СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ТЯЖЕСТИ ТЕЧЕНИЯ ВНЕБОЛЬНИЧНОЙ ПНЕВМОНИИ

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ТЯЖЕСТИ ТЕЧЕНИЯ ВНЕБОЛЬНИЧНОЙ ПНЕВМОНИИ


RU (11) 2302637 (13) C1

(51) МПК
G01N 33/68 (2006.01) 

(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ 
Статус: по данным на 26.07.2007 - действует 

--------------------------------------------------------------------------------

Документ: В формате PDF 
(14) Дата публикации: 2007.07.10 
(21) Регистрационный номер заявки: 2005134060/15 
(22) Дата подачи заявки: 2005.11.03 
(24) Дата начала отсчета срока действия патента: 2005.11.03 
(45) Опубликовано: 2007.07.10 
(56) Аналоги изобретения: RU 2003122545 A, 10.01.2005. RU 2193196 C2, 20.11.2002. RU 2233189 C2, 27.06.2004. KAZACHKOV M.Y. et al., Release of cytokines by human nasal epithelial cells and peripheral blood mononuclear cells infected with Mycoplasma pneumoniae, Exp. Biol. Med. (Maywood), 2002, May, 227(5), pp.330-335. 
(72) Имя изобретателя: Калинина Елена Петровна (RU); Журавская Наталья Сергеевна (RU); Романченко Елена Анатольевна (RU) 
(73) Имя патентообладателя: ГУ Дальневосточный научный центр физиологии и патологии дыхания Сибирского отделения Российской академии медицинских наук (RU) 
(98) Адрес для переписки: 690105, г.Владивосток, Русская, 73г, ГУ ДНЦ физиологии и патологии дыхания СО РАМН 

(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ТЯЖЕСТИ ТЕЧЕНИЯ ВНЕБОЛЬНИЧНОЙ ПНЕВМОНИИ
Изобретение относится к медицине, а именно к пульмонологии, и может быть использовано для ускоренной диагностики степени тяжести внебольничной пневмонии (ВП). Сущность изобретения включает определение показателей реактивной способности иммунокомпетентных клеток с определением системного уровня цитокинов (ИЛ-2, 8, ФНО- ). Преимущество изобретения заключается в ускорении способа. 1 табл.




ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ


Изобретение относится к медицине, а именно к пульмонологии, и может быть использовано для ускоренной диагностики тяжести течения внебольничной пневмонии (ВП).

Пневмония (П) по-прежнему остается одним из наиболее широко распространенных инфекционных заболеваний человека с серьезным прогнозом [1]. В настоящее время П рассматривается как состояние с определенными системными манифестациями, что переводит локальное воспалительное поражение легочной ткани в разряд инфекционной болезни. По статистическим данным, около 26% больных пневмонией, госпитализированных в отделение реанимации, умирают от осложнений в виде септического шока и острого респираторного дистресс-синдрома [3]. Основными причинами осложненного течения, по мнению ряда авторов, являются поздняя госпитализация больных, недооценка степени тяжести и риска развития осложнений у конкретного пациента, что влечет за собой несвоевременное начало проведения и неадекватность интенсивной терапии, вентиляционной поддержки - все это способствует не только более длительному пребыванию больных в стационаре, но и значительно увеличивает стоимость лечения больных [1, 3]. В связи с чем адекватная оценка состояния пациента, своевременное прогнозирование развития осложнений заболевания приобретает в этой ситуации первостепенное значение. В России ежегодно П заболевают 1,5 миллиона человек, причем показатель заболеваемости составляет 348,1 на 100000 жителей, т.е. в абсолютных числах чуть более 500000 жителей. Правильный диагноз ставится только трети больным, примерно у 1 миллиона человек заболевание не распознается и адекватное лечение не проводится [5]. Подобная практика приводит к резкому увеличению числа больных с затяжным течением болезни и значительному числу легочных осложнений. Общая летальность при П составляет около 20-30 случаев на 100000 человек в год и занимает первое место среди причин летальности от инфекционных болезней и 6-е место среди всех причин летальности [3]. При П тяжелого течения, сопровождающихся высокой летальностью, чрезвычайно важна ранняя антибактериальная терапия в течение первых часов после установления диагноза.

Таким образом, распространенность, значительный экономический ущерб, обусловленный временной утратой трудоспособности, обуславливают актуальность проблемы и необходимость разработки своевременной диагностики этого заболевания с целью адекватного лечения в зависимости от степени тяжести.

