СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ КОНЪЮГАТА ИЗОНИАЗИД-ДЕКСТРАН

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ КОНЪЮГАТА ИЗОНИАЗИД-ДЕКСТРАН


--- Закажите полную версию данного патента ---
RU (11) 2125451 (13) C1

(51) 6 A61K31/715, A61K31/455 

(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ 
Статус: по данным на 26.07.2007 - прекратил действие 

--------------------------------------------------------------------------------

(14) Дата публикации: 1999.01.27 
(21) Регистрационный номер заявки: 94041109/14 
(22) Дата подачи заявки: 1994.11.09 
(45) Опубликовано: 1999.01.27 
(56) Аналоги изобретения: RU 2087146 C1, 23.03.93. RU 2020940 C1, 12.09.90. RU 94016158 A1, 17.02.94. 
(71) Имя заявителя: Новосибирский медицинский институт 
(72) Имя изобретателя: Панасенко С.Г.; Пупышев А.Б.; Курунов Ю.Н.; Шкурупий В.А. 
(73) Имя патентообладателя: Новосибирский медицинский институт 
(98) Адрес для переписки: 630091 Новосибирск Красный пр-т 52, Новосибирский медицинский институт 

(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ КОНЪЮГАТА ИЗОНИАЗИД-ДЕКСТРАН 

Изобретение относится к органической химии, химии выcoкoмoлeкуляpных соединений, биохимии, монет использоваться при разработке новых противотуберкулезных лекарственных препаратов повышенной эффективности. Проводят окисление декстрана периодатом натрия, осаждение этанолом, конъюгацию полученного диальдегиддекстрана с изониазидом и восстановление образовавшегося Шиффова основания боргидридом натрия. Причем перед осаждением этанолом осуществляют диализ диальдегиддекстрана. Конъюгацию проводят путем внесения изониазида в сухом виде в количестве, обеспечивающем его концентрацию 0,3 моль/л, и осуществляют диализ раствора конъюгата перед его осаждением этанолом. Способ обеспечивает повышенное содержание изониазида, высокую чистоту и стабильность продукта. 


ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ



Изобретение относится к области органической химии, химии высокомолекулярных соединений, биохимии, а именно реакции ковалентной сшивки полисахаридов (на примере декстрана) с производными гидразина (на примере гидразида изоникотиновой кислоты, изониазида).

Необходимость данного изобретения продиктована потребностями медицины в разработке новых противотуберкулезных лекарственных препаратов повышенной эффективности на основе конъюгации распространенного противотуберкулезного препарата изониазида с гидролизуемыми (в т.ч. полисахаридными) носителями. Назначение конъюгации связывается с получением препаратов пролонгированного действия. Известны конъюгаты изониазида с производными поливинилпирролидона (1, 5, 8), поликонденсата формальдегида с производным бензальдегида (6), карбоксаметилсефадекса (7). Общим недостатком этих носителей может рассматриваться их низкая гидролизуемость в организме, возможность накопления внутри лизосом с провоцированием неблагоприятных последствий.

Среди методов конъюгации изониазида с декстраном известен окислительный путь, осуществляющийся в два этапа (9, 11):

1) окисление декстрана до диальдегиддекстрана,

2) присоединение изониазида по реакционноспособным альдегидным группам диальдегиддекстрана.

В разработке метода сшивки изониазида с декстраном в качестве отправной взята технология, представленная в изобретении Шкурупия В.А. и соавт. (11). Авторы проводили окисление декстрана периодатом натрия (0,03 М) с остановкой реакции с помощью этиленгликоля. Образовавшийся диальдегиддекстран осаждали этанолом и центирифугировали. Полученный диальдегиддекстран растворяли в воде, и к нему в слабокислой среде прибавляли водный раствор изониазида (0,09 М). По завершении реакции проводили восстановление конъюгата водным раствором боргидрида натрия в щелочной среде. Продукт осаждали этанолом и центрифугировали. В результате содержание изониазида в конъюгате достигало 30 моль/моль декстрана.

При воспроизведении данного метода мы столкнулись с теми трудностями, что продукт получается загрязненным неорганическими примесями и нестойким. Кроме того, для повышения терапевтической эффективности препарата представлялось целесообразным увеличить содержание действующего начала - изониазида в конъюгате.

Поэтому задачей изобретения явилась разработка метода конъюгации изониазида с декстраном, обеспечивающего повышенное содержание изониазида, достаточную чистоту и стабильность препарата.

