СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ФОРМЫ АЛЛЕРГОДЕРМАТОЗА У ДЕТЕЙ РАННЕГО ВОЗРАСТА

СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ФОРМЫ АЛЛЕРГОДЕРМАТОЗА У ДЕТЕЙ РАННЕГО ВОЗРАСТА


(19) RU (11) 2140082 (13) C1

(51) 6 G01N33/49 

(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ 
Статус: по данным на 09.07.2007 - прекратил действие 

--------------------------------------------------------------------------------

(14) Дата публикации: 1999.10.20 
(21) Регистрационный номер заявки: 98101056/14 
(22) Дата подачи заявки: 1998.01.19 
(24) Дата начала отсчета срока действия патента: 1998.01.19 
(45) Опубликовано: 1999.10.20 
(56) Аналоги изобретения: SU 1529120 A1 (Горьковский НИИ педиатрии и Горьковский медицинский институт), 15.12.89. SU 1608584 A1 (Ростовский мед.институт), 23.11.90. SU 1783431 A1 (Институт проблем криобиологии и криомедицины АН УССР), 23.12.92. 
(71) Имя заявителя: Ивановская государственная медицинская академия 
(72) Имя изобретателя: Сучкова Г.Д.; Шиляев Р.Р.; Чемоданов В.В.; Баклушин А.Е.; Фадеева О.Ю. 
(73) Имя патентообладателя: Ивановская государственная медицинская академия 
(98) Адрес для переписки: 153462, Иваново, пр.Ф.Энгельса, д.8, Государственная медицинская академия 

(54) СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ФОРМЫ АЛЛЕРГОДЕРМАТОЗА У ДЕТЕЙ РАННЕГО ВОЗРАСТА 

Использование: в медицине, а именно в педиатрии и дерматологии. У пациента берут венозную кровь и выделяют из нее лейкоцитарные клетки. После центрифугирования получают две субпопуляции лейкоцитов (нейтрофилы и мононуклеары). Определяют жизнеспособность ядросодержащих клеток и их подсчет. Показатель спонтанной адгезии (САД) рассчитывают по формуле САД = Кк - Кнеадг./Кк х 100%, где Кк - количество нейтрофилов до инкубации; Кнеадг. - количество нейтрофилов после инкубации. Если показатели спонтанной адгезии нейтрофилов находятся на уровне 53,75% 3,48, то имеет место преобладание нейродермита в случае трансформации экземы в нейродермит, а снижение показателей спонтанной адгезии нейтрофилов до 29,18% 1,83 свидетельствует о преобладании экземы. Способ повышает точность и сокращает время диагностики формы аллергодерматозов у детей до 3 лет, в период возрастной эволюции процесса. 1 табл. 


ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ



Изобретение относится к медицине, а именно к педиатрии и дерматологии.

Без четкой дифференцировки отдельных форм аллергодерматозов невозможно назначить рациональное лечение, диетический режим и определить прогноз, так как каждая форма связана с определенными провоцирующими факторами и фоновой патологией. Так, для больных с экзематозными формами характерна пищевая и микробная сенсибилизация, а с лихеноидными - минимальная церебральная недостаточность, постнатальная гипоксия плода.

Прототипом явился существующий в настоящее время клинический способ диагностики формы аллергодерматоза (Торопова Н.П., Синявская О.А. Экзема и нейродермит у детей. - Екатеринбург. - 1993. - С.75-121), который субъективен и зависит от профессиональных навыков врача, а в период, когда у больного имеются признаки как экземы, так и нейродермита, часто приводит к ошибкам диагностики, так как не позволяет четко установить преобладание той или иной формы в короткий промежуток времени.

Мы поставили перед собой задачу разработать диагностические критерии для более точной и ранней диагностики превалирующей формы аллергодерматоза у детей до 3 лет, в период возрастной эволюции процесса.

