СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ ТУБЕРКУЛЕЗНОГО ПРОЦЕССА

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ ТУБЕРКУЛЕЗНОГО ПРОЦЕССА


RU (11) 2238564 (13) C2

(51) 7 G01N33/53 

(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ 
Статус: по данным на 26.07.2007 - прекратил действие, но может быть восстановлен 

--------------------------------------------------------------------------------

(14) Дата публикации: 2004.10.20 
(21) Регистрационный номер заявки: 2002122555/15 
(22) Дата подачи заявки: 2002.08.20 
(24) Дата начала отсчета срока действия патента: 2002.08.20 
(43) Дата публикации заявки: 2004.03.10 
(45) Опубликовано: 2004.10.20 
(56) Аналоги изобретения: RU 2099712 C1, 20.12.1997.
МИНИЦКАЯ Л.А. Раннее выявление туберкулезной инфекции, диагностика клинических форм туберкулеза у детей // Рос.мед.ж., 1996, №3, с. 46-49.
ГОЛЫШЕВСКАЯ В.И. и др. Лабораторная диагностика туберкулеза на современном этапе // 4 Рос. нац. конгр. "Человек и лекарство". - М., 8-12 апр., 1997, с.191.
YOUNG A.M. fbstr. 30 th IUATLD World Conf. lung Health, Mabrid, 14-18 Sept., 1999 //Int. J. Tuberc. and Lung Disease, 1999, N9, p. 179.
RU 1783435 А1, 23.12.1992.
RU 94037628 А1, 27.12.1996.
RU 1729487 А1, 30.04.1992. 
(72) Имя изобретателя: Бородулин Б.Е. (RU); Косарев В.В. (RU); Жестков А.В. (RU); Бородулина Е.А. (RU) 
(73) Имя патентообладателя: Бородулин Борис Евгеньевич (RU) 
(98) Адрес для переписки: 443099, г.Самара, ул. Чапаевская, 89, Самарский государственный медицинский университет 

(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ ТУБЕРКУЛЕЗНОГО ПРОЦЕССА 
Изобретение относится к медицине, а именно к фтизиатрии (науке, изучающей туберкулез), и предназначено для определения активности туберкулезного процесса. Определяют муцин, иммуноглобулин А, фагоцитоз, лизоцим, фибронектин, Т-клетки, Т-хелперы, Т-супрессоры, В-клетки, Т-киллеры, рассчитываются две классификационные функции:

f1 – значение функции для здоровых: f1=3EG5·0,056+IgA·8,72+фагоцитоз·2,48+лизоцим·2,25+фибронектин·0,246+Т-клетки·32,1+Т-хелперы·4,3+Т-супрессоры·8,2+В-клетки·15,5+Т-киллеры·46,57–188,226;

f2 – значение функции для больных:

f2=3EG5·(-0,12)+IgA·13,4+фагоцитоз·0,9+лизоцим·1,025+фибронектин·0,74+Т-клетки·39,15+Т-хелперы·0,059+Т-супрессоры·5,65+В-клетки·29,76+Т-киллеры·29,25–371,09 и при f1<f2 устанавливается активность туберкулезного процесса. Способ позволяет упростить и повысить точность диагностики. 



ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ


Изобретение относится к медицине, а именно к фтизиатрии (науке, изучающей туберкулез).

Имеющиеся способы определения активности туберкулезного процесса имеют серьезные недостатки. Известен способ пробного лечения, суть которого состоит в назначении противотуберкулезных препаратов в течение от 3 до 6-ти месяцев, и в случае положительного эффекта делается заключение об активности процесса [1].

Недостатком этого способа является длительность, дороговизна, возможность нанесения вреда больному, отсутствие четких критериев и субъективизм оценки результатов.

Известен способ определения активности с помощью провокационных проб с туберкулином, суть которого состоит в введении больших доз туберкулина от 20 до 80 туберкулиновых единиц, изучения общей, местной, очаговой реакции организма и иммунологических показателей до пробы и после пробы [1,2,3,6].

