СПОСОБ ЭКСПРЕСС-ДИАГНОСТИКИ ЭНДОГЕННОЙ ИНТОКСИКАЦИИ

СПОСОБ ЭКСПРЕСС-ДИАГНОСТИКИ ЭНДОГЕННОЙ ИНТОКСИКАЦИИ


RU (11) 2280865 (13) C1

(51) МПК
G01N 33/48 (2006.01) 

(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ 
Статус: по данным на 09.07.2007 - может прекратить свое действие 

--------------------------------------------------------------------------------

Документ: В формате PDF 
(14) Дата публикации: 2006.07.27 
(21) Регистрационный номер заявки: 2004138314/15 
(22) Дата подачи заявки: 2004.12.27 
(24) Дата начала отсчета срока действия патента: 2004.12.27 
(45) Опубликовано: 2006.07.27 
(56) Аналоги изобретения: ПАФОМОВ Г.А. Экспресс-метод определения токсических свойств крови и лимфы с помощью парамеций при экзо- и эндотоксикозах. Советская медицина. 1980. №1, с.42-44. RU 2000126956 А, 20.09.2002. RU 2176790 C1, 10.12.2001. RU 2148254 C1, 27.04.2000. RU 2147124 C1, 27.03.2000. ШАТОХИНА С.Н. Диагностическое значение кристаллических структур биологических жидкостей в клинике внутренних болезней: Автореф. диссер. уч.ст.к-.м.н. М. 1995, с.9-35. 
(72) Имя изобретателя: Савина Лидия Васильевна (RU); Яковенко Мария Сергеевна (RU); Мингалева Евгения Анатольевна (RU); Клименко Елена Федоровна (RU); Кравцова Наталья Анатольевна (RU); Конько Нелля Петровна (RU) 
(73) Имя патентообладателя: Савина Лидия Васильевна (RU); Яковенко Мария Сергеевна (RU) 
(98) Адрес для переписки: 350063, г.Краснодар, ул. Седина, 4, КГМА, патентный отдел, Т.А. Дорониной 

(54) СПОСОБ ЭКСПРЕСС-ДИАГНОСТИКИ ЭНДОГЕННОЙ ИНТОКСИКАЦИИ
Изобретение относится к различным разделам медицины: терапии, хирургии, травматологии, гинекологии, стоматологии и т.д. и может быть использовано для экспресс-диагностики эндогенной интоксикации. Сущность способа заключается в том, что сыворотку крови в каплях наносят на предметные стекла, каждую каплю накрывают покровными стеклами и сушат при t=+20-24°C на протяжении 1-1,5 часа, выдерживают на открытом воздухе 1,5-2 часа, затем микроскопируют в проходящем свете, в поляризованном и в поляризованном свете с кварцевым компенсатором. При изучении препарата в проходящем свете и наличии в нем кристаллов: (и/или) - скелетных, ступенчатых, узловатых фибрилл, прямоугольно разветвленных агрегатов диагностируют гиперглобулинемию, при исследовании препарата в поляризованном свете и наличии в нем оптически активных кристаллов - радиально-лучистых сферолитов определяют гиперхолестеринемию, игловидных - гиперурикемию, ветвящихся дендритов - гиперкреатининемию; при исследовании препарата в поляризованном свете с кварцевым компенсатором и наличии в нем кристаллов пестрой окраски: (и/или) - пластин, веерообразных пластин диагностируют гиперпутресцинемию; овоидных зерен гиперфенилаланинемию; (и/или) - друз, многогранников и призм - гипергистидинемию; цепочечно-ориентированных агрегаций из зерен - гипертриптофанемию; сферолитов с отростками - гиперизолейцинемию; агрегатов из зерен - гипербилирубинемию. Способ информативен, позволяет визуально определить селективные маркеры эндотоксикоза, прост в исполнении и может быть использован для широкого применения в различных областях медицины. 20 ил.




ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ


Предлагаемое изобретение относится к медицине: хирургии, гинекологии, реаниматологии, эндокринологии, травматологии, стоматологии; биологии, биофизике и может быть использовано для экспресс-диагностики ситуационной эндогенной токсиемии.

Эндотоксикоз - сложный многофакторный аутокаталитический процесс, приобретающий с течением времени универсальный характер, зависящий от запустивших его механизмов. Повреждающими агентами становятся несбалансированно действующие биологически активные вещества, которые приобретают свойства эндогенных токсических субстанций (ЭТС).

Слагаемые синдрома: токсиемия, концентрация циркулирующих ЭТС, как поступивших из первичного очага, так и возникших вторично в результате повреждения тканей - как проявление фактора агрессии (Ерюхин И.А., Шамков Б.В. Эндотоксикоз в хирургической клинике. С.-П. - 1995. Леонтьева Н.В., Белоцерковский М.В. Синдром эндогенной интоксикации. - С.П. - 1998. - СПбГМУ).

Эндогенная интоксикация организма сопутствует многим заболеваниям и нередко служит основной причиной смертельных исходов. Наряду со специфическими чертами, присущими той или иной нозологической форме заболевания, протекающие с синдромом эндотоксемии, имеют много общих биохимических и патофизиологических механизмов. Прогноз заболевания, а также степень нарушения гомеостатических констант организма у отдельных индивидуумов во многом зависят от вида метаболического дистресса (Беляков Н.А., Малахова М.Я. Критерии и диагностика эндогенной интоксикации//В сб. Эндогенн. интоксикация. С.Петерб., 1994, с.60-62; Клин. мед. - 1981. - №10 (38).

Выраженная эндогенная интоксикация, как правило, сопровождает хронические заболевания печени, почек, поджелудочной железы, ожоговый токсикоз, перитонит, острую кишечную непроходимость, сепсис, обширные травмы, гинекологические болезни и т.д.

Для большинства этих состояний характерны: гипербилирубинемия, гиперглобулинемия, нарушение синтеза белков, аминокислот за счет нарушения синтетической, дезинтоксикационной функции печени; при накоплении продуктов азотистого метаболизма (креатинина, мочевой кислоты), происходящем при блокаде функции почек; при перитоните, ожоговой болезни, гнилостных процессах преобладают полиамины (биогенные амины - кадаверин, путресцин), являющиеся продуктами биодеградации белков (Дорохин К.М., Спас В.В. Патофизиологические аспекты синдрома эндогенной интоксикации//Анестезиология и рениматология. - 1994. - №1. - С. 56-60; Дин Р. Процессы распада в клетке. М., 1981; Лопухин Ю.М., Молоденков М.Н. Гемосорбция. М., 1985; Кишкун А.А., Кудинова А.С., Офитова А.Д., Мишурина Р.Б. Значение средних молекул в оценке уровня эндогенной интоксикации// Военно-медицинский журнал. - 1996. - №2, - с.41-44).

Увеличение фракции -1-глобулинов наблюдается при острых, подострых, обострении хронических воспалительных процессов; поражении печени, всех процессов тканевого распада или клеточной пролиферации.

Увеличение фракции -2-глобулинов наблюдается при всех видах острых воспалительных процессов, особенно с выраженным экссудативным и гнойным характером (пневмония, эмпиема плевры, другие виды гнойных процессов), аутоиммунных заболеваниях; злокачественных опухолях; в стадии восстановления после термических ожогов; нефротическом синдроме.

Рост фракций -глобулинов выявляют при заболеваниях печени, первичных и вторичных гиперлипопротеидемиях, гипотиреозе, сахарном диабете, нефротическом синдроме.

Повышение содержания -глобулинов, содержащих иммуноглобулины G, A, M, D, Е, отмечается при реакции системы иммунитета, когда происходит выработка антител и аутоантигенов: при вирусных и бактериальных инфекциях, воспалении, деструкции тканей, ожогах; при гепатитах и циррозе печени; гемобластозах, кандидомикозах; СКВ (Назаренко Г.И., Кишкун А.А. Клиническая оценка результатов лабораторных исследований. M., 2000).

