СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ТЕРАПЕВТИЧЕСКИ РЕЗИСТЕНТНЫХ РЕАКТИВНЫХ ДЕПРЕССИЙ

СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ТЕРАПЕВТИЧЕСКИ РЕЗИСТЕНТНЫХ РЕАКТИВНЫХ ДЕПРЕССИЙ


RU (11) 2253119 (13) C1

(51) 7 G01N33/92 

(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ 
Статус: по данным на 30.01.2009 - может прекратить свое действие 

--------------------------------------------------------------------------------

Документ: В формате PDF 
(21) Заявка: 2004124099/15 
(22) Дата подачи заявки: 2004.08.06 
(24) Дата начала отсчета срока действия патента: 2004.08.06 
(45) Опубликовано: 2005.05.27 
(56) Список документов, цитированных в отчете о поиске: RU 1720000 A1, 15.03.1992. RU 2042950 C1, 27.08.1995. RU 2230323 С1, 10.06.2004. RU 992028 A1, 30.01.1983. US 6080549 A1, 27.06.2000. АЛЕКСАНДРОВСКИЙ Ю.А. и др. Неврозы и перекисное окисление липидов. М.: Наука, 1991, с.1-119. 
(72) Автор(ы): Покровский Д.Г. (RU); Зиньковский А.К. (RU); Михайленко А.А. (RU) 
(73) Патентообладатель(и): Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Тверская государственная медицинская академия Министерства здравоохранения Российской Федерации" (ГОУ ВПО Тверская ГМА Минздрава России) (RU) 
Адрес для переписки: 170642, г.Тверь, ул. Советская, 4, ГОУ ВПО ТГМА МЗ РФ, патентный отдел 

(54) СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ТЕРАПЕВТИЧЕСКИ РЕЗИСТЕНТНЫХ РЕАКТИВНЫХ ДЕПРЕССИЙ

Изобретение относится к медицине, а именно к психиатрии и неврологии. Способ включает определение сфингомиелинов методом проточной тонкослойной хроматографии, при этом по шкале Гамильтона определяют степень выраженности депрессии, определяют количественное содержание фосфатидилэтаноламинов, сфингомиелинов и фосфатидилэтаноламинов, подсчитывают лейкоцитарную формулу и при наличии лимфоцитов более 25% и моноцитов более 5% и значении фосфатидилэтаноламинов 32,6±1,6, сфингомиелинов 27,6±1,1 и фосфатидилэтаноламинов 27,4±2,7 диагностируют терапевтически резистентную реактивную депрессию. Технический результат: способ прост в применении, позволяет обнаружить патобиохимические и иммунологические маркеры терапевтической резистентности при реактивной депрессии и контролировать на биохимическом и иммунологическом уровнях состояние пациента, объективизируя клиническую оценку состояния при мониторинге эффективности лечения. 1 табл.




ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ


Изобретение относится к области медицины, а именно к психиатрии и неврологии. Депрессия - одно из наиболее распространенных расстройств, встречающихся как в психиатрической, так и в соматической практике. Около 30% больных депрессиями остаются рефракторными к адекватной тимоаналептической терапии, чем обусловлена необходимость выявления способов эффективной предикции и терапии резистентных депрессий. 

Способ позволяет повысить точность диагностики резистентности при реактивной депрессии путем определения биохимических и иммунологических маркеров, являющихся предикторами рефрактерности к антидепрессантной терапии. В ходе тестирования выявляются лица, имеющие патобиохимические и иммунологические признаки нарушений деятельности нервной системы, которые в дальнейшем будут проявляться или уже проявляются на момент обследования депрессивной симптоматикой, резистентной к современным антидепрессантным психофармакологическим средствам. Способ обеспечивает высокую точность определения лиц с указанной симптоматикой для уточнения динамики состояния в клинике.

Аналогом предлагаемого изобретения авторы предлагают способ, описанный в монографии “Неврозы и перекисное окисление липидов” // Александровский Ю.А., Поюровский М.В., Незнамов Г.Г., - М.: Наука, 1991, 140 с.

Выявлено, что в условиях хронического эмоционального стресса, лежащего в основе депрессивного страдания, в центральной нервной системе имеется достаточно условий для возникновения активации перекисного окисления липидов (ПОЛ) по нескомпенсированному варианту. Авторами установлено, что активация ПОЛ, проявляющаяся в повышении содержания в крови гидроперекисей липидов и малонового диальдегида, наиболее выражена у больных с небольшой (до 6 мес) длительностью невротических расстройств. С увеличением давности заболевания наблюдалось постепенное уменьшение концентрации в крови больных продуктов ПОЛ, что соответствует “истощению” функциональных возможностей стресс-реализующих систем и формированию затяжных невротических состояний. При этом выявленные биохимические нарушения имеют широкую индивидуальную вариабельность, существенно снижающие их диагностическую ценность.

