СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ПОСЛЕДСТВИЙ ПЕРИНАТАЛЬНЫХ ПОРАЖЕНИЙ ЦЕНТРАЛЬНОЙ НЕРВНОЙ СИСТЕМЫ ЛЕГКОЙ СТЕПЕНИ У ДЕТЕЙ

СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ПОСЛЕДСТВИЙ ПЕРИНАТАЛЬНЫХ ПОРАЖЕНИЙ ЦЕНТРАЛЬНОЙ НЕРВНОЙ СИСТЕМЫ ЛЕГКОЙ СТЕПЕНИ У ДЕТЕЙ


RU (11) 2312351 (13) C1

(51) МПК
G01N 33/53 (2006.01) 

(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ 
Статус: по данным на 30.01.2009 - действует 

--------------------------------------------------------------------------------

Документ: В формате PDF 
(21) Заявка: 2006133450/15 
(22) Дата подачи заявки: 2006.09.18 
(24) Дата начала отсчета срока действия патента: 2006.09.18 
(45) Опубликовано: 2007.12.10 
(56) Список документов, цитированных в отчете о поиске: СКВОРЦОВ И.А. и др. Развитие нервной системы у детей в норме и патологии. - М.: МЕДпресс-информ, 2003, с.68-89. RU 2257587 С2, 27.07.2005. RU 2282858 C1, 27.08.2006. RU 2281506 C1, 10.08.2006. ULCOVA-GALLOVA Z. et al. Anti-phospholipid antibodies against phosphatidylinositol, and phosphatidylserine are more significant in reproductive failure than
antibodies against cardiolipin only. Am J Reprod Immunol., 2005, 54(2), p.112-117, PMID: 16105103, реф., [он-лайн], [найдено 03.05.2007], найдено из базы данных PubMed.

(72) Автор(ы): Федоров Геннадий Николаевич (RU); Клименко Иван Иванович (RU); Константинова Марина Анатольевна (RU); Григорьева Валентина Николаевна (RU) 
(73) Патентообладатель(и): ГОУ ВПО Смоленская государственная медицинская академия Федерального Агентства по здравоохранению и социальному развитию (RU) 
Адрес для переписки: 214019, г.Смоленск, ул. Крупской, 28, ГОУ ВПО Смоленская государственная медицинская академия Федерального Агентства по здравоохранению и социальному развитию 

(54) СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ПОСЛЕДСТВИЙ ПЕРИНАТАЛЬНЫХ ПОРАЖЕНИЙ ЦЕНТРАЛЬНОЙ НЕРВНОЙ СИСТЕМЫ ЛЕГКОЙ СТЕПЕНИ У ДЕТЕЙ

Изобретение относится к области медицины, а именно к неврологии, педиатрии, иммунологии, детской психиатрии. Для диагностирования последствий перинатального поражения центральной нервной системы легкой степени у детей в сыворотке крови определяют уровни суммарных аутоантител к 2-гликопротеину, кардиолипину, фосфатидилсерину, фосфатидилинозитолу и фосфатидиловой кислоте. При содержании вышеуказанных суммарных аутоантител выше 10,02 Е/мл делают вывод о наличии последствий перинатального поражения центральной нервной системы легкой степени. Использование способа позволяет повысить точность и эффективность диагностики последствий перинатального поражения ЦНС легкой степени. 1 табл.




ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ


Изобретение относится к медицине, в частности к неврологии, педиатрии, иммунологии, детской психиатрии. Оно может быть использовано в клинике для диагностики последствий перинатальных поражений центральной нервной системы /ППП ЦНС/ легкой степени у детей.

Известен способ диагностики ППП ЦНС легкой степени по клиническим признакам, согласно которому ППП ЦНС дифференцируют от детского церебрального паралича /ДЦП/, психических заболеваний детского возраста, вегетативно-дизрегуляторного и гипертензионно-гидроцефального синдромов, обусловленных соматической патологией либо другими заболеваниями головного мозга. В силу большого количества синдромальных клинических проявлений ППП ЦНС для постановки диагноза требуется применение множества специальных методов исследования: РЭГ, КИТ, КТ гол. мозга, ЭЭГ, УЗИ гол. мозга.

Эти показатели в сочетании с данными, полученными при изучении клинической картины и анамнеза, заключениями окулиста, ортопеда, психиатра позволяют с большей достоверностью установить наличие ППП ЦНС как последствий перинатального поражения ЦНС (Скворцов И.А., Ермоленко И.А. Развитие нервной системы у детей в норме и патологии. М.: МЕДпресс-информ, 2003. - С.68-89).

Недостатками используемых методов диагностики ППП ЦНС является большая продолжительность по времени, связанная с применением большого количества методик, отсутствие четких критериев, большая стоимость, привлечение консультирующих врачей других специальностей, отсутствием, в большинстве случаев, медицинской документации, содержащей полноценный перинатальный анамнез; кроме того, данные исследования отличаются высокой стоимостью.