Мочевая кислота (МК) - основной продукт катаболизма пуриновых нуклеозидов, входящих в состав нуклеиновых кислот, макроэргических соединений (АТФ, АДФ, АМФ), некоторых витаминов (Тиц Н.У. Клиническая оценка лабораторных тестов. M., 1986). Гиперурикемия развивается во всех состояниях, при которых усилен обмен или деградация нуклеопротеидов (тяжелые инфекции, распад тканей, токсикозы беременности, хронические заболевания почек).

Путресцин - биологический амин, относящийся к классу полиаминов, накапливается в биологических жидкостях и тканях при гнилостных процессах, например, при гангрене, абсцессах легких, гнойном перитоните, является токсическим компонентом полостных сред (Лабораторная диагностика эндогенной интоксикации. В кн.: Медицинские лабораторные технологии. С.Петербург, 2002, - c.572).

Креатинин - конечный продукт азотистого обмена. Повышение уровня его содержания наблюдается при нарушении азотовыделительной функции почек, при уремии, при печеночной недостаточности.

Информативными маркерами эндогенной интоксикации считают наличие в сыворотке крови таких аминокислот, как триптофан, фенилаланин, гистидин, изолейцин (Кузин Н.И., Костюченок Б.М. Раны и раневая инфекция. M., 1982; Дьяченко П.К. Вопросы патогенеза и лечения эндотоксического шока //Вестн. хирургии. - 1980. - №11, - с.3-9; Дорохин К.М., Спас В.В. Патофизиологические аспекты синдрома эндогенной интоксикации// Анестезиология и реаниматология. - 1994. - №1, - с.56-60; Малахов М.Я. Лабораторная диагностика эндогенной интоксикации. В кн.: Справочник. Медицинские лабораторные технологии. С.Петербург. - 2002, - с.571-599).

Для диагностики эндогенной интоксикации в настоящее время используются различные способы: биохимические, биологического тестирования, определение токсичности плазмы сыворотки крови по парамециевому тесту, определение летальности в группе РЭС-блокированных мышей, определение токсического действия на изолированной петле кишечника, определение молекул средней массы (МСМ), Кишкун А.А. с соавт. Значение средних молекул в оценке уровня эндогенной интоксикации // Военно-мед. журнал. - 1990. - №2, - с.41-44. Оболенский С.В., Малахова М.Л. Лабораторная диагностика интоксикации в практике интенсивной терапии. С.Петерб., 1999).

Аналог. Способ определения МСМ. Определение фракции молекул средней массы в сыворотке крови осаждением белков трихлоруксусной кислотой (ТХУ) (Малахова М.Я., Соломенников А.В., Беляков Н.А., Владыка А.С. // Лабораторное дело. - 1987. - №3, - с.224-226).

В основе способа лежит определение оптимальной концентрации ТХУ, которая бы осаждала белки, начиная с молекулярной массы 10 кД и выше, выяснение оптимальной длины волны, при которой целесообразно проводить исследование; определение возможности исследований при замораживании сыворотки крови или хранении ее на холоде.

Экспресс-метод определения МСМ заключается в том, что в 1 мл сыворотки крови (СК) осаждали белок добавлением 0,5 мл 10 или 15% раствора ТХУ и после центрифугирования проводили спектрофотометрию супернатанта после разведения его дистиллированной водой в отношении 1:9 в диапазоне длин волн от 236 до 286 нм; на основании полученных значений экстинкции строили спектрограммы. Кроме того, в супернатанте определяли количество белка по методу Лоури, исходя из того, что около 85% веществ, входящих в пул МСМ, имеют пептидную природу.

Недостатки способа:

- нарушение нативности СК при добавлении в нее 10 или 15% раствора ТХУ;

- использование прибора спектрометра, что удорожает себестоимость способа;

- затруднение в дифференцировании МСМ, если в СК, например, имеются креатинин, мочевая кислота, путресцин, аминокислоты.