В настоящее время рекомендовано для постановки диагноза руководствоваться клиническими критериями с обязательным проведением диагностического комплекса, включающего: рентгенографию органов грудной клетки и лабораторные исследования. Лабораторное обследование включает клинический минимум и микробиологическое исследование мокроты. Однако данный диагностический комплекс имеет ряд недостатков: во-первых, только через 24-48 часов имеется предварительный результат идентификации возбудителя, во-вторых, при рентгенологическом обследовании не всегда имеются четкие инфильтративные изменения, может отмечаться только усиление легочного рисунка, что связано со стадией морфологического изменения в легких или особенностями этологического фактора, например, атипичные возбудители пневмонии (хламидии, микоплазма и др.). Эти причины затрудняют диагностику заболевания и тем более степени тяжести П. Лабораторно-инструментальные исследования, включающие клинический минимум, анализ мокроты, рентгенографию органов грудной полости, занимают длительное время обследования, полученные результаты зависят от сопутствующих заболеваний у обследуемого и грамотности медперсонала. Время обследования занимает в среднем не менее 3 дней и отодвигает своевременное назначение необходимого адекватного медикаментозного лечения в зависимости от степени тяжести П.

Задача изобретения - разработка достоверного ускоренного метода диагностики тяжести течения внебольничной пневмонии.

Поставленная задача достигается определением реактивной способности иммунокомпетентных клеток (ИКК) вырабатывать туморнекротизирующий фактор (TNF- ), интерлейкин-2 (IL-2) и интерлейкин-8 (IL-8). Мы отдали предпочтение цитокинам, синтезируемым макрофагом или антигенпрезентирующей клеткой, как центральному звену иммунной защиты, которое активирует факторы неспецифической резистентности и способствует развитию специфического иммунитета. Уровень IL-2, синтезируемого CD4 клетками, определяет процесс дифференцировки и пролиферации Т-клеток, что является важным звеном, определяющим поздний адаптивный ответ на инфекционный антиген.

В качестве аналога использован способ диагностики органов дыхания, заключающийся в определении в крови оксипролина и глюкозамингликанов при типичном и затяжном течениях внебольничной пневмонии и инфильтративном туберкулезе. Проводится оценка только биохимических показателей сыворотки крови у пациентов с уже известным диагнозом ВП, 2003122545 А, 10.01.2005. В прототипе авторы не оценивали показатели иммунной системы у больных пневмонией. В отличие от прототипа в нашем изобретении оцениваются не особенности течения уже имеющегося заболевания, а наличие или отсутствие болезни, а именно пневмонии, и тяжесть ее течения.

Под наблюдением находилось 48 больных внебольничной пневмонией (ВП), которые проходили обследование в клинике ИМКВЛ. Пациентов с легким, средним и тяжелым течением заболевания было поровну. Аллергических заболеваний у данной группы наблюдения выявлено не было. Группу контроля составили 15 практически здоровых человек с нормальной функцией внешнего дыхания, подтвержденной клиническими и функциональными методами обследования, не имеющих в анамнезе хронической бронхолегочной патологии аллергических заболеваний, не болевших острыми заболеваниями в течение 6 месяцев.

Реактивную способности иммунокомпетентных клеток оценивали по уровню цитокинов TNF и IL-2, 8 в крови с помощью специфических реактивов фирмы "Genzyme diagnostics" методом иммуноферментного анализа согласно прилагаемой к наборам инструкции в модификации Е.Г.Исаченко и др. [2]. Результаты оценивали с помощью иммуноферментного анализатора EL-800 при длине волны 450 нм.

В результате анализа лабораторных показателей у обследованных с ВП выявлен характерный для каждой степени тяжести системный синтез TNF- и IL-2, 8 по сравнению с контрольной группой (табл.1). У пациентов с легким течением заболевания уровень IL-2 составил 12,6±0,6 пг/мл, TNF- - 8,08±0,7 пг/мл, IL-8 - 68,43±1,6 пг/мл. Отмечена разница секреции IL-8 у больных с разным течением ВП, при тяжелой ВП его уровень в 3 раз превышает секрецию при легком течении заболевания, что свидетельствует о минимальном воспалительном процессе в легких с незначительным привлечением в орган-мишень цитокина - хемоатрактанта. У пациентов со средней тяжестью воспалительного процесса обращает на себя внимание снижение синтеза TNF- и IL-2 и значительное увеличение IL-8 по сравнению с аналогичными уровнями у пациентов с легкой ВП. Имеется достоверное количественное различие показателей по сравнению с контрольной группой, где системный синтез изученных цитокинов значительно ниже (р<0,001).

Таким образом, полученные результаты свидетельствуют, что легкое течение заболевания наблюдается при системном уровне IL-2 в интервалах от 12 до 13,2 пг/мл, IL-8 от 63,83 до 73,03 пг/мл и TNF от 7,37 до 8,77 пг/мл, течение средней степени тяжести ВП при уровне IL-2 - от 6, 07 до 7,23 пг/мл, IL-8 от 110,71 до 117,31 пг/мл, TNF от 6,96 до 8,76 пг/мл и тяжелая ВП диагностируется при уровне - IL-2 от 15,78 до 17,98 пг/мл, IL-8 от 146,4 до 170,2 пг/мл, TNF от 11,73 до 12,73 пг/мл. Данные интервалы величин явились критериями тяжести течения ВП.

