СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ РЕКОНВАЛЕСЦЕНТНОГО САЛЬМОНЕЛЛЕЗНОГО БАКТЕРИОНОСИТЕЛЬСТВА

СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ РЕКОНВАЛЕСЦЕНТНОГО САЛЬМОНЕЛЛЕЗНОГО БАКТЕРИОНОСИТЕЛЬСТВА


RU (11) 2242756 (13) C2

(51) 7 G01N33/48, G01N33/68 

(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
к патенту Российской Федерации 
Статус: по данным на 27.12.2006 - прекратил действие, но может быть восстановлен 

--------------------------------------------------------------------------------

(14) Дата публикации: 2004.12.20 
(21) Регистрационный номер заявки: 2003106562/15 
(22) Дата подачи заявки: 2003.03.12 
(24) Дата начала отсчета срока действия патента: 2003.03.12 
(43) Дата публикации заявки: 2003.09.10 
(45) Опубликовано: 2004.12.20 
(56) Аналоги изобретения: SU 1303163 А1, 15.04.1987. SU 1837237 А1, 30.08.1993. SU 1748068 А1, 15.07.1992. RU 2143691 С1, 27.12.1999. ROGANO L et al. Haematologica - 1997, Jul-Aug., 82(4), 415-419 (реферат Medline). 
(72) Имя изобретателя: Бухарин О.В. (RU); Чайникова И.Н. (RU); Валышев А.В. (RU); Валышева И.В. (RU); Калинина Т.Н. (RU); Скачков М.В. (RU); Смолягин А.И. (RU) 
(73) Имя патентообладателя: Институт клеточного и внутриклеточного симбиоза УрО РАН (RU) 
(98) Адрес для переписки: 460021, г.Оренбург, ул. Карагандинская, 43, кв.28, А.В. Валышеву 

(54) СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ РЕКОНВАЛЕСЦЕНТНОГО САЛЬМОНЕЛЛЕЗНОГО БАКТЕРИОНОСИТЕЛЬСТВА
Изобретение относится к медицине, в частности к диагностике инфекционных заболеваний. Для этого в период разгара болезни у чистой культуры сальмонелл, выделенной из фекалий больного сальмонеллезом, определяют антилактоферриновую активность, а в копрофильтрате определяют содержание лактоферрина и при значениях первого показателя 7,8-13,0 нг, а второго - 460-1400 нг/мл прогнозируют реконвалесцентное сальмонеллезное бактерионосительство. Способ позволяет с высокой точностью прогнозировать формирование сальмонеллезного реконвалесцентного бактерионосительства на ранних стадиях развития заболевания сальмонеллезом, что позволяет осуществить индивидуальный подход к лечению больных с целью сокращения числа бактерионосителей, провести коррекцию дефицита факторов естественной резистентности слизистой пищеварительного тракта. 4 табл.




ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ


Изобретение относится к медицине, в частности к диагностике инфекционных заболеваний, и может быть использовано в клинической практике для прогнозирования реконвалесцентного бактерионосительства при сальмонеллезе.

Известен способ прогнозирования сальмонеллезного бактерионосительства по динамике уровня свободных и связанных в иммунные комплексы копроантител, определяемых в РНГА со стандартным групповым О-диагностикумом [1]. Но в данном способе не учитываются биологические свойства сальмонелл, от которых во многом зависит характер течения и исход инфекционного процесса, а также то, что местные антитела подвергаются интенсивному воздействию протеолитических ферментов, что затрудняет оценку полученных результатов [2].

Известно прогнозирование сальмонеллезного бактерионосительства по уровню циркулирующих лимфоцитов, сенсибилизированных к О-антигену сальмонелл и определяемых в реакции антигенспецифического розеткообразования [2]. Если в остром периоде болезни и в период реконвалесценции резко снижено количество антигенспецифических лимфоцитов, то прогнозируется вероятность завершения острой формы заболевания бактерионосительством. Аналогично прогнозируется сальмонеллезное бактерионосительство при низком индексе завершенности фагоцитоза у больных в остром периоде сальмонеллеза [2]. Однако эти методы не учитывают биологические свойства сальмонелл, влияющие на течение и исход инфекционного процесса.