Целью изобретения является повышение точности и своевременности диагностики ППП ЦНС, что обеспечит высокую эффективность и рациональное проведение комплекса терапевтических мероприятий.

Сущность предложенного способа диагностики состоит в том, что в сыворотке крови детей с подозрением на ППП ЦНС методом иммуноферментного анализа /ИФА/ определяют уровень суммарных аутоантител к 2-гликопротеину, кардиолипину, фосфатидилсерину, фосфатидилинозитолу и фосфатидиловой кислоте и при уровне суммарных аутоантител к 2-гликопротеину, кардиолипину, фосфатидилсерину, фосфатидилинозитолу и фосфатидиловой кислоте выше 10,02 Е/мл диагностируют наличие ППП ЦНС легкой степени.

Аутоантитела к 2-гликопротеину, кардиолипину, фосфатидилсерину, фосфатидилинозитолу и фосфатидиловой кислоте входят в состав клеточных мембран. Ранее было известно только то, что их высокий уровень ассоциирован с развитием аутоиммунных заболеваний. Если допустить, что основой неспецифической компоненты иммунного ответа при ППП ЦНС является воспаление, как наиболее ранняя и универсальная клеточная реакция на повреждение, не зависящая от характера повреждения и агрессивных агентов, то определение уровней суммарных аутоантител к 2-гликопротеину, кардиолипину, фосфатидилсерину, фосфатидилинозитолу и фосфатидиловой кислоте как маркеров аутоиммунного воспаления может быть дополнительным критерием в диагностике ППП ЦНС легкой степени. Полученные данные показали, что при ППП ЦНС уровень суммарных аутоантител к 2-гликопротеину, кардиолипину, фосфатидилсерину, фосфатидилинозитолу и фосфатидиловой кислоте в сыворотке крови достоверно увеличивался, следовательно, данный метод определения аутоантител можно считать достаточно специфичными маркерами ППП ЦНС как последствий перинатальных поражений ЦНС.

Способ осуществляется следующим образом.

У всех пациентов берут кровь из вены и определяют уровень суммарных аутоантител к 2-гликопротеину, кардиолипину, фосфатидилсерину, фосфатидилинозитолу и фосфатидиловой кислоте методом непрямого твердофазного иммуноферментного анализа /ИФА/ с помощью наборов «Orgentec» (Нидерланды) по следующей схеме:

1. Контроли и предварительно разбавленные пробы пациентов добавляются в ячейки микропланшета. Любые присутствующие антитела связываются с иммобилизированными антигенами. После 30-минутной инкубации промываются, а промывочный раствор удаляет несвязавшиеся компоненты сыворотки.

2. Раствор конъюгата - античеловечьего - IgG - пероксидаза хрена добавляется в ячейки для определения аутоантител, связанных с иммобилизированными антигенами. После 15-минутной инкубации избыточный ферментный конъюгат удаляется промывочным раствором.

3. Хромогенный раствор субстрата, содержащий ТМБ, добавляется в ячейки. В течение 15-минутной инкубации цвет раствора становится голубым. Развитие окраски останавливается добавлением 1 М соляной кислоты в качестве стоп-раствора. Раствор меняет цвет на желтый.

Интенсивность окраски прямо пропорциональна концентрации IgG в образце. Оптическую плотность немедленно измеряют на ридере при 450 нм.

ПРИМЕР.

У пациента Д., 4 лет, на момент обращения к детскому неврологу были жалобы на периодические, с частотой 1-2 раза в неделю, резкие головные боли, сопровождающиеся головокружением, тошнотой. Со слов родителей, головные боли чаще всего появлялись после нагрузки, а их приступы учащались при смене погоды.

При сборе анамнеза выяснилось, что ребенок родился в срок, с массой 3250 г. В процессе родов развилась слабость родовой деятельности, поэтому проводилась родостимуляция. Околоплодные воды были зеленоватого цвета. Родившись, ребенок закричал сразу, оценен по шкале Апгар 8-96, к груди приложен на 2-е сутки. Мать сообщила, что ребенок часто и несколько необычно запрокидывал голову назад в первые месяцы жизни. Кроме того, у него наблюдался тремор рук и подбородка при плаче и действии сильных внезапных раздражителей (свет, звук и т.д.). Была выставлена группа риска по перинатальной энцефалопатии. Психомоторное и речевое развитие ребенка было нормальным.

Впервые головные боли появились в 3,5 года, когда ребенок пошел в детский сад. Одновременно с этим родители обратили внимание на необъяснимые периоды вялости, сонливости, во время которых усиливались головные боли, появлялась тошнота.

Объективно на момент осмотра: кожные покровы бледные, АД 100/60 мм рт.ст., ЧДД 18 в мин.

