СПОСОБ ОЦЕНКИ СОСТОЯНИЯ НОВОРОЖДЕННОГО РЕБЕНКА

СПОСОБ ОЦЕНКИ СОСТОЯНИЯ НОВОРОЖДЕННОГО РЕБЕНКА


(19) RU (11) 2075084 (13) C1

(51) 6 G01N33/68 

(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ 
Статус: по данным на 09.07.2007 - прекратил действие 

--------------------------------------------------------------------------------

(14) Дата публикации: 1997.03.10 
(21) Регистрационный номер заявки: 93044215/14 
(22) Дата подачи заявки: 1993.09.01 
(45) Опубликовано: 1997.03.10 
(56) Аналоги изобретения: Н.М. Межирова, Т.Ю. Брыкалина, Т.Ю. Литвинова, Е.М. Донцов. Вопросы охраны материнства и детства. - 1991, N 5, с.68. 
(71) Имя заявителя: Нижегородский научно-исследовательский институт детской гастроэнтерологии 
(72) Имя изобретателя: Щельцина Н.Ю.; Переслегина И.А. 
(73) Имя патентообладателя: Нижегородский научно-исследовательский институт детской гастроэнтерологии 

(54) СПОСОБ ОЦЕНКИ СОСТОЯНИЯ НОВОРОЖДЕННОГО РЕБЕНКА 

Изобретение относится к медицине, а именно к перинатологии, и может быть использовано для комплексной оценки состояния новорожденного ребенка, прогноза течения неонатального периода и своевременного назначения адекватной терапии. Целью предлагаемого изобретения является повышение точности способа за счет чувствительности к ранним проявлениям эндогенной интоксикации. Поставленная цель достигается тем, что в эритроцитах пуповинной крови определяют активность глутатионтрансферазы и глутатионредуктазы, рассчитывают отношение первой ко второй и при значении этого отношения 1,8 и выше определяют наличие интоксикации организма новорожденного ребенка, Новым является определение в пуповинной крови активности глутатионтрансферазы, ее соотношения с глутатионредуктазой и использование этого соотношения для выявления интоксикации организма. 1 табл. 


ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ



Изобретение относится к медицине, а именно к перинатологии, и может быть использовано для комплексной оценки состояния новорожденного ребенка, прогноза течения неонатального периода и своевременного назначения адекватной терапии.

Разработка критериев эндогенной интоксикации организма является важной практической задачей для клиницистов, в целом, и для неонатологов, в частности. Выявление наличия интоксикации позволяет неонатологу всесторонне оценить состояние новорожденного, назначить адекватную детоксикационную терапию и тем самым повысить эффективность лечебно-профилактических мероприятий.

Под эндогенной интоксикацией понимают аутоинтоксикацию, то есть патологическое состояние, вызванное общим действием на организм токсических веществ эндогенного происхождения (Энциклопедический словарь медицинских терминов. Под ред. Б.В. Петровского, М. изд-во "Советская энциклопедия", 1982, т. 1, с. 417).

Наиболее распространенным и обязательным способом оценки состояния новорожденного ребенка является оценка по десятибальной шкале Апгар, согласно которой в течение первых минут после рождения двукратно, через 1 и 5 мин после рождения оценивают 5 клинических признаков (частоту и ритм сердцебиений, частоту дыханий, окраску кожных покровов, состояние мышечного тонуса и нервно-рефлекторной возбудимости). В зависимости от суммы баллов состояние оценивают при 8 10 баллах как удовлетворительное, при 5 7 баллах как средней тяжести, при 1 4 баллах как тяжелое.

Способ дает интегративную оценку общего состояния новорожденного ребенка, не раскрывая патогенетического механизма нарушения состояния. Отдельные звенья могут быть оценены существующими способами оценки состояния новорожденного (определение кислотно-основного баланса крови, активности трансаминаз, водно-солевого обмена и др.). При этом оцениваются разные виды метаболического гомеостаза, но не принимается во внимание интоксикации организма, как этиопатогенетический фактор нарушения состояния плода.