Известны способы прогнозирования сальмонеллезного бактерионосительства, учитывающие динамику нарастания антител [3], снижение индекса литической активности сыворотки [4] и мононуклеарного индекса [5]. Недостатком этих способов является то, что они становятся информативными только с 3-4 недели заболевания.

Наиболее близким к заявляемому способу по назначению и совокупности существенных признаков является способ прогнозирования реконвалесцентного сальмонеллезного бактерионосительства [6], согласно которому у выделенной из фекалий больного сальмонеллезом чистой культуры сальмонелл определяют антилизоцимную активность (АЛА), и если антилизоцимная активность сальмонелл составляет 8 мкг и выше, то в 81% случаев прогнозируют развитие бактерионосительства. 

Однако известный способ имеет ряд существенных недостатков. Антилизоцимная активность сальмонелл, оцениваемая в этом способе, позволяет им инактивировать лизоцим, являющийся одним из факторов естественной резистентности и содержащийся во всех секретах организма человека. Вместе с тем при колонизации сальмонеллами слизистой кишечника инактивация лизоцима для сальмонелл не играет значимой роли, поскольку антимикробное свойство лизоцима связано с гидролитическим расщеплением пептидогликанового слоя клеточной стенки преимущественно грамположительных бактерий [7], а сальмонеллы достаточно устойчивы к действию лизоцима, так как являются грамотрицательными бактериями. 

В то же время в антимикробной защите слизистой кишечника, препятствующей развитию сальмонеллезного реконвалесцентного бактерионосительства, участвуют другие, более эффективные по сравнению с лизоцимом, бактерицидные белки (лактоферрин, секреторные антитела и др.), действующие не только на грамположительные, но и на грамотрицательные микроорганизмы [2, 8], уровень которых не учитывается в способе-прототипе. 

Задачей заявляемого технического решения является повышение точности прогнозирования реконвалесцентного сальмонеллезного бактерионосительства.

Для решения указанной задачи в заявляемом способе прогнозирования реконвалесцентного сальмонеллезного бактерионосительства у чистой культуры сальмонелл, выделенной из фекалий больного сальмонеллезом, определяют антилактоферриновую активность, а в копрофильтрате определяют содержание лактоферрина и при значениях первого показателя 7,8-13,0 нг, а второго - 460-1400 нг/мл прогнозируют реконвалесцентное сальмонеллезное бактерионосительство.

Существенными отличительными признаками заявляемого способа являются 

- определение антилактоферриновой активности у чистых культур сальмонелл, выделенных из фекалий больного сальмонеллезом; 

- определение содержания лактоферрина в копрофильтрате; 

- прогнозирование реконвалесцентного сальмонеллезного бактерионосительства при значениях антилактоферриновой активности возбудителя 7,8-13,0 нг, а содержании лактоферрина в копрофильтрате - 460-1400 нг/мл.

Новая совокупность признаков позволяет при осуществлении заявляемого изобретения получить новый технический результат, который состоит в том, что новый способ позволяет с высокой точностью прогнозировать формирование сальмонеллезного реконвалесцентного бактерионосительства на ранних стадиях заболевания сальмонеллезом, что дает возможность осуществить индивидуальный подход к лечению больных с целью сокращения числа бактерионосителей, провести коррекцию дефицита факторов естественной резистентности барьерного эпителия пищеварительного тракта, например, иммуномодуляторами, и использовать препараты, подавляющие способность энтеробактерий к деградации этих факторов.

Известно, что одним из факторов, определяющих возможность развития и длительность сальмонеллезного бактерионосительства, являются взаимоотношения в системе “лизоцим хозяина-антилизоцимная активность возбудителя” и сальмонеллы с высокой АЛА инактивируют большее количество лизоцима в клетках и тканях организма и могут длительное время персистировать в организме больных [9]. Однако лизоцим не оказывает прямого литического действия на грамотрицательные бактерии, к которым относятся сальмонеллы. Независимо от уровня АЛА бактерий потенциальная бактериолитическая активность лизоцима в отношении микроорганизмов и, в частности, грамотрицательных бактерий реализуется благодаря присутствию других антимикробных факторов, включая потенциирующее действие лактоферрина [8, 10]. Кроме этого, лактоферрин оказывает бактериостатическое действие на рост бактерий на поверхности барьерных эпителиев и в фаголизосомах нейтрофильных гранулоцитов, связанное с его способностью создавать и поддерживать дефицитную по катионам железа и других металлов переменной валентности среду, т.е. между бактериями и лактоферрином идет конкуренция за железо, повышающее вирулентность последних [8]. При дефиците лактоферрина существенно снижается способность подавлять микроорганизмы, находящиеся на поверхности барьерного эпителия, или уже фагоцитированные бактерии [11].

