СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ТЕЧЕНИЯ НЕФРОТИЧЕСКОГО СИНДРОМА У ДЕТЕЙ ПРИ ГЛОМЕРУЛОНЕФРИТЕ

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ТЕЧЕНИЯ НЕФРОТИЧЕСКОГО СИНДРОМА У ДЕТЕЙ ПРИ ГЛОМЕРУЛОНЕФРИТЕ


RU (11) 2021613 (13) C1

(51) 5 G01N33/53, A61B5/00 

(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ 
Статус: по данным на 10.08.2007 - прекратил действие 

--------------------------------------------------------------------------------

(14) Дата публикации: 1994.10.15 
(21) Регистрационный номер заявки: 5019350/14 
(22) Дата подачи заявки: 1991.10.25 
(45) Опубликовано: 1994.10.15 
(56) Аналоги изобретения: Педиатрия 1985, N12, с.37-41. 
(71) Имя заявителя: Светлов С.И.; Пинелис В.Г.; Игнатова М.С.; Москалева Е.С.; Политова Л.Н.; Ананенко А.А.; Юрьева Э.А.; Вельтищев Ю.Е. 
(72) Имя изобретателя: Светлов С.И.; Пинелис В.Г.; Игнатова М.С.; Москалева Е.С.; Политова Л.Н.; Ананенко А.А.; Юрьева Э.А.; Вельтищев Ю.Е. 
(73) Имя патентообладателя: Научно-исследовательский институт педиатрии и детской хирургии 

(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ТЕЧЕНИЯ НЕФРОТИЧЕСКОГО СИНДРОМА У ДЕТЕЙ ПРИ ГЛОМЕРУЛОНЕФРИТЕ 

Использование: в медицине, детской нефрологии. Сущность изобретения: у пациента берут пробу утренней мочи, затем в пробе определяют уровень 1-0-алкил-2-ацетил-Sh-глицеро-3-фосфорилхолина в динамике и при повышении уровня этого показателя относительно нормы в течение 4 - 8 недель после начала лечения судят о неблагоприятном течении нефротического синдрома у детей. Преимуществом способа является его атравматичность. 1 табл. 


ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ



Изобретение относится к медицине, а именно к детской нефрологии.

Клеточные и молекулярные механизмы развития нефротического синдрома и повреждения почечной ткани при гломерулонефрите остаются неясными. Клинические проявления, тяжесть и течение нефротического синдрома (НС) у детей зависят от особенностей повреждения почечного фильтра и характера патологического процесса в гломерулах. В свою очередь, биологически активные медиаторы и физико-химические факторы, вызывающие протеинурию, могут оказывать повреждающее действие на почечную ткань, стимулировать процессы клеточной инфильтрации, вызывать дистрофические и фибропластические изменения, склерозирование и снижение функции почек. В этой проблеме появились, в последнее время, новые подходы, связанные с открытием целой серии медиаторов воспаления, иммунитета, межклеточной сигнализации. Одним из таких ключевых медиаторов является 1-0-алкил- 2-ацетил-Sh-глицеро- 3-фосфорилхо- лин, называемый также фактором активации тромбоцитов (ФАТ), который оказывает крайне широкий спектр биологического действия и является важным повреждающим фактором при воспалении, анафилаксии, шоке и других иммунных и неиммунных процессах.

В экспериментах на животных ФАТ вызывает потерю фиксированных отрицательных зарядов гломерул и умеренную протеинурию, сокращение и пролиферацию клеток мезангиума, а при экспериментальных гломерулонефритах приводит к отложению иммунных комплексов и фибрина в гломерулах и моноцитарной инфильтрации почечной ткани.

Показано высвобождение ФАТ клетками крови при остром постстрептококковом ГН и волчаночном нефрите у взрослых, а также повышение его содержания в крови. Кроме того, установлено высокое содержание ФАТ в моче взрослых больных с волчаночным нефритом.

Для выявления возможной роли ФАТ в патогенезе нефротического синдрома при различных вариантах гломерулонефрита у детей наряду с другими был использован методический подход, включающий определение уровня эндогенного ФАТ в моче.

Оказалось, что у здоровых детей ФАТ в моче не определяется или присутствует в незначительных количествах - 0,0-1,2 нг/10 мл мочи. В активной стадии нефротического синдрома у большинства детей с гломерулонефритом происходит 5-10-кратное повышение уровня ФАТ в моче: 2,45 0,4 нг/10 мл при стероид-чувствительном НС и 4,100,85 нг/10 мл при стероид-резистентном НС. При этом у детей, имеющих стероид-чувствительный вариант НС, уровень ФАТ начинает снижаться уже через несколько дней после начала стероидной терапии и падает до следовых количеств после 4 недель терапии. В то же время у детей со стероид-резистентным вариантом нефротического синдрома уровень ФАТ в моче сохраняется высоким через 4 недели после начала терапии, несмотря на снижение активности нефротического синдрома.