Ближайшим аналогом является способ выявления наличия эндогенной интоксикации новорожденного по количеству среднемолекулярных пептидов в сыворотке крови (Н. М. Межирова, Т.Ю. Брыкалина, Т.Ю. Литвинова, Е.М. Донцов. Средние молекулы как критерий оценки эндогенной интоксикации при критических состояниях у новорожденных в раннем неонатальном периоде//Вопр. охр. матер. и дет. 1991, N 5, с. 68). При повышении уровня средних молекул (СМ) судят о наличии эндогенной интоксикации. Способ прост в исполнении. Однако, данный критерий является недостаточно чувствительным, что проявляется существенной отстроченностью (несколько суток) повышения концентрации СМ от момента воздействия факторов, вызывающих интоксикацию, поэтому авторы рекомендуют исследование уровня СМ в динамике, что каждый раз связано с забором венозной крови, а значит повышенной травматичностью.

Недостаточная чувствительность способа объясняется следующим: СМ является вторичными эндогенными токсинами, вызывающими гемодинамические расстройства, нервно-психические нарушения, отек легких и мозга, полисерозиты, анемию, развитие септических состояний; уровень любых токсинов находится под контролем детоксицирующих систем, и только срыв функции последних приведет к накоплению токсина, которое можно выявить лабораторными тестами. С этой позиции более ранняя диагностика эндогенной интоксикации организма возможна на основе оценки состояния детоксицирующих механизмов.

Целью предлагаемого изобретения является повышение точности способа за счет чувствительности к ранним проявлениям эндогенной интоксикации.

Поставленная цель достигается тем, что в эритроцитах пуповинной крови определяют активность глутатионтрансферазы и глутатионредуктазы, рассчитывают отношение первой ко второй и при значении этого отношения 1,8 и выше определяют наличие интоксикации организма новорожденного ребенка.

Новым является определение в пуповинной крови активности глутатионтрансферазы (ГТ), ее соотношения с глутатионредуктазой (ГР) и использование этого соотношения для выявления интоксикации организма как детей, так и взрослых. Глутатионтрансферазы (ГТ)-группа ферментов, относящаяся ко второй фазе биотрансформации токсических соединений фазе конъюгации. Защитное действие ГТ осуществляется посредством нескольких механизмов, основным среди которых является катализ конъюгации токсина с восстановленным глутатионом (ГSH). Образующиеся конъюгаты после ряда преобразований выводятся через почки или с калом. Активность ГТ может индуцироваться при поступлении токсина в организм. Эффективность функции ГТ зависит от количества субстрата - ГSH, дефицит которого способствует нарушению данного детоксикационного механизма.

Одним из поставщиков ГSH является реакция, катализируемая глутатионредуктазой (ГР):



Исходя из вышесказанного, изменение активности ГТ свидетельствует о степени напряженности системы детоксикации организма, а соотношение ГТ/ГР будет характеризовать сбалансированность реакций, использующих и синтезирующих глутатион.

Работоспособность способа доказана следующими фактами:

1. Обследовано 64 новорожденных ребенка, в эритроцитах пуповинной крови которых определяли активность ГТ, ГР и рассчитывали отношение ГТ/ГР. Величина отношения изменялась в диапазоне от 0,4 до 9,7. За критерий интоксикации принято значение отношения 1,8 и выше, характеризующее напряжение детоксикационного механизма и нарушение его субстратного обеспечения (см.таблицу).

Верификация оценки состояния новорожденного проведена с использованием комплексного обследования:

а) при оценке состояния новорожденного по шкале Апгар установлено, что дети с отношением ГТ/ГР эритроцитов 1,8 и выше имели низкую оценку по шкале Апгар (3 7 баллов) в 30% случаев, а дети с отношением ниже 1,8 все имели оценку 8 10 баллов. Кроме того, в первой группе детей еще 20% детей имели признаки внутриутробной гипоксии в родах (нарушение сердцебиения плода, мекониальные амниотические воды). Во второй группе такие симптомы отмечались лишь в 4% случаев.

