СПОСОБ РАННЕЙ ДИАГНОСТИКИ ТУБЕРКУЛЕЗА ПЕРИФЕРИЧЕСКИХ ЛИМФАТИЧЕСКИХ УЗЛОВ

СПОСОБ РАННЕЙ ДИАГНОСТИКИ ТУБЕРКУЛЕЗА ПЕРИФЕРИЧЕСКИХ ЛИМФАТИЧЕСКИХ УЗЛОВ


RU (11) 2115925 (13) C1

(51) 6 G01N33/48 

(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ 
Статус: по данным на 26.07.2007 - прекратил действие 

--------------------------------------------------------------------------------

(14) Дата публикации: 1998.07.20 
(21) Регистрационный номер заявки: 95104040/14 
(22) Дата подачи заявки: 1995.03.21 
(45) Опубликовано: 1998.07.20 
(56) Аналоги изобретения: Проблемы туберкулеза, 1984, N 3, с. 36 - 39. 
(71) Имя заявителя: Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт фтизиопульмонологии 
(72) Имя изобретателя: Титаренко О.Т.; Солдатова Н.В.; Баринов В.С.; Прохорович Н.А. 
(73) Имя патентообладателя: Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт фтизиопульмонологии 

(54) СПОСОБ РАННЕЙ ДИАГНОСТИКИ ТУБЕРКУЛЕЗА ПЕРИФЕРИЧЕСКИХ ЛИМФАТИЧЕСКИХ УЗЛОВ 

Изобретение относится к медицине, а именно к фтизиатрии, и может быть использовано в диагностике туберкулеза периферических лимфатических узлов в активной стадии. Известные способы диагностики, основанные на использовании результатов гистологического и бактериологического исследований оперативно удаляемых лимфатических узлов, трудоемки и длительны. В известном способе биохимической диагностики активного туберкулеза периферических лимфатических узлов не указывалась чувствительность и специфичность теста, что не позволяет судить об истинной его диагностической ценности. С целью сокращения сроков диагностики активного туберкулеза периферических лимфатических узлов определяется уровень активности аденозиндезаминазы (АДА) в сыворотке крови, и эта величина сравнивается с пороговым значением и при превышении последнего диагностируется активный туберкулез периферических лимфатических узлов. 


ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ



Изобретение относится к медицине, а именно к фтизиатрии, и может быть использовано в диагностике туберкулеза периферических лимфатических узлов в активной стадии.

В клинической практике туберкулез лимфатических узлов обычно дифференцируют с неспецифическим лимфаденитом и метастазами опухолей. Актуальность ранней диагностики туберкулеза периферических лимфатических узлов определяется низким уровнем решения данной проблемы. Из-за сложностей дифференциально-диагностического процесса на амбулаторном этапе 93% больных госпитализируется в противотуберкулезные учреждения в сроки, превышающие 3 мес. от начала выявления заболевания, нередко с осложнениями специфического процесса - абсцессами, свищами, вторичной инфекцией (Щерба Б.В. К вопросу о дифференциальной диагностике туберкулеза периферических лимфатических узлов и злокачественных опухолей // Пробл.туб. 1992, N 7-8, с. 19- 21).

Известен способ ранней диагностики туберкулеза периферических лимфатических узлов путем гистологического и бактериологического исследования биоптатов или удаленных лимфатических узлов (Щерба Б.В., Беллендир Э.Н., Надежников А. Т. Патогенез, ранняя диагностика и лечение туберкулеза периферических лимфатических узлов // Пробл. туб. 1993, N 2, с. 39-42). Чувствительность гистологического и бактериологического методов исследования не превышает 83 и 65% соответственно (Dandapat M.C., Mishra B.M. Dash S.P., Kar P. К. Peripheral lymph node tuberculosis review of 80 cases // Brit.j.Surgery. 1990, v. 77, n. 8, p. 911- 912). Указанные исследования достаточно трудоемки: выполнение гистологического исследования занимает не менее 10-15 дней, бактериологическое - 3 мес.

