СПОСОБ И КОМПОЗИЦИЯ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ АСТМЫ

СПОСОБ И КОМПОЗИЦИЯ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ АСТМЫ


RU (11) 2179445 (13) C2

(51) 7 A61K31/727, A61K9/12, A61P11/06 

(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ 
Статус: по данным на 26.07.2007 - действует 

--------------------------------------------------------------------------------

(14) Дата публикации: 2002.02.20 
(21) Регистрационный номер заявки: 98104512/14 
(22) Дата подачи заявки: 1996.08.13 
(24) Дата начала отсчета срока действия патента: 1996.08.13 
(43) Дата публикации заявки: 2000.01.10 
(45) Опубликовано: 2002.02.20 
(56) Аналоги изобретения: RU 2039581 C1, 20.07.1995. US 5389618 A, 14.02.1995. БАЛАБАН С.Я. и др. Способ применения фонофореза гепарина при бронхиальной астме - Здравоохранение Таджикистана, 1990, № 4, с. 103-104. КОВАЛЕНКО В.Н. и др. Применение раствора гепарина в комплексном лечении больных хроническим бронхитом и бронхиальной астмой. - V съезд фтизиатров Белоруссии, Минск, 1989, с. 283-284. ASHKIN et al - The effect of low molecular weight heparin on antigen - induced bronchoconctriction and airway hyperresp - onsiveness in sheep. - Am. Rev. Resp. Dis., 1993, № 147, р. А 660. AHMED et al Inhaled heparin an anti-allergic (anti-astmatic) agent. - Resp. Drug. Delivery, IV, 1994, 55-63. 
(71) Имя заявителя: БЕЙКЕР НОРТОН ФАРМАСЬЮТИКАЛЗ, ИНК. (US) 
(72) Имя изобретателя: АХМЕД Тахир (US); БРОДЕР Сэмюель (US); ВИСНАНТ Джон К. (US) 
(73) Имя патентообладателя: БЕЙКЕР НОРТОН ФАРМАСЬЮТИКАЛЗ, ИНК. (US) 
(74) Патентный поверенный: Лебедева Наталья Георгиевна 
(85) Дата соответствия ст.22/39 PCT: 1998.03.18 
(86) Номер и дата международной или региональной заявки: US 96/13133 (13.08.1996) 
(87) Номер и дата международной или региональной публикации: WO 97/06783 (27.02.1997) 

(54) СПОСОБ И КОМПОЗИЦИЯ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ АСТМЫ 

Изобретение относится к медицине, в частности к пульмонологии и аллергологии и касается лечения пациента, страдающего антиген-индуцированной астмой, и снижения гиперреактивности дыхательных путей. Способ включает интрабронхиальное введение указанному пациенту фармацевтической композиции, содержащей в каждой дозе от 0,05 до 1,0 мг ультранизкомолекулярных гепаринов, имеющих средний молекулярный вес 3000 дальтон или менее, на 1 кг веса тела пациента. Также созданы фармацевтические композиции для ингаляции для использования в новом способе лечения. Способ обеспечивает купирование бронхоконстрикции при уменьшении осложнений лечения. 3 с. и 31 з. п. ф-лы, 11 ил. , 7 табл. 


ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ



Эта заявка охватывает материал, включенный в описание заявки 377066, поданной в Патентное Ведомство США 23 июня 1995.

Это изобретение относится к способам и композициям для предупреждения и обратного развития симптомов и проявлений астмы.

Хроническую астму можно рассматривать, главным образом, как воспалительное заболевание, сопровождающееся бронхоспаз-мом. Степень реактивности и сужения бронхов в ответ на раздражитель у лиц, страдающих астмой, выше, чем у здоровых людей. Стойкое воспаление служит причиной гиперреактивности или гиперчувствительности дыхательных путей. Может наблюдаться также отек слизистой оболочки, закупорка бронхов слизью и гиперсекреция; паренхима легких остается нормальной. Сужение дыхательных путей может претерпевать обратное развитие спонтанно или под влиянием лечения. Иммунный ответ типа 1 (немедленный) может играть важную роль в развитии астмы у детей и многих взрослых; однако, если заболевание начинается во взрослом возрасте, идентифицировать аллергические факторы бывает трудно. Воздействие холодного воздуха, физической нагрузки и прочие отягощающие факторы также могут являться фактором, вызывающим астму.

