СПОСОБ УМЕНЬШЕНИЯ УСТОЙЧИВОСТИ МИКОБАКТЕРИЙ ТУБЕРКУЛЕЗА К РИФАМПИЦИНУ И ЭТАМБУТОЛУ В ЭКСПЕРИМЕНТЕ

СПОСОБ УМЕНЬШЕНИЯ УСТОЙЧИВОСТИ МИКОБАКТЕРИЙ ТУБЕРКУЛЕЗА К РИФАМПИЦИНУ И ЭТАМБУТОЛУ В ЭКСПЕРИМЕНТЕ


RU (11) 2185162 (13) C2

(51) 7 A61K31/395, A61P31/06 

(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ 
Статус: по данным на 26.07.2007 - прекратил действие, но может быть восстановлен 

--------------------------------------------------------------------------------

(14) Дата публикации: 2002.07.20 
(21) Регистрационный номер заявки: 99122793/14 
(22) Дата подачи заявки: 1999.10.28 
(24) Дата начала отсчета срока действия патента: 1999.10.28 
(45) Опубликовано: 2002.07.20 
(56) Аналоги изобретения: РУДОЙ Н.М. Лекарственная устойчивость микобактерий туберкулеза (значение в клинике и эпидемиологии туберкулеза) . - М., 1969, с.30-37. RU 2033159 C1, 20.04.1995. АЛЬТШУЛЛЕР М.И. Новое понимание феномена устойчивости к лекарствам на примере рифампицинрезистентности у Micobacterium tuberculosis. Экспериментальная и клиническая медицина. - Харьков, 1999, №2, с.24-26. ВАСИЛЬЕВА И.А. Эффективность двухэтапной краткосрочной химиотерапии туберкулеза. Дисс. к.м.н. - М., 1997, с.163. НАВАШИН С.М. и др. Рациональная антибиотикотерапия. Справочник. Изд. четвертое, переработанное и дополненное. - М.: Медицина, 1982, с.165-166. 
(71) Имя заявителя: Московская медицинская академия им. И.М.Сеченова 
(72) Имя изобретателя: Куничан А.Д.; Соколова Г.Б.; Иванов В.Э.; Дорожкова И.Р. 
(73) Имя патентообладателя: Московская медицинская академия им. И.М.Сеченова 
(98) Адрес для переписки: 119992, Москва, ул. Б. Пироговская, 2/6, ММА им. И.М.Сеченова, НИЦ, патентная служба 

(54) СПОСОБ УМЕНЬШЕНИЯ УСТОЙЧИВОСТИ МИКОБАКТЕРИЙ ТУБЕРКУЛЕЗА К РИФАМПИЦИНУ И ЭТАМБУТОЛУ В ЭКСПЕРИМЕНТЕ 

Изобретение относится к медицине, в частности к фтизиатрии, и может быть использовано для лечения туберкулеза. В камеры с культурой легочной ткани мышей, зараженной микобактериями туберкулеза, устойчивыми к рифампицину и этамбутолу, которые используют в концентрациях 1-2 мкг/мл, добавляют циклосерин в концентрации 15 мкг/мл. Данное изобретение способствует уменьшению устойчивости микобактерий туберкулеза к противотуберкулезным препаратам рифампицину и этамбутолу. 1 табл. 


ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ



Изобретение относится к медицине, в частности к фтизиатрии, и может быть использовано при лечении туберкулеза.

Борьба с лекарственной устойчивостью микобактерий туберкулеза является одной из наиболее актуальных проблем современной фтизиатрии. От 37 до 50% впервые выявленных больных с бациллярными формами туберкулеза выделяют микобактерии, устойчивые к основным противотуберкулезным препаратам.

Известен способ лечения туберкулеза с применением рифампицина, включающий антибактериальную терапию с применением стрептомицина, изониазида, рифампицина.

Данный способ неэффективен в борьбе с лекарственной устойчивостью микобактерий туберкулеза к рифампицину и этамбутолу (а.с. 1512611 A 61 К 3/00 27.10.88).

Известен способ лечения деструктивного туберкулеза легких, включающий введение рифампицина при распространенном процессе (а.с. 1513426 G 01 N 33/53 02.07.87).

Однако этот способ не решает проблемы устойчивости микобактерий туберкулеза к рифампицину и этамбутолу.

Известно, что циклосерин используется в комбинации с противотуберкулезными препаратами первого и второго ряда при лечении туберкулеза (М.Д. Машковский. "Лекарственные средства", М., 1993, т. 2, с.381).

Однако в данном случае циклосерин применяется для предупреждения устойчивости микобактерий туберкулеза к противотуберкулезным препаратам, а не для уменьшения уже развившейся устойчивости, в частности к рифампицину и этамбутолу.