Прототип. Биологический экспресс определения токсических свойств СК с помощью парамеций при эндотоксикозе (Пафомов Г.А., Бурдыга Ф.А., Ширинова М.Н. Экспресс-метод определения токсических свойств крови и лимфы с помощью парамеций при экзо- и эндотоксикозах // Советская медицина. - 1980. - №1, - с.42-44).

Сущность способа заключается в изменении сроков гибели парамеций - простейших инфузорий под действием токсического фактора, находящегося в СК.

Для анализа используют чистую линию Paramecium caudatum, которую выращивают в стеклянных сосудах в настое сена, стебля или корок банана в кипяченой воде.

Способ требует оборудования:

- микроскопа, предметных стекол, секундомера, меланжера, стеклянной палочки.

Ход исследования:

- С помощью меланжера для эритроцитов на стекло наносят 0,01 мл СК и равный объем взвеси, содержащей от 8 до 10 парамеций, что достигается соответствующим разведением питательной среды, в которой парамеции культивируются.

- Обе капли тщательно смешивают, включают секундомер.

- Определяют время гибели половины количества парамеций (LD50) и гибели всех клеток (LD100).

- Образец исследуют 3 раза и используют средние данные.

В качестве биологического контроля определяли время выживаемости парамеций в сыворотке здоровых доноров, которое в среднем оказалось равным LD50 (15-16 мин) и LD100 (24-25 мин).

Недостатки способа

1. Постоянное выращивание парамеций.

2. Отсутствие информации о дифференцированных показателях токсичности сыворотки крови (отдельных ее компонентов).

3. Отсутствие возможности селективного применения дезинтоксикационной терапии.

Задачи:

1. Расширение возможности диагностики эндогенной интоксикации.

2. Повысить информативность за счет выделения селективных маркеров эндотоксикоза в СК.

3. Повысить точность и качество диагностики эндогенного токсикоза.

4. Повысить точность и адекватность оказания терапевтической помощи в процессе лечения.

Сущность способа заключается в том, что для экспресс-диагностики эндогенной интоксикации сыворотку крови в каплях, объемом 0,01-0,02 мл, наносят на предметное стекло, накрывают покровным стеклом, сушат при t=+20-24°C на протяжении 1-1,5 часов, выдерживают на открытом воздухе 1,5-2 часа, затем микроскопируют в проходящем свете, поляризованном и в поляризованном с кварцевым компенсатором, при изучении препарата в проходящем свете и при наличии в нем кристаллов: (и/или) - скелетных, ступенчатых, узловатых фибрилл, прямоугольно-разветвленных агрегатов диагностируют гиперглобулинемию, при исследовании препарата в поляризованном свете и наличии в нем оптически активных кристаллов - радиально-лучевых сферолитов определяют гиперхолестеринемию, игловидных - гиперурикемию, ветвящихся дендритов - гиперкреатининемию, при изучении препарата в поляризованном свете с кварцевым компенсатором и наличии в нем кристаллов пестрой окраски: (и/или) - пластин, веерообразных пластин диагностируют гиперпутресцинемию; овоидных зерен - гиперфенилаланинемию; (и/или) - друз, многогранников и призм - гипергистидинемию; цепочечно-ориентированных агрегаций из зерен - гипертриптофанемию; сферолитов с отростками - гиперизолейцинемию; агрегатов из зерен - гипербилирубинемию.

Способ осуществляют следующим образом:

1. Производят забор крови из вены - 3,0 мл, центрифугируют для получения сыворотки.

2. Сыворотку в виде капель (5-6) объемом 0,01-0,02 мл каждая наносят на предметное стекло, накрывают покровным стеклом.

3. Высушивают в термостате при t=+20-24°С на протяжении 1-1,5 часов.

4. Выдерживают на открытом воздухе 1,5-2 часа.

