СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ИНДИВИДУАЛЬНОЙ ЭФФЕКТИВНОСТИ ГБО-ТЕРАПИИ ПРИ ОСТРОМ ЛЕЙКОЗЕ

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ИНДИВИДУАЛЬНОЙ ЭФФЕКТИВНОСТИ ГБО-ТЕРАПИИ ПРИ ОСТРОМ ЛЕЙКОЗЕ


RU (11) 2066452 (13) C1

(51) 6 G01N33/48, G01N33/53 

(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ 
Статус: по данным на 10.08.2007 - прекратил действие 

--------------------------------------------------------------------------------

(14) Дата публикации: 1996.09.10 
(21) Регистрационный номер заявки: 94003829/14 
(22) Дата подачи заявки: 1994.02.15 
(45) Опубликовано: 1996.09.10 
(56) Аналоги изобретения: Авторское свидетельство СССР N 1462203, кл. G O1 N 33/80, N 8, 1989. 
(71) Имя заявителя: Дьячкова Светлана Яковлевна 
(72) Имя изобретателя: Дьячкова С.Я.; Леонов А.Н.; Поздняков А.М.; Степанова Т.В. 
(73) Имя патентообладателя: Дьячкова Светлана Яковлевна 

(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ИНДИВИДУАЛЬНОЙ ЭФФЕКТИВНОСТИ ГБО-ТЕРАПИИ ПРИ ОСТРОМ ЛЕЙКОЗЕ 

Использование: медицина, преимущественно педиатрия и иммунология, для определения индивидуальной эффективности ГБО-терапии при остром лейкозе. Цель изобретения - повышение точности и чувствительности метода. Сущность изобретения: в период терапевтической лейкопении при острых лейкозах измеряют уровень Р-белка в плазме крови до курса ГБО-терапии и после 1,3,5 сеансов. Снижение его до нормальных показателей свидетельствует об индивидуальной эффективности иммунокорригирующего действия ГБО. 3 табл. 


ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ



Изобретение относится к медицине, преимущественно к педиатрии и иммунологии.

Совpеменное лечение острых лейкозов у детей проводится по интенсивному протоколу All-BFM-90 в течение 6 месяцев. Оно основано на использовании массивных доз цитостатиков, которые на 2-м, 3-м и 4-м месяце лечения приводят к резко выраженной лейкопении и снижению естественной иммунологической резистентности оpганизма. На этом фоне у детей увеличивается количество вульгаpных инфекций, при лечении которых нежелательно применение известных иммуностимуляторов. Использование гипербарической оксигенации (ГБО) в этот период потребовало определить критерий правильной оценки ее эффективности и индивидуальной чувствительности.

В литературе известны способы определения чувствительности к гипербарической оксигенации:

1. Способ определения индивидуальной чувствительности к ГБО. Авторы Жданов Г.Г. Кричевская А.А. Милютина Н.П. Николаева Е.Е. Шерстнев К.Б. Шерстнева И.Я. Авт.св. N 1462203.

Авторы определяют чувствительность к ГБО по активности СОД в эритроцитах и в плазме. Однако этот способ имеет ряд существенных отличий и недостатков:

a) СОД является показателем антиокисилительной системы и не характеризует иммунологический гомеостаз, в связи с чем этот тест используется для определения кислородной интоксикации и не может быть критерием эффективности ГБО-терапии.

б) Современные методы определения СОД требуют дорогостоящих реактивов и оборудования, что неприемлемо в практических лабораториях.

в) Определение СОД требует значительных количеств исследуемого материала (крови) и затраты рабочего времени.

2. Способ определения индивидуальной чувствительности к ГБО. Авторы Якушин В.И. Ефремова Т.И. Башлыков В.М. Алексеева А.В. Авт.св. N 1533645.

Авторы определяют чувствительность к ГБО по электропроводимости крови. Этот способ, как и предыдущий, имеет свои особенности и недостатки:

а) Авторы исследуют с помощью своего теста возможность длительной ГБО-терапии и диагносцирование кислородной интоксикации.

б) Способ требует специального оборудования, чем затруднено его использование в практическом здравоохранении.

