СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ ХАРАКТЕРА ТЕЧЕНИЯ ОСТРОГО ЛИМФОБЛАСТНОГО ЛЕЙКОЗА У ДЕТЕЙ

СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ ХАРАКТЕРА ТЕЧЕНИЯ ОСТРОГО ЛИМФОБЛАСТНОГО ЛЕЙКОЗА У ДЕТЕЙ


RU (11) 2152028 (13) C1

(51) 7 G01N33/48, G01N33/50, G01N33/53 

(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ 
Статус: по данным на 10.08.2007 - прекратил действие 

--------------------------------------------------------------------------------

(14) Дата публикации: 2000.06.27 
(21) Регистрационный номер заявки: 99114162/14 
(22) Дата подачи заявки: 1999.07.05 
(24) Дата начала отсчета срока действия патента: 1999.07.05 
(45) Опубликовано: 2000.06.27 
(56) Аналоги изобретения: Бельченко Д.И. Эритроклазические костномозговые кластеры и прогнозирование характера течения острого лимфобластного лейкоза. - Клиническая лабораторная диагностика, 1993, N 4, с.9-13. RU 1543997 А1, 27.02.95. RU 2044997 С1, 10.12.95. RU 2069858 С1, 27.11.96. Демидова И.В и др. Цитохимические показатели бластных клеток и лимфоцитов в дифференциальной диагностике и прогнозе течения острых лейкозов. II Всесоюзный съезд гематологов. Тезисный доклад. - М., 1985, 182 с. Смирнова Е.А., Бельченко Д.И. Оценка эффективности цитостатической терапии острого лимфобластного лейкоза с помощью феномена эритроклазических кластеров и экзоцитарного лизиса входящих в них эритроцитов. - Педиатрия, 1996, N 2, с. 53-55. 
(71) Имя заявителя: Тверская медакадемия; Бельченко Дмитрий Иванович; Кривошеина Елена Леонидовна 
(72) Имя изобретателя: Бельченко Д.И.; Кривошеина Е.Л. 
(73) Имя патентообладателя: Тверская медакадемия; Бельченко Дмитрий Иванович; Кривошеина Елена Леонидовна 
(98) Адрес для переписки: 170642, г.Тверь, ул. Советская 4, Тверская медакадемия 

(54) СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ ХАРАКТЕРА ТЕЧЕНИЯ ОСТРОГО ЛИМФОБЛАСТНОГО ЛЕЙКОЗА У ДЕТЕЙ 

Изобретение может быть использовано в медицине, а именно в педиатрии и детской гематологии. В обычных мазках периферической крови больных определяют количество ауторозеток и интенсивность экзоцитарного лизиса эритроцитов. При исходном абсолютном количестве ауторозеток с экзоцитарным лизисом эритроцитов в активную фазу острого лимфобластного лейкоза более 13,0 109/л прогнозируют наступление раннего рецидива лейкоза и(или) развитие внекостномозговых пролифератов, а при исходном содержании количества ауторозеток с экзоцитарным лизисом эритроцитов менее 3,0 109/л можно прогнозировать длительную ремиссию. Способ более доступен, недорогой, пригоден к применению в любом лечебном учреждении, не требует дополнительных затрат. 


ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ



Изобретение относится к медицине, а именно - к педиатрии и детской гематологии.

Злокачественные опухоли среди причин смертности детей в возрасте старше трех лет занимают в России второе место после показателя смертности детей от несчастных случаев. В структуре заболеваемости детей опухолями на первом месте стоят острые лейкозы, при этом заболеваемость острым лимфобластным лейкозом (ОЛЛ) составляет до 85% всех случаев лейкозов. Современные принципы терапии, основанные на достижениях передовых медицинских технологий, позволили в последние годы получать стабильные, свыше 5 лет, ремиссии ОЛЛ, расцениваемые как практическое выздоровление у 70-80% больных, однако до 22% этих "долгожителей" дают поздние рецидивы в сроки от 0,5 до 4 лет после отмены терапии. Поэтому исследования, посвященные вопросам инициального прогноза ОЛЛ на длительную ремиссию и излечение, являются важным разделом лейкозологии.

Среди факторов риска неблагоприятного течения ОЛЛ у детей выделяют возраст на момент постановки диагноза, пол, инициальное количество лейкоцитов и другие. Одним из наиболее существенных критериев для прогнозирования результатов лечения являются структурные нарушения хромосом при ОЛЛ, обнаруживаемые с помощью цитогенетических исследований изменения кариотипа бластных клеток.