5. Под микроскопом в проходящем, поляризованном и в поляризованном с кварцевым компенсатором свете изучают картину кристаллизации и при наличии в препарате в проходящем свете кристаллов: (и/или) - скелетных, ступенчатых, узловатых фибрилл, прямоугольно разветвленных агрегатов диагностируют гиперглобулинемию, при наличии в препарате в поляризованном свете оптически активных радиально-лучевых сферолитов определяют гиперхолестеринемию, игловидных - гиперурикемию, ветвящихся дендритов - гиперкреатининемию, при наличии в препарате в поляризованном свете с кварцевым компенсатором кристаллов пестрой окраски: (и/или) - пластин, веерообразных пластин диагностируют гиперпутресцинемию; овоидных зерен - гиперфенилаланинемию; (и/или) - друз, многогранников и призм - гипергистидинемию; цепочечно-ориентированных агрегаций из зерен - гипертриптофанемию; сферолитов с отростками - гиперизолейцинемию; агрегатов из зерен - гипербилирубинемию.

При определении кристаллических микротипов пользовались терминологией, принятой в минералогии, в определении жидкокристаллических микроформ (А.Н.Федоров. Курс минералогии и кристаллографии. СПБ, 1901; Джейл Ф.Х. Полимерные монокристаллы. Л., 1968).

Нами предварительно были приготовлены стандартные эталонные модели, содержавшие СК здорового человека, обогащенную различными метаболитами, появляющимися при эндогенной интоксикации. Для этой цели СК помещали в емкости из кварцевой посуды и обогащали метаболитами с заранее известной концентрацией: глобулинами ( 1-, 2-, -, -фракции), креатинином, мочевой кислотой, путресцином, билирубином, аминокислотами (фенилаланин, гистидин, триптофан, изолейцин).

На фиг.1-15 приведены стандартные эталоны кристаллограмм (СЭК), разработанных нами моделей.

Гиперглобулинемия

СЭК 1-глобулиновой фракции приведен на фиг.1 присутствуют скелетные кристаллы, концентрация фракции - 5,3%; СЭК модели 2-глобулиновой фракции, фиг.2 видны ступенчатые кристаллы; концентрация фракции - 10,9%; СЭК модели -глобулиновой фракции (концентрация 16,8%) приведен на фиг.3, присутствуют узловатые фибриллы; СЭК модели -глобулиновой фракции приведен на фиг.4, концентрация 21,3% видны прямоугольно разветвленные агрегаты.

Гиперхолестеринемия СЭК приведен на фиг.5, концентрация ХС составляет 9,9 ммоль/л, присутствует оптически активный кристалл - радиально-лучевой сферолит.

Гиперурикемия. СЭК приведен на фиг.6, присутствует игловидный кристалл мочевой кислоты (МК), концентрация которой составила 2,3 ммоль/л.

Гиперкреатининемия. СЭК представлен на фиг.7, присутствуют ветвящиеся оптически активные дендриты, концентрация креатинина - 3,2 ммоль/л.

Гиперпутресцинемия. СЭК приведен на фиг.8, 9; концентрация путресцина соответственно составила 30 и 50 нг/мл, присутствуют пестрые веерообразные пластины. Исследования проведены в поляризованном свете с кварцевым компенсатором (КК).

Гипераминоацидемия. СЭК СК, обогащенной фенилаланином, приведен на фиг.10, концентрация - 39 мг/л, присутствуют овоидные зерна, исследования выполнены в поляризованном свете с КК. СЭК СК, обогащенной гистидином, приведен на фиг.11 и 12, концентрация соответственно составила 30 и 45 мг/л, присутствуют пестрые многогранники, призмы, друзы. СЭК СК, обогащенной триптофаном, приведен на фиг.13, концентрация - 18 мг/л, видны пестрые цепочечно-ориентированные агрегации из зерен.

СЭК СК, обогащенной изолейцином, приведен на фиг.14, концентрация - 50 мг/л, присутствует сферолит с отростками.

