СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ НАРУШЕНИЙ АДАПТАЦИИ НОВОРОЖДЕННЫХ ДЕТЕЙ ОТ МАТЕРЕЙ С ХРОНИЧЕСКИМИ ВОСПАЛИТЕЛЬНЫМИ ГИНЕКОЛОГИЧЕСКИМИ ЗАБОЛЕВАНИЯМИ

СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ НАРУШЕНИЙ АДАПТАЦИИ НОВОРОЖДЕННЫХ ДЕТЕЙ ОТ МАТЕРЕЙ С ХРОНИЧЕСКИМИ ВОСПАЛИТЕЛЬНЫМИ ГИНЕКОЛОГИЧЕСКИМИ ЗАБОЛЕВАНИЯМИ


RU (11) 2237900 (13) C2

(51) 7 G01N33/577 

(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ 
Статус: по данным на 10.08.2007 - прекратил действие, но может быть восстановлен 

--------------------------------------------------------------------------------

(14) Дата публикации: 2004.10.10 
(21) Регистрационный номер заявки: 2002110678/15 
(22) Дата подачи заявки: 2002.04.22 
(24) Дата начала отсчета срока действия патента: 2002.04.22 
(43) Дата публикации заявки: 2003.11.27 
(45) Опубликовано: 2004.10.10 
(56) Аналоги изобретения: RU 2152619 C1, 10.07.2000. АНТИПОВА И.И. и др. Течение раннего неонатального периода и прогностические критерии нарушений адаптации у новорожденных группы высокого инфекционного риска, Поволжская научно-практическая конференция "Современные методы диагностики и лечения в акушерстве и гинекологии" Сб. научн. тр. - Саратов, 1999, с.29-31. FADEL S et al. Cellular immune responses in neonates, Int Rev Immunol, 2000, 19(2-3), p.173-193. 
(72) Имя изобретателя: Афонин А.А. (RU); Кравченко Л.В. (RU); Ефанова Е.А. (RU); Валенцева К.В. (RU); Левкович М.А. (RU) 
(73) Имя патентообладателя: Ростовский НИИ акушерства и педиатрии (RU) 
(98) Адрес для переписки: 344012, г.Ростов-на-Дону, ул. Мечникова, 43, РНИИАП, патентный отдел 

(54) СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ НАРУШЕНИЙ АДАПТАЦИИ НОВОРОЖДЕННЫХ ДЕТЕЙ ОТ МАТЕРЕЙ С ХРОНИЧЕСКИМИ ВОСПАЛИТЕЛЬНЫМИ ГИНЕКОЛОГИЧЕСКИМИ ЗАБОЛЕВАНИЯМИ 
Изобретение относится к области медицины, а именно к педиатрии, и может быть использовано для прогнозирования нарушений в периоде постнатальной адаптации новорожденных. Сущность способа состоит в том, что в пуповинной крови определяют субпопуляцию Т-лимфоцитов с рецепторами СД3+ СД69+, СД3+ СД71+, СД3+ СД95+ и при выявлении повышения субпопуляций лимфоцитов с рецепторами СД3+ СД69+ выше 7%, СД3+ СД71+ выше 12% и СД3+ СД95+ выше 15% прогнозируют нарушения адаптации новорожденных. Техническим результатом является повышение точности прогнозирования нарушения адаптации новорожденных на субклинической стадии. 



ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ


Изобретение относится к области медицины, а именно к педиатрии, и найдет использование для протезирования нарушений в периоде посгнатальной адаптации новорожденных и отбора детей для проведения последующего лечения.

Новорожденных детей в зависимости от состояния здоровья педиатры делят на две группы: с физиологическим и осложненным течением раннего периода постнатальной адаптации. Дети с физиологическим течением раннего периода адаптации не имеют ни соматических, ни неврологических нарушений, в то время как у детей с осложненным течением адаптации имеет место развитие симптомов инфекционного токсикоза, манифестация одного или нескольких очагов инфекции (пневмония, омфалит, гепатит и других), в связи с чем им назначают антибактериальную терапию (Н.Н.Володин и соавт. “Роль про- и противовоспалительных цитокинов в иммунной адаптации новорожденных детей” International Journal on Immunorehebilitation, 2000. Volume 2, Number 1. - Р.175-184). Таким образом, осложненное течение адаптации новорожденных тесно связано с развитием инфекционно-токсических процессов в организме ребенка.