Цель изобретения повышение точности и индивидуальной чувствительности способа.

Поставленная цель достигается тем что Р-белки в организме характеризуют иммунологический и обменный гомеостаз, как наиболее патогенетически пораженные при остром лейкозе и его специфическом лечении. Кроме того, сывороточные Р-белки участвуют в процессах захвата и переработки активных фоpм кислорода, образующихся при ГБО-терапии. Таким образом, Р-белки являются наиболее информативным критерием эффективности ГБО-терапии.

Способ осуществляется следующим образом: у детей с острым лейкозом, получающих массивные дозы цитостатиков, при развитии лейкопении до ГБО-терапии и после 1,3,5 сеансов определяют уровень Р-белка. Методика: а) Кровь из пальца в количестве 0,05 мл (1 капля) помещают в 0,5 мл консерванта "Глюгицир". После центрифугирования отделяют плазму, в которой определяют белки с помощью анти-Р-реагента. б) Для определения рабочего титра анти-Р-реагента последний разводят от 1:100 до 1:800 методом двукратных разведений в объеме 0,2 мл. Во все разведения добавляют по 0,025 мл 4% суспензии эритроцитов человека 0(1) группы. Через 1 2 ч учитывают по агглютинации эритроцитов. Рабочим разведением считается реакция, положительная на два креста (++). в) Для определения Р-белка в исследуемой плазме крови ее разводят от 1: 500 до 1:102400 в объеме 1 мл, добавляют по 0,1 мл анти-Р-реагента в рабочем титре и по 0,025 мл эритроцитов человека 0(1) группы, перемешивают и оставляют на 6 - 18 ч при 4oС. г) Учитывают визуально по интенсивности реакции гемагглютинации. Титром Р-белка считают последнее разведение, дающее торможение тест-системы. В норме1:1600-1:3200 (в log2=10,64 11,64).

Положительный эффект способа представлен в табл. 3.

Из таблицы видно, что снижение уровня Р-белка, свидетельствуя о нормализации иммунологического и обменного гомеостаза в организме, является показателем эффективности ГБО-терапии при остром лейкозе в период терапевтической лейкопении.

Данные о нормальном уровне Р-белков в артериально-венозной или венозной крови получены из следующих источников:

1. Бартова Л.М. Кулагина Н.Н. Маргулис Г.У. и др. Методические рекомендации по определению Р-белков в сыворотке (плазме) крови человека. М. НИИЭМ им. Гамалеи Н.Ф. 1989.

2. Бартова Л. М. Кулагина Н.Н.Методы определения Р-белков. Сб. н.тр. "Регуляторные Р-белки при инфекционных и других заболеваниях". М. 1990, с.9

13.

3. Бартова Л.М. Кулагина Н.Н. Маргулис Г.У. и др. Определение Р-белков в сыворотке (плазме) крови человека. Методические рекомендации МЗ РФ. М. 1994, с.10

4. Дьячкова С.Я. Леонов А.Н. Поздняков А.М. Кульберг А.Я. Кулагина Н.Н. Оболенкова Л. А. Комплексная лабораторная оценка влияния ГБО на иммунные процессы организма. Методические рекомендации МЗ РФ. Воронеж, 1994, с.15.

Кроме того, была обследована группа здоровых детей из 10 человек, чьи показатели Р-белков в артериально-венозной крови (1:1600-1:3200) были приняты за основу.

В условиях ГБО-терапии происходит увеличение напряжения и объемного содержания кислорода в артериальной крови, а затем и в тканях, что связано с изменением функционирования О2-транспортных систем (Соколянский И.Ф. 1983). Одним из основных критериев действия гипербарического кислорода в организме является инициирование перекисного окисления липидов (ПОЛ) мощного свободнорадикального процесса. В то же время ПОЛ в различных белково-липидных мембранах клеток характеризует развитие патологического или иного активного процесса (Галкин Б.Н. и др. 1989; Осипов А.Н. и др. 1990; Агуреев А.П. и др. 1990). В свою очередь, Р-белки могут снижать содержание активного кислорода в биологических жидкостях и опосредованно повышать вязкость клеточной мембpаны (Кульберг А.Я. 1990), т.е. влиять на клеточный метаболизм в направлении активации репаративных процессов. Таким образом, показатели ПОЛ и Р-белков могут характеризовать индивидуальную чувствительность к гипербарическому кислороду и метаболические процессы.