б) при динамическом исследовании концентрации среднемолекулярных пептидов в пуповинной крови и в венозной крови на 3 4 сутки после рождения установлено, что у детей с величиной отношения 1,8 и выше в 64% случаев происходит нарастание концентрации СМ к 3 суткам. В другой группе детей нарастание СМ отмечено только в 20% случаев. Между отношением ГТ/ГР эритроцитов пуповинной крови и концентрацией СМ на 3-4 сутки выявлена прямая корреляционная связь (ч +0,45, р 0,05). При этом увеличение ГТ/ГР выявляется сразу после рождения, т.е. раньше изменения концентрации СМ.

в) клиническое наблюдение за детьми на протяжении 5 дней показало, что у новорожденных с высоким значением ГТ/ГР эритроцитов пуповинной крови, но без признаков кислородной недостаточности при рождении в 45% случаев отмечалась патология переходного периода в виде нарушения гемоликвородинамики.

В другой группе нарушение процессов адаптации отмечено в 34% при этом в 17% случаев оно было обусловлено травматическими причинами.

Способ осуществляется следующим образом.

0,5 1,0 мл пуповинной крови новорожденного ребенка помещают в пробирку с 3,8% цитрата натрия (в соотношении 10:1). Отделяют эритроциты от плазмы центрифугированием (10 мин, 3000 об/мин) и дважды их отмывают 2-кратным объемом 0,15 М хлористого натрия. Готовят гемолизат 1:40, в котором определяют активность ферментов. Активность ГТ определяют методом Habig W.H. Pabst M.G. Gacoby W. B. (Glutatione-S-transferases//G. Biolog. Chem. 1974, v. 249, p. 7130). Активность ГР определяют методом Pinto R.E. Bartley V. (The effect of age sex on glutatione reductase and glutatione peroxidase activities//G. Biochem. 1969, v. 112, p. 109 115).

Рассчитывают отношение ГТ/ГР и при значении этого отношения 1,8 и выше определяют наличие интоксикации организма новорожденного ребенка. Примеры конкретного исполнения.

1. Новорожденный М. Родился в срок. Оценка по шкале Апгар 3/5 баллов. В эритроцитах пуповинной крови определены активность ГТ, ГР и отношение ГТ/ГР, которые составили соответственно 3,88 мкмоль/л мин, 2,12 мкмоль/л мин и 1,8.

Определено наличие интоксикации организма новорожденного ребенка, которая подтвердилась увеличением концентрации СМ с 0,340; 0,300 опт. ед. после рождения до 0,500; 0,360 опт. ед. на 3 сутки жизни и развитием нарушения гемоликвородинамики.

2. Новорожденный Г. Родился в срок. Оценка по шкале Апгар 8/9 баллов. Активность ГТ, ГР эритроцитов пуповинной крови и отношение ГТ/ГР составили 5,24; 2,91 мкмоль/л мин и 1,7. Состояние новорожденного оценено как состояние без эндогенной интоксикации.

Уровень СМ к 3 суткам не увеличился и составлял, как и при рождении 0,210 и 0,200 опт. ед.

Применение способа обеспечивает следующий положительный эффект:

1. раннее выявление эндогенной интоксикации;

2. возможность своевременного назначения патогенетической детоксикационной терапии;

3. атравматичность, обусловленная взятием пуповинной крови после перерезки пуповины. 


ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ



Способ определения состояния новорожденного ребенка, включающий выявление наличия интоксикации организма путем биохимического исследования крови, отличающийся тем, что в эритроцитах пуповинной крови определяют активность глутатионтрансферазы и глутати- онредуктазы, рассчитывают отношение первой ко второй и при значении этого отношения 1,8 и выше определяют наличие интоксикации организма новорожденного ребенка.