В последние годы возросло число женщин фертильного возраста, инфицированных такими возбудителями как цитомегаловирусы, герпесвирусы, энтеровирусы, хламидии, микоплазмы, вирусы гепатита В и С, Эбштейн-Барра (Г.А.Самсыгина, 1997), что приводит к росту хронических воспалительных гинекологических заболеваний и в дальнейшем проявляется рождением детей с нарушениями адаптации, приводящими к развитию инфекции.

Диагностика нарушений адаптации у новорожденных с точки зрения прогноза развития внутриутробной инфекции в неонатальном периоде в последнее десятилетие осуществляется следующими методами.

При внутриутробной инфекции у детей на 1-2 сутки жизни определяется повышение концентрации интерлейкина-8 в диапазоне концентраций 190-100 мг/мл, концентрации С-реактивного белка до 2,66+0,6 мг/дл, 1-кислого гликопротеида 38+6,2 мг/дл (Н.В.Володин и соавт. “Роль про- и противовоспалительных цитокинов в иммунной адаптации новорожденных детей” International Journal on Immunorehebilitation, 2000. Volume 2, Number 1).

В случае бактериальных инфекций у новорожденных имеет место достоверное повышение уровней интерлейкина 1-в, фактора некроза опухолей - (М.В.Дегтярева, 1995, дисс. канд. мед. наук “Комплексное исследование провоспалительных иммуноцитокинов и функционального состояния лимфоцитов у новорожденных детей в норме и при патологии”).

У новорожденных детей с пневмонией бактериального генеза определяется низкий уровень продукции активных форм кислорода полиморфно-ядерными лейкоцитами. Определение повышенной чувствительности Т-лимфоцитов новорожденных к активационному апоптозу свидетельствует о массивном бактериальном внутриутробном инфицировании (В.Ю.Талалаев, 2000, Педиатрия, №3).

Снижение продукции активных форм кислорода полиморфно-ядерными лейкоцитами, определяемой методом люминолзависимой хемилюминесценции (до 2,571,37) позволяет диагностировать различные инфекции у новорожденных (Л.В.Ганковская и соавт., 2000, International Journal on Immunorehabilitation, 2000. Volume 2, Number 1).

Внутриутробные инфекции характеризуются достоверным снижением содержания СД3+ (в среднем до 45,3±4,2%) и СД 4+ (в среднем до 29,33,1%) популяций лимфоцитов (Г.А.Самсыгина, 1997, Педиатрия №5, 1997).

Для оценки состояния новорожденного ребенка определяют содержание супероксиддисмутазы, креатина и СМП 254 и при диагностически значимых отклонениях двух показателей из трех состояние оценивается как неудовлетворительное с точки зрения прогноза заболеваемости в первый год жизни ребенка (патент РФ №2075084, 1997).

У новорожденных от переношенной беременности в сыворотке крови определяют уровень тироксина на первые и пятые сутки жизни и при снижении уровня этого показателя на 25% и более на пятые сутки прогнозируют высокую степень заболеваемости новорожденных (патент РФ №2014613, 1994).

У матерей новорожденных, перенесших внутриутробную гипоксию, в зимний период определяют в молозиве первых суток после родов показатели неспецифической защиты и при их изменениях в сторону уменьшения функциональной активности нейтрофильных гранулоцитов, количества неферментных катионных белков, увеличения общего содержания лейкоцитов, лимфоцитов и макрофагов прогнозируют в раннем постнатальном периоде развитие локальных гнойно-воспалительных процессов у их новорожденных с гипоксией в 80% (заявка РФ №99116922/14, 1999).

При диагностике состояния детей по определению в крови степени хемилюминесценции наблюдается ряд недостатков. Прежде всего следует отметить, что хемилюминесценция является интегральным показателем свободно-радикального окисления и не учитывает определенных реакций их образования. Последнее снижает возможность целенаправленной специфической терапии. Так, например, снижение активных форм кислорода при образовании NO радикала приводит к развитию клинических признаков, не характерных для снижения активных форм кислорода, образующихся вследствие других патологических процессов. Следовательно, данные методы не позволяют отдифференцировать вид метаболических нарушений для проведения специфических методов лечения.