Наиболее распространенными симптомами астмы являются одышка и чувство стеснения в груди; что проявляются также стерторозное дыхание, одышка и кашель. Обычно наблюдается снижение легочной функции скорее по обструктивному, чем по рестриктивному типу. Часто бессимптомные периоды чередуются с приступами.

Среди известных факторов, вызывающих астму, наибольшее внимание привлекают аллергены и физическая нагрузка. Оба этих фактора являются мощными, встечающимися в естественных условиях раздражителями; физическая нагрузка имеет большое значение в обыденной жизни каждого больного астмой, в то время как аллергены воздействуют лишь на некоторых из них. Тем не менее, об эффектах антигена известно больше всего.

Основными целями лекарственного лечения астмы являются предотвращение бронхоспазма и долгосрочный контроль над гиперреактивностью бронхов. Поскольку ни пациент, ни врач обычно не могут предсказать, когда случится бронхоспазм, пациенты как с эпизодическими, так и/или с исключительно сезонными приступами могут нуждаться в непрерывной терапии.

В качестве бронхорасширяющих агентов используют бета-агонисты; они стимулируют бета2-адренергические рецепторы, повышают содержание внутреклеточного цАМФ и могут ингибировать высвобождение медиаторов тучных клеток. Другие пригодные лекарственные средства включают теофиллин и родственные ему препараты ксантинового ряда, которые вызывают бронходилатацию благодаря неизвестным механизмам; бискромон, кромолин, которые предотвращают высвобождение медиаторов и блокируют нейрональные рефлексы респираторного тракта, а также кортикостероиды, которые прежде всего уменьшают воспаление и отек. Облегчить бронхоспазм могут антихолинергические препараты, которые блокируют парасимпатические холинергические импульсы на уровне рецепторов. Антигистаминные препараты в некоторых случаях предотвращают или купируют аллергические астматические приступы, особенно у детей, но они могут быть эффективными при астме только частично, поскольку гистамин только один из многих медиаторов.

Современные лекарственные средства, применяемые для лечения аллергической астмы, имеют ряд недостатков. В целом, известные агенты имеют относительно короткую продолжительность действия и могут быть частично или полностью неэффективными, если применяются после того, как антигенная провокация уже состоялась. Более того, из-за серьезных побочных эффектов, связанных с применением таких агентов, как агонисты бета2-адренорецепторов и кортикостероиды, терапевтический интервал безопасности таких агентов относительно узок и пациенты, которые их принимают, нуждаются в тщательном наблюдении.

Гиперреактивность бронхов (или гиперчувствительность дыхательных путей) является отличительным признаком астмы и тесно связана с предшествующим воспалением дыхательных путей. Ухудшение течения астмы и воспаления дыхательных путей связано с повышением гиперреактивности бронхов, которая может вызываться как антигенными, так и неантигенными раздражителями. Агонисты бета2-адренорецепторов являются мощными агентами для лечения бронхоспазма, однако они не воздействуют на воспаление дыхательных путей или гиперреактивность бронхов. Постоянное применение только агонистов бета2-адренорецепторов в отдельности может ухудшить гиперреактивность бронхов в силу снижения чувствительности бета2-адренорецепторов. В настоящее время кортикостероиды являются единственными доступными эффективными агентами, уменьшающими гиперреактивность бронхов. Хотя ингаляционные кортикостероиды являются относительно безопасными для взрослых пациентов, страдающих астмой, эти агенты обладают огромной токсичностью у детей, включая подавление функции надпочечников, а также снижение плотности костей и задержку роста. Таким образом, поиск более безопасных и эффективных агентов, которые уменьшали бы гиперреактивность бронхов, продолжается.

В течение нескольких последних лет было установлено, что гепарин, вводимый интрабронхиально, может быть эффективным ингибитором бронхоспазма и бронхоконстрикции и, следовательно, является ценным агентом для профилактики астмы (см. , например, Ahmed et al. New Eng. J. Med. , 329: 90-95, 1993; Ahmed, Resp. Drug Deliv. , 1V: 55-63, 1994). Было установлено, что низкомолекулярные гепарины, например гепарины со средним молекулярным весом 4 000 - 5 000 дальтон, эффективно предотвращают индуцированную антигеном бронхоконстрикцию; эти низкомолекулярные гепарины также демонстрируют значительно меньшую антикоагулянтную активность по сравнению с коммерческим гепарином, что является желательным свойством, когда эти агенты используют для лечения астмы (см. Ashkin et al. Am. Rev. Resp. Dis. , 1993, Intl. Conf. Abstracts, стр. А660).