Получение диальдегиддекстрана возможно с помощью иодной кислоты (10), периодата натрия и других окислителей (4, 11, 13). Выбранный нами способ обработки декстрана периодатом представляется более мягким в сравнении с действием иодной кислоты, однако, и он не лишен недостатка, связанного с возможностью частичной окислительной деградации декстрана (2). В этих условиях, вероятно, целесообразно использование в качестве исходного материала декстрана с молекулярным весом 40000 (декстран-40,), имеющего запас полимерности в сравнении с применявшимся ранее декстраном с молекулярным весом 28000-40000 (11).

В наших экспериментах обнаружено, что на перовом этапе конъюгации (реакции окисления декстрана) выделение диальдегиддекстрана при помощи только осаждения этанолом приводило к получению конъюгата, загрязненного неорганическими примесями (предположительно NaIO4, NaIO3 и NaI). Использование такого неочищенного диальдегиддекстрана в реакции конъюгации давало конечный продукт с низким содержанием изониазида, нестойкий при хранении, например, в отдельном опыте был получен продукт с содержанием изониазида 7 моль/моль декстрана, через 2 недели хранения при 4oC содержание изониазида понизилось до 4 моль/моль декстрана.

Поэтому применили удаление непрореагировавшего периодата и других примесей с помощью диализа смеси против дистиллированной воды. Очистку осуществляли путем осаждения диальдегиддекстрана этанолом с последующим переосаждением и высушиванием из ацетона. Процедура диализа способствовала заметному увеличению чистоты конечного продукта, связыванию диальдегиддекстрана с изониазидом, стабильности конъюгата. Так, соотношение изониазид:декстран в конъюгате возросло с 7 до 20 моль/моль декстрана, а содержание изониазида в нем не изменялось по крайней мере в течение 1 года хранения препарата в холодильнике (4-6oC).

При проведении реакции конъюгации нашли, что к раствору диальдегиддекстрана при pH 2,9 предпочтительно добавлять сухой изониазид в концентрации 0,3 моль/л, трехкратно превышающей стандартную (11). Эта модификация позволила повысить содержание изониазида в конъюгате до 32 - 35 моль/моль декстрана. Стабилизацию конъюгата восстановлением образующихся двойных связей (типа Шиффова основания) осуществляли добавлением боргидрида натрия в щелочной среде. Одновременно боргидрид восстанавливал непрореагировавшие с изониазидом альдегидные группы, полученные при окислении декстрана.

Повышенная очистка конечного продукта достигалась сочетанием диализа, осаждения конъюгата этанолом и промывки ацетоном.

Конечный продукт представляет собой растворимый в воде порошок желтовато-белого цвета.

Общий выход конъюгата - 32,4% от теоретического, расчет на декстран. Продукт содержит 30-35 моль изониазида в расчете на 1 моль декстрана-40, что выше, чем у других авторов (12). Концентрацию изониазида определяли спектрофотометрически (3).

Продукт устойчив при хранении в сухом виде при 4-6oC по крайней мере в течение 1,5 лет. Снижение общего содержания изониазида в продукте или его отщепления не обнаружено. При нагревании до 100oC препарат разлагается (не подлежит термостерилизации).

Таким образом, в предложенной нами методике конъюгации принципиально важными являются следующие моменты:

1) процедура обязательной очистки окисленного декстрана с помощью диализа до его осаждения (этанолом),

2) внесение в реакционную смесь изониазида в сухом виде в насыщающих концентрациях (0,3 М),

3) процедура диализа конъюгата перед осаждением этанолом.

Пример. Получение конъюгата изониазида с декстраном.

1. Получение диальдегиддекстрана.

К раствору 155 мг декстрана-40 ("Fluka", Швейцария) в 7,85 мл дистиллированной воды прибавляли 1,70 мл 0,2 М раствора NaIO4, перемешивали на магнитной мешалке 45 мин при комнатной температуре. Приливали 2,1 мл чистого этиленгликоля, перемешивали 20 мин. Раствор подвергали диализу в течение 24 часов против 50 объемов дистиллированной воды, осаждали продукт добавлением 65 мл охлажденного (+4-6oC) этанола в течение 24 ч. Взвесь центрифугировали 15 мин при 3000 об/мин (центрифуга К-23, "Janetzky"). Осадок 3 раза промывали ацетоном и высушивали на воздухе. Выход - 84 мг (54% теоретического).