В изобретении с использованием для диагностики внутриутробных инфекций по уровню мембранных молекул клеток СД3+ и СД4+ Т-лимфоцитов хотя и могут быть использованы для диагностики ее наличия, но не позволяют установить время развития инфекции.

Прототипом изобретения избран “Способ прогнозирования локальных гнойно-воспалительных процессов у новорожденных детей” (заявка РФ №99116646/14, 1999, Хубаева И.В. и соавт.).

Сущность способа, избранного в качестве прототипа, состоит в том, что в раннем постнатальном периоде у новорожденных с выраженной гипоксией определяют показатели в пуповинной и периферической крови в первые сутки жизни и при их изменениях в сторону уменьшения функциональной активности нейтрофильных гранулоцитов, лейкоцитарного индекса реактивности, составляющих гемограмму, и в сторону увеличения уровня перекисного окисления липидов и общего содержания лейкоцитов прогнозируют развитие локальных гнойно-воспалительных процессов в весенне-летний сезон с вероятностью 80-100%.

Способ, избранный в качестве прототипа, обладает рядом несовершенств:

1. Предполагает использование только у новорожденных с выраженной гипоксией.

2. Не позволяет проводить дифференциальный диагноз между внутриутробной инфекцией и инфицированием.

3. Не может быть использован для прогноза вирусной инфекции.

4. Способ используется для диагностики только локальных гнойно-воспалительных процессов и не затрагивает генерализованные инфекции.

Указанные недостатки устраняются в данном заявляемом способе.

Задача изобретения: повышение точности прогнозирования инфекции в периоде постнатальной адаптации у новорожденных для назначения адекватной терапии.

Поставленная задача решается тем, что детям, родившимся клинически здоровыми от матерей с различными хроническими воспалительными гинекологическими заболеваниями, проводят определение субпопуляций Т-лимфоцитов пуповинной крови с рецепторами СД3+ СД69+, СД3+ СД71+, СД3+ СД95+ и при выявлении уровней субпопуляций лимфоцитов с рецепторами СД3+ СД69+ выше 7%, СД3+ СД71+ выше 12% и СД3+ СД95+ выше 15% прогнозируют развитие инфекции в ранней постнатальной адаптации.

Данный способ позволяет на субклинической стадии диагностировать нарушение адаптации у инфицированных новорожденных, приводящих к развитию инфекции, провести дифференциальную диагностику между инфекцией и инфицированием у новорожденных и в случае прогноза развития инфекции назначать антибактериальную терапию до манифестации заболевания.

В монографии Р.М.Хаитова (“Иммунология”, Москва, 2000) указано, что Т-лимфоциты с рецепторами СД3+ СД69+, СД3+ СД71+ используются как ранний маркер активации, их повышение связано с началом пролиферации лимфоцитов, в то время как повышение СД3+ СД95+ субпопуляций лимфоцитов объясняется запуском через эти рецепторы внутриклеточного механизма самоуничтожения - апоптоза.

Однако в литературе не встречается примеров использования этих методов при диагностике нарушений адаптации у новорожденных. В связи с тем, что в ранней постнатальной адаптации велика роль иммунной системы (Benitz W.E., 1998) нами были исследованы уровни субпопуляций Т-лимфоцитов пуповинной крови с рецепторами СД3+ СД69+ и СД3+ СД71+ как ранних маркеров активации и с рецепторами СД3+ СД95+, индуцирующих апоптоз клетки.

По нашим данным у женщин с хроническими воспалительными гинекологическими заболеваниями в 90% случаев имеют место осложнения беременности и родов, состояние плода и новорожденного, при этом в 53% случаев это проявляется нарушением адаптации у их новорожденных.

Все вышеуказанное явилось основанием использования определения повышения субпопуляций Т-лимфоцитов с рецепторами СД3+ СД69+, СД3+ СД71+, СД3+ СД95+ в крови пуповины для прогноза нарушений адаптации новорожденных детей, приводящих к развитию инфекции.

Технический результат, получаемый в результате реализации предлагаемого способа, состоит в дифференцированном подходе к диагностике и терапии нарушений адаптации новорожденных детей, родившихся от матерей с хроническими воспалительными гинекологическими заболеваниями. Способ позволяет своевременно назначать адекватные лечебные мероприятия, направленные на предупреждение развития инфекции в периоде постнатальной адаптации новорожденных, обладает высокой точностью, достаточно прост.