Среди передовых медицинских технологий, позволяющих прогнозировать течение ОЛЛ, важная роль принадлежит иммунофенотипированию.

Иммунологические методы выявляют гетерогенность в пределах морфологически однородной популяции лимфоидных лейкозных клеток. Иммунологические исследования включают традиционные реакции розеткообразования с эритроцитами барана (Е-РОК) и комплементарного розеткообразования (ЕАС-РОК) - in vitro [1] . Для детальной иммунологической диагностики применяют иммунофенотипирование бластных клеток с использованием моноклональных антител к различным антигенным детерминантам, позволяющее выявлять дифференцировочные антигены, характеризующие стадию и направление дифференцировки кроветворных клеток, дающих начало злокачественному клону. Установление иммунологического подварианта предполагает оценку комплекса маркеров, имеющих взаимосвязь с рецепторными, пролиферативными и прочими характеристиками лимфобластов, которые могут иметь решающее значение при определении чувствительности клеток к противолейкозной терапии. Иммунофенотипирование позволяет выделять как прогностически наиболее благоприятный подвариант: пре-пре-В-клеточный подвариант ОЛЛ ("общий"), менее благоприятные - стволовой (или "О") и Т-клеточный иммунологические подварианты ОЛЛ, так и подвариант с плохим прогнозом - В-клеточный ОЛЛ [5]. Однако метод требует наличия дорогостоящих панелей диагностических моноклональных антител к дифференцировочным антигенам гемопоэтических клеток и аппаратуры, имеющихся в наличии лишь в небольшом числе лечебных учреждений, а при отсутствии такой аппаратуры - и значительных временных затрат для проведения исследования.

Прототипом заявляемого способа является способ, предложенный Д.И. Бельченко - исследование феномена эритроклазических костномозговых кластеров (ЭКК) и экзоцитарного лизиса входящих в них эритроцитов для оценки эффективности цитостатической терапии ОЛЛ и прогнозирования наступления ремиссии и рецидива [4, 6]. ЭКК - это клеточные ассоциации, сходные по своему строению с розетками, образуемыми in vitro клетками иммунной системы и эритроцитами. В отличие от известных гемопоэтических островков (кластеров), состоящих из макрофагов и гемопоэтических клеток костного мозга, находящихся на разных стадиях созревания, обнаруженные автором кластеры, за исключением кластеробразующих клеток, состояли из зрелых эритроцитов и, следовательно, не были связаны непосредственно с процессами гемопоэза. Кроме того, в отличие от гемопоэтических кластеров, образуемых стромальными элементами костного мозга, ЭКК бывают образованы также и гемопоэтическими, и бластными, т. е. паренхиматозными, клетками. Общей особенностью клеток, находящихся в центре эритроклазических кластеров, является наличие в них гидролитических ферментов. Другой особенностью эритроклазических кластеров является экзоцитарный лизис входящих в их состав эритроцитов (эритроклазия) кластеробразующими клетками благодаря наличию в них гидролитических ферментов и других цитотоксических веществ. Костный мозг для исследования по предлагаемой методике получали стернальной пункцией. Количество ЭКК определяли в мазках аспиратов костного мозга при подсчете 500 миелокариоцитов. Выявлено достоверное влияние цитостатического лечения на процесс эритроклазического кластерообразования в костном мозге больных ОЛЛ и на способность кластеробразующих клеток к лизису эритроцитов, входящих в состав кластеров. Уменьшение числа ЭКК с экзоцитарным лизисом эритроцитов в результате лечения с высокой степенью достоверности может свидетельствовать об эффективности цитостатической терапии. Отсутствие указанной закономерности позволяет предположить резистентность опухоли к лечению.

К недостаткам метода можно отнести травматичный и требующий особого навыка характер способа получения материала для исследования - костномозговой пункции - и значительные временные затраты для подсчета 500 миелокариоцитов и ЭКК при каждом исследовании.

