СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ОПИСТОРХОЗА И СРЕДСТВО ДЛЯ ЕГО ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ

СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ОПИСТОРХОЗА И СРЕДСТВО ДЛЯ ЕГО ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ


RU (11) 2143838 (13) C1

(51) 7 A61B5/04, A61K35/56 

(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ 
Статус: по данным на 10.08.2007 - прекратил действие 

--------------------------------------------------------------------------------

(14) Дата публикации: 2000.01.10 
(21) Регистрационный номер заявки: 98107427/14 
(22) Дата подачи заявки: 1998.04.22 
(24) Дата начала отсчета срока действия патента: 1998.04.22 
(45) Опубликовано: 2000.01.10 
(56) Аналоги изобретения: Клебановская и др. Иммуноферментный тест в диагностике описторхоза и сероэпидемиологических исследованиях. - Медицинская паразитология, 1990, N 6, с. 45-47. 
(71) Имя заявителя: Научный центр клинической и экспериментальной медицины СО РАМН; Дарянина Светлана Анатольевна; Дедкова Лариса Михайловна 
(72) Имя изобретателя: Дарянина С.А.; Дедкова Л.М.; Шургая А.М. 
(73) Имя патентообладателя: Научный центр клинической и экспериментальной медицины СО РАМН; Дарянина Светлана Анатольевна; Дедкова Лариса Михайловна 
(98) Адрес для переписки: 630117, Новосибирск, ул.Академика Тимакова, 2, Научный центр клинической и экспериментальной медицины СО РАМН, Ученому секретарю Селятицкой В.Г. 

(54) СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ОПИСТОРХОЗА И СРЕДСТВО ДЛЯ ЕГО ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ 

Изобретение относится к области медицины, к паразитологии. Проводят определение величины биопотенциала по методу Фолля в акупунктурных точках определенных меридианов. При отклонении величины биопотенциала в одной и более точках от величины 50-60 условных единиц или при падении биопотенциала после достижения им указанных значений более чем на 4 условных единицы оценивают величину биопотенциала в данных точках в присутствии диагностического средства. При нормализации величины биопотенциала в присутствии средства в разведении до 10-30 г/мл ставят острую стадию, в разведении, более или равном 10-30 г/мл, - хроническую стадию заболевания. Средство для диагностики описторхоза содержит белковый компонент гомогената взрослых половозрелых марит Opistorhis felineus, полученный путем центрифугирования гомогената и обработки надосадочной жидкости сульфатом аммония. Способ и средство повышают эффективность диагностики. 2 с.п.ф-лы. 


ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ



1. Область применения.

Изобретение относится к области медицины, в частности паразитологии, и может быть использовано для диагностики описторхоза.

2. Уровень техники.

2.1. Способ диагностики описторхоза.

Известен способ диагностики описторхоза, включающий забор кала, анализ его на содержание яиц гельминта методом Калантаряна и методом толстого мазка с целлофановой покровной пластинкой по Като (1). Недостатком известного способа является трудоемкость, невозможность установления инвазии в острой стадии болезни, недостаточная эффективность.

Известен также способ диагностики описторхоза, включающий дуоденальное зондирование, определение в дуоденальном содержимом яиц гельминта (2). Недостатком известного способа является его техническая сложность, инвазивность, неудобство для пациента, невозможность установления инвазии в острой стадии болезни.

Наиболее близком по решаемой задаче является способ диагностики описторхоза, включающий забор крови из пальца пациента, получение сыворотки крови, определение реакции сыворотки крови на антиген, выделенный из возбудители описторхоза Opisthorchis felineus (3), определение острой или хронической стадии болезни. Недостатком известного способа является его недостаточная эффективность при диагностике хронической стадии заболевания (60,8%), инвазивность. Отчасти недостаточная эффективность обусловлена зависимостью результатов диагностики от иммунного статуса больного - способ менее эффективен у лиц с иммунодефицитами.

Задачей, на решение которой направлено изобретение, является повышение эффективности диагностики хронической стадии заболевания, обеспечение неинвазивности способа. Поставленная задача достигается тем, что определяют величину биопотенциала по методу Фолля в определенных акупунктурных (биологически активных) точках (см. ниже), при отклонении величины биопотенциала в одной и более точках от величины 50-60 условных единиц более чем на 4 условных единицы или при падении биопотенциала после достижения им указанных значений более чем на 4 условных единицы оценивают величину биопотенциала в данных точках в присутствии диагностического средства, полученного из экстракта марит Opistorchis felineus; при нормализации величины биопотенциала в присутствии на тестировочной площадке диагностического средства в разведении до 10-30 г/мл ставят острую стадию, в разведении 10-30 г/мл и выше - хроническую стадию заболевания.