Вместе с тем известно, что уровень лактоферрина как острофазового белка из семейства трансферринов в значительной степени регулируется провоспалительными цитокинами [12] и содержание его существенно изменяется при воспалении. Поэтому в лабораторной и клинической практике значения содержания лактоферрина используются для оценки степени активности воспалительной реакции [13] как критерий эффективности противовоспалительной терапии [14]. Кроме того, известно, что микроорганизмы независимо от их видового происхождения способны инактивировать бактерицидное действие лактоферрина, обеспечивая условия для выживания их в макроорганизме [15].

Использование количественной оценки содержания лактоферрина в копрофильтрате и антилактоферриновой активности сальмонелл для прогнозирования реконвалесцентного бактерионосительства в источниках патентной и научно-технической литературы не обнаружено. 

Авторами экспериментально установлена взаимосвязь между реконвалесцентным сальмонеллезным бактерионосительством и способствующими его формированию содержанием лактоферрина в копрофильтрате больного сальмонеллезом и АЛА возбудителя, также определены интервалы изменений данных показателей.

Проводились следующие исследования. 

В опытной серии готовили копрофильтраты больных сальмонеллезом. Для этого 4 г фекалий, взятых в разгар заболевания и в период реконвалесценции, гомогенизировали с 8 мл забуференного физиологического раствора (0,15 М, рН 7,2), в который предварительно добавляли для инактивации кишечных протеаз 1 мг ингибитора трипсина из соевых бобов (Sigma, номер по каталогу 9003) [16]; 0,5 мл 50 мМ раствора ЭДТА; 0,5 мл 0,025% раствора Твин-20 (Sigma, номер по каталогу 1379) [16]; 1 мл раствора контрикала (AWD, Германия) в концентрации 500 ед/мл. Далее пробы центрифугировали в течение 30 мин (13 000 об/мин; 5°С), получали супернатант, к которому добавляли 1 мл раствора контрикала в концентрации 500 ед/мл и повторно центрифугировали в том же режиме. В полученном супернатанте, являющимся копрофильтратом, определяли содержание лактоферрина иммуноферментным анализом (ИФА) с использованием реагентов ЗАО “Россия” (Новосибирская обл., Кольцово) в соответствии с инструкцией, прилагаемой к набору реагентов ИФА, и концентрацию лизоцима по методическим рекомендациям [17].

Проведенные авторами исследования показали (результаты приведены в таблице 1), что содержание лизоцима в копрофильтратах больных в разгар болезни возрастает по сравнению с копрофильтратами здоровых обследуемых лишь в 1,6 раза, в стадию реконвалесценции - в 1,5 раза, тогда как содержание лактоферрина соответственно в 12 и 6,6 раза.

Это подтверждает то, что во все периоды сальмонеллезной инфекции, и особенно в разгар болезни, выявлена значительно большая, по сравнению с лизоцимом, кратность возрастания в копрофильтратах лактоферрина (составной элемент системы молекулярной защиты от инфекции, усиливающий действие других факторов естественной резистентности), что позволяет более точно выявлять любые отклонения количественных значений данного показателя. Содержание лактоферрина в копрофильтратах можно использовать как сигнальный маркер нарушений естественной резистентности кишечного биотопа, что позволяет более достоверно судить о состоянии антимикробной защиты организма больного в различные периоды сальмонеллезной инфекции.



Таким образом, изменения в содержании лактоферрина в копрофильтратах больных сальмонеллезом являются более чувствительным сигнальным маркером нарушений в состоянии естественной резистентности слизистой кишечника по сравнению с лизоцимом.