Недостатком этого способа является трудоемкость, пробы проводятся только в специализированных учреждениях, представляют опасность для больного возможностью вызвать обострение туберкулезного процесса, эффективен от 20 до 48%, что снижает точность и достоверность определения активности туберкулезного процесса.

Известен способ полимеразно-цепной реакции, суть которого состоит в обнаружении специфичной для микобактерии дезоксирибонуклеиновой кислоты [4, 5].

Недостатком этого способа является сложность и дороговизна оборудования, малая доступность практическому здравоохранению, а также не позволяет отличать живые и мертвые микобактерии, а также штамм противотуберкулезной вакцины, что снижает точность и достоверность определения активности туберкулезного процесса.

Известен способ иммуноферментного анализа, суть которого в обнаружении антител к туберкулезу [4].

Недостатком этого способа является прежде всего дороговизна, недостаточная чувствительность (до 68%). Число ложноположительных реакций у здоровых лиц колеблется от 14% и выше, что связано с наличием общих антигенов между МБТ и другими непатогенными микобактериями, что снижает точность и достоверность определения активности туберкулезного процесса.

Таким образом, проблема определения активности туберкулезного процесса в настоящее время не решена.

Прототипом послужил способ определения активности туберкулезного процесса методом иммуноферментного анализа путем устранения его недостатков.

Целью изобретения является повышение точности и достоверности определения активности туберкулезного процесса.

Эта цель достигается тем, что определяют муцин (3EG5, ед/мл), иммуноглобулин А (IgA, г/л), фагоцитоз (%), лизоцим, е.а., фибронектин, нг/мл, Т-клетки (абс.), Т-хелперы (абс.), Т-супрессоры (абс.), В-клетки (абс-), Т-киллеры (абс.), рассчитывают две классификационные функции:

f1 - значение функции для здоровых:

f1=3EG50,056 + IgA8,72 + фагоцитоз 2,48 + лизоцим 2,25 + фибронектин 0,246 + Т-клетки 32,1 + Т-хелперы 4,3 +Т-супрессоры 8,2 + В-клетки 15,5 + Т-киллеры 46,57 - 188,226;

f2 - значение функции для больных:

f2=3EG5 -0,12 + IgA 13,4 + фагоцитоз 0,9 + лизоцим 1,025 + фибронектин 0,74 + Т-клетки 39,15 + Т-хелперы 0,059 - Т-супрессоры 5,65 + В-клетки 29,76 + Т-киллеры 29,25-371,09

и при f1<f2 диагностируется активность туберкулезного процесса.

Способ осуществляется следующим образом.

1. Сбор анамнестических данных, изучение преморбитного фона, на котором развивается туберкулез.

2. Забор крови для иммунологических и биохимических исследований.

3. Проведение лабораторной диагностики.

4. Расчет по формуле двух классификационных функций.

5. Сравнение полученных функций.

Сущность заявляемого способа заключается в следующем. После проведения иммунологических и биохимических исследований сыворотки крови у пациентов при подозрении на туберкулез и при дифференциальной диагностике с другими легочными заболеваниями, имеющими сходную картину, полученные показатели используют в расчетах по приведенным формулам для каждой из классификационных функций.

При f1<f2 устанавливается активность туберкулезного процесса, то есть заболевание туберкулез, или ставится диагноз туберкулез при дифференциальной диагностике с другими нетуберкулезными заболеваниями.

При f1>f2 пациент не страдает туберкулезом. Исследуются следующие показатели:

а) Биохимические:

лизоцим, е.а. - один из неспецифических факторов защиты организма от патогенных бактерий. Фермент, вызывающий повреждение мембран бактерий с последующей их гибелью; фагоцитоз, % - один из неспецифических факторов защиты организма от патогенных бактерий. Клетка, захватывающая и переваривающая чужеродный агент; 3EG5 (муцин, ед/мл) - фермент, способствующий коллагенообразованию; фибронектин, нг/мл - один из неспецифических факторов защиты организма, участвующий в межклеточном взаимодействии при воспалении.