В качестве критерия оценки клинической формы мы использовали информацию об изменении спонтанной адгезии нейтрофилов, т.е. способности их к прилипанию на различных субстратах, в том числе и к эндотелию сосудов. Теоретическим обоснованием данного способа является следующее. Нейтрофил - высокодифференцированная короткоживущая клеточная популяция, ответственная за индукцию и реализацию воспалительной реакции в условиях сенсибилизированного организма, находится под контролем нервной системы. Эти клетки - посредники между соединительной тканью и нервной системой. Нейтрофил получает сигнал от последней для реализации в тканях своего функционального потенциала и одновременно осуществляет механизм обратной связи, информируя клетки вегетативных ядер нервной системы о метаболическом состоянии и о клеточной композиции тканей организма (Бахов Н.И., Александрова Л.З., Титов В.Н. Роль нейтрофилов в регуляции метаболизма тканей //Лаб. Дело. -1988.- N 6. -С.3 -12). Большинство реакций, в которых участвует нейтрофил, совершается в тканях. Поэтому адгезивность, характеризующая способность клеток прикрепляться и задерживаться на определенных субстратах, имеет важное значение. Адгезивность принадлежит к энергетически зависимым реакциям клеток на адекватные раздражители. Нейтрофилы приобретают гиперадгезивность, отвечая на стимулирующие агенты, которые возникают внутри сосудистого русла и за его пределами. Нейтрофил из циркулирующего становится маргинальным, контактируя с эндотелиоцитами, часть нейтрофилов ингибирует стенку сосуда, переходя в ткани (Маянский А.Н., Маянский Д.Н. Очерки о нейтрофиле и макрофаге. Медицина. Новосибирск, 1983. -255с). Прилипание нейтрофилов к поверхности эндотелия непосредственно предшествует миграции полиморфноядерных лейкоцитов (Damerau B., Keller H.Comparison of adhesion to glass and aggregation of human leucocytes. // Agents Action. - 1983. -Vol. 13. -N 1. -P.53-58.; Patаrrogo M. Leukocyte-cell adhesion a molecular process fundomental in leucocyte physiology // Immunol. Rev. -1990. -Vol.114. -N 2. -P. 67-108.

Таким образом, изменение адгезивных свойств нейтрофилов является универсальным индикатором, отражающим характер воспаления в очагах у больных с аллергодерматозами.

Нами разработан способ диагностики клинической формы аллергодерматоза с помощью простой доступной методики определения спонтанной адгезии нейтрофилов, выполняемой в короткий промежуток времени.

Диагностика осуществляется следующим образом. Из 0,8-1 мл венозной крови пациента, после внесения ее в раствор, состоящий из 2,7% раствора трилона Б и 6% Декарта (раствор полиглюкина) в соотношении 1:2 (0,5 мл раствора трилона Б и 1 мл полиглюкина), выделялись лейкоцитарные клетки. Полученная смесь после перемешивания отстаивалась при комнатной температуре в течение 30 минут. Плазма, обогащенная лейкоцитами, собиралась пастеровской пипеткой и наслаивалась на двухступенчатый градиент плотности фиколл-верографина. Центрифугированием при 1000 об/мин в течение 30 минут получали две субпопуляции лейкоцитов (нейтрофилы и мононуклеары), которые дважды отмывали в среде Хенкса (pH 7,2-7,4).

Определение жизнеспособности ядросодержащих клеток и их подсчет проводили с помощью витальной окраски 0,1% раствором трипанового синего, приготовленного на фосфатном буфере (pH 7,2-7,4). Подсчет жизнеспособных клеток проводили в камере Горяева. Число жизнеспособных клеток в суспензиях составляло 90-95%.

По 0,1 мл взвеси нейтрофилов и 0,1 мл раствора Хенкса (pH 7,4) смешивали, после чего 0,1 мл взвеси помещали в камеру Горяева и подсчитывали количество клеток в 5 больших квадратах, а другую часть смеси, состоящую из 0,05 мл клеток и 0,05 мл раствора Хенкса (pH 7,4) раскапывали в планшеты для иммунологических исследований с v-образным дном и помещали в термостат на 2 часа при температуре 37oC. После инкубации планшет тщательно встряхивали, перемешивали и переносили содержимое в счетную камеру Горяева, где в 5 больших квадратах подсчитывалось число клеток, неадгезировавшихся при инкубировании.