Выполнение способа и его эффективность описаны в следующих примерах.

Пример 1.

Ребенок Р-ов родился 12.05.2000 г. (история родов №286) у женщины 25 лет с отягощенным акушерским анамнезом (неразвивающаяся беременность). Беременность протекала на фоне кольпита, эрозии шейки матки. Во время беременности у женщины отмечалась ОРВИ, пневмония. При ДНК-диагностике обнаружены микоплазма, уреаплазма. Роды I, в срок. Ребенок родился в удовлетворительном состоянии, с массой 3100, длиной 49 см, оценкой по шкале Апгар 8-9 баллов. Кожные покровы бледно-розовые, чистые. В первые сутки жизни проведено исследование субпопуляций Т-лимфоцитов с рецепторами СД3+ СД69+, СД3+ СД71+, СД3+ СД95+ в сыворотке крови. Для этого производят забор 3,0 мл крови пуповины. После выделения лейкоцитарного пола крови в фикол-верографиновом градиенте оценивают фенотипическую характеристику Т-лимфоцитов методом проточной цитофлуориметрии с использованием моноклональных антител (фирмы CALTAG) (проточный цитофлуориметр аппарат COULTEN Epics XL). Применяют следующие антитела СД3+ (типирование суммарной популяции Тлф) и активационные маркеры СД3+ СД69+ (ранней активации), СД3+ СД71+ (рецепторы к трансферину) и маркерам активации апоптоза СД3+ СД95+.

Уровень субпопуляций Тлф с рецепторами СД3+ СД69+: 8%, СД3+ СД71+: 13%, СД3+ СД95+: 16%, т.е. по нашим данным ребенок угрожаем по развитию инфекции в периоде постнатальной адаптации новорожденного.

Однако в первые 7 суток, когда ребенок находился в роддоме, клинических проявлений заболевания не было. После выписки из роддома у ребенка стала нарастать истеричность кожных покровов, которая сохранялась в течение 1 месяца, появилась гипермия зева, появилось гнойное отделяемое из левого уха, повысилась температура до субфебрильных цифр, ребенок плохо прибавлял в массе на первом месяце жизни, отмечались симптомы интоксикации в виде вялости, адинамии, срыгиваний, плохого аппетита.

Ребенок на 28 сутки жизни госпитализирован в отделение патологии новорожденных РНИИАП.

Ребенку во время нахождения в стационаре на 28 сутки жизни проведен общий анализ крови, в котором определялся лейкоцитоз, нейтрофилез со сдвигом до палочкоядерных, лабораторное и функциональное обследование:

УЗИ печени (на 28 сутки жизни) выявило изменения паренхимы печени, гипермоторную функцию желчного пузыря.

При исследовании билирубина в сыворотке крови на 28 сутки жизни выявлена гипербилирубинемия (110 мкмоль/л) за счет непрямой фракции.

При осмотре ЛОР-врачом поставлен диагноз левостороннего гнойного отита.

В анализе крови на стерильность, посевах отделяемого из зева рост микрофлоры не определялся.

Ребенку был поставлен диагноз: Внутриутробная инфекция неуточненной этиологии: левосторонний гнойный средний отит, фарингит, конъюгационная желтуха.

Назначена антибактериальная, дезинтоксикационная терапия, интерферонотерапия.

Пример 2.

Ребенок Б-ов родился 6.04.2000 г. (история родов №158) у женщины 34 лет, беременность которой протекала на фоне хронического аднексита, кольпита. При ДНК-диагностике обнаружены уреаплазма, микоплазма, гарднерелла.

Роды I, в срок, путем кесарева сечения. Ребенок родился в удовлетворительном состоянии, массой 3700, длиной 52 см, с оценкой по шкале Апгар 8-9 баллов. Кожные покровы бледно-розовые, чистые.

В первые сутки жизни проведено исследование субпопуляций Тлф с рецепторами СД3+ СД69+, СД3+ СД71+, СД3+ СД95+.

Уровень субпопуляций Тлф с рецепторами СД3+ СД69+: 7%, СД3+ СД71+: 12%, СД3+ СД95+: 15%.

