СПОСОБ ОЦЕНКИ ДЕЙСТВИЯ И ЭФФЕКТИВНОСТИ ПРОТИВОМИКРОБНЫХ СРЕДСТВ НА МИКРОФЛОРУ ПОЛОСТИ РТА

СПОСОБ ОЦЕНКИ ДЕЙСТВИЯ И ЭФФЕКТИВНОСТИ ПРОТИВОМИКРОБНЫХ СРЕДСТВ НА МИКРОФЛОРУ ПОЛОСТИ РТА


RU (11) 2251693 (13) C1

(51) 7 G01N33/48 

(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ 
Статус: по данным на 25.10.2007 - действует 

--------------------------------------------------------------------------------

Документ: В формате PDF 
(14) Дата публикации: 2005.05.10 
(21) Регистрационный номер заявки: 2004118354/15 
(22) Дата подачи заявки: 2004.06.17 
(24) Дата начала отсчета срока действия патента: 2004.06.17 
(45) Опубликовано: 2005.05.10 
(56) Аналоги изобретения: SU 1157021 А, 23.05.1985. RU 2078344 C1, 27.04.1997. RU 2180222 С2, 10.03.2002. SU 1186211 А, 23.10.1985. SU 1802322 A1, 15.03.1993. SU 1802338 A1, 15.03.1993. 
(72) Имя изобретателя: Румянцев В.А. (RU); Юсуфова М.В. (RU); Дубова М.А. (RU); Слободина Е.В. (RU); Багдасарян В.А. (RU) 
(73) Имя патентообладателя: Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Тверская государственная медицинская академия Министерства здравоохранения Российской Федерации" (ГОУ ВПО Тверская ГМА Минздрава России) (RU) 
(98) Адрес для переписки: 170642, г.Тверь, ул. Советская, 4, ГОУ ВПО Тверская ГМА МЗ РФ, патентный отдел 

(54) СПОСОБ ОЦЕНКИ ДЕЙСТВИЯ И ЭФФЕКТИВНОСТИ ПРОТИВОМИКРОБНЫХ СРЕДСТВ НА МИКРОФЛОРУ ПОЛОСТИ РТА
Изобретение относится к области медицины. Способ заключается в сравнении амплитуд тестовых кривых измерения рН в средах полости рта до и после применения средств. Тестовые кривые изменения рН в кислую сторону получают после активации кислотообразующей микрофлоры полости рта 15 мл 50% раствора сахарозы в виде полоскания рта в течение 30 секунд, а тестовые кривые изменения рН в щелочную сторону получают после активации аммиак-образующей микрофлоры 15 мл 8% раствора карбамида (полоскание рта 30 сек). Оценку эффективности средств проводят по разности амплитуд тестовых сахарозной и карбамидной кривых рН (Ас и Ак), полученных до и после применения средства, а общую оценку действия средств на ротовую микрофлору проводят путем сравнения значений Ас и Ак. Способ обеспечивает оценку действия средств не только на кислотопродуцирующую микрофлору полости рта, но и аммиак-продуцирующую. 1 ил.






ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ


Изобретение относится к медицине, а именно к стоматологии. 

Главной причиной развития основных стоматологических заболеваний, кариеса и воспалительных заболеваний пародонта, является микрофлора полости рта. Развитие кариеса связано, главным образом, с метаболической активностью кислотопродуцирующих микроорганизмов (Streptococcus mutans и др.). А воспалительные заболевания пародонта связаны с жизнедеятельностью протеолитической анаэробной микрофлоры. Последняя в процессе метаболизма азотсодержащих веществ продуцирует аммиак, который смещает в щелочную сторону реакцию в полости рта. Борьба с патогенной микрофлорой является важным звеном профилактики и лечения кариеса и воспалительных заболеваний пародонта. С этой целью используются гигиенические и противомикробные средства. Существование и появление новых противомикробных средств для борьбы с микрофлорой обуславливает необходимость точной и достаточно быстрой оценки их противомикробного действия.