2. Получение конъюгата.

К раствору 84 мг диальдегиддекстрана (pH 4,6) в 1,54 мл дистиллированной воды прибавляли 0,14 мл 5% CH3COOH (pH 2,9), 75,6 мг твердого изониазида и перемешивали 20 мин при комнатной температуре. Прибавляли каплю спиртового раствора фенолфталеина и затем 0,5 N NaOH до розовой окраски (pH 8,0). После этого вводили 33,6 мкл буфера 1 М трис-HCl pH 7,5 и перемешивали 5 мин (окраска исчезала). Прибавляли 0,84 мл водного раствора NaBH4 (4 мг/мл), перемешивали 30 мин. Раствор конъюгата диализовали 24 ч против 50 объемов дистиллированной воды. Продукт осаждали охлажденным этанолом (54 мл, 5 ч) и центрифугировали. Осадок 3 раза промывали ацетоном и высушивали на воздухе. Выход 50,8 мг (60% от теоретического, расчет на диальдегиддекстран).

Список литературы

1. Вавилин Г.И., Ильина Т.Б., Рабинович И.М., Кропачев В.А., Трухманова Л. Б. , Маркелова Т.М. // О возможности использования полимеров для пролонгирования действия тубазида в эксперименте. - Пробл. туб. - 1968. - N 4. - С. 74-77.

2. Гибиетис Я.Л., Зицманис А.Х., Спинце Б.А. // Способ получения диальдегиддекстрана. - Авт. свид. N 1530630.

3. Гребенник Л.И. // Об определении производных гидразида изоникотиновой кислоты и продуктов их превращения в организме. - Пробл. туб. - 1961. - N 4. С. 69-74.

4. Линденбаум Г. М. , Миргородская О.А., Москвичев Б.В. // Химическая модификация водорастворимых декстранов. -Хим. фарм. журн. - 1977. - т.11, N 6. - С.80-83.

5. Перельман А.Е., Княжецкий С.И., Вавилин Г.И., Кропачев В.А., Трухманова Л.Б. // Продолжительность сохранения активного гидразида изоникотиновой кислоты в организме экспериментальных животных после введения его полимерного азометинового производного. - Хим. фарм. журн. - 1977. - Т. 11, N 8. - С. 10-17.

6. Сокирко Т.А. // Фармакология пролонгированной формы изониазида. - Автореф. дис. ... канд. биол. наук. - Киев. - 1990. - 18 С.

7. Туркебаева К.А., Шипунова О.В., Кривцова А.Е., Мошкович С.А., Жубанов Б.А. // О возможности лечения туберкулеза полимерным изониазидом пролонгированного действия. - Пробл. туб. - 1990. - N 6. - С. 32-36.

8. Ушаков С. Н., Кропачев В.А., Трухманова Л.Б., Маркелова Т.М. // Полимерные азометиновые производные п-аминосалициловой кислоты и гидразида изоникотиновой кислоты. - Высокомолек. соед. - 1972.- Сер.А, Т.14, N 10. - С. 2023-2027.

9. Хомяков К. П., Вирник А.Д., Ушаков С.Н., Роговин З.А. // Синтез полимерных лекарственных соединений на основе производных декстрана. - Высокомолек. соед. - 1965. - Т.7, N 6. - С. 1035-1040.

10. Хомяков К.П., Пененжик М.А., Вирник А.Д., Роговин З.А. // Синтез диальдегид- и дикарбоксилдекстрана. - Высокомолек. соед. - 1965. - Т.7, N 6. С.1030-1034.

11. Шкурупий В.А., Курунов Ю.Н., Чернова Т.Г. // Способ лечения генерализованного туберкулезного процесса. - Заявка на изобр. N 93-015116.

12. Шкурупий В.А., Чернова Т.Г., Курунов Ю.Н. // Изменения гранулемы при лечении туберкулеза пролонгированной формой изониазида в эксперименте. - Пробл. туб. - 1993. - N 1. - С.38-41.