В то время как было обнаружено, что различные гепарины пригодны в качестве профилактических агентов, если вводятся до антигенной провокации, тем не менее они ранее описывались как неэффективные в отношении изменения бронхоконстрикторной реакции и гиперреактивности дыхательных путей при введении после антигенной провокации (Ahmed et al. J. Appl. Physiol. , 76: 893-901, 1994).

Целью настоящего изобретения является создание способа и композиций для лечения астмы, индуцированной антигеном, и гиперреактивности бронхов, которые не имели бы недостатков, описанных в предшествующем уровне.

Еще одной целью настоящего изобретения является создание способа и композиций для лечения астмы, которые были бы эффективными для предотвращения и обратного развития проявлений астматического приступа.

Еще одной целью настоящего изобретения является создание способа и композиций, которые были бы высокоэффективными для уменьшения специфической и неспецифической гиперреактивности бронхов даже при введении пациенту после антигенной провокации.

Преследуя эти и другие цели, которые станут понятны из дальнейшего описания, настоящее изобретение включает способ лечения пациента, страдающего антиген-индуцированной астмой, посредством интрабронхиального введения указанному пациенту фармацевтической композиции, включающей приблизительно от 0,05 до 1,0 мг ультранизкомолекулярных гепаринов на килограмм тела пациента в каждой дозе. Введение этих гепаринов может представлять собой неотложную терапию после антигенной провокации или длительную терапию для подавления гиперреактивности бронхов.

Ультранизкомолекулярные гепарины, использующиеся в настоящем изобретении, имеют средний молекулярный вес менее 3 000 дальтон и могут демонстрировать низкую антикоагулянтную активность или же практически не иметь этой активности вовсе. Новые ингаляционные композиции создаются в форме жидких или порошковых распыляющихся или аэрозольных композиций, содержащих подходящие концентрации ультранизкомолекулярных гепаринов.

Фиг. 1 представляет собой диаграмму, иллюстрирующую влияние предварительного лечения ингаляционным ультранизкомолекулярным гепарином (CY222) в различных дозах на антиген-индуцированную острую бронхоконстрикцию у овец с аллергией. Данные представлены в виде антиген-индуцированного среднего СКО% изменения СЛС с предварительным лечением CY222 и без него.

СЛС = специфическое легочное сопротивление

+ = значимо отличается от антигенного контроля (р<0,05). СКО% изменения СЛС с предварительным лечением CY216 и без него.

Фиг. 3 представляет собой диаграмму, иллюстрирующую влияние предварительного лечения ингаляционным гепарином со средним молекулярным весом (фрагмином - Fragmin) на антиген-индуцированную острую бронхоконстрикцию у овец с аллергией. Данные представлены в виде антиген-индуцированного среднего СКО% изменения СЛС с предварительным лечением фрагмином и без него.

Фиг. 4 представляет собой диаграмму, иллюстрирующую влияние предварительного лечения ингаляционным ультранизко-молекулярным гепарином (CY222) на антиген-индуцированную гиперчувствительность дыхательных путей у овец с алергией. Данные представлены в виде постантигенного среднего CKO ПД4 в процентах от исходных значений с предварительным лечением CY222 и без него.

ПД4 = комулятивная провоцирующая доза карбахола, повышающая СЛС до 400% от исходных значений.

+ = значимо отличается от антигена в отдельности (р<0,05). CKO ПД4 в процентах от исходных значений с предварительным лечением CY216 и без него.

Фиг. 6 представляет собой диаграмму, иллюстрирующую влияние предварительного лечения ингаляционным гепарином со средним молекулярным весом (фрагмином - Fragmin) на антигениндуцированную гиперчувствительность дыхательных путей у овец с аллергией. Данные представлены в виде постантигенного среднего СКО ПД4 в процентах от исходных значений с предварительным лечением фрагмином и без него.

Фиг. 7 представляет собой график, иллюстрирующий сравнительные защитные влияния ингаляционных CY222, CY216 и фрагмина на антиген-индуцированную острую бронхоконстрикторную реакцию (ОБР) у овец с аллергией. Данные представлены в виде постантигенной средней СКО% защиты от антиген-индуцированной ОБР. Толстые горизонтальные полоски представляют ИД50.