Аналогом заявляемого способа авторы считают бактериологический метод, подразумевающий взятие образцов микрофлоры из полости рта и их посев на питательные среды с последующей инкубацией (Яковлева В.И., Трофимова Е.К., Давидович Т.П., Просверяк Г.П. “Диагностика, лечение и профилактика стоматологических заболеваний”, изд. 2-е, перер. и дополн., Минск, “Вышейшая школа”, 1994, 494 с., С.73-75). 

Этот метод из-за его длительности (инкубация длится 24-48 часов), дороговизны и трудоемкости (требуются микробиологическая лаборатория, питательные среды, лабораторная посуда, термостат) практически не используется в клинике, а применяется лишь при сертификационных исследованиях противомикробных средств в лабораторных условиях.

В качестве прототипа авторы предлагают “Способ определения действия противомикробных средств на микрофлору полости рта”, авторское свидетельство №1157021 от 11 июля 1980 года, авторы Румянцев В.А. и Петрикас А.Ж. Этот способ заключается в том, что оценку противомикробной активности средства производят путем сравнения амплитуд кривых рН (водородного показателя) в средах полости рта до и после применения противомикробных средств. При этом активацию ротовой микрофлоры для получения кривых рН осуществляют с помощью тестовой дозы сахарозы (например, 15 мл 50% раствора сахарозы, полоскание в течение 30 сек) и по разнице амплитуд тестовых кривых рН до и после применения противомикробного средства (например, 0,2% раствора хлоргексидина в качестве полоскания рта) судят об его действии.

Недостатком указанного способа является то, что с его помощью можно оценивать действие противомикробных средств только на кислотопродуцирующую микрофлору полости рта, при этом действие средств на аммиак-продуцирующую микрофлору не учитывается.

С целью устранения перечисленных недостатков аналогов и прототипа предлагаем способ оценки действия и эффективности противомикробных средств на микрофлору полости рта. Этот способ включает в себя оценку действия противомикробного средства на кислотопродуцирующую микрофлору полости рта путем сравнения амплитуд кривых изменения рН в кислую сторону в средах полости рта до и после применения противомикробного средства. При этом активацию ротовой микрофлоры для получения кривых рН осуществляют с помощью тестовой дозы сахарозы (15 мл 50% раствора сахарозы, полоскание в течение 30 сек) и по разнице амплитуд тестовых кривых рН до и после применения противомикробного средства судят об его действии в отношении кислотопродуцирующей микрофлоры.

Для оценки действия на аммиак-продуцирующую микрофлору полости рта и оценки эффективности противомикробных средств дополнительно проводят сравнение амплитуд тестовых кривых рН в средах полости рта до и после применения противомикробного средства. При этом тестовые кривые изменения рН в щелочную сторону получают в результате активации аммиак-продуцирующей микрофлоры полости рта. Активацию последней проводят тестовым раствором карбамида (15 мл 8% раствора карбамида, полоскание в течение 30 сек).

Для реализации способа электрометрическим методом измеряют рН в среде полости рта (например, в смешанной слюне) у исследуемого (начальное значение рН-рНн), затем он полощет рот в течение 30 секунд 15 мл 50% раствора сахарозы (тестовый активатор), затем в последующие 20 минут определяют рН смешанной слюны и фиксируют его минимальное значение (рНmin 1). По разнице между начальным и минимальным значениями определяют первую амплитуду тестовой сахарозной кривой изменения рН в кислую сторону: A1c=рНн-рН min 1. После восстановления рН смешанной слюны за счет ее буферных систем к начальному значению рНн (через 20-30 мин) исследуемый полощет рот в течение 30 секунд 15 мл 8% раствора карбамида (тестовый активатор). Как и в первом случае, в течение 20 минут определяют рН смешанной слюны и фиксируют его максимальное значение (pHmax 1). По разнице между максимальным и начальным значениями рН определяют первую амплитуду тестовой карбамидной кривой изменения рН смешанной слюны в щелочную сторону: A1 к=pHmax 1-рНн.