Гипербилирубинемия. СЭК СК, обогащенной билирубином, показан на фиг.15, концентрация 45 мкмоль/л, видны пестрые агрегаты из зерен.

Способ апробирован на 312 больных с синдромом эндогенной интоксикации.

Примеры

Пример 1, фиг.16 а-з. Б-й И., история болезни (ИБ) №192. Диагноз (Ds): острый панкреатит, панкреонекроз, разлитой гнойный перитонит. На фиг.16 а-з приведены кристаллограмы СК б-го И. Присутствуют прямоугольно разветвленные агрегаты (а), узловатые фибриллы (б), сферолиты с отростками (в), игловидные кристаллы (г), ветвящиеся дендриты (д), пластины и веерообразные пластины (ж), многогранники и призмы (з).

Технология: из вены б-го И. осуществлен забор крови в количестве 3 мл, которую отцентрифугировали для получения сыворотки. Капли СК (5) объемом 0,01 мл каждая нанесли на предметные стекла и накрыли каждую покровным стеклом. Препарат высушили в термостате при t=+20°C на протяжении 1 часа, выдержали на открытом воздухе 1,5 часа и изучили под микроскопом в проходящем, поляризованном свете и в поляризованном свете с КК. Найдены кристаллы, представленные прямоугольно разветвленными агрегатами, узловатыми фибриллами, сферолитами с отростками, игловидными кристаллами, ветвящимися дендритами, пластинами, многогранниками и призмами.

Одновременно в СК определяли содержание глобулиновых белковых фракций, изолейцина, МК, креатинина, путресцина, гистидина, которые оказались повышенными и соответственно составили: -фракция - 24,3% (норма - 17,4%), -фракция - 17,1% (норма - 13,3%), изолейцин - 54 мг/л (норма 16 мг/л), МК - 2,9 ммоль/л (норма 0,18 ммоль/л), креатинин - 2,8 ммоль/л (норма 0,044 ммоль/л), путресцин - 38 нг/мл (норма 20 нг/мл), гистидин - 39,0 мг/л (норма 12 мг/л). Предполагаемая эндогенная интоксикация глобулинами, изолейцином, креатинином, путресцином, гистидином, мочевой кислотой подтвердилась.

Пример 2, фиг.17 а-д. Б-ная К., ИБ №238. Ds.: Острый эндометрит, двусторонний аднексит, параметрит, сепсис. На фиг.17 а-д приведены КГ сыворотки крови, обнаружены прямоугольно разветвленные агрегаты (а), скелетные и ступенчатые кристаллы (а, б), радиально-лучевые сферолиты (в), овоидные зерна (г), пестрые цепочечно-ориентированные агрегации из зерен (д).

Технология: из вены б-ной К. взято 3 мл крови, которую отцентрифугировали. Капли СК (6) объемом 0,02 мл каждая, нанесли на предметные стекла и накрыли покровными, высушили в термостате при t=+22°С на протяжении 1,5 часа, выдержали на открытом воздухе 1,5 часа и изучили под микроскопом в проходящем, поляризованном и поляризованном с КК свете. Найдены кристаллы: прямоугольно разветвленные агрегаты, скелетные и ступенчатые радиально-лучевые сферолиты, овоидные зерна, пестрые цепочечно-ориентированные агрегации из зерен. Одновременно в СК определили содержание глобулиновых белковых фракций, холестерина, фенилаланина, триптофана, которые оказались повышенными и соответственно составили: -фракция - 22,8% (норма 17,4%), 1-фракция - 5,5% (норма 3,5%), 2-фракция - 11,3% (норма 7,8%), холестерин - 11,8 ммоль/л (норма 3,8 ммоль/л), фенилаланин - 25 мг/л (норма 18 мг/л), триптофан 16 мг/л (норма 11 мг/л). Эндогенная интоксикация глобулинами, холестерином, фенилаланином, триптофаном подтвердилась.