+ = значимо отличается от фрагмина (р<0,05) СКО защиты от антиген-индуцированных изменений ПД4.

Фиг. 9 представляет собой диаграмму, иллюстрирующую влияние CY222 на антиген-индуцированную гиперчувствительность дыхательных путей при его введении в виде аэрозоля немедленно после антигенной провокации.

+ = значимо отличается от исходных значений (р<0,05)

Фиг. 11 представляет собой диаграмму, иллюстрирующую влияние фрагмина на антиген-индуцированную гиперчувствительность дыхательных путей при его введении в виде аэрозоля немедленно после антигенной провокации.

Гепарин, сульфатированный мукополисахарид, синтезируется в тучных клетках в виде протеогликана и в избытке присутствует в легких различных животных. Гепарин не является конкретным соединением с постоянным молекулярным весом, а представляет собой в действительности гетерогенную смесь в различной степени сульфатированных полисахаридных цепей, состоящих из повторяющихся фрагментов D-глюкозамина и или L-идуроновой, или D-глукороновой кислоты. Средний молекулярный весь гепарина, выделенного из тканей животных, варьирует в пределах приблизительно от 6000 до 30000 дальтон.

Фармакологически гепарин известен, прежде всего, как антикоагулянт. Эта активность гепарина возможна благодаря его способности связываться с некоторыми остатками антитромбина III (AT-III), ускоряя нейтрализацию этим агентом активированных факторов свертывания крови и предотвращая превращение протромбина в тромбин. Большие количества гепарина могут инактивировать тромбин и более ранние факторы свертывания крови, предотвращая превращение фибриногена в фибрин.

Противосвертывающая активность гепарина связана с молекулярным весом его полисахаридных фрагментов; низкомолекулярные компоненты или фрагменты (например, фрагменты с молекулярным весом менее 6000 дальтон) обладают умеренным и малым антитромбиновым и геморрагическим влиянием. Подобно этому, низкомолекулярные гепарины, выделенные из тканей животных, имеют пониженные противосвертывающие свойства, поскольку они состоят в основном из низкомолекулярных фрагментов или фракций.

Коммерческий гепарин, который в основном получают из легких крупного рогатого скота или слизистой оболочки кишечника свиней, имеет средний молекулярный вес около 15000-17500 дальтон.

Показано, что гепарин действует как специфический блокатор рецепторов IP3 и ингибирует опосредуемое IP3 высвобождение кальция. Ранее мы высказали предположение о том, что гепарин может блокировать рецепторы IP3 в тучных клетках и, таким образом, препятствуя передаче сигналов, может модулировать дегрануляцию тучных клеток и высвобождение медиаторов. Исследования in vivo и in vitro подтвердили это предположение и продемонстрировали, что вдыхаемый гепарин может ослаблять аллергическую бронхоконстрикцию у овец, предотвращать астму, вызванную физическим усилием, а также ингибировать высвобождение гистамина тучными клетками, индуцированное анти-IgE. Обнаружено, что вдыхаемый гепарин в дозах до 1000 единиц на кг не оказывает влияния на частичное тромбопластиновое время (ЧТВ), что предполагает отсутствие антикоагулянтного эффекта.

Сообщалось, что низкомолекулярные гепарины (средний молекулярный вес около 4500 дальтон), которые имеют уменьшенную активность в отношении АЧТВ, были эффективны в смысле предотвращения антиген-индуцированной острой бронхоконстрикторной реакции (ОБР) и гиперреактивности бронхов, также называемой гиперчувствительностью дыхательных путей (ГЧД), в исследованиях на животных. Однако, как будет обсуждено и проиллюстрировано далее более подробно, ни коммерческий гепарин, ни низкомолекулярные или со средним молекулярным весом гепарины, даже обладающие очень малой противосвертывающей активностью, неэффективны в смысле улучшения ГЧД после антигенной провокации. Эти гепарины отчетливо демонстрируют только профилактический, предупреждающий эффект, но не представляет ценности при лечении спровоцированного антигеном астматического приступа.