13. Molteni L. // Dextran and Inulin Conjugates as Drug Carriers. - Meth. Enzymol. - 1985. - V.112. - Pt.A.- P.285-297. 


ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ



Способ получения конъюгата изониазид-декстран, включающий окисление декстрана периодатом натрия, осаждение этанолом, конъюгацию полученного диальдегиддекстрана с изониазидом и восстановление образовавшегося основания Шиффа боргидриом натрия, отличающийся тем, что до стадии осаждения этанолом диальдегиддекстран подвергают диализу, конъюгацию проводят путем внесения изониазида в сухом виде в раствор диальдегиддекстрана в количестве, обеспечивающем его концентрацию 0,3 моль/л, после стадии восстановления осуществляют диализ раствора конъюгата и осаждение продукта этанолом.




ПРОЧИТАТЬ НУЖНО ВСЕМ !
Судьба пионерских изобретений и научных разработок, которым нет и не будет аналогов на планете еще лет сорок, разве что у инопланетян



Независимый научно технический портал

Подборка патентов изобретений и технологий относящихся к медицине, а именно:
  • Все от зачатия и до рождения ребенка. Акушерство, гинекология, сексология и сексопатология

  • Гастроэнтерология, гепатология и панкреатология

  • Дерматология и дерматовенерология

  • Иммунология. Способы диагностики и лечения (ВИЧ) и приобретенного иммунодефицита (СПИД)

  • Кардиология и кардиохирургия

  • Фармацевтика. Лекарственные и косметические средства и композиции

  • Медицинская техника

  • Наркология. Средства выявления и профилактики различного вида зависимостей

  • Неврология, невропатология и неонатология

  • Онкология и радиология

  • Оториноларингология

  • Офтальмология

  • Вирусология, паразитология и инфектология

  • Педиатрия и неонатология

  • Психиатрия, психотерапия

  • Пульмонология и фтизиатрия

  • Стоматология

  • Способы диагностики функционального состояния организма человека

  • Травматология, артрология и ортопедия

  • Терапия. Мануальная терапия. Физиотерапия. Рефлексотерапия. Биотерапия и фитотерапия

  • Урология, нефрология и андрология

  • Физиотерапия

  • Хирургия

  • Эндокринология

  • Косметология. Санитария и гигиена


Медицина






СОВЕРШЕННО БЕСПЛАТНО!
Вам нужна ПОЛНАЯ ВЕРСИЯ данного патента? Сообщите об этом администрации портала. В сообщении обязательно укажите ссылку на данную страницу.


ПОИСК ИНФОРМАЦИИ В БАЗЕ ДАННЫХ


Режим поиска:"и" "или"

Инструкция. Ключевые слова в поле ввода разделяются пробелом или запятой. Регистр не имеет значения.

Режим поиска "и" означает, что будут найдены только те страницы, где встречается каждое из ключевых слов. Например, при запросе "лечение бесплодия" будет найдено словосочетание "лечение бесплодия". При использовании режима "или" результатом поиска будут все страницы, где встречается хотя бы одно ключевое слово ("лечение" или "бесплодия").

В любом режиме знак "+" перед ключевым словом означает, что данное ключевое слово должно присутствовать в найденных файлах. Если вы хотите исключить какое-либо слово из поиска, поставьте перед ним знак "-". Например: "+лечение -бесплодия".

Поиск выдает все данные, где встречается введенное Вами слово. Например, при запросе "бесплодие" будут найдены слова "бесплодия", "бесплодию" и другие. Восклицательный знак после ключевого слова означает, что будут найдены только слова точно соответствующие запросу "бесплодие!".

Акушерство, гинекология, сексология и сексопатология | Гастроэнтерология, гепатология и панкреатология | Дерматология и дерматовенерология | Иммунология. Вирусология. Способы лечения синдрома приобретенного иммунного дефицита (спид) | Кардиология и кардиохирургия | Лекарственные и косметические средства и композиции | Медицинская техника | Наркология. Средства выявления и профилактики различного вида зависимостей | Неврология, невропатология и неонатология | Онкология и радиология | Оториноларингология | Офтальмология | Вирусология, паразитология и инфектология | Педиатрия и неонатология | Психиатрия, психотерапия и психофизиология | Пульмонология и фтизиатрия | Стоматология | Травматология. Артрология и ортопедия | Терапия. Мануальная терапия. Физиотерапия. Рефлексотерапия. Биотерапия и фитотерапия. Диагностика заболеваний и функционального состояния организма человека | Урология, нефрология, андрология | Хирургия | Эндокринология | Косметология


Rambler's Top100 Webalta Уровень доверия Цитирование