Прототипом предлагаемого изобретения является биохимический способ диагностики, заключающийся в определении третьей фракции изофермента лактатдегидрогеназы (ЛДГ3) в сыворотке крови (Долго-Сабурова И.С., Буткарев И.Н. Значение определения изоферментов лактатдегидрогеназы в сыворотке крови в диагностике туберкулеза периферических лимфатических узлов // Пробл.туб., 1984, N 3, с.36-39). Однако он позволяет констатировать лишь наличие активного воспалительного процесса в лимфатических узлах, но не его природу. При этом авторами не приводятся характеристики диагностической ценности метода (чувствительности, специфичности, суммарной диагностической эффективности), а указываются лишь средние значения показателя.

Цель изобретения - разработать биохимический способ ранней диагностики туберкулеза периферических лимфатических узлов, соответствующий по диагностической эффективности (точности) известным способам верификации заболевания (гистологическому и бактериологическому) и обеспечивающий получение результатов в более короткий срок.

Цель достигается тем, что проводят биохимическое исследование в сыворотке крови уровня активности аденозиндезаминазы (АДА; 3.5.4.4.) и, сравнивая его с пороговой величиной, делают вывод о наличии или отсутствии у исследуемого активного туберкулеза периферических лимфатических узлов.

Способ реализуется следующим образом: кровь для исследования берется из вены утром натощак в количестве 3 мл; активность АДА определяется по методу Giusti (Giusti G. Adenosine deaminase. In: Bergmeyer H.U., ed. Methods of enzymatic analysis// New/ York: Academic Press. 1974, vol.2, p.1092-1099). Согласно последнее 50 мкл пробы инкубируют в водяной бане при температуре 37oC с 1,0 мл субстратно-буферной смеси (7,5 ммоль/л аденозин, приготовленный на 50 ммоль/л фосфатном буфере; pH=6,5). После 60-минутной инкубации добавляют 3,0 мл фенол-нитропруссида (106 ммоль/л фенол; 0,17 ммоль/л нитропруссид натрия) и 3,0 мл щелочного р-ра гипохлорита (11 ммоль/л гипохлорит натрия; 125 ммоль/л гидрат окиси натрия). Образовавшийся индофенол определяют спектрофотометрически при длине волны между 620 и 650 н. На каждую пробу ставится контроль, в который исследуемый образец вводится после добавления фенолнитропруссида. Результаты сопоставляются со стандартом (75 мкмоль/л сульфат аммония), который обрабатывается подобно пробе. В контроль на реактивы вместо исследуемого образца вводится 50 мкл воды. Вычисление проводится по формуле



Полученный результат соотносят с пороговым значением показателя, рассчитанным на основании статистической обработки данных клинических исследований с использованием дискриминантного анализа на базе критерия Фишера. Результат исследования, равный или превышающий пороговое значение уровня активности АДА, свидетельствует в 85% случаев в пользу активного туберкулеза периферических лимфатических узлов.

Основанием для выбора фермента АДА в качестве критерия поражения лимфатических узлов является то, что последние представляют собою одно из мест образования Т-лимфоцитов, которым принадлежит важная роль в клеточноопосредованном иммунологическом ответе на туберкулезную инфекцию. Показано, что для специфического процесса свойственен рост числа Т-хелперов (CD4+), которые при туберкулезе лимфоузлов существенно превалируют по сравнению с неспецифическим их поражением над числом Т-супрессоров (Brincker H., Pedersen N. lmmunological marker patterns in granulomatous Lymph node lesions // Histpopathology. 1989, v.15, n.5 p.495-503.). Наряду c этим известно, что пропорционально степени стимуляции Т-хелперов туберкулезными антигенами возрастает активность АДА в биологических жидкостях (Barnes P., Mistry S.D., Cooper C. L., Pirmer C. Compartmentalization of a CD4+ T-lymphocyte subpopulation in tuberculosis pleuritis // J.Immonol. 1989, v.142, n.4, p.1114-1119; Baganha M., Pego A., Lima M., Gaspar E. Serum and pleural adenosine desaminase correlation with lymphocytic populations // Chest. 1990, v.7, n.3, p. 605-610).