В настоящее время неожиданно было обнаружено, что фракции ультранизкомолекулярного гепарина (УНМГ) не только являются эффективными ингибиторами анафилаксии дыхательных путей, но также и высокоэффективны в отношении снижения ГЧД, даже если их вводят после антигенной провокации. Длительное регулярное применение УНМГ также снижает ГЧД, и, следовательно, УНМГ можно использовать для длительной терапии астмы, вызванной как специфическими (т. е. антигенными), так и неспецифическими факторами.

Соответственно, настоящее изобретение включает способ лечения пациента, страдающего антиген-индуцированной астмой, который подвергся воздействию антигена, вызвавшего астму, указанный способ включает интрабронхиальное введение пациенту фармацевтической композиции, содержащей приблизительно от 0,05 до 1,0 мг одной или более фракций УНМГ на килограмм веса тела пациента на каждую дозу указанной композиции и предпочтительно приблизительно от 0,075 до 0,75 мг/кг на дозу. Для целей настоящей заявки УНМГ можно определить как фракции гепарина, имеющие средний молекулярный вес 3000 дальтон и менее. УНМГ, имеющие средний молекулярный вес 2500 дальтон и менее, могут быть даже более эффективными при применении в способе настоящего изобретения. Каждая фракция УНМГ может включать дисахариды, трисахариды, тетрасахариды и/или пентасахариды, а также молекулы с более длинной цепью.

В соответствии с настоящим изобретением пациенту, страдающему антиген-индуцированной астмой, который вдохнул, проглотил или каким-либо другим образом вошел в контакт с антигеном (т. е. подвергся антигенной "провокации") того типа, о котором известно, что он провоцирует астматические приступы у данного пациента, вне зависимости от того, имеет ли уже этот пациент симптомы ОБР и/или ГЧД, быстро вводится посредством ингаляции одна доза фармацевтической композиции, содержащей одну или более фракций УНМГ, суммарно присутствующих в вышеуказанном интервале концентраций. Если необходимо, можно последовательно вводить дополнительные дозы до тех пор, пока пациент не достигнет или не будет удерживать нормальные уровни сопротивления дыхательных путей.

Настоящее изобретение также включает длительное введение УНМГ пациентам, страдающим астмой, для снижения и подавления ГЧД. Понятие "длительное введение" в настоящем документе означает введение УНМГ-содержащих композиций по меньшей мере один раз в день в течение по меньшей мере десяти последовательных дней. Длительное введение композиции, содержащей около 0,05-1,0 мг/кг на дозу и предпочтительно около 0,075-0,75 мг/кг на дозу, может продолжаться неопределенно долго для обеспечения терапии, подавляющей ГЧД, по меньшей мере сравнимой с терапией кортикостероидами, но практически лишенной побочных эффектов.

Несмотря на известную активность N-десульфатированных гепаринов в других биологических системах, например, в качестве ингибиторов клеточного роста, было установлено, что все фракции УНМГ, которые являются активными и могут применяться в настоящем изобретении для лечения пациентов, страдающих астмой, являются N-сульфатированными; N-десульфатированные фракции неэффективны.

Ингаляционные композиции УНМГ, применяющиеся в настоящем изобретении, могут включать жидкие или порошковые композиции, содержащие УНМГ и удобные для распыления и интрабронхиального введения, или аэрозольные композиции, вводимые посредством аэрозольного баллончика, выпускающего дозированные количества композиции.

Подходящие жидкие композиции включают УНМГ в водном, фармацевтически приемлемом для вдыхания растворителе, например в изотоническом солевом растворе или бактериостатической воде. Эти растворы вводят с помощью насоса или дозирующего распыляющего устройства, срабатывающего при сдавливании, или с помощью любого другого известного устройства, которые при вдыхании обеспечивают поступление нужной дозы жидкой композиции в легкие пациента.

Подходящие порошковые композиции включают, для примера, порошковые препараты гепарина, тщательно перемешанного с лактозой или другими инертными порошками, приемлемыми для интрабронхиального введения. Порошковые композиции могут вводиться с помощью аэрозольного дозирующего устройства или помещаться в ломающуюся капсулу, которую пациент может вставлять в устройство, прокладывающее эту капсулу и выдувающее порошок наружу устойчивой струей, удобной для ингаляции.