В качестве прототипа предлагаемого изобретения заявители предлагают “Способ диагностики невроза” // Патент № 1720000, бюлл. №10, 15.03.92. Кровь больного в объеме 0,1 мл экстрагируют смесью хлороформ : метанол 1:2 (по объему), фильтруют, трижды промывают осадок на фильтре смесью хлороформ : метанол 2:1. Фильтрат отмывают 0,02% CaCl2, а затем трижды смесью хлороформметанол 0,02% CaCl2 (3:48), упаривают и растворяют в 5-10 мкл смеси хлороформ : метанол 2:1. После этого исследуемый образец наносят на хроматографическую пластинку. Выделение фракции сфингомиелинов осуществляют методом проточной горизонтальной хроматографии в системе хлороформ : метанол : 7 н. аммиак 13:7:1. Идентификацию сфингомиелинов проводят по Rf=0,31, количественное содержание сфингомиелинов определяют по фосфору после проявления хроматограммы серной кислотой и рассчитывают в мкмоль фосфора на литр. При значениях 2000 мкмоль фосфора и выше диагностируют невроз.

Недостатки прототипа, на взгляд авторов, следующие:

1. Позволяет регистрировать патологическое увеличение содержания лишь одной фракции фосфолипидов (СФМ).

2. Не учитывает вовлеченность в генез депрессивного состояния иммунных механизмов. 

3. Неприменим для диагностики реактивных резистентных депрессий.

В отличие от рассмотренного выше способа-прототипа, предлагаемый новый способ выявляет среднестатистические результаты для когорты терапевтически резистентных больных реактивными депрессиями. Значимы показатели иммунитета в виде моноцитоза >5% и лимфоцитоза >25% в лейкоцитарной формуле общего анализа крови в сочетании с показателями фосфатидилэтаноламинов (ФЭА) - 32,6±1,6%, сфингомиелинов (СФМ) - 27,6±1,1%, и фосфатидилхолинов (ФХ) - 27,4±2,7%, (р<0,001).

Способ осуществляют следующим образом. Для оценки обмена фосфолипидов исследуют цельную кровь в объеме 0,1 мл методом проточной тонкослойной хроматографии, описанном в прототипе. Известно, что фосфолипиды, являясь основным структурно-функциональным компонентом биологических мембран, принимают непосредственное участие в процессах трансмембранного переноса всех метаболитов, участвуют в процессах возбудимости клетки, энергетическом их обмене, биосинтезе белка, а также выполняют роль вторичных мессенджеров. Доказана интенсификация процессов перекисного окисления липидов (ПОЛ) при различных по генезу психических заболеваниях. При этом установлено, что хронический эмоциональный стресс, лежащий в основе депрессивного страдания, приводит к состоянию метаболической внутриклеточной гипоксии вследствие преобладания процессов гликолиза над окислительным фосфорилированием, то есть анаэробизма над тканевым дыханием. В этих условиях нарушается утилизация глюкозы (гликогена), что в свою очередь приводит к блокированию образования из аминоспирта сфингозида - церамида. При этом за счет активации специфических трансфераз образуется повышенное количество СФМ (часть которого расходуется на увеличение синтеза ФЭА), что может служить гиперлипогенетическим источником энергетического депо в условиях интрацеллюлярной гипоксии. Также следует принять во внимание возможные взаимопревращения ФЭА и ФХ, входящих в состав многочисленных белково-липидных комплексов. Эти реакции протекают преимущественно в митохондриальных мембранах и подтверждают данные об исключительно важном значении аминосодержащих фосфолипидов в процессах окислительного фосфорилирования. Таким образом, обнаруживаемые с помощью тонкослойной хроматографии повышение содержания СФМ, ФЭА и снижение содержания ФХ в крови больных с терапевтически резистентными реактивными депрессиями может быть обусловлено характерными для депрессивных состояний гипоксическими процессами, и как следствие, выраженными изменениями биомембран (табл.1).