Далее после восстановления рН смешанной слюны к начальному значению (через 10-20 мин) пациент использует оцениваемое противомикробное средство, после чего вновь проводят активацию микрофлоры тестовым раствором сахарозы. Как и в первом случае, в течение последующих 20 минут измеряют рН и определяют его минимальное значение. По разнице между минимальным и начальным значениями рассчитывают амплитуду второй тестовой сахарозной кривой рН (А2с ). После восстановления рН смешанной слюны к начальному значению рНн (через 20-30 мин) исследуемый полощет рот тестовым раствором карбамида. В течение 20 минут определяют рН смешанной слюны и фиксируют его максимальное значение (рНmax 2 ). По разнице между максимальным и начальным значениями рН определяют вторую амплитуду тестовой карбамидной кривой изменения рН смешанной слюны в щелочную сторону: А2 к=pHmax 2-рН н.

Эффективность действия противомикробного средства на кислотопродуцирующую микрофлору полости рта оценивают по разности первой и второй амплитуд тестовых сахарозных кривых рН (A c=Ac 1-Аc 2).

Эффективность действия противомикробного средства на аммиак-продуцирующую микрофлору полости рта оценивают по разности первой и второй амплитуд тестовых карбамидных кривых рН (А k=Аk1-Аk2).

Общую оценку действия противомикробного средства на микрофлору полости рта проводят путем сравнения А c и A k. Если больше цифровое значение А c, то противомикробное средство действует сильнее на кислотопродуцирующую микрофлору, чем на аммиак-продуцирующую, и наоборот.

Это сравнение А c и A k позволяет классифицировать противомикробные средства по выраженности их действия в отношении кислото- и аммиак-продуцирующей микрофлоры полости рта. То есть, оно позволяет определять показания к использованию тех или иных противомикробных средств в полости рта в зависимости от имеющейся патологии (кариеса зубов или воспалительных заболеваний пародонта), что отвечает цели этиотропного лечения. 

Количество тестовых растворов сахарозы и карбамида, активирующих ротовую микрофлору, длительность их экспозиции и концентрация подобраны опытным путем так, чтобы получать наиболее выраженные изменения рН в средах полости рта в кислую и щелочную сторону у пациентов референтной группы без патологии со стороны зубов и пародонта.

Преимущества предлагаемого способа:

- более точный: позволяет дополнительно оценивать эффективность действия противомикробных средств на аммиак-продуцируюшую уреазопозитивную микрофлору полости рта, которая является основным этиологическим фактором развития воспалительных заболеваний пародонта; позволяет сравнивать действие одного и того же противомикробного средства на кислото- и аммиак-продуцирующую микрофлору полости рта;

- быстрый способ, реализуется в течение 2 часов;

- относительно недорогой - требуется только рН-метр и два раствора: сахарозы и карбамида.

ПРИМЕР.

Обследуемый в течение суток до определения не использовал никаких противомикробных средств и не принимал еду за 3 часа до обследования.

С помощью рН-метра “Denver Basic” и рН-чувствительного FET-электрода определили начальное значение рН смешанной слюны обследуемого, которую он сплюнул в пробирку в объеме 1 мл. Это значение составило 7,10 ед. рН (рНH), см. чертеж. Далее обследуемый набрал в рот 15 мл 50% раствора сахарозы и в течение 30 сек полоскал им рот (тестовый раствор сахарозы), после чего выплюнул. Далее у него тем же способом с интервалом 2-5 мин определяли рН сплевываемой смешанной слюны и на 15 минуте после полоскания раствором сахарозы фиксировали его минимальное значение. Это значение составило 6,51 ед. рН (рНmin 1).