Обоснованием для предлагаемого способа являются данные, полученные на основании результатов обследования четырех групп больных с поражением периферических лимфатических узлов. I группу составили 26 больных с активным процессом, II группу - 11 больных с неактивным (леченым) туберкулезом, III группу - 17 больных с опухолевым (первичным или метастатическим) поражением и IV группу 35 больных с неспецифическим воспалением. Диагноз туберкулезного поражения в активной стадии верифицировался положительными результатами гистологического и бактериологического исследований удаленных лимфатических узлов.

В I группе активность АДА равнялась 25,2 1,85 ед/л, во II группе - 12,5 0,96 ед/л, в III группе - 15,2 1,5 ед/л и в IV группе - 14,0 2,4 ед/л. С учетом выделенного в ходе дискриминантного анализа порогового значения уровня АДА, свойственного активному (нелеченному) туберкулезному поражению периферических лимфатических узлов, у больных основной (I группы) активность АДА превышала данную величину в 85% случаев. В остальных (контрольных) группах больных активность АДА была ниже порогового уровня в 94% случаев.

Полученные данные позволяют говорить о высокой диагностической значимости предлагаемого показателя: его чувствительность равняется 85%, специфичность 94%. Соответственно вероятность диагностики наличия или отсутствия активного туберкулеза периферических лимфатических узлов (то есть положительная или отрицательная ценность показателя) обеспечивается исследованием активности АДА в 84% и 94% случаев. Диагностическая эффективность теста при этом составляет 91%.

Примеры реализации заявленного способа.

Пример 1. Больная Ч., 61 года (и.б. N 939) госпитализирована в отделение туберкулеза лимфатической системы СПбНИИФ 10.11.94 г. с подозрением на туберкулезный лимфаденит шеи. Больна 6 месяцев. На шее слева определяется конгломерат лимфоузлов размером 4х5 см; безболезненный, кожа над ним не изменена. 11.11.94 исследована активность АДА сыворотки крови, уровень которой превышал пороговый. Результаты реакции Манту с 2 Т.Е. (14.11.94): кожная реакция 25 мм, общая реакция отрицательная. 7.12.94 удалены лимфоузлы шеи слева. 19.12.94 получены результаты гистологического исследования: в ткани лимфатического узла множественные эпителиоидно-клеточные бугорки и конгломераты бугорков с единичными многоядерными гигантскими клетками типа Пирогова-Ланганса. Заключение: туберкулезный лимфаденит. МБТ и неспецифическая флора не обнаружены.

В данном случае исследование активности АДА позволило высказаться в пользу активного туберкулезного поражения лимфатических узлов шеи на вторые сутки пребывания больной в клинике, тогда как при применении общепринятого диагностического алгоритма, включающего выполнение реакции Манту и гистологическое исследование удаленных лимфоузлов, диагноз был поставлен через 5 недель.

Пример 2. Больной К., 30 лет (и.б. N 553) поступил в отделение туберкулеза лимфатической системы СПбНИИФ 9.06.94 г. с подозрением на туберкулезный лимфаденит левой подмышечной области, где определялось несколько увеличенных узлов размером 2х2 см. Болен 3 месяца. 14.06.94 исследована активность АДА, уровень которой был ниже порогового. Реакция Манту с 2 Т.Е. (14.06.94) - 18 мм. 26.06.94 выполнена операция - удаление лимфоузлов левой подмышечной области. Гистологическое заключение (4.07.94): участок лимфоузла с гиперплазией лимфоидной ткани. МБТ не обнаружены. Заключение: неспецифический лимфаденит.

У данного больного туберкулезная этиология процесса была исключена на основании нехарактерной клинической картины заболевания и гистологического заключения. Уровень активности АДА (ниже порогового) подтверждает полученные результаты.

Предлагаемый способ отличается от наиболее близкого аналога тем, что впервые в качестве биохимического показателя используют величину активности АДА в сыворотке крови в целях диагностики активного туберкулеза периферических лимфатических узлов. Предлагаемый признак позволяет значительно сократить сроки этиологической диагностики туберкулеза периферических лимфатических узлов в активной стадии по сравнению с аналогом и известными способами. 


ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ



Способ ранней диагностики активного туберкулеза периферических лимфатических узлов путем биохимических исследований, отличающийся тем, что определяют уровень активности аденозиндезаминазы (АДА) в сыворотке крови больных и при превышении им порогового значения диагностируют активный туберкулез периферических лимфатических узлов.