б) Иммунологические:

Ig А (г/л), В-клетки (абс.) - гуморальные факторы иммунитета; Т-клетки (абс.), Т-хелперы (абс.), Т-супрессоры (абс.), Т-киллеры (абс.) - иммунокомпетентные клетки клеточного иммунного ответа.

Здоровые (f1)=3ЕG5, ед/мл 0,056 + IgA, г/л 8,72 + фагоцитоз, % 2,48 + лизоцим, е.а. 2,25 + фибронектин, нг/мл 0,246 + Т-клетки (абс.) 32,1 + Т-хелперы (абс.) 4,3 +Т-супрессоры (абс-) 8,2 + В-клетки (абс.) 15,5 + Т-киллеры (абс.) 46,57 - 188,226.

Туберкулез (f2) = 3EG5, ед/мл -0,12 + IgA, г/л 13,4 + фагоцитоз, % 0,9 + лизоцим, е.а. 1,025 + фибронектин, нг/мл 0,74 + Т-клетки (абс.) 39,15 + Т-хелперы (абс.) 0,059 - Т-супрессоры (абс.) 5,65 + В-клетки (абс.) 29,76 + Т-киллеры (абс.) 29,25-371,09.

Таким образом, для определения активности туберкулезного процесса, то есть заболевания туберкулезом формально следует подставить значения включенных в модель показателей в приведенные выше формулы и вычислить классификационные значения. Человек будет относиться к тому типу (не имеет туберкулеза или болен туберкулезом), для которого значение максимально.

Для определения активности туберкулезного процесса классификационной функции в работе применялся факторный и дискриминантный анализ при помощи современных пакетов статистического анализа. Полученная математическая модель определения типа заболевания по показателям иммунного статуса организма имеет очень высокий процент корреляции (R2=0,98) и очень высокую степень достоверности (F=96,910, р <0,0000).Пример 1. Пациент 39 лет, состоит на учете в туберкулезном диспансере в группе риска VII-A с данными рентгенологического исследования: в верхней доле левого легкого S 1-2 определяются очаговые тени интенсивные. Последнее время жалуется на слабость, потливость, субфебрильную температуру, периодически кашель со скудной мокротой, МБТ не обнаружены методом микроскопии, проба Манту 2ТЕ-14 мм, общий анализ крови в пределах нормы. При анализе полученных анализов традиционного обследования данных за активность не выявлено. Получены следующие иммунологические показатели: 3EG5 - 64,05 ед/мл; уровни Ig-A - 2,32 г/л; фагоцитоза - 26,9%; лизоцим - 11,28 е.а.; фибронектин - 855 нг/мл; Т-клетки - 1,43; Т-хелперы - 1,07; Т-супрессоры - 0,67; В-клетки - 0,65; Т-киллеры - 0,12.

(f1) Здоровые = 64,050,056+2,328,72+26,92,48+11,282,25+8550,246+1,4332,1+1,074,3+0,678,2+0,6515,5+0,1246,57-188,226=168,5.

(f2) Туберкулез = 64,050,12-2,323,4+26,90,9+11,281,025+8550,74+1,4339,15+1,070,059-0,675,65+0,6529,76+0,1229,25-371,09=341,4.

f1=168,5; f2=341,4; f1<f2.После проведенного противотуберкулезного лечения отмечена положительная рентгенологическая динамика, улучшение общего состояния.

Пример 2. Пациент 43 лет, поступил в пульмонологическое отделение. Жалобы на слабость, кашель со скудным количеством мокроты по утрам, недомогание последние две недели, в связи с температурой до 38,2 направлен в стационар.