В своих исследованиях наряду с Р-белками мы использовали ряд тестов, характеризующих: 1. Иммунный статус больных острым лейкозом; 2. О2-зависимые и O2-независимые процессы в клетках крови; 3. Уровень ПОЛ и антиперекисной защиты.

ПОЛ оценивали по содержанию малонового диальдегида (МДА) в сыворотке крови (Стальная И. Д. Гаришвили Т. Г. 1977), антирадикальную активность (супероксиддисмутазу СОД) по гашению хемилюминесценции (Von S.Popov and al. 1985).

Во всех случаях исследований Р-белков, МДА и СОД у больных, подвергшихся ГБО, выявлена корреляционная связь между этими показателями (табл.1).

С увеличением титра Р-белков росли показатели МДА и СОД.

Для определения точности предлагаемого способа в сравнении с прототипом (СОД) исследовали частоту (%) нормализации исследуемых и иммунных показателей под действием ГБО и корреляцию последних с Р-белками и СОД (прототип).

Данные представлены в табл. 2.

Как видно из табл.2, Р-белки в данном конкретном случае применения обладали наибольшей информативностью (до 83%) по сравнению с прототипом (до 75%) и с другими показателями. Нормализация показателей Р-белков под действием ГБО в период терапевтической лейкопении у больных острым лейкозом на фоне клинического благополучия может быть показателем эффективности ГБО. Кроме того, Р-белки в большей степени коррелируют с иммунными показателями, чем СОД (прототип), что может характеризовать их (Р-белки) показателем иммунокоррегирующего эффекта ГБО.

Как следует из табл.2, после 1-го сеанса ГБО нормализация показателей Р-белка отмечалась лишь в 12,50% случаев, после 3-ех в 93,75% после 5-и в 100% В связи с этим авторы согласны, что целесообразно оставить в формуле признак "и после не менее 3-ех сеансов".

Пример 1. Ермоленко А. 2,5 г поступил с диагнозом острый лейкоз. После интенсивного лечения цитостатиками в период терапевтической лейкопении (при Z= 2200) больной принял 5 сеансов ГБО. Уровень Р-белка у ребенка до ГБО=1: 25600 (14,64), после 1 сеанса ГБО 1:12800 (13,64); после 3-ех сеансов ГБО=1: 6400 (12,64) и после 5-и1:3200 (11,64). Самочувствие после ГБО-терапии было хорошее, простудных заболеваний и вульгарных инфекций в период терапевтической лейкопении не было.

Пример 2. Виноградов А. 4 г. поступил с диагнозом острый лейкоз. Получал интенсивные дозы цитостатиков. В период терапевтической лейкопении (при Z= 2400) лечение проводилось обычными консервативными методами без ГБО. Уровень Р-белка у ребенка на протяжении всего этого периода при 3-ех кратном обследовании был стабильным 1:51200 (15,64), отмечались простудные заболевания.

На основании изложенных примеров предлагаемого способа и сравнения его с прототипом можно заключить, что предлагаемый способ обеспечивает следующие преимущества:

1. Являясь показателем иммунологического и обменного гомеостаза в организме, а также участвуя в переработке активных форм кислорода, служит патогенетически обоснованным критерием эффективности ГБО-терапии в плане иммунокоррекции и повышения резистентности в период терапевтической лейкопении при остром лейкозе.

2. Является достоверным и динамичным тестом.

3. Требует малых количеств исследуемого материала (крови), что существенно в детской практике.

4. Прост в постановке.

5. Создает экономию дорогостоящих реактивов, оборудования и рабочего времени, что способствует его внедрению в практическое здравоохранение. 


ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ



Способ определения индивидуальной эффективности ГБО-терапии при остром лейкозе, включающий исследование плазмы крови, отличающийся тем, что в плазме крови измеряют уровень R белков до курса ГБО-терапии и после не минее трех сеансов и при снижении его до нормальных показателей определяют индивидуальную эффективность ГБО.