Учитывая, что факторами, способствующими формированию бактерионосительства, являются нарушения в системе неспецифической защиты организма от инфекции [18], авторами были проведены сравнительные исследования по изучению содержания лактоферрина в копрофильтратах больных сальмонеллезом, у которых сформировалось реконвалесцентное бактерионосительство и у которых бактерионосительство не наблюдалось. С этой целью обследовались 30 больных сальмонеллезом в разгар заболевания и в период реконвалесценции. Обследование включало бактериологическое исследование фекалий и определение в копрофильтрате концентрации лактоферрина иммуноферментным анализом. В результате бактериологического исследования фекалий было установлено, что у 8 из 30 обследуемых в контрольных посевах фекалий после проведенного лечения перед выпиской из стационара (стадия реконвалесценции) был обнаружен рост сальмонелл, то есть у них сформировалось реконвалесцентное бактерионосительство. Результаты исследования лактоферрина в копрофильтратах приведены в таблице 2.



Как видно из таблицы 2, у больных с сформировавшимся реконвалесцентным бактерионосительством в копрофильтратах содержание лактоферрина было в 2,3 раза ниже в разгар болезни и в 3,7 раза ниже в период реконвалесценции по сравнению с лицами, у которых в контрольных посевах фекалий сальмонеллы не высевались.

Статистическая обработка результатов по исследованию содержания лактоферрина в копрофильтратах и антилактоферриновой активности сальмонелл, проводимая с использованием критерия Стьюдента (t), проверкой различий средних с рассматриваемым уровнем значимости р=0,01, t=2,83 для групп обследуемых, состоящих из 22 человек, и t=3,50 для групп обследуемых, состоящих из 8 человек, позволила установить допустимый интервал значений [19] содержания лактоферрина в разгар болезни, при котором в период реконвалесценции формируется реконвалесцентное сальмонеллезное бактерионосительство, составляющий 460-1400 нг/мл (таблица 2).

Таким образом, проведенные авторами исследования показали, что отсутствие значительного увеличения в копрофильтратах лактоферрина в разгар болезни при сальмонеллезной инфекции и сохраняющееся низкое содержание лактоферрина в период реконвалесценции способствуют развитию бактерионосительства после перенесенной острой сальмонеллезной инфекции.

Поскольку известно, что энтеробактерии способны в процессе выживания в организме человека, в том числе и при бактерионосительстве, инактивировать многие факторы естественной резистентности, включая лактоферрин [15], авторами были проведены экспериментальные исследования для сравнительной оценки уровня антилактоферриновой активности (АЛфА) сальмонелл, выделенных из фекалий больных сальмонеллезом, у которых сформировалось бактерионосительство и без бактерионосительства.

Антилактоферриновая активность сальмонелл изучалась иммуноферметным анализом. Из суточной агаровой культуры сальмонелл готовили взвесь в физиологическом растворе (109 КОЕ/мл) и инкубировали в равных объемах с раствором лактоферрина (Sigma, номер по каталогу 0520) в концентрации 100 нг/мл в течение 24 ч при 37°С. Контрольные пробы содержали вместо микробной взвеси забуференный физиологический раствор. После инкубации контрольные и опытные пробы центрифугировали в течение 20 мин (8000 об/мин; 5°С), отбирали супернатант и в нем определяли остаточную концентрацию лактоферрина иммуноферментным анализом с использованием реагентов ЗАО “Вектор-Бест” в соответствии с инструкцией использования данных реагентов. Измерение оптической плотности опытной и контрольной проб проводилось на фотометре при длине волны 492 нм, содержание лактоферрина определялось путем построения калибровочных графиков и выражалось в нг. Результаты исследования приведены в таблица 3.



Как видно из таблицы 3, количество лактоферрина, инактивируемого сальмонеллами, выделенными от больных с сформировавшимся в дальнейшем бактерионосительством, значительно выше по сравнению с сальмонеллами, выделенными от больных, у которых бактерионосительство не сформировалось. Статистическая обработка результатов по исследованию антилактоферриновой активности сальмонелл, проводимая с использованием критерия Стьюдента (t), проверкой различий средних с рассматриваемым уровнем значимости р=0,01, t=2,83 для групп обследуемых, состоящих из 22 человек, и t=3,50 для групп обследуемых, состоящих из 8 человек, позволила установить допустимый интервал [16] для антилактоферриновой активности сальмонелл, выделенных от больных без последующего формирования бактерионосительства, составивший 4,3-7,7 нг (таблица 3).