Наиболее близким аналогом является способ лечения туберкулеза, при котором для уменьшения или ликвидации ранее приобретенной устойчивости микобактерий туберкулеза к изониазиду, стрептомицину и ПАСК применяется циклосерин (по А.Е.Рабухину в кн.: "Химиотерапия больных туберкулезом", М., 1970; Н.М. Рудой в кн.: "Лекарственная устойчивость микобактерий туберкулеза (значение в клинике и эпидемиологии туберкулеза), М., 1969; Meissner G. Prax. Pneumol. , 1965, Н. 19, S. 387).

Однако в описаниях этого способа отсутствуют данные о влиянии циклосерина на устойчивость микобактерий туберкулеза к рифампицину и этамбутолу.

Задача - уменьшение устойчивости микобактерий туберкулеза к противотуберкулезным препаратам рифампицину и этамбутолу.

Поставленная задача решается путем добавления к рифампицину, этамбутолу или к их смеси циклосерина.

Для доказательства решения поставленной задачи приводим описание проведенных исследований.

Исследования проведены в культуре легочной ткани мышей. Культивирование вели методом эксплантации в специальных фторопластовых перфузионных камерах. Эксплантаты легочной ткани получали из дистальных участков легких и помещали на покровные стекла, жестко приклеенные к камерам. Кусочки ткани фиксировали к стеклу плазмой крови кролика. Затем в камеры вводили питательную среду 199, герметизировали и помещали в термостат при температуре 37oС. Продолжительность инкубации составляла 5 дней. Наблюдение за выселением и ростом вели ежедневно в фазовом контрасте под инвертированным микроскопом МБИ-13 (ЛОМО). За время наблюдения вокруг эксплантата образовалась обширная клеточная зона. Затем питательную среду путем перфузии заменяли на среду, содержащую микобактерии туберкулеза, устойчивые к рифампицину и этамбутолу, 10% сыворотки крупного рогатого скота и лекарственные препараты. Рифампицин и этамбутол вводили в бактериостатических концентрациях (1 и 2 мкг/мл соответственно), циклосерин - в суббактериостатической концентрации (15 мкг/мл) с тем, чтобы он не подавлял полностью рост микобактерий туберкулеза. Провели серию экспериментов.

В результате в камерах без препаратов, а также в камерах с рифампицином и этамбутолом, появление первых мелких типичных микроколоний микобактерий туберкулеза (МВТ) отмечалось уже на 4-й день после инфицирования ими культуры ткани. К 7-му дню после инокуляции МБТ наблюдалось следующее:

а) в камерах без препаратов (1-я группа) насчитывалось до 1200101 микроколоний МБТ на 100 полей зрения в пределах зоны выселения и роста клеточных элементов и до 1405l16,2 за ее пределами;

б) в камерах с рифампицином (2-я группа) - соответственно 1085104 и 122589,2 микроколоний МБТ на 100 полей зрения;

в) в камерах с этамбутолом (3-я группа) - соответственно 67540,3 и 78535,9 микроколоний МБТ на 100 полей зрения.

Рост микроколоний МБТ в камерах опытных серий с циклосерином и его комбинациями с рифампицином и этамбутолом начинал визуально определяться с значительной задержкой по сравнению с контролем (с 10-11-го дня после инфицирования культуры ткани).

В камерах с циклосерином на 18-й день после инфицирования насчитывалось 9611,4 микроколоний МБТ на 100 полей зрения в клеточной зоне, а за ее пределами - 10511,1.

Значимо меньшим было количество микроколоний МБТ в камерах, содержавших комбинации циклосерин + рифампицин (в пределах клеточного массива 656,2 и за его пределами 715,3 микроколоний МБТ на 100 полей зрения; Р<0,05), циклосерин + этамбутол (соответственно 606,3 и 695,3 микроколоний МБТ на 100 полей зрения; Р<0,05). Наибольший бактериостатический эффект наблюдался при тройной комбинации препаратов: циклосерин + рифампицин + этамбутол (соответственно 443,7 и 513,4 микроколоний на 100 полей зрения; Р<0,01).

С учетом времени появления видимых микроколоний МБТ и их количества циклосерин оказывал бактериостатическое действие на микроорганизмы, устойчивые к рифампицину и этамбутолу. Это действие усиливалось под влиянием рифампицина и этамбутола в двойной комбинации каждого из них с циклосерином и было особенно выраженным при использовании комбинации всех трех препаратов. Указанные изменения роста микобактерий туберкулеза свидетельствуют о том, что в условиях культуры легочной ткани циклосерин снижает устойчивость микроорганизмов к рифампицину и этамбутолу.

Таким образом, предлагаемый способ позволит уменьшить устойчивость микобактерий туберкулеза к противотуберкулезным препаратам рифампицину и этамбутолу, позволит повысить эффективность лечения лекарственно резистентного туберкулеза, уменьшить процент больных с бациллярными формами туберкулеза, выделяющих микобактерии, устойчивые к основным противотуберкулезным препаратам. 


ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ



Способ уменьшения устойчивости микобактерий туберкулеза к рифампицину и этамбутолу или их смеси циклосерином в эксперименте, отличающийся тем, что рифампицин и этамбутол используют в концентрациях 1-2 мкг/мл, а циклосерин - в концентрации 15 мкг/мл.