2.1. Средства для диагностики описторхоза.

Известны средства (нозоды), предназначенные для электроакупунктурной диагностики паразитов по методу Фолля, зарубежных фирм "Staufen-Farma", "Heel" (4) или их отечественные копии, известны антигены того же назначения отечественных фирм "Медиса", "Галс", "Сарчук и Ко", "Имедис". Однако указанные средства не позволяют диагностировать описторхоз.

Известно средство для диагностики описторхоза на основе иммуноферментного метода, содержащее цельный экстракт гомогената марит Opisthorchis felineus, карбонат-бикарбонатный буфер с pH 9,6 (3). Недостатком известного средства является его недостаточная эффективность (60,8%), обусловленная, тем, что экстракт марит содержит низкомолекулярные балластные белки тегумента (оболочки) марит и, возможно, некоторые белки "хозяина"-кошки, не являющиеся иммунологически значимыми и дающие ложноположительные реакции при тестировании на описторхоз.

Задачей, на решение которой направлено изобретение, является повышение эффективности средства.

Решение поставленной задачи достигается тем, что средство для диагностики описторхоза включает осаждаемый сульфатом аммония белковый компонент экстракта марит Opisthorchis felineus, физраствор. В данном средстве на основе высаливания сульфатом аммония с последующей хроматографией исключены вышеуказанные балластные белки, что обеспечивает большую эффективность диагностическго средства.

Описание сущности изобретения

1. Способ диагностики описторхоза.

У больного с помощью прибора для электропунктурной диагностики (например, "Меридиан-11, либо его зарубежные аналоги) определяют величину биопотенциала по методу Фолля в отсутствие заявленного диагностического средства в следующих акупунктурных (биологически активных) точках:

Меридиан аллергии:

1 (1) аллергические поражения кожи нижнего отдела туловища, нижних конечностей, органов брюшной полости и малого таза.

2 (1.1) нарушение лимфодинамики при аллергических процессах (аутосенсибилизация).

3 (1a) нарушение вегетативной регуляции при аллергии, иммунотоксические реакции.

4 (1b) аллергия всего тела.

6 (2) аллергические поражения кожи затылка, верхних конечностей, органов грудной полости и шеи.

7 (3) аллергические поражения кожи головы, органов полости рта, носа, придаточных пазух носа.

Меридиан тонкой кишки:

8 (3a) фатеров сосок.

Меридиан селезенки - поджелудочной железы:

2 (1a) поджелудочная железа (справа) селезенка (слева)

6 (4) состояние иммунной системы в целом

Меридиан печени:

2 (1a) печень

3 (1b) брюшина печени

4 (2) клетки и дольки печени

5 (2a) междольковые желчные протоки

Меридиан кожи:

1 (1) кожа нижней части туловища и нижних конечностей

5 (2) кожа верхней части туловища

6 (3) кожа головы

Меридиан желчного пузыря:

1 (44) желчный проток (справа) общий печеночный проток (слева)

2 (43d) лимфатические сосуды желчного пузыря и желчевыводящих путей

4 (43b) желчный пузырь и желчевыводящие пути

5 (43a) брюшина желчного пузыря

5 (43) пузырный проток (справа) правый печеночный проток (слева)

8 (41) желчные протоки правой и левой долей печени

Меридиан желудка:

4 (44b) желудок

Меридиан легких:

3 (10c) легкие

4 (10b) бронхиолы.

При отклонении величины биопотенциала в одной и более точках от величины 50-60 условных единиц более чем на 4 условных единицы или при падении биопотенциала после достижения им указанных значений более чем на 4 условных единицы оценивают величину биопотенциала в данных точках в присутствии заявленного диагностического средства. При этом поочередно помещают на тестировочную площадку, подключенную к измерительной цепи прибора, запаянную ампулу с определенным разведением данного средства, через 30 секунд производят измерения, при нормализации величины биопотенциала в присутствии средства в разведении до ДЗО (10-30 г/мл) ставят острую стадию, в разведении более или равно ДЗО (10-30 г/мл) - хроническую стадию заболевания. Если значения биопотенциала в акупунктурных точках (БАТ) не изменяются - диагностику расценивают как отрицательную.