Таблица 1. 
Изменения содержания фосфолипидов крови (в % М±м), и показателей иммунитета у больных реактивными терапевтически резистентными депрессиями. 
Фракции Норма (контрольная группа) Терапевтически резистентная реактивная депрессия Показатели иммунитета при терапевтически резистентной реактивной депрессии 
ФЭА 25,4±1,2 32,6±1,6* Содержание лимфоцитов более 25% * Содержание моноцитов более 5%* 
СФМ 17,75±1,1 27,6±1,1* 
ФХ 46,87±2,2 27,4±2,7* 
Примечание: различия между нормой и терапевтически резистентной депрессией: * - р<0,001 


В современных исследованиях показано, что иммунная система посредством органоспецифических иммунных реакций гуморального и клеточного типа принимает непосредственное участие в регуляции деятельности нервной систем, в частности выявлены особенности взаимосвязей иммунологических и клинических параметров при депрессивных расстройствах. Отмечено при этом, что с увеличением давности психического заболевания возрастает роль иммунной системы в патогенезе депрессии, в связи с чем повышается риск иммунодефицитных состояний. 

Способ включает изучение лейкоцитарной формулы общего клинического анализа крови с целью выявления иммунологических маркеров резистентности депрессии к терапии. Материалом для общего клинического анализа крови является цельная капиллярная кровь. Приготовленный мазок фиксируют метиловым спиртом 5 мин, после чего окрашивают по Романовскому - Гимзе. Краска стандартная имеет в своем составе азур II, водорастворимый желтый эозин, метиловый спирт и глицерин. Рабочий раствор краски готовят путем разведения 3 капель готовой краски 1,0 мл дистиллированной воды. Продолжительность окраски 40 минут. Окрашенные мазки изучают под микроскопом с иммерсионной системой (окуляр 10, объектив 90). Для подсчета лейкоцитарной формулы пользуются 11-клавишным счетчиком, фиксирующим количества каждого вида лейкоцитов в процентах.

Выявленные у когорты терапевтически резистентных больных реактивными депрессиями среднестатистические показатели моноцитоза свидетельствуют о напряженности фагоцитарного звена иммунитета, лимфоцитоз показывает дефект клеточного звена иммунной системы, что подтверждает неоднородность и многоуровневость нейробиохимических механизмов формирования резистентности депрессии к тимоаналептической терапии.

Обследовано 85 больных с реактивными депрессиями, 50 женщин и 35 мужчин от 20 до 50 лет, средний возраст 34±3,2 года. По результатам тимоаналептической терапии пациенты разделились на респондеров (40 пациентов), обнаруживших положительную динамику, и нонреспондеров (45 пациентов), у которых значимых позитивных сдвигов в процессе терапии не отмечено. Клинические исследования соответствовали критериям МКБ-10, дополнены шкалой депрессии М. Гамильтона (21 вопрос). Контроль составила группа из 50 практически здоровых лиц, сопоставимая по полу и возрасту. В обследование не включались лица, перенесшие болезнь Боткина, имеющих признаки хронического гепатита или цирроза печени. Параклинические исследования включали оценку лейкоцитарной формулы клинического анализа крови и изучение фосфолипидного спектра цельной крови методом проточной тонкослойной хроматографии.

Преимущества данного способа диагностики терапевтически резистентной реактивной депрессии: 

1. При использовании в клинике позволяет обнаружить патобиохимические и иммунологические маркеры терапевтической резистентности при реактивной депрессии.

2. Применение заявленного метода позволяет контролировать на биохимическом и иммунологическом уровнях состояние пациента, объективизируя клиническую оценку состояния при мониторинге эффективности лечения.

3. Способ диагностики прост в применении, пригоден для использования в клинических условиях.

КЛИНИЧЕСКИЙ ПРИМЕР. Больная Н, 45 лет. История болезни №916. Диагноз: Дистимия. Заболевания связывается с длительной объективно неразрешимой психотравмирующей ситуацией. Клинически обнаруживает признаки депрессивного эпизода средней степени выраженности. По шкале депрессии М. Гамильтона 20,5 баллов. Проведен клинический анализ крови, выявлено лимфоцитов - 27% и моноцитов - 6%. Проба крови исследовалась методом тонкослойной хроматографии, содержание ФЭА составило - 34,2%, СФМ - 29,5% и ФХ - 25,3%, что позволяет выявить терапевтически резистентную реактивную депрессию.




ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ


Способ диагностики терапевтически резистентных реактивных депрессий, включающий определение сфингомиелинов методом проточной тонкослойной хроматографии, отличающийся тем, что по шкале Гамильтона определяют степень выраженности депрессии, определяют количественное содержание фосфатидилэтаноламинов, сфингомиелинов и фосфатидилэтаноламинов, подсчитывают лейкоцитарную формулу и при наличии лимфоцитов более 25% и моноцитов более 5% и значении фосфатидилэтаноламинов 32,6±1,6, сфингомиелинов 27,6±1,1 и фосфатидилэтаноламинов 27,4±2,7 диагностируют терапевтически резистентную реактивную депрессию.