Для сальмонелл, выделенных от больных, у которых сформировалось бактерионосительство, допустимый интервал составил 6,0-13,0 нг. Исключив значения АЛфА, общие для сальмонелл, выделенных и от больных без формирования бактерионосительства и от больных, у которых сформировалось в последствии бактерионосительство, интервал антилактоферриновой активности, при котором формируется бактерионосительство, составил 7,8-13,0 нг.

Это подтверждает то, что выделенные от больных сальмонеллы, имеющие значения АЛфА в интервале 7,8-13,0 нг, способны длительно находиться в организме, вызывая развитие реконвалесцентного сальмонеллезного бактерионосительства.

Результат исследования содержания лактоферрина в копрофильтрате больных сальмонеллезом, антилактоферриновой активности сальмонелл и данные по характеру течения сальмонеллезной инфекции приведены в таблице 4.

Как видно из таблицы 4, реконвалесцентное бактерионосительство сформировалось только у обследуемого Р., 39 лет, у которого в остром периоде сальмонеллеза оба показателя, включая лактоферрин в копрофильтрате и антилактоферриновую активность сальмонелл, вошли в допустимый интервал изменений данных показателей (460-1400 нг/мл - для первого показателя и 7,8-13,0 нг - для второго показателя). У всех остальных обследуемых, у которых в допустимый интервал попадал какой-либо один показатель или не попадали оба показателя, острая инфекция закончилась выздоровлением. 



Способ осуществляется следующим образом.

1. Из фекалий больного готовится копрофильтрат путем гомогенизации 4 г фекалий с 8 мл забуференного физиологического раствора (0,15 М; рН 7,2), в который предварительно добавлены 0,5 мл 50 мМ раствора ЭДТА, 0,5 мл 0,025% раствора Твин-20 (Sigma, номер по каталогу 1379) [16]. 1 мл раствора контрикала (AWD, Германия) в концентрации 500 ед/мл, 1 мг ингибитора трипсина из соевых бобов (Sigma, номер по каталогу 9003) [16].

2. Гомогенат переносят в пластиковые пробирки и центрифугируют в течение 20 мин (8000 об/мин; 5°С), к надосадку повторно добавляют 1 мл контрикала в концентрации 500 ед/мл и еще раз центрифугируют в течение 15 мин (8000 об/мин; 5°С).

3. Отбирают надосадок и в нем определяют содержание лактоферрина ИФА с использованием реагентов ЗАО “Вектор-Бест” в соответствии с инструкцией использования данных реагентов. Измерение оптической плотности проб проводится на фотометре, перерасчет содержания лактоферрина осуществляется путем построения калибровочных графиков и выражается в нг/мл.

4. Из суточной агаровой культуры сальмонелл, выделенной от больного, готовят микробную взвесь в физиологическом растворе (109 КОЕ/мл). 

5. На стерильном забуференном физиологическом растворе (0,15 М; pH 7,2) готовят раствор лактоферрина (Sigma, номер по каталогу 0520) [16] в концентрации 100 нг/мл. В лунки стерильного полистиролового планшета вносят по 50 мкл микробной взвеси и раствора лактоферрина.

6. Параллельно с опытной готовят контрольную пробу, содержащую вместо микробной взвеси 50 мкл забуференного физиологического раствора.

7. Пробы инкубируют 24 ч при 37°С.

8. После инкубации пробы центрифугируют в течение 20 мин (8000 об/мин; 5°С).

9. Проводят определение остаточного содержания лактоферрина в супернатанте опытных и контрольных проб с помощью ИФА с использованием реагентов ЗАО “Вектор-Бест” в соответствии с инструкцией использования данных реагентов. Измерение оптической плотности опытной и контрольной проб проводится на фотометре, перерасчет содержания лактоферрина осуществляется путем построения калибровочных графиков и получают содержание лактоферрина в нг.

10. Рассчитывают антилактоферриновую активность по разнице концентрации лактоферрина в опытной и контрольных пробах и выражают в нг лактоферрина, инактивированного сальмонеллами. 