Способ диагностики прост в исполнении, не обладает токсическим действием на пациенте, является неинвазивным, более чувствительным при диагностике описторхоза в сравнении с прототипом: у 75% пациентов диагноз, поставленный по заявленному способу, был подтвержден другими методами диагностики (по калу, дуоденальному зондированию, иммуноферментному анализу). При этом специфичность способа составила 81%.

2. Средство для диагностики описторхоза

Средство для диагностики описторхоза получают следующим образом.

Взрослых половозрелых марит Opistorchis felineus извлекают из желчных протоков печени спонтанно инвазированных кошек или инвазированных в лабораторных условиях кроликов и тщательно отмывают от следов желчи и крови физиологическим раствором. Отмытых марит помещают в 0,01 М Na-фосфатный буферный раствор pH 7,2, содержащий 0,45% NaCl (примерно 1000 особей на 5 мл раствора) и выдерживают при температуре минус 20oC в течение 18 - 24 часов. После размораживания (1 час при 37oC) мариты гомогенизируют сначала механически, а затем с помощью ультразвука (44 мГц 3 раза по 1 минуте). Фракцию растворимых белков отделяют от белков тегумента центрифугированием (30 минут при 3000 g). Центрифугат аккуратно сливают, и белки осаждают 30% сульфата аммония при температуре 6 - 8oC в течение 12 часов. Осадок отделяют центрифугированием (3000 g 30 минут) и растворяют в 2 мл 0,05 М Трис-HCl pH 8,2, содержащем 0,5 М NaCl.

Белки O. felineus фракционируют хроматографией на колонке (1,5х30 см), содержащей 100 мл ультрагеля AcA-54, уравновешанного 0,05 М NaCl. 2 мл образца наносят на поверхность геля и элюируют со скоростью 10 мл/ч. Собирали 50 фракций по 2 мл. Во фракциях определяют белок по методу Лоури и иммунологическую активность методом иммуноферментного анализа с использованием больных хроническим описторхозом. Иммунологически активные фракции 30-45 мл объединяют, концентрируют ультрафильтрцией и хранят при температуре минус 20oC.

Средство (нозод), приготовленное таким образом, разбавляют физиологическим раствором до концентрации 1 мг/мл. Приготовление нозодов путем разведения в физиологическом растворе производят по десятичной шкале и по сотенной шкале. Десятичные разведения обозначают знаком "Д", сотенные знаком "C". Первое десятичное разведение Д1 содержит 1/10 часть средства, каждое следующее разведение приготавливается из одной части предыдущего разведения из 9 частей физиологического раствора. Приготовление разведений по сотенной шкале производят по следующему правилу: первое сотенное разведение С1 содержит 1/100 часть средства. Каждое следующее разведение приготавливается из одной части предыдущего разведения и 99 частей физиологического раствора. Таким образом готовят средство в следующих разведениях: Д30, С100, С200 и т. д. Подготовленное средство стерилизуют и разливают по ампулам из расчета 1 мл в ампуле.

Результаты этиологической диагностики описторхоза с использованием данного средства по заявленному способу подтверждаются клиническими данными.

Примеры конкретного выполнения

Пример 1. Больной Г. 57 лет. Диагноз: Хронический персистирующий гепатит, умеренно выраженная непрямая гипербиллирубинемия, хронический холецистит, вялотекущее обострение. Субкомпенсированный дисбактериоз кишечника, обусловленный повышенным ростом кишечной палочки, сниженным ростом бифидобактерий. Распространенный остеохондроз. При проведении диагностики на описторхоз были получены следующие показатели, приведенные в конце текста.

Приведенные данные показывают отрицательную диагностику на описторхоз, что подтверждается результатами клинико-функционального обследования.

Пример 2. Больной К. 42 года. Диагноз: Острый описторхоз. Гастродуоденит стадия обострения.

При проведении диагностики на описторхоз по предложенному способу были получены следующие данные, приведенные в конце текста.

Приведенные данные показывают положительную диагностику острого описторхоза, что подтверждается клинико-функциональными обследованиями.

Пример 3. Больная С., 31 год. Диагноз: Эрозивный бульбит, дискинезия желчевыводящих путей по гипертоническому типу.

Приведенные данные показывают отрицательную диагностику на о. описторхоз, что подтверждается клинико-функциональными обследованиями.

Пример 4. Больной С., 32 года. Диагноз: Аллергический риноконьюнктивит. Пищевая аллергия. Поливалентная сенсибилизация. При измерении биопотенциала в акупунктурных точках, имеющих этио-патогенетические взаимосвязи развития описторхоза, до и после помещения на тестировочной площадке заявленного средства для диагностики описторхоза были получены следующие данные, приведенные в конце текста.