Пример 3, фиг.18 а-ж. Б-ной Н., ИБ №2113, Ds: Абсцесс правого легкого. Эмпиема плевры. Эндотоксический шок. На фиг.18 а-ж представлены КГ СК: узловатые фибриллы (а), прямоугольно разветвленные агрегаты и ступенчатые кристаллы (б), игловидные (в), радиально-лучевые сферолиты (в) с отростками (г), пластины (д), ветвящиеся дендриты (ж).

Технология: из вены б-ного Н. взято 3 мл крови и отцентрифугировано. Капли СК (5) каждая объемом 0,02 мл нанесли на предметные стекла, каждую накрыли покровными стеклами. Препарат высушили в термостате при t=+23°С на протяжении 1 часа, выдержали на открытом воздухе 2 часа и микроскопировали в проходящем, поляризованном свете и в поляризованном с КК. Найдены кристаллы: узловатые фибриллы, прямоугольно разветвленные агрегаты, ступенчатые, игловидные, радиально-лучевые сферолиты, сферолиты с отростками, пластины, ветвящиеся дендриты. Одномоментно в СК определили повышение содержания: -глобулинов - 22,9% (норма 13,3%), -глобулинов - 25% (норма 17,4%), 2-глобулинов - 13% (норма 7,8%), МК - 4,3 ммоль/л (норма 0,18 ммоль/л), ХС - 13,4 ммоль/л (норма 3,8 ммоль/л), изолейцина - 30 мг/л (норма 16 мг/л), путресцина - 48 нг/мл (норма 20 нг/мл), креатинина - 2,9 ммоль/л (норма 0,044 ммоль/л). Эндогенная интоксикация глобулинами, МК, ХС, изолейцином, путресцином, креатинином подтвердилась.

Пример 4, фиг.19 а-к. Б-ной Ф., ИБ №21, Ds: цирроз - рак печени, асцит, печеночная недостаточность, механическая желтуха. На фиг.19 а-к представлены КГ СК: скелетные кристаллы (а), ступенчатые (б), узловатые фибриллы (в), прямоугольно разветвленные агрегаты (г), пестрые агрегаты из зерен (д), друзы (ж), радиально-лучевые сферолиты (з), овоидные зерна (и), пестрые цепочечно-ориентированные агрегации из зерен (к).

Технология: из вены б-го Ф. взято 3,0 мл крови, которая отцентрифугирована. Капли СК (6) каждая объемом 0,02 мл нанесли на предметные стекла, каждую накрыли покровными стеклами, высушили в термостате при t=+24°C на протяжении 1,5 часов и выдержали на открытом воздухе 1,5 часа, микроскопировали в проходящем, поляризованном свете и в поляризованном свете с КК. Найдены кристаллы: скелетные, ступенчатые, узловатые фибриллы, прямоугольно разветвленные агрегаты, агрегаты из пестрых зерен, друзы, радиально-лучевые сферолиты, овоидные зерна, пестрые цепочечно-ориентированные агрегации из зерен. Одновременно в СК определили повышение содержания: глобулинов: 1-фракции - 8,1% (норма 3,5%), 2-фракции - 17,5% (норма 7,8%), -фракции - 20,9% (норма 13,3%), -фракции - 29% (норма 17,4%), билирубина - 34 мкмоль/л (норма 8,2 мкмоль/л), гистидина - 49 мг/л (норма 12 мг/л), холестерина - 11,3 ммоль/л (норма 3,8 ммоль/л), фенилаланина - 36 мг/л (норма 18 мг/л), триптофана - 23 мг/л (норма 11 мг/л). Эндогенная интоксикация глобулинами, билирубином, холестерином, фенилаланином, триптофаном подтвердилась.