Аэрозольные композиции для применения в данном способе обычно включают фторированные алкановые пропелленты, поверхностно-активные вещества и сорастворители и могут помещаться в алюминиевые или другие обычные аэрозольные контейнеры, которые затем закрывают подходящим дозирующим клапаном и нагнетают давление пропеллентом.

Общая концентрация фракций УНМГ в любом носителе, подходящем для использования в соответствии с настоящим изобретением, должна быть достаточно высокой для обеспечения нужной дозы приблизительно от 0,05 до 1,0 мг УНМГ/кг. Так, например, если распытитель вводит 4 мл раствора на дозу, концентрация УНМГ в растворе в случае, если пациент весит 75 кг, должна быть приблизительно 1,0-20,0 мг/мл.

Специалистам в области фармации понятно, что существует множество известных способов и устройств для введения точно отмеренных доз интрабронхиальных препаратов и для регулирования нужной дозировки в соответствии с весом пациента и тяжестью его состояния. Более того, существует множество известных жидких, порошковых и аэрозольных носителей, подходящих для интрабронхиальных композиций УНМГ настоящего изобретения. Настоящее изобретение не ограничивается какими бы то ни было определенными инертными наполнителями, растворителями или носителями, а также какими бы то ни было определенными способами или аппаратами или интрабронхиальным введением.

Композиции УНМГ, описанные в настоящем документе, обеспечивают высокоэффективное лечение антиген-индуцированной астмы даже после антигенной провокации.

Для демонстрации неожиданного превосходства фракций УНМГ по сравнению с более высокомолекулярными гепаринами при лечении антиген-индуцированной астмы после антигенной провокации, были проведены эксперименты, сравнивающие действие различных типов гепарина у овец с аллергией как до, так и после антигенной провокации. Подробное описание этих экспериментов и полученных результатов производится в следующих примерах, а также на рисунках.

Следующие примеры, иллюстрирующие способ настоящего изобретения и демонстрирующие его эффективность, не предназначены для перечисления конкретных материалов, методик или схем лечения, которые только лишь и должны использоваться для практического осуществления настоящего изобретения.

Пример 1

Введение гепаринов перед антигенной провокацией

Методы

Легочное сопротивление потоку воздуха

Для всех исследований использовали шестнадцать овец с аллергией, у которых документально подтверждена только острая бронхоконстрикторная реакция на антиген Ascaris suum. Овец интубировали назотрахеальной трубкой с манжеткой и измеряли легочное сопротивление потоку воздуха (ЛС) с помощью методики баллонного пищеводного катетера, в то время как объем газа в грудной клетке измеряли с помощью плетизмографии тела. Данные выражали специфическое ЛС (СЛС, определенное как ЛС относительно объема газа в грудной клетке (ОБгг).

Реактивность дыхательных путей

Для оценки реактивности дыхательных путей вычерчивали кривые кумулятивная доза - ответ на вдыхаемый карбахол путем измерения СЛС до и после ингаляции физиологическим pacтвором, содержащим буфер, и после каждого введения 10 входов возрастающих концентраций карбахола (0,25, 0,5, 1,0, 2,0 и 4,0% (вес/объем) раствора). Реактивность дыхательных путей измеряли определением кумулятивной провоцирующей дозы (ПД4) карбахола (в единицах вдыхания), которая повышала СЛС до 400% от исходных значений. Одна единица вдыхания определялась как одно вдыхание 1% раствора карбахола.

Гепариновые фракции

В эксперименте, сравнивающем эффективность различных гепариновых материалов, вводившихся овцам с аллергией до антигенной провокации, использовали один УНМГ (CY222, Sanofi; Париж, Франция), один низкомолекулярный гепарин (CY216, Sanofi) и один гепарин со средним молекулярным весом (Fragmin, Kabivitrum, Стокгольм, Швеция). Молекулярный вес и другие характеристики этих* гепариновых фракций представлены в таблице 1.

Как показано в таблице, УНМГ, применявшийся в этом эксперименте, не только имел молекулярный вес менее 3000, но и дополнительно около 88% гепариновых цепей, включенных в эту фракцию, имели молекулярный вес менее 2500.