Приведенные данные показывают положительную диагностику хронического описторхоза, что подтверждается клинико-функциональными обследованиями.

Пример 5. Больная В. N и 634, 25 лет. Диагноз: Экзогенная бронхиальная астма, легкой степени тяжести. Аллергическая риносинусопатия. Хронический холангиохолецистит. При проведении электроакупунктурной диагностики на описторхоз получены следующие показатели биопотенциалов БАТ диагностического алгоритма, приведенные в конце текста.

Приведенные данные показывают положительную диагностику хронического описторхоза, что подтверждается клинико-функциональными обследованиями.

Пример 6. Больной П. N и 436, 43 года. Диагноз: ВСД по гипертоническому типу. Хронический нейродермит. Хронический холецистит активная фаза. При проведении электроакупунктурной диагностики на описторхоз были получены следующие данные, приведенные в конце текста.

Приведенные данные показывают положительную диагностику хронического описторхоза, что подтверждается клинико-функциональными обследованиями.

Список использованных источников

1. Яровой П. И. , Зубчук М.П., Токмалев А.К. Справочник по медицинской гельминтологии. - Кишинев, 1984, 288 с.

2. Яблоков Д.Д. Описторхоз человека. Томск 1979 год.

3. Клебановская И. А., Старостина О.Ю., Баллад Н.Е., Иващенко Е.А. Иммуноферментный тест в диагностике описторхоза и сероэпидемиологических исследованиях. Медицинская паразитология, 1990, N 6, с. 45-47.

4. Самохин А.В., Готовский Ю.В. Практическая электропунктура по методу Р.Фолля. Москва, 1994, 301 с. 


ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ



1. Способ диагностики описторхоза, включающий определение реакции систем организма на диагностическое средство, полученное из гомогената марит Opistorchis felineus, отличающийся тем, что определяют величину биопотенциала по методу Фолля в следующих акупунктурных точках:

меридиан аллергии:

1 (1) аллергические поражения кожи нижнего отдела туловища, нижних конечностей, органов брюшной полости и малого таза,

2 (1.1) нарушение лимфодинамики при аллергических процессах (аутосенсибилизация),

3 (1а) нарушение вегетативной регуляции при аллергии, иммунотоксические реакции,

4 (1в) аллергия всего тела,

6 (2) аллергические поражения кожи затылка, верхних конечностей, органов грудной полости и шеи,

7 (3) аллергические поражения кожи головы, органов полости рта, носа, придаточных пазух носа,

меридиан тонкой кишки:

8 (3а) фатеров сосок,

меридиан селезенки - поджелудочной железы:

2 (1а) поджелудочная железа (справа), селезенка (слева),

6 (4) состояние иммунной системы в целом,

меридиан печени:

2 (1а) печень,

3 (1в) брюшина печени,

4 (2) клетки и дольки печени,

5 (2а) междольковые желчные протоки,

меридиан кожи:

1 (1) кожа нижней части туловища и нижних конечностей,

5 (2) кожа верхней части туловища,

6 (3) кожа головы,

меридиан желчного пузыря:

1 (44) желчный проток (справа), общий печеночный проток (слева),

2 (43d) лимфатические сосуды желчного пузыря и желчевыводящих путей,

4 (43в) желчный пузырь и желчевыводящие пути,

5 (43а) брюшина желчного пузыря,

6 (43) пузырный проток (справа), правый печеночный проток (слева),

8 (41) желчные протоки правой и левой долей печени,

меридиан желудка:

4 (44в) желудок,

меридиан легких:

3 (10с) легкие,

4 (10в) бронхиолы,

при отклонении величины биопотенциала в одной и более точках от нормальной величины 50 - 60 условных единиц более чем на 4 условных единицы или при падении биопотенциала после достижения им указанных значений более, чем на 4 условных единицы оценивают величину биопотенциала в данных точках в присутствии диагностического средства на тестировочной площадке прибора; при нормализации величины биопотенциала в присутствии средства в разведении до 10-30 г/мл ставят острую стадию, в разведении, более или равном 10-30 г/мл, - хроническую стадию заболевания.

2. Средство для диагностики описторхоза, содержащее гомогенат взрослых половозрелых марит Opistorchis felineus, отличающееся тем, что оно содержит белковый компонент, полученный путем центрифугирования гомогената и обработки надосадочной жидкости сульфатом аммония.