11. Прогнозируют реконвалесцентное сальмонеллезное бактерионосительство, если антилактоферриновая активность возбудителя и содержание лактоферрина в копрофильтрате входят в интервалы допустимых изменений значений, составляющих для антилактоферриновой активности возбудителя - 7,8-13,0 нг и для содержания лактоферрина в копрофильтрате - 460-1400 нг/мл, характеризующие формирование реконвалесцентного сальмонеллезного бактерионосительства. Таким образом, установленная связь между значениями содержания лактоферрина в копрофильтрате и значениями антилактоферриновой активности сальмонелл, выделенных из фекалий больных сальмонеллезом, позволяет прогнозировать формирование реконвалесцентного сальмонеллезного бактерионосительства.

Пример 1. У больной К., 36 лет, находящейся на лечении в Оренбургской муниципальной клинической инфекционной больнице, из фекалий в период разгара болезни выделена Salmonella enteritidis, антилактоферриновая активность данной культуры составила 8,7 нг. Содержание лактоферрина в копрофильтрате равнялась 1098 нг/мл. Полученные значения концентрации лактоферрина и антилактоферриновой активности входят в интервалы допустимых изменений значений лактоферрина и антилактоферриновой активности, характеризующие формирование реконвалесцентного бактерионосительства. Данный прогноз подтвержден неоднократным выделением возбудителя при бактериологическом обследовании больного после проведенного лечения перед выпиской из стационара: трижды с интервалом в один день из фекалий высевалась культура сальмонелл.

Пример 2. У больной Л., 42 лет, в разгар болезни из фекалий выделена S.enteritidis. Антилактоферриновая активность возбудителя составила 9,5 нг, а содержание лактоферрина в копрофильтратах - 1690 нг/мл. Полученное значение антилактоферриновой активности входит в интервал допустимых изменений данного показателя, а значение содержания лактоферрина в копрофильтратах не входит в установленные интервалы изменений этого показателя, следовательно, прогнозируется выздоровление без бактерионосительства. Данный прогноз подтвержден трехкратными отрицательными результатами бактериологического обследования через 3, 5, 7 дней после клинического выздоровления.

Пример 3. У больного И., 19 лет, из фекалий в разгар болезни выделена S.enteritidis, значения антилактоферриновой активности которой составили 3,4 нг. Содержание лактоферрина в копрофильтратах составляло 980 нг/мл. Полученное значение антилактоферриновой активности сальмонелл не входит в интервал допустимых изменений данного показателя, а значение содержания лактоферрина в копрофильтратах, напротив, входит в установленные интервалы изменений лактоферрина, характеризующие формирование реконвалесцентного бактерионосительства. Прогнозируется выздоровление без бактерионосительства. Данный прогноз подтвержден неоднократными отрицательными результатами бактериологического обследования больного перед выпиской из стационара. 

Для установления эффективности предлагаемого метода прогнозирования реконвалесцентного сальмонеллезного бактерионосительства было обследовано 64 больных сальмонеллезом, диагноз был подтвержден клинически и бактериологически. Реконвалесцентное бактерионосительство спрогнозировано у 15 больных. Фактически реконвалесцентное бактерионосительство сформировалось у 16 больных, что подтверждено положительными результатами бактериологического исследования. Эффективность предлагаемого метода у данной группы больных составила 93,8%. 

Таким образом, предлагаемый способ позволяет с высокой точностью прогнозировать вероятность формирования реконвалесцентного бактерионосительства на ранних этапах развития заболевания. Выявленные на ранней стадии болезни лица с дефицитом лактоферрина в копрофильтрате и высокими значениями антилактоферриновой активности сальмонелл являются группой риска по развитию у них сальмонеллезного бактерионосительства, так как дефицит лактоферрина как фактора неспецифической антимикробной защиты слизистой кишечника способствует селекции энтеробактерий с высокой способностью к деградации лактоферрина и длительному сохранению их в организме хозяина. Заявляемый способ позволяет осуществлять на ранних стадиях развития заболевания индивидуальную коррекцию дефицита факторов естественной резистентности слизистой пищеварительного тракта, например, иммуномодуляторами и использовать препараты, подавляющие способность энтеробактерий к деградации этих факторов, что сократит число бактерионосителей и уменьшит опасность распространения сальмонеллезной инфекции среди людей. 