Рассчитали амплитуду первой тестовой сахарозной кривой: A1k=pHmin 1-рНн=7,10-6,51=0,61 ед. рН. Через 35 минут от начала опыта значение рН смешанной слюны за счет ее буферных свойств вернулось к начальному значению (рНн=7,10 ед. рН). Обследуемый в течение 30 сек полоскал рот 15 мл 8% раствора карбамида (тестовый раствор карбамида), после чего выплюнул. Далее у него тем же способом с интервалом 2-5 мин определяли рН сплевываемой смешанной слюны и на 18 минуте после полоскания раствором карбамида фиксировали его максимальное значение. Это значение составило 7,78 ед. рН (pHmax 1).

Рассчитали амплитуду первой тестовой карбамидной кривой: A1k=pH max 1-рНн=7,78-7,10=0,68 ед. рН. Через 85 минут от начала опыта значение рН смешанной слюны за счет ее буферных свойств вернулось к начальному значению (рНн =7,10 ед. рН).

Затем пациент в течение 2 минут полоскал рот 15 мл 0,5% раствора медного купороса (противомикробного средства). Сразу после выплевывания раствора обследуемый повторно в течение 30 сек полоскал рот 15 мл 50% раствора сахарозы (тестовый раствор сахарозы). Как и в первом случае, после этого с интервалом 2-5 минут у него определяли рН сплевываемой смешанной слюны. Минимальное значение рН зафиксировали на 12 минуте после повторного полоскания рта тестовым раствором сахарозы. Оно составило 6,55 ед. рН (рН min 2). После восстановления через 30 минут после полоскания рта противомикробным средством рН смешанной слюны к начальному значению (рНн) пациент повторил полоскание рта тестовым раствором карбамида. Последующее измерение рН смешанной слюны выявило его максимальное значение на 10 минуте после полоскания карбамидом, которое составило 7,26 ед. рН.

Рассчитали амплитуду второй тестовой сахарозной кривой рН смешанной слюны: А2c =рНн-pHmin 2=7,10-6,55=0,55.

Разность амплитуд двух тестовых сахарозных кривых рН смешанной слюны составила: А с=А1c-А2c=0,61-0,55=0,06 ед. рН. Полученная величина А c (0,06 ед. рН) характеризовала действие 2-минутного полоскания рта 15 мл 0,5% раствора медного купороса на кислотопродуцирующую ротовую микрофлору пациента.

Рассчитали амплитуду второй тестовой карбамидной кривой рН смешанной слюны: А2к =pHmax2-pHS=7,26-7,10=0,16. Разность амплитуд двух тестовых карбамидных кривых рН смешанной слюны (А к) составила: А k=A1 к-A2k=0,68-0,16=0,52 ед. рН.

Полученная величина А k (0,52 ед. рН) характеризовала действие 2-минутного полоскания рта 15 мл 0,5% раствора медного купороса на аммиак-продуцирующую ротовую микрофлору пациента.

Сравнение полученных значений А с и А к показало, что значение A k больше значения А c в 8,7 раза (А к/А c=0,52/0,06=8,7). Это означает, что 2-минутное полоскание рта 0,5% раствором медного купороса в 8,7 сильнее подавляет в полости рта аммиак-продуцирующую микрофлору, чем кислотопродуцирующую. Следовательно, это противомикробное средство следует использовать для профилактики и лечения воспалительных заболеваний пародонта, а не кариеса зубов.




ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ


Способ оценки действия и эффективности противомикробных средств на микрофлору полости рта, включающий оценку действия противомикробного средства на кислотопродуцирующую микрофлору путем сравнения амплитуд тестовых сахарозных кривых рН в средах полости рта (Ас) до и после его применения, отличающийся тем, что оценку действия противомикробного средства осуществляют в отношении аммиак-продуцирующей микрофлоры полости рта, используя в качестве ее тестового активатора 15 мл 8% раствора карбамида в течение 30 с, оценивают эффективность противомикробного средства по разности амплитуд тестовых карбамидных кривых рН (Ак), а общую оценку действия противомикробного средства осуществляют путем сравнения Ас и Ак, причем большему значению А соответствует более выраженное действие противомикробного средства на кислото- или аммиак-продуцирующую микрофлору