Авторы предлагают свой способ прогнозирования характера течения ОЛЛ у детей с помощью определения интенсивности экзоцитарного лизиса эритроцитов в ауторозетках (АР) периферической крови. Кроме розеткообразования in vitro существует внутрисосудистое (т. е. in vivo) ауторозеткообразование [2, 3]. При ОЛЛ розеткообразующими клетками могут быть моноциты, гранулоциты и бластные клетки. Являющиеся объектом действия розеткообразующих клеток эритроциты, благодаря наличию на их поверхности соответствующих рецепторов, способны фиксировать иммунные комплексы, антитела, антигены различной природы, что и определяет возможность участия эритроцитов в процессах ауторозеткообразования в периферической крови. В организме кроме деструкции старых эритроцитов постоянно происходит элиминация эритроцитов с измененными свойствами. Усиление эритродиереза может наблюдаться при различных патологических состояниях, в основе которых лежат изменения гемопоэза, в частности при острых лейкозах. Внутрисосудистое ауторозеткообразование приводит к экзоцитарному лизису эритроцитов с поврежденными или измененными мембранами и их элиминации из циркулирующей крови, т.е. является компонентом механизма внутрисосудистого разрушения эритроцитов. Количество АР при ОЛЛ у детей определяли в обычных мазках периферической крови при подсчете 200 лейкоцитов. Окраска мазков по Гимзе с последующей световой микроскопией. Авторами выявлено достоверное увеличение общего абсолютного количества АР и АР с экзоцитарным лизисом эритроцитов при ОЛЛ у детей в активную фазу заболевания по сравнению с их количеством в периоде ремиссии, когда преобладают АР без экзоцитарного лизиса эритроцитов. При наиболее тяжелом течении заболевания с возникновением внекостномозговых пролифератов и ранних рецидивов ОЛЛ обнаружено резкое увеличение абсолютного количества АР с экзоцитарным лизисом эритроцитов в активную фазу ОЛЛ (более 13,0 109/л). Исходное абсолютное количество АР с экзоцитарным лизисом эритроцитов в крови больных ОЛЛ, составляющее более 3,0 109/л, может служить показателем риска непродолжительности ремиссии; соответственно исходное абсолютное количество АР с экзоцитарным лизисом эритроцитов, составляющее менее 3,0 109/л, является благоприятным показателем прогноза длительной, свыше 5 лет, ремиссии.

Исследование эндогенного ауторозеткообразования при ОЛЛ у детей является общедоступным и недорогим методом, пригодным к применению в любом лечебном учреждении; не требующим дополнительных затрат, так как для исследования необходимы только приготовленные и окрашенные обычным способом мазки периферической крови, исследуемые световой микроскопией. Метод помогает определить инициальный прогноз на непродолжительную или длительную ремиссию ОЛЛ и может быть использован наряду с другими методами прогнозирования течения ОЛЛ у детей.

ЛИТЕРАТУРА

1. Барышников А.Ю., Ленская P.В., Кондратчик К.Л. и др. Особенности иммунологических субвариантов острого лимфобластного лейкоза у детей. //Гематология и трансфузиология. - 1987. - N 2. - С. 26-31.

2. Бельченко Д. И. Розеткообразование в периферической крови крыс при гипокинезии. //Космическая биология и авиакосмическая медицина. - 1990. - N 4. - С. 58-59.

3. Бельченко Д.И. Внутрисосудистое ауторозеткообразование при гемолитических анемиях. //Гематология и трансфузиология. - 1992. -N 4. - С. 23-25.

4. Бельченко Д.И. Эритроклазические костномозговые кластеры и прогнозирование характера течения острого лимфобластного лейкоза. //Клинич. лабораторная диагностика. - 1993. - N 4. - С. 9-13.

5. Курдюков Б.В., Тупицын Н.Н., Маякова С.А. и др. Зависимость прогноза заболевания от иммунологической характеристики острого лимфобластного лейкоза у детей. //Педиатрия. - 1997. - N 4. - С. 20 - 24.

6. Смирнова Е. А., Бельченко Д.И. Оценка эффективности цитостатической терапии острого лимфобластного лейкоза с помощью феномена эритроклазических кластеров и экзоцитарного лизиса входящих в них эритроцитов. //Педиатрия. - 1996. - N 2. - С. 53-55. 


ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ



Способ прогнозирования характера течения острого лимфобластного лейкоза у детей, включающий определение интенсивности экзоцитарного лизиса эритроцитов, отличающийся тем, что интенсивность экзоцитарного лизиса эритроцитов определяют в ауторозетках периферической крови больных и при исходном абсолютном количестве ауторозеток с экзоцитарным лизисом эритроцитов в активную фазу острого лимфобластного лейкоза более 13,0 109/л прогнозируют наступление раннего рецидива лейкоза и (или) развитие внекостномозговых пролифератов, а при исходном содержании абсолютного количества ауторозеток с экзоцитарным лизисом эритроцитов менее 3,0 109/л можно прогнозировать длительную ремиссию.