Показатель спонтанной адгезии (САД) (%) рассчитывали по формуле

САД=Кк-Кнеадг / Кк 100%,

где Кк - количество нейтрофилов в 5 больших квадратах камеры Горяева до инкубации;

Кнеадг - количество нейтрофилов в 5 больших квадратах камеры Горяева после инкубации.

Нами обследовано 54 ребенка раннего возраста с различными проявлениями аллергодерматозов. При этом у 20 детей имелись проявления на коже в виде истиной экземы, у 20 - лихенизация и локализация поражения свидетельствовали о сформированном диффузном нейродермите, а у 4 больных процесс носил признаки той и другой формы, 10 детей того же возраста составили контрольную группу.

Диагноз клинической формы кожных проявлений у детей ставился на основании морфологических признаков, локализации, характеристики дермографизма по классификации О.А. Синявской с соавт., (1979). В ходе исследований нами были установлены следующие показатели спонтанной адгезии нейтрофилов (табл. 1).

Для доказательства адекватности оценки формы аллергодерматоза по показателю спонтанной адгезии нейрофилов и клиническому способу диагностики мы провели сопоставление данных клинического осмотра с данными предложенного способа, а также наблюдение за изменением клинических проявлений в динамике, в случаях сочетания признаков экзематозной и лихеноидной форм у одного и того же ребенка. Клиническая картина оценивалась по универсальному статусу формализированной истории болезни 53 Ленинградского ОТКЗ МЗ РСФСР (1982), где высоко информативными оказались прежде всего локализация и характер первичных и вторичных морфологических элементов, наличие зуда, характер дермографизма.

В результате наших исследований, в первой группе детей показатели спонтанной адгезии нейтрофилов были равны 29,18% 1,83, что соответствовало экзематозной форме аллергодерматоза. Во второй группе детей показатели спонтанной адгезии были равны 53,75% 3,48 (P < 0,001), что соответствовало лихеноидной форме (нейродермит) и были выше аналогичных показателей контрольной группы (что не противоречило гистопатологическим исследованиям, свидетельствующим о большом количестве нейтрофилов в очагах с лихенизацией (Цветкова Г. М., Мордовцев В.Н. Патоморфологическая диагностика заболеваний кожи. - М.: Медицина, 1986, -299 с.).

У детей в период трансформации дерматоза из экзематозной формы в лихеноидную (4 группа) показатели спонтанной адгезии были ближе к показателям 2 группы (лихеноидной), а наблюдение за ними в динамике через 4-6 месяцев позволило поставить лихеноидную форму (нейродермит) дерматоза и по клинической картине.

Таким образом, показатели спонтанной адгезии нейтрофилов имеют достаточно отчетливую прогностическую значимость, обеспечивая верификацию патоморфологической формы аллергодерматоза за несколько месяцев до развития клинических манифестаций, что позволяет назначать патогенетическую терапию в более ранние сроки.

Пример 1. Больной С., 11 мес. Ребенок от 2-й беременности, протекавшей на фоне гестоза и анемии, а также осложненной кандидозным кольпитом, 2 родов.

При рождении крик сразу, масса 3,750 г, длина 53 см. На естественном вскармливании до 4 месяцев. Психомоторное развитие - по возрасту. Фоновая патология: энцефалопатия перинатальная. Из перенесенных заболеваний - бронхит в 4,5 месяца. Первые высыпания на коже в виде эритемы, шелушения в области щек, теменной области с 1,5 месяцев. С 5,5 месяцев процесс стал распространенным. В области щек и разгибательной поверхности конечностей на фоне эритемы и отека появились папуло-везикулезные элементы, мокнутие. Наблюдался и получал лечение с диагнозом истинная экзема.

Госпитализирован в 11 месяцев. Беспокоит зуд, усиливающийся при снятии одежды и беспокойстве ребенка. На коже кроме описанных выше проявлений экземы в области локтевых и подколенных сгибов, лучезапястных суставов появились эритема и папулезные элементы, дермографизм носит смешанный характер. Проведено исследование спонтанной адгезии нейтрофилов, выделенных из 0,8-1 мл венозной крови пациента на двухступенчатом градиенте плотности фиколл-верографина. При этом оценивалась способность нейтрофилов к прилипанию на пластиковой поверхности иммунологических планшетов с v-образным дном при двухчасовой инкубации при температуре 37oC.