Протокол эксперимента

Исследования дыхательных путей

Для каждого животного определяли реактивность дыхательных путей (ПД4), а затем в разные дни эксперимента овцы подвергались антигенной провокации антигеном Askaris suum. Измерялось СЛС до и немедленно после провокации, а затем каждый час вплоть до 2 часов, до тех пор, пока величина СЛС не возвращалась к исходному значению. Затем измеряли величину ПД4 после провокации. Этот протокол повторяли по истечении по меньшей мере 14 дней, после предварительного лечения CY222, CY216 и фрагмином в виде аэрозоля в дозах 0,31, 0,62, 1,25, 2,5 и 5,0 мг/кг.

Анализ данных

Данные выражали как (а) среднее СКО% изменение СЛС; (b) ПД4 как % от исходного значения; (с) % защиты от острой бронхоконстрикторной реакции (ОБР) и (d) % защиты гиперчувствительности дыхательных путей (ГЧД).









Сравнительное влияние предварительного лечения испытуемыми препаратами на ОБР и ГЧД представлено в таблицах 2-6 и графически изображено на фиг. 1-8.

Эти данные свидетельствуют о том, что предварительное лечение CY222 и CY216 и фрагмином в виде аэрозолей ослабляло антиген-индуцированную острую бронхоконстрикторную реакцию дозозависимым образом; минимальные эффективные дозы составляли 0,62 мг/кг, 1,25 мг/кг и 2,5 мг/кг соответственно.

Предварительное лечение CY222, CY216 и фрагмином в виде аэрозолей ослабляло антиген-индуцированную ГЧД дозозависимым образом, минимальные эффективные дозы составляли 0,62 мг/кг, 1,25 мг/кг и 5,0 мг/кг соответственно.

Сравнительный анализ лекарственных препаратов выявил обратно пропорциональную зависимость между защитными эффектами и молекулярным весом гепариновых фракций. Фракция УНМГ, CY222, оказалась наиболее эффективным агентом, что было показано значительным ингибированием антиген-индуцированной бронхоконстрикции и ГЧД в дозе 0,6 мг/кг, в то время как CY216 и фрагмин в этой дозе были неэффективны. Средние групповые значения ИД50 для CY222, CY216 и фрагмина против аллергической бронхоконстрикции составляли 0,5, 1,3 и 1,8 мг/кг соответственно. Соответствующие средние групповые значения ИД50 для CY222, CY216 и фрагмина против ГЧД составляли 0,51, 2,5 и 4,7 мг/кг.

Пример 2

Введение гепаринов после антигенной провокации

В этом эксперименте придерживались того же протокола, что и в примере 1, за исключением следующего: (а) три гепариновых продукта, вводившиеся экспериментальным животным, представляли CY222, коммерческий гепарин (молекулярный вес приблизительно 15000 дальтон) и фрагмин; и (b) гепарины вводили животным в форме аэрозоля немедленно после антигенной провокации. Экспериментальные данные представлены в таблице 7 и графически изображены на фиг. 9-11.

Как видно из таблицы 7 и фиг. 9-11, ингаляционный CY222, введенный после антигенной провокации, существенно изменил у экспериментальных животных постантигенную ГЧД, восстанавливал уровни ГЧД до исходных значений и выше. Этот эффект не наблюдался при использовании коммерческого гепарина или фрагмина, при котором введение этих гепаринов после антигенной провокации не приводило к улучшению ГЧД.

Таким образом, показано, что созданы способы и композиции, достигающие различные цели настоящего изобретения и хорошо приспособленные для удовлетворения требований к его практическому применению.

Поскольку возможны различные варианты осуществления описанного выше изобретения и поскольку возможны различные изменения описанных выше вариантов осуществления, следует понять, что весь материал, описанный в настоящем документе, должен интерпретироваться в иллюстративном, а не ограничительном смысле.

Заявленный материал как новый и претендующий на защиту патентной грамотой изложен в следующей формуле изобретения. 


ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ



1. Способ лечения пациента, страдающего антиген-индуцированной астмой, который подвергся провокации вызвавшим астму антигеном, включающий интрабронхиальное введение пациенту фармацевтической композиции, содержащей от 0,05 до 1,0 мг ультранизкомолекулярных гепаринов (УНМГ) на 1 кг веса тела пациента в каждой дозе; указанные УНМГ имеют средний молекулярный вес 3000 дальтон или менее.

2. Способ по п. 1, в котором указанные УНМГ имеют средний молекулярный вес 2500 дальтон или менее.

3. Способ по п. 1, в котором указанная композиция содержит от 0,075 до 0,75 мг УНМГ/кг на дозу.