При рентгенологическом обследовании справа в верхней доле ограниченное затемнение слабой интенсивности 34 см. Микобактерии методом микроскопии не обнаружены. Проба Манту - папула 8 мм. Общий анализ крови: Л - 9 тыс., э - 2, п - 4, с - 62, л - 15, м - 4, соэ - 28 мм/ч. Выставлено подозрение на пневмонию, необходимо исключить туберкулез. Сделана иммунограмма: 3ЕG5 - 52,21 ед/мл; уровни Ig-A - 2,5 г/л; фагоцитоза - 31%; лизоцим - 10,8 е.а.; фибронектин - 832,4 нг/мл; Т-клетки - 1; Т-хелперы - 0,57; Т-супрессоры - 0,39; В-клетки - 0,37; Т-киллеры - 0,17.

(f1) Здоровые = 52,210,056+2,58,72+312,48+10,82,25+832,40,246+132,14-0,57 V4,3+0,398,2+0,3715,5+0,1746,57-188,226=152,37.

(f2) Туберкулез = 52,210,12-2,513,4+310,9+10,81,025+832,40,74+139,15+0,570,059-0,395,65+0,3729,76+0,1729,25-371,09=308,32.

f1=152,37; f2=308,32; f1<f2Лечение пневмонии эффекта не дало, при противотуберкулезном лечении получена положительная динамика.

Приведенные примеры показывают высокую информативность и точность предлагаемого способа определения активности туберкулезного процесса.

Таким образом, предлагаемый впервые способ позволяет с достаточной точностью прогнозировать и определять активность туберкулезного процесса, характеризуется точностью диагностики на ранних этапах (98,8%), по сравнению с известными. Позволяет определять активность туберкулеза в группах риска рецидива туберкулеза, выявить туберкулез при дифференциальной диагностике. Данный метод отличается высокой экономичностью в связи с ограниченным набором иммунологических показателей, безопасностью для больного, быстротой получения результатов, не требует дорогого оборудования и может проводиться как в специализированных, так и в учреждениях общей лечебной сети.

ИСТОЧНИКИ ИНФОРМАЦИИ

1. Авербах М.М., Литвинов В.И. Иммунология и иммуногенетика туберкулеза: Состояние и перспективы развития исследования.// Проблемы туберкулеза. - 1989. - №2. - С.65-69.

2. Авербах М.М., Рабухин А.Е., Борзенко А.С., Гергерт В.Я. Новые туберкулино-провокационные тесты в выявлении скрытой активности туберкулезного процесса.//Проблемы туберкулеза. - 1977. - №2. - С.26-28.

3. Коваленко И.П. Реактивация туберкулеза легких.//Кишенев, 1989. - С.123- 151.

4. Генодиагностика во фтизиатрии.//Новости науки и техники. Сер. Мед. Вып. Туберкулез/ВИНИТИ. - 2002. - №1. - C.1-16.

5. Где прячется БК.//Новости науки и техники. Сер. Мед. Вып. Туберкулез/ВИНИТИ. - 2002. - №1. - Р-3.

6. Перельман М.И., Корякин В.А., Протопопова Н.М. Туберкулез. Учебник. - М.: Медицина, 1990. C.59-60. 



ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ


Способ определения активности туберкулезного процесса, отличающийся тем, что определяют муцин (3EG5, ед/мл), иммуноглобулин А (IgA, г/л), фагоцитоз (%), лизоцим, е.а., фибронектин, нг/мл, Т-клетки (абс.), Т-хелперы (абс.), Т-супрессоры (абс.), В-клетки (абс.), Т-киллеры (абс.), рассчитываются две классификационные функции: f1 – значение функции для здоровых: f1=3EG50,056+IgA8,72+фагоцитоз2,48+лизоцим2,25+фибронектин0,246+Т-клетки32,1+Т-хелперы4,3+Т-супрессоры8,2+В-клетки15,5+Т-киллеры46,57–188,226; f2 – значение функции для больных: f2=3EG5(-0,12)+IgA13,4+фагоцитоз0,9+лизоцим1,025+фибронектин0,74+Т-клетки39,15+Т-хелперы0,059+Т-супрессоры5,65+В-клетки29,76+Т-киллеры29,25–371,09; и при f1<f2 устанавливается активность туберкулезного процесса.