СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СТЕПЕНИ АКТИВНОСТИ СИЛИКОТУБЕРКУЛЕЗА

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СТЕПЕНИ АКТИВНОСТИ СИЛИКОТУБЕРКУЛЕЗА


RU (11) 2079124 (13) C1

(51) 6 G01N1/28 

(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ 
Статус: по данным на 26.07.2007 - прекратил действие 

--------------------------------------------------------------------------------

(14) Дата публикации: 1997.05.10 
(21) Регистрационный номер заявки: 94031546/14 
(22) Дата подачи заявки: 1994.08.29 
(45) Опубликовано: 1997.05.10 
(56) Аналоги изобретения: Ватолина В. А., Нечаева 0. Б. и Гольдеман А. Г. Информационное письмо Свердловского филиала НПО " Фтизиопульмонология" Минздрава РСФСР и Свердловского медицинского научного центра профилактики и охраны здоровья рабочих промышленных предприятий Минздрава РСФСР. Свердловск, 1989, с. 8 - 9. 
(71) Имя заявителя: Свердловское областное объединение "Фтизиопульмонология" (Областной противотуберкулезный диспансер); Медицинский научный центр профилактики и охраны здоровья рабочих промпредприятий 
(72) Имя изобретателя: Науменко Е.С.; Чуканов В.И.; Гольдельман А.Г.; Жовтяк Е.П.; Берг Д.Б. 
(73) Имя патентообладателя: Свердловское областное объединение "Фтизиопульмонология" (Областной противотуберкулезный диспансер); Медицинский научный центр профилактики и охраны здоровья рабочих промпредприятий 

(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СТЕПЕНИ АКТИВНОСТИ СИЛИКОТУБЕРКУЛЕЗА 

Изобретение относится к области медицины, а именно фтизиатрии и профпатологии, и касается диагностики активности силикотуберкулеза. Сущность изобретения: исследуют методом поляризационной микроскопии жидкокристаллическую картину сыворотки крови, сравнивая две пробы с туберкулином и без него, определяя наличие характерных для силикотуберкулеза веерных, конфокально-полигональных текстур и жидкокристаллических линий. При их исчезновении в образце с туберкулином с полностью или частично диагностируется активный силикотуберкулез. Положительный эффект: предлагаемый способ повышает точность и достоверность диагностики активности силикотуберкулеза, позволяет уточнить диагноз на раннем этапе развития силикотуберкулезного процесса и своевременно начать специфическую терапию. 5 ил. 


ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ



Изобретение относится к области медицины, а именно фтизиатрии и профпаталогии, и касается диагностики активности силикотуберкулеза.

Известен способ диагностики активности силикотуберкулеза на основании данных рентгенографического исследования грудной клетки по скиалогической картине теней легких и ее изменениям в процессе наблюдения и пробного лечения больных с данным заболеванием (Дубынина В.П. Силикотуберкулез: клиника, диагностика, лечение. -М. Медицина, 1976, с.42-47). Однако рентгенография грудной клетки является поздним индикатором активности силикотуберкулезного процесса. Многочисленными исследованиями показано, что данный процесс с явными рентгенологическими признаками активности является далеко зашедшим и плохо поддающимся терапевтическому воздействию (Гольдельман А.Г. Зислин Д.М. Силикотуберкулез как клиническая проблема. Свердловск: Издательство Уральского университета, 1989, с.82-116).

Наиболее близким по сущности способом диагностики активности силикотуберкулезного процесса является подкожная туберкулиновая проба с 20 TE. Способ состоит в следующем: определяется уровень гамма-глобулинов сыворотки крови, абсолютное число лимфоцитов, T-лимфоцитов, альбумино-глобулиновый коэффициент, уровень гамма-глобулинов и реакция торможения миграции лимфоцитов до и после подкожного введения туберкулина. Результат считается положительным при отклонении не менее 2 из 6 показателей на 20 и более процентов (Ватолина В. А. Нечаева О.Б. Гольдельман А.Г. Информационное письмо Свердловского филиала НПО "Фтизиопульмонология" Минздрава РСФСР и Свердловского Медицинского научного центра профилактики и охраны здоровья рабочих промышленных предприятий Минздрава РСФСР. Свердловск, 1989. с.8-9).