Неврологический статус: глазные щели симметричны, D=S; зрачки обычной формы и размеров, D=S; фотореакция сохранена. Движения глазных яблок в полном объеме. Точки выхода тройничного нерва безболезненны. Нижнечелюстной рефлекс оживлен. Лицо симметрично, носогубные складки D=S. Язык по средней линии. Мышечный тонус S=D, не изменен. Мышечная сила в конечностях 4-5 баллов. Сухожильные рефлексы высокие, D=S; кожные брюшные рефлексы угнетены. Патологических рефлексов нет. Чувствительных расстройств не выявлено. Динамические координаторные пробы выполняет уверенно, в позе Ромберга устойчив, отмечается тремор пальцев вытянутых рук. Дермографизм белый, нестойкий; коэффициент Хильдебранта 3,5. Вегетативный индекс Кредо 17. Выражен дистальный гипергидроз.

Общие анализы крови, мочи, биохимический анализ крови без патологии.

Заключение окулиста: диски зрительных нервов бледно-розовые, границы четкие, артерии сетчатки сужены.

ЭКГ - синусовый ритм, обменно-восстановительные изменения миокарда.

РЭГ - Тонус вен снижен, пульсовое кровенаполнение повышено.

КИГ - Исходный вегетативный тонус - гиперсимпатикотонический, ИН 2=105 (при ЧСС=90), вегетативная реактивность - асимпатикотоническая.

ЭЭГ - Умеренные общемозговые изменения (ближе к легким), регулярного характера. Межполушарной асимметрии не выявлено. Эпиактивности не выявлено.

Заключение по скрининг-таблице оценки вегетативного тонуса - симпатикотония.

КТ головного мозга не проводилось.

Уровень суммарных аутоантител к 2-гликопротеину, кардиолипину, фосфатидилсерину, фосфатидилинозитолу и фосфатидиловой кислоте, определенный методом ИФА, был 21,64 Е/мл.

Диагноз. Последствия перинатального поражения центральной нервной системы легкой степени в форме синдрома вегетативной дизрегуляции.

Способ диагностики последствий перинатального поражения центральной нервной системы легкой степени у детей по уровню суммарных аутоантител к 2-гликопротеину, кардиолипину, фосфатидилсерину, фосфатидилинозитолу и фосфатидиловой кислоте в сыворотке крови был апробирован на 32 детях с диагнозом ППП ЦНС легкой степени (основная группа), уровень изменялся в пределах от 10,03 до 33,01 Е/мл. Контрольную группу составили 10 детей с первой группой здоровья, с перинатальным анамнезом без особенностей.

У здоровых детей уровень аутоантител не превышает 10,02 Е/мл. Данные показывают, что уровень суммарных аутоантител к 2-гликопротеину, кардиолипину, фосфатидилсерину, фосфатидилинозитолу и фосфатидиловой кислоте может служить маркером ППП ЦНС легкой степени.

Всем обследованным производился забор крови и определение уровня суммарных аутоантител к 2-гликопротеину, кардиолипину, фосфатидилсерину, фосфатидилинозитолу и фосфатидиловой кислоте перечисленным выше способом.

Результаты проведенного исследования представлены в таблице. Для обработки полученного материала и проведения статистического анализа в исследованных группах была использована программа статистической обработки информации «Statgraph». Вычисляли среднюю и ошибку средней (М±m). Сравнение в исследуемых группах проводилось попарно при помощи параметрических методов, так как изучаемые выборки могут быть аппроксимированы нормальным законом распределения. Сравнение осуществлялось с помощью критериев Стьюдента (t) (сравнение средних) и Фишера (сравнение средних квадратических отклонений). Уровень достоверности оценивался значением «р». Различия при сравнении считались достоверными с вероятностью более 95% при р<0,05.

Использование предложенного способа диагностики имеет следующие преимущества:

1) высокую точность в диагностике ППП ЦНС легкой степени;

2) быструю диагностику;

3) обеспечивает своевременное и рациональное проведение комплекса терапевтических мероприятий.

Таблица 
Уровень суммарных аутоантител в сыворотке крови у детей с диагнозом последствия перинатального поражения центральной нервной системы легкой степени (Е/мл). 
Последствия перинатального поражения ЦНС легкой степени Здоровые дети 
М±m (min-max) N М±m (min-max) n 
26,47±3,27* 32 6,58±1,72 10 
(10,03-33,01) (3,04-10,02) 
Примечание: * - р<0,01 - достоверность различия в группах при сравнении. 





ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ


Способ диагностики последствий перинатального поражения центральной нервной системы легкой степени, включающий оценку клинических признаков, отличающийся тем, что проводят определение уровня суммарных аутоантител к 2-гликопротеину, кардиолипину, фосфатидилсерину, фосфатидилинозитолу и фосфатидиловой кислоте в сыворотке крови методом твердофазного иммуноферментного анализа и при содержании суммарных аутоантител к 2-гликопротеину, кардиолипину, фосфатидилсерину, фосфатидилинозитолу и фосфатидиловой кислоте выше 10,02 Е/мл делают вывод о наличии диагноза последствий перинатального поражения центральной нервной системы легкой степени.