Показатель спонтанной адгезии (САД) рассчитывали по формуле

САД = Кк - К неадг/ Кк 100%,

где Кк - количество нейтрофилов в 5 больших квадратах камеры Горяева до инкубации;

Кнеадг - количество нейтрофилов в 5 больших квадратах камеры Горяева после инкубации.

Показатель спонтанной адгезии нейтрофилов, полученный у обследуемого ребенка, составил 62,79%, что позволило предположить преобладание у него лихеноидной формы дерматоза. Осмотр ребенка через 4 месяца показал наличие у него клиники сформированного диффузного нейродермита.

Итак, заявленный способ оказался более информативным и прогностически точным в сравнении с традиционным клиническим. Полученная информация объективна, получена за короткий срок, а следовательно, позволяет ставить диагноз в ранние сроки и проводить своевременно соответствующую патогенетическую терапию, что позволяет предупредить развитие инвалидизирующих форм дерматоза.

Пример 2. Больной Г., 1 год 4 мес. Ребенок от 1-й беременности, роды путем кесарева сечения, масса при рождении 3200 г, длина 51 см. Крик при рождении сразу. В период новорождености страдал молочницей слизистой рта. Психомоторное развитие - по возрасту. У отца ребенка - экзема кистей.

Первые манифестации на коже щек, конечностей, туловища по типу эритематосквамозных очагов с папулезными и везикулезными элементами, очагами мокнутия с 4-месячного возраста. Наблюдался с диагнозом экзема. Госпитализирован в возрасте 1 года 4 месяцев.

Процесс в области щек носил признаки экземы в виде инфильтрации, отека, эритемы, микровезикуляции и мокнутия, тогда как на участках кожи в области шеи, локтевых и коленных сгибов появились лихеноидные папулы на фоне эритемы, усилился зуд. Постановка диагноза по клинической картине вызывала определенные трудности. Проведено исследование спонтанной адгезии нейтрофилов, выделенных из 0,8-1 мл венозной крови пациента на двухступенчатом градиенте плотности фиколл-верографина. При этом оценивалась способность нейтрофилов к прилипанию на пластиковой поверхности иммунологических планшетов с v-образным дном при двухчасовой инкубации при температуре 37oC.

Показатель спонтанной адгезии (САД) рассчитывали по формуле

САД = Кк - Кнеадг/Кк 100%,

где Кк - количество нейтрофилов в 5 больших квадратах камеры Горяева до инкубации;

Кнеадг - количество нейтрофилов в 5 больших квадратах камеры Горяева после инкубации.

Полученный показатель 58,88% позволил поставить диагноз диффузного нейродермита.

Осмотр ребенка через 6 месяцев показал отсутствие акзематозных проявлений, но сохранение высыпаний в виде лихеноидных папул на эритематозном фоне в области лучезапястных и коленных сгибов, наличие лихенизации (клинические признаки диффузного нейродермита).

Таким образом, заявленный способ является объективным и информативным, отражает изменения в организме, развившиеся еще до клинической манифестации, лихеноидной формы, что делает возможным до четких клинических проявлений нейродермита прогнозировать у ребенка ее развитие и провести патогенетическое лечение в более ранние сроки. Кроме того, заявленный способ информативен, объективен по сравнению с клиническим методом, нетрудоемок, прост и общедоступен в техническом исполнении. 


ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ



Способ диагностики формы аллергодерматоза у детей раннего возраста, включающий определение формы аллергодерматоза по клиническим признакам, отличающийся тем, что становится возможным в короткий промежуток времени устанавливать преобладающую форму аллергодерматоза в период трансформации экземы в нейродермит, по показателю спонтанной адгезии нейтрофилов, находящемуся в случаях преобладания нейродермита в пределах 53,75 3,48 и снижающемуся до уровня 29,18% 1,83 при преобладании у них признаков экземы.