Целью изобретения являются исследования механизмов прогрессирования патологического процесса у детей с нефротическим синдромом при различных вариантах гломерулонефрита на основе поиска патогенетически значимых медиаторов и расширение диагностических возможностей при обследовании таких детей.

Для исследования берется утренняя свежевыпущенная порция мочи. К 6 мл мочи добавляют 9,0 мл метанола, экстрагируют липиды в течение 1 ч, периодически встряхивая, при комнатной температуре. Метанольный экстракт центрифугируют при 3000 об/мин в течение 15 мин. К супернатанту добавляют 9,0 мл хлороформа и 3,0-3,5 мл дистиллированной воды, встряхивают и оставляют стоять при комнатной температуре до полного расслоения фаз. В случае необходимости добавляют еще 0,5 мл метанола и 0,5-1,0 мл воды. По завершении полного расслоения фаз нижнюю, хлороформенную фазу упаривают в токе инертного газа до объема 0,05-0,1 мл и наносят на пластины с тонким слоем силикагеля. Пластины хроматографируют в системе хлороформ-метанол-вода (65:35:6). Одновременно хроматографируют стандарт ФАТ и смесь известных фосфолипидов (фосфотидилхолин, сфингомиелин и лизофосфатидилхолин). В этой смеси ФАТ движется между сфингомиелином и лизофосфатидилхолином и имеет Rf 0,1-0,25. Зону пластины с опытным образцом, соответствующую миграции ФАТ, отмечают, силикагель снимают и экстрагируют липиды в 2,0 мл метанола в течение 30 мин при комнатной температуре. Экстракт центрифугируют и к метанолу прибавляют 1,0 мл хлороформа и 0,8 мл воды. После расслоения фаз нижнюю, хлороформную фазу концентрируют и упаривают досуха в токе инертного газа. Осадок ресуспендируют в 0,1 мл 0,9%-ного NaCl, содержащего 0,25% бычьего сывороточного альбумина. Полученный образец тестируют на присутствие ФАТ по агрегации кроличьей плазмы, богатой тромбоцитами, в присутствии индометацина (1 г/мл) и креатинкиназы/креатинфосфат (31,25 г/мл и 15,5 г/мл соответственно). Количество ФАТ в пробе рассчитывают, строя калибровочную кривую зависимости амплитуды агрегации от количества внесенного ФАТ.

В таблице суммированы данные по уровню эндогенного ФАТ в моче детей с нефротическим синдромом.

П р и м е р 1. Больной И., 10 лет. Клинический диагноз: нефротическая форма гломерулонефрита, активность II ст., стероид-чувствительный НС. Был обследован через 2 дня после начала обострения заболевания. На момент обследования имелись выраженные отеки, протеинурия > 3,0 г/л, гипо- и диспротеинемия, гиперлипидемия. СОЭ 41 мм/ч. Уровень ФАТ в моче 3,25 нг/10 мл. Через 2 недели после назначения стероидной терапии при минимальной активности, отсутствии отеков и улучшении клинико-биохимических показателей ФАТ в моче 0,45 нг/10 мл. Еще через 3 недели ребенок был обследован вновь в стадии клинико-лабораторной ремиссии. ФАТ в моче - следовые количества.

П р и м е р 2. Больной К., 7 лет. Клинический диагноз: смешанная форма гломерулонефрита, активность III ст., стероид-резистентный НС. На момент обследования: протеинурия > 5 г/л, СОЭ 60 мм/ч, выраженная гипо- и диспротеинемия. ФАТ в моче 6,1 нг/10 мл. Через 5 недель ребенок обследован вновь. Проводилось лечение азатиоприном, курантилом. Протеинурия 2,3 г/л, СОЭ 43 мм/ч, гипо- и диспротеинемия сохраняются, хотя и меньше выражены. ФАТ в моче 3,4 нг/10 мл. Через 3 месяца обследование показало: активность процесса II-I ст. , протеинурия 1,3 г/л, СОЭ 23 мм/ч, ФАТ в моче 3,05 нг/10 мл. Морфологический диагноз - мембранопролиферативный гломерулонефрит с выраженным фибропластическим компонентом. 


ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ



СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ТЕЧЕНИЯ НЕФРОТИЧЕСКОГО СИНДРОМА У ДЕТЕЙ ПРИ ГЛОМЕРУЛОНЕФРИТЕ, включающий инструментально-лабораторное обследование, отличающийся тем, что у пациента берут пробу утренней мочи, затем в пробе определяют уровень 1-0-алкил-2-ацетил-Sh-глицеро-3-фосфорилхолина в динамике и при повышении уровня этого показателя относительно нормы в течение 4 - 8 недель после начала лечения судят о неблагоприятном течении нефротического синдрома у детей.