Однако известный способ имеет существенные недостатки: больным с гиперчувствительностью к туберкулину (по результатам пробы Манту) противопоказано введение больших доз туберкулина, у значительного числа больных, особенно с нередко выраженной картиной пневмокониоза и малыми формами туберкулеза, подкожная туберкулиновая проба дает отрицательный результат. Известный способ является весьма трудоемким и результат известен лишь на четвертые сутки.

Задачей изобретения является повышение точности и достоверности способа диагностики активности силикотуберкулеза за счет определения особенностей структурно-оптических свойств сыворотки крови кристаллоскопическим методом в присутствии туберкулина in vitro.

Указанная задача решается следующим образом. В качестве биологически активной жидкости берется сыворотка крови больного. Методом поляризации микроскопии определяют жидкокристаллические структуры (текстуры) и проводят их сравнение в пробах с туберкулином и без него. При исчезновении хотя бы одной из характерных для силикотуберкулеза -веерной, конфокально-полигональной текстурой или жидко-кристаллических линий в образце с туберкулином - диагностируется активный силикотуберкулезный процесс.

Предлагаемый способ отличается от прототипа тем, что туберкулиновая проба проводится не в живом организме, a in vitro. Это позволяет избегнуть различных осложнений, противопоказаний и создать оптимальную концентрацию туберкулина в сыворотке крови, тем самым повысить достоверность получаемых результатов. Использование данного способа повышает точность и достоверность ранней диагностики активности силикотуберкулезного процесса.

За счет сокращения количества операций предлагаемого способа снижается трудоемкость и длительность исследования.

В доступной нам литературе данных об определении активности силикотуберкулезного процесса этим способом мы не встретили.

Способ осуществляется следующим образом. Для исследования берется сыворотка крови (СК) больного силикотуберкулезом после центрифугирования в объеме 1-3 мл. Готовится раствор туберкулина (РТ): 1 амп. на 5 мл.физиологического раствора (5000 TE/мл)(туберкулин очищенный лиофилизированный, предприятия по производству бактерийных препаратов Ленинградского НИИ вакцин и сывороток).

Рабочие пробы для исследований готовят следующим образом:

СК делится на две равные части,

к первой, контрольной, добавляется равный объем физиологического раствора (маркировка СФ),

ко второй, испытуемой (туберкулиновая проба), добавляется равный объем раствора РТ (маркировка СТ).

После приготовления рабочие пробы выдерживаются 1 сутки при комнатной температуре.

Для исследования кристаллизационных структур СК в жидкокристаллической липидной матрице (лицитин стандарт 10%-ный спиртовой раствор производства Харьковского завода бакпрепаратов) используются полированные предметные стекла, специально обработанные для создания условий слабой связи раствора с подложкой. Покровные стекла обычные. Кристаллизационные пробы готовятся в "сэндвич-ячейке", образованной предметным и покровным стеклами.

На предметное стекло наносится 10 мкл раствора СК и 5 мкл спиртового раствора лецитина. Сверху капля накрывается покровным стеклом. Приготовленные образцы выдерживаются при комнатной температуре в течение 1 суток, после чего проводится сравнительный анализ образующих кристаллизационных текстур методом поляризационной микроскопии на микроскопе ПОЛАМ Р-211 производства ЛОМО.

В клинических условиях изучено 56-ть больных. Все они были обследованы в условиях клиники областного кониоцентра, расположенного на базе Свердловского областного объединения "Фтизиопульмонология". Больные были разделены на три группы. В I группу вошли 12-ть больных силикотуберкулезом, группу II составили 33-и больных туберкулезом легких, в группу III, контрольную, включены 11-ть человек с разнообразной легочной и не легочной патологией. Группы были сопоставимы по полу и по возрасту. При изучении проб из первой группы было установлено, что при силикотуберкулезе в пробе СФ в 100% случаев присутствуют веерные (фиг.1), конфокально-полигональные (фиг.2) текстуры и текстуры в виде жидкокристаллических линий (фиг.3). У больных с активным силикотуберкулезом в пробе СТ отмечается исчезновение одной или нескольких данных, характерных для силикотуберкулеза, текстур. Данные об активности силикотуберкулезного процесса подтверждены другими общепринятыми методами, а также динамическим наблюдением за этими больными.