По нашим данным период новорожденности должен протекать благоприятно. При обследовании ребенка в возрасте 1 месяц выявлено, что ребенок здоров, на протяжении первого месяца ничем не болел.

Пример 3.

Ребенок Б-ов родился 4.04. (история родов №151) у женщины 22 лет с отягощенным акушерским анамнезом (1 самопроизвольный выкидыш), беременность которой протекала на фоне хронического аднексита, кольпита. При ДНК-диагностике обнаружена уреаплазма.

Роды I, в срок. Ребенок родился в удовлетворительном состоянии массой 2900, длиной 49 см, с оценкой по шкале Апгар 8-9 баллов. Кожные покровы бледно-розовые, чистые. В первые сутки жизни проведено исследование субпопуляций Т-лф с рецепторами СД3+ СД69+, СД3+ СД71+, СД3+ СД95+.

Уровень субпопуляций Тлф с рецепторами СД3+ СД69+: 6%, СД3+ СД71+: 11%, СД3+ СД95+: 14%.

По нашим данным период новорожденности должен протекать благоприятно.

При обследовании ребенка в возрасте 1 месяца выявлено, что ребенок здоров и на первом месяце жизни ничем не болел.

Диагностика внутриутробной инфекции проводилась у новорожденных, матери которых имели хронические воспалительные гинекологические заболевания в виде хронического аднексита, эндометрита, кольпита. Новорожденные были разделены на 2 группы:

- дети с нарушениями в ранней постнатальной адаптации в виде везикулопустулеза, конъюгационной желтухи, пневмонии, задержки внутриутробного развития по гипотрофическому типу, перинатального поражения ЦНС(61%) - I гр.

- дети, у которых при клинико-лабораторном обследовании не было выявлено видимых очагов поражения (39%) - II группа.

Все дети I группы получали базисную антибактериальную и посиндромную терапию, в то время как у новорожденных II группы отмечалось физиологическое течение раннего периода адаптации.

Таким образом, нами было обследовано 32 новорожденных ребенка, родившихся от матерей, страдающих хроническими воспалительными заболеваниями гениталий в виде хронического аднексита, эндометрита, кольпита. В роддоме все дети были клинически здоровы. После выписки из роддома новорожденные были разделены на 2 группы: дети с физиологическим течением неонатального периода и с осложненным. У детей с осложненным течением неонатального периода отмечался везикулопустулез, отит, гипотрофия, пневмония, конъюгационная желтуха. В анализах крови определялся лейкоцитоз, нейтрофилез при манифестации заболевания.

По уровню субпопуляций лимфоцитов с рецепторами СД3+ СД69+, СД3+ СД71+, СД3+ СД95+ в крови пуповины было возможно прогнозировать нарушения в периоде постнатальной адаптации новорожденного. У всех новорожденных, имевших значение СД соответственно выше 7%, 12% и 15% развились впоследствии нарушения адаптации, приведших к развитию инфекции, что показывает высокую точность заявляемого способа.

Используемые нами показатели дают возможность ранней диагностики возникновения патологического процесса у инфицированных новорожденных.

Предложенный нами способ достаточно прост, нетравматичен, так как используется пуповинная кровь, позволяет на субклинической стадии диагностировать нарушение адаптации у инфицированных новорожденных, приводящих к развитию инфекции, выявлять ее до манифестации заболевания и, таким образом, проводить дифференциальную диагностику между инфекцией и инфицированием, на основании этого назначать антибактериальную терапию не всем новорожденным из группы риска, а дифференцировано.

Апробирован в родильном доме и отделении патологии новорожденных РНИИАП. 



ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ


Способ прогнозирования нарушений адаптации новорожденных детей от матерей с хроническими воспалительными гинекологическими заболеваниями, путем исследования пуповинной крови, отличающийся тем, что определяют субпопуляции Т-лимфоцитов пуповинной крови с рецепторами СД3+ СД69+, СД3+ СД71+, СД3+ СД95+ и при выявлении повышения субпопуляций Т-лимфоцитов с рецепторами СД3+ СД69+ выше 7,0%, СД 3+ СД 71+ выше 12,0% и СД 3+ СД 95+ выше 15,0% прогнозируют нарушения адаптации новорожденных, приводящих к развитию инфекции.