Пример 5, фиг.20 а-л. Б-ной Ш., ИБ №1116, Ds: травматический шок, эндотоксикоз, синдром сдавления, турникетный шок, острая почечно-печеночная недостаточность. На фиг.20 а-л представлены КГ сыворотки: скелетные кристаллы (а), ступенчатые (б), узловатые фибриллы (в), ветвящиеся дендриты (г), игловидные кристаллы (д), пестрые агрегаты из зерен (е), пестрые многогранники и призмы (ж), пестрые друзы (з), овоидные зерна (и), цепочечно-ориентированные агрегации из зерен (к), сферолиты с отростками (л).

Технология: из вены б-ного Ш. взято 3,0 мл крови, которая отцентрифугирована. Капли СК (6) каждая объемом 0,01 мл нанесли на предметные стекла. Каждую накрыли покровными стеклами, высушили в термостате при t=+23°C на протяжении 1,5 часа и выдержали на открытом воздухе 2 часа, микроскопировали в проходящем, поляризованном свете и в поляризованном свете с кварцевым компенсатором. Найдены кристаллы: при исследовании в проходящем свете - скелетные, ступенчатые, узловатые фибриллы; в поляризованном свете - ветвящиеся дендриты, игловидные; в поляризованном свете с КК - пестрые кристаллы - агрегаты из зерен, многогранники и призмы, друзы, овоидные зерна, цепочечно-ориентированные агрегации из зерен, сферолиты с отростками.

Одномоментно определили в СК повышение содержания: 1-глобулинов - 8,2% (норма 3,5%), 2-глобулинов - 18,1% (норма 7,8%), -глобулинов - 24,5% (норма 13,3%), мочевой кислоты - 3,8 ммоль/л (норма 0,18 ммоль/л), креатинина - 2,9 ммоль/л (норма 0,044 ммоль/л), гистидина - 46 мг/л (норма 12 мг/л), триптофана - 36 мг/л (норма 11 мг/л), фенилаланина - 36 мг/л (норма 18 мг/л), билирубина - 38 мкмоль/л (норма 8,2 мкмоль/л), изолейцина - 29 мг/л (норма 16 мг/л). Эндогенная интоксикация глобулинами, МК, ХС, билирубином, креатинином, гистидином, триптофаном, фенилаланином, изолейцином подтвердилась.

Техническое преимущество способа заключается в том, что расширяется арсенал диагностических тестов, являющихся маркерами эндогенной интоксикации. Предлагаемый способ создает возможность снизить себестоимость биохимических исследований, является экономически дешевым. В течение суток можно провести до 200 исследований, в зависимости от текущей динамики состояния больного и проводимых лечебных мероприятий.

Способ может быть широко использован в медицинских учреждениях.




ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ


Способ экспресс-диагностики эндогенной интоксикации, включающий исследование сыворотки крови и ее микроскопирование, отличающийся тем, что капли сыворотки крови объемом 0,01-0,02 мл наносят на предметное стекло, накрывают покровным и высушивают в термостате на протяжении 1-1,5 ч при t=+20-24°C, выдерживают на открытом воздухе 1,5-2 ч, изучают препарат в проходящем, поляризованном свете и в поляризованном свете с кварцевым компенсатором и при выявлении в проходящем свете кристаллов (и/или) - скелетных, ступенчатых, узловатых фибрилл, прямоугольно разветвленных агрегатов - диагностируют гиперглобулинемию, при изучении препарата в поляризованном свете и выявлении в нем оптически активных кристаллов - радиально-лучевых сферолитов - определяют гиперхолестеринемию, игловидных - гиперурикемию, ветвящихся дендритов - гиперкреатининемию, при исследовании препарата в поляризованном свете с кварцевым компенсатором и наличии в нем кристаллов пестрой окраски (и/или) - пластин, веерообразных пластин - диагностируют гиперпутресцинемию; овоидных зерен - гиперфенилаланинемию (и/или) - друз, многогранников и призм - гипергистидинемию; цепочечно-ориентированных агрегаций из зерен - гипертриптофанемию; сферолитов с отростками - гиперизолейцинемию; агрегатов из зерен - гипербилирубинемию.