4. Способ по п. 1, в котором каждую дозу вводят в виде композиции, содержащей от 1,0 до 20,0 мг УМНГ на 1 мл композиции.

5. Способ по п. 1, в котором указанные УНМГ практически не обладают противосвертывающей активностью.

6. Способ по п. 1, в котором каждый из указанных УНМГ включает дисахариды, трисахариды, тетрасахариды или пентасахариды.

7. Способ по п. 1, в котором указанная композиция включает раствор УНМГ в водном фармацевтически приемлемом для вдыхания носителя.

8. Способ по п. 7, в котором указанный носитель является изотоническим солевым раствором или бактериостатической водой.

9. Способ по п. 7, в котором указанную композицию вводят с помощью насоса или распыляющего устройства, срабатывающего при сдавливании.

10. Способ по п. 7, в котором указанная композиция дополнительно включает аэрозольный пропеллент и ее вводят с помощью аэрозольного дозирующего ингалятора.

11. Способ по п. 1, в котором указанная композиция включает порошкообразный препарат УНМГ, смешанный с инертным порошком, приемлемым для интрабронхиального введения.

12. Способ по п. 11, в котором указанным инертным порошком является лактоза.

13. Способ по п. 11, в котором указанную композицию вводят с помощью аэрозольного дозирующего устройства.

14. Способ по п. 11, в котором указанную композицию вводят из ломкой капсулы.

15. Способ лечения пациента, страдающего астмой, для снижения и подавления гиперреактивности дыхательных путей, включающий длительное интрабронхиальное введение указанному пациенту фармацевтической композиции, содержащей от 0,05 до 1,0 мг ультранизкомолекулярных гепаринов (УНМГ) на 1 кг веса тела пациента в каждой дозе; указанные УНМГ имеют средний молекулярный вес 3000 дальтон или менее.

16. Способ по п. 15, в котором указанные УНМГ имеют средний молекулярный вес 2500 дальтон или менее.

17. Способ по п. 15, в котором указанная композиция содержит от 0,075 до 0,75 мг УНМГ/кг на дозу.

18. Способ по п. 15, в котором указанную дозу вводят в виде композиции, содержащей от 1,0 до 20,0 мг УНМГ/мл.

19. Способ по п. 15, в котором указанные УНМГ практически не обладают противосвертывающей активностью.

20. Способ по п. 15, в котором каждый из указанных УНМГ включает дисахариды, трисахариды, тетрасахариды или пентасахариды.

21. Фармацевтическая композиция для лечения пациента, страдающего антиген-индуцированной астмой, включающая от 0,05 до 1,0 мг УНМГ на 1 кг веса тела пациента в каждой дозе в фармацевтически приемлемом для вдыхания носителе, указанные УНМГ имеют средний молекулярный вес 3000 дальтон или менее.

22. Композиция по п. 21, в которой указанные УНМГ имеют средний молекулярный вес 2500 дальтон или менее.

23. Композиция по п. 21, которая включает от 0,075 до 0,75 мг УНМГ/кг на дозу.

24. Композиция по п. 21, в которой каждая доза представлена в виде раствора, содержащего от 1,0 до 20,0 мг УМНГ/мл.

25. Композиция по п. 21, в которой указанные УНМГ практически не обладают противосвертывающей активностью.

26. Композиция по п. 21, в которой каждый из указанных УНМГ включает дисахариды, трисахариды, тетрасахариды или пентасахариды.

27. Композиция по п. 21, которая включает раствор УНМГ в водном фармацевтически приемлемом для вдыхания носителе.

28. Композиция по п. 27, в которой указанный носитель является изотоническим солевым раствором или бактериостатической водой.

29. Композиция по п. 27, которая удобна для введения с помощью насоса или распыляющего устройства, срабатывающего при сдавливании.

30. Композиция по п. 27, которая дополнительно включает аэрозольный пропеллент и удобна для введения с помощью аэрозольного дозирующего ингалятора.

31. Композиция по п. 27, которая включает порошкообразный препарат УНМГ, смешанный с инертным порошком, приемлемым для интрабронхиального введения.

32. Композиция по п. 31, в которой указанным инертным порошком является лактоза.

33. Композиция по п. 31, которая вводится с помощью аэрозольного дозирующего устройства.

34. Композиция по п. 31, которая вводится из ломкой капсулы.