Диагностика ВП и выявление тяжести течения заболевания с использованием предлагаемого метода осуществляется в течение 5 часов. Это в 14 раз ускорило диагностику и определение тяжести течения заболевания, что способствовало быстрому своевременному назначению необходимых лекарственных препаратов.

Уровень цитокинов в сыворотке крови пациентов с ВП и здоровых 
Контингент обследованных TNF IL-8 IL-2 
ВП легкая, n=16 8,08±0,7*** 68,43±1,6 *** 12,6±0,6*** 
ВП средней тяжести, n=16 7,87±0,9** 114,01±3,3 *** 6,65±0,6** 
ВП тяжелая, n=16 12,24±0,5*** 158,3±11,9*** 16,88±1,1*** 
Контрольная группа, n=15 0,5±0,03 1,7±0,3 3,32±0,9 
Примечание. Звездочками показана достоверность показателей здоровых к показателям групп наблюдения (*** - р<0,001; ** - р<0,01; * - р<0,05). 


Полученные результаты были дополнительно проверены общепринятыми критериями постановки диагноза ВП. Диагноз подтверждали на основании функциональных и лабораторных методов обследования индивидуально для каждого больного. Сопоставление результатов полностью подтвердило достоверность предложенного метода диагностики внебольничной пневмонии, а также степень тяжести заболевания. Способ осуществляется следующим образом: содержание цитокинов в сыворотке крови исследовали методом твердофазного иммуноферментного анализа (с использованием реактивов фирмы «R&D diagnostic Inc.» США).

Пример 1. Больной Ж, 20 лет, поступил в госпиталь на 3-и сутки от начала заболевания с жалобами на: слабость, вялость, повышение температуры до 37,9°С, кашель малопродуктивный частый, усиливающийся при вдыхании холодного воздуха и физической нагрузке. Пациенту проведено обследование по предлагаемой методике. Получены следующие результаты: уровень в крови IL-2 12,8 пг/мл, IL-8 65,2 пг/мл, TNF 7,9 пг/мл. Согласно результатам обследования, которое заняло 5 часов, пациенту был выставлен диагноз: Внебольничная пневмония, нетяжелое течение.

Назначены антибактериальные препараты цефалоспоринового ряда и симптоматическое лечение. Через 10 дней приема препаратов состояние пациента значительно улучшилось, купированы симптомы интоксикации, гиперреактивность верхних дыхательных путей, кашель не беспокоил.

Таким образом, способ оценки реактивной способности иммунокомпетентных клеток с целью диагностики внебольничной пневмонии и определения тяжести течения заболевания является актуальным, достоверным, информативным, ускоренным диагностическим методом, показанным всем больным ВП. Помогает диагностировать заболевание, оценить тяжесть течения ВП, что необходимо для более дифференцированного, своевременного и качественного лечения.

Источники информации

1. Досуточная летальность в стационаре при внебольничной пневмонии / А.Л.Верткин, А.В.Наумов, Е.И.Вовк, Л.А.Алексанян и др. // Клиническая микробиология и антимикробная химиотерапия. 2003. Т.5. №4. С.380-388.

2. Исаченко Е.Г., Виткина Т.И., Геронина С.А., Бердышев Е.В. Спонтанный и липополисахаридиндуцированный синтез цитокинов клетками крови человека в норме и при аллергопатологиях // Иммунология, - 1999. - №5. - С.37-39.

3. Ноников В.Е. Пневмонии: сложные и нерешенные вопросы диагностики и лечения / В.Е.Ноников // Рус. мед. журн. 2004. Т.12. №21. С.1226-1232.

4. Патент №2231789 (РФ) Способ диагностики степени тяжести хронического обструктивного бронхита / Е.П.Калинина, Н.С.Журавская, Е.Г.Исаченко // Бюл. 2004. №18.

5. Чучалин А.Г. Диагностика и лечение пневмоний с позиций медицины доказательств / А.Г.Чучалин, А.Н.Цой, В.В.Архипов // Consilium Medicum. 2002. №12. С.425-452.




ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ


Способ определения тяжести внебольничной пневмонии, включающий лабораторные исследования крови, отличающийся тем, что проводят определение реактивной способности иммунокомпетентных клеток с выявлением системного уровня цитокинов TNF и IL-2,8, при уровне IL-2 от 12 до 13,2 пг/мл, IL-8 от 63,83 до 73,03 пг/мл и TNF от 7,37 до 8,77 пг/мл диагностируют легкое течение, при уровне IL-2 от 6,07 до 7,23 пг/мл, IL-8 от 110,71 до 117,31 пг/мл и сохранении содержания TNFa на уровне от 7,37 до 8,77 пг/мл - течение средней степени тяжести и при уровни IL-2 - от 15,78 до 17,98 пг/мл, IL-8 от 146,4 до 170,2 пг/мл, TNF от 11,73 до 12,73 пг/мл диагностируют тяжелую внебольничную пневмонию.