема клеточной взвеси выпивала по 0,5 стакана минеральной воды. Такую манипуляцию повторяли через каждые 2 дня на 3-й день 10 раз. Состояние больной стабилизировалось, исчезли боли в правом подреберье, больная стала более активной, нормализовался сон, исчез кожный зуд, носовые кровотечения. По органам без изменений. Язык влажный, живот мягкий и безболезненный в правом подреберье, печень у края реберной дуги. При биохимическом контроле отмечается нормализация концентрации общего билирубина и его непрямой фракции, снижение показателей щелочной фосфатазы и повышение процентного содержания альбумина. Таким образом у больной наступала устойчивая ремиссия заболевания.

В настоящее время в ЦНИИ Гастроэнтерологии нами использован этот метод у 23 больных с различными заболеваниями печени (289 раз):

а) у 5 больных хроническим гепатитом перорально применяли изолированные гепатоциты 73 раза;

б) у 8 больных первичным билиарным циррозом (одна больная повторно) применяли перорально изолированные гепатоциты 133 раза;

в) у больных с алиментарным циррозом применяли перорально изолированные гепатоциты 31 раз;

г) у 6 больных с постинфекционным циррозом использовали перорально изолированные гепатоциты 52 раза.

По сравнению с способом-прототипом, предлагаемый способ перорального использования изолированных гепатоцитов позволяет: значительно удешевить и упростить способ лечения за счет отказа от сложных, громоздких и дорогостоящих аппаратов.

Способ перорального использования изолированных гепатоцитов при лечении печеночной недостаточности при хронических заболеваниях печени может войти в арсенал лечебных средств как в стационаре, так и в поликлинических условиях. 


ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ



1. Способ лечения печеночной недостаточности при хронических заболеваниях печени, включающий введение взвеси изолированных функционально активных гепатоцитов, отличающийся тем, что взвесь гепатоцитов в растворе Хенкса вводят перорально из расчета 2 мл на 100 г массы тела больного при концентрации 2107 клеток в 1 мл за 3О-40 мин до приема пищи через каждые 2 дня на 3-й до наступления устойчивой ремиссии, при необходимости цикл повторяется через 5-6 месяцев.

2. Способ по п.1, отличающийся тем, что до и после приема взвеси гепатоцитов вводят 100 мл минеральной воды.