У больных активным туберкулезом в образце с СТ отмечалось общее увеличение количества текстур, в основном за счет миелиновых и атипичных форм. У ряда больных также отмечается появление жидкокристаллических линий и конфокально-полигональных текстур. Эти результаты согласуются с данными других авторов (Рогожина Н.А. Бабин М.М. с соавт. Определение активности туберкулеза легких поляризационной микроскопией жидких кристаллов //Пробл.туберкулеза. 1993, N5, с.50). При изучении текстур контрольной группы каких-либо закономерностей, аналогичных вышеописанным, выявить не удалось.

В качестве примера приводим краткую выписку из истории болезни.

Больной Т в, 67 лет, стаж работы (формовщиком) в условиях воздействия кремнеземсодержащей пыли 18 лет. В течение 19 лет страдает силикозом. Ухудшение самочувствия отмечается в течение 1,5 лет: наросла одышка, усилился кашель, появилась потливость и боли в грудной клетке.

При объективном обследовании легких грудная клетка бочкообразной формы, перкуторно звук коробочный, аускультативно на фоне ослабленного дыхания единичные сухие хрипы. Рентгенологически определяется диффузное усиление и деформация легочного рисунка по сетчато-петлистому типу, на этом фоне множественные узелковые тени размером до 2 мм. Слева в первом межреберье определяется крупноочаговая тень средней интенсивности размером 1,2х1,2 см. Заключение: силикотуберкулез. Силикоз I-II. Очаговый туберкулез второго сегмента верхней доли левого легкого неясной активности. При бронхоскопии выявлен двухсторонний диффузный эндобронхит с неспецифическим воспалением I степени. Исследование функции внешнего дыхания показало наличие значительных нарушений вентиляции по смешанному типу. Реакция Манту с 2 TE 3 мм.

Лабораторные данные:

Микобактерии туберкулеза в мокроте не обнаружены при восьмикратном исследовании методом люминесцентной микроскопии и посевом.

Общий анализ крови в пределах нормы.

Содержание общего белка в сыворотке крови 72,9 г/л.

Альб./глоб. индекс 1,25.

Содержание Т-лимфоцитов 42% B-лимфоцитов 6% IgG 14,5 г/л, IgM 2,3 г/л, IgA 2,2 г/л. C- реактивный протеин отрицательный. Подкожная туберкулиновая проба расценена как сомнительная.

При проведении туберкулиновой пробы in vitro методом поляризационной микроскопии жидкокристаллических текстур сыворотки крови в образце с туберкулином выявлено исчезновение двух из трех обязательных типов текстур - конфокально- полигональной (фиг.4) и жидкокристаллических линий (фиг.5), что соответствует диагнозу активного силикотуберкулезного процесса. Заключение: силиконотуберкулез. Силикоз I-II. Очаговый туберкулез верхней доли левого легкого в фазе инфильтрации.

После 4-месячного курса комбинированной антибактериальной терапии в сочетании с иммуномодуляторами отмечается нормализация общего состояния больного и при рентгенологическом исследовании легких,почти полное рассасывание крупноочаговой тени во втором сегменте левого легкого.

Основными преимуществами данного способа определения активности силикотуберкулеза по сравнению с прототипом являются:

повышение точности и достоверности диагностики активности силикотуберкулеза;

возможность диагностики активности силикотуберкулеза на ранних этапах его развития, когда другие методы малоинформативны;

время, затрачиваемое на диагностику, по сравнению с прототипом сокращается в два раза;

за счет снижения количества операций снижается трудоемкость способа. 


ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ



Способ определения степени активности силикотуберкулеза путем лабораторного исследования сыворотки крови до и после проведения туберкулиновой пробы, отличающийся тем, что туберкулиновую пробу проводят in vitro, а сыворотку исследуют методом поляризационной микроскопии, при этом выявляют 3 вида кристаллизационных структур: веерные, конфокально-полигональные текстуры, а также жидкокристаллические линии, и при исчезновении хотя бы одного из видов названных структур в образце в сравнении с исходным определяют активную степень заболевания.