Источники информации

1. Пясецкая Е.С. Свободные и связанные в иммунном комплексе копроантитела при сальмонеллезе и их диагностическое и прогностическое значение. Дис.... канд. мед. наук. Ленинград. 1986. - 156 с.

2. Хазенсон Л.Б., Чайка Н.А. Иммунологические основы диагностики и эпидемиологического анализа кишечных инфекций. - Ленинград. 1987. - С.49-50.

3. Тендетник Ю.Я., Ющук Н.Д., Трушина В.В. Серологический метод диагностики различных форм сальмонеллезного бактерионосительства // Акт. вопр. эпидемиологии и инфек. болезней. - М. 1975. - Вып.5. Ч.1 - С.74-77.

4. Николаева Н.Г. Показатели литической активности сыворотки крови больных брюшным тифом, хронических бактерионосителей и больных сальмонеллезом //Второй Всесоюзный съезд инфекционистов. - Ташкент. 1985. - С.23-24.

5. Перекопская Т.И., Колмогорцева В.В. Определение мононуклеарного индекса у больных ОКИЗ с целью прогнозирования продолжающегося бактериовыделения // Второй Всесоюзный съезд инфекционистов. - Ташкент. 1985. - С.375-376.

6. SU 1303163 МПК А1, А 61 К 37/48, 15.04.87 (прототип).

7. Бухарин О.В., Васильев Н.В. Лизоцим и его роль в биологии и медицине. - Томск. 1974. - С.44-50.

8. Кокряков В.Н. Биология антибиотиков животного происхождения. - Санкт-Петербург. 1999. - С.65-66.

9. Бухарин О.В. Персистенция патогенных бактерий - М.: Медицина. 1999. - С.156-164.

10. Кокряков В.Н. и др. Синергетическое антимикробное действие катионных белков при фагоцитозе // Моделирование и клиническая характеристика фагоцитарных реакций / Сб. науч. трудов. Под ред. А.Н.Маянского. - Горький. 1989. - С.98-103.

11. Ellison R.T., Giehl T.J. Killling of Gram-negative bacteria by lactoferrin and lysozyme // J.Clin. Invest. - 1991. - Vol.88. - P.1080-1091. 

12. Кашкин К.П. Цитокины иммунной системы: основные свойства и иммунобиологическая активность // Клиническая лабораторная диагностика. - 1998. - №11. - С.21-32.

13. Немцева Е.Р. и др. Иммуноферментный метод определения лактоферрина человека и его использование для диагностики гнойно-септических осложнений // Вопросы медицинской химии. - 1995. - Т.41, №3. - С.58-61.

14. Сухарев А.Е., Николаев А.А, Васильев М.Ю. Уровень сывороточного лактоферрина в норме и при патологии // Вопросы медицинской химии. - 1990. - №3. - С.81-83.

15. RU 2156807, МПК С 27 С 12 Q 1/02, 1/04, 27.09.2000.

16. Каталог фирмы “Sigma” (реактивы для биохимии и исследований в области естественных наук). - 1999. - С.621.

17. Бухарин О.В., Волков А.Н., Скачков М.В., Филаткина Л.А. Применение сигнального способа диагностики острой дизентерии по определению количества лизоцима в копрофильтратах. Метод. реком. - Оренбург. 1979. - 7 с.

18. Бухарин О.В., Усвяцов Б.Я. Бактерионосительство (медико-экологический аспект). - Екатеринбург. 1996. - С.106-113.

19. Лакин Г.Ф. Биометрия. - М.: Высшая школа. 1990. - С.108.




ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ


Способ прогнозирования реконвалесцентного сальмонеллезного бактерионосительства путем определения способности возбудителя инактивировать факторы естественной резистентности человека, отличающийся тем, что у чистой культуры сальмонелл, выделенной из фекалий больного сальмонеллезом, определяют антилактоферриновую активность, а в копрофильтрате определяют содержание лактоферрина и при значениях первого показателя 7,8-13,0 нг, а второго 460-1400 нг/мл прогнозируют реконвалесцентное сальмонеллезное бактерионосительство.