ИЗОБРЕТЕНИЕ
Патент Российской Федерации RU2027189

СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ ТЕЧЕНИЯ РОЖИ

СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ ТЕЧЕНИЯ РОЖИ

Имя изобретателя: Панютич Александр Васильевич[BY]; Панютич Елена Анатольевна[BY]; Крапивин Вадим Александрович[BY]; Зубрицкий Павел Кононович[BY]; Давыдов Ренат Рафаэльевич[BY]; Чилингиров Румен Христович[RU]
Имя патентообладателя: Крапивин Вадим Александрович (BY)
Адрес для переписки: 
Дата начала действия патента: 1991.11.28

Использование: медицина, инфекционные болезни и может быть использовано для прогнозирования небрагоприятных исходов рожи. Сущность изобретения: в сыворотке крови пациента определяют содержание фактора некроза опухолей- a в разгар болезни и на фоне клинического выздоровления, при снижении уровня ФНО- a в сравнении с исходным в 4-5 раз прогнозируют стойкую ремиссию, а при его сохранении или повышении - рецидив заболевания и/или формирование хронического лимфостаза. Положительный эффект: заявляемый способ прогнозирования исходов течения рожи у больных различными клиническими формами заболевания путем определения уровня ФНО- a в сыворотке крови воспроизводим, информативен и точен, поскольку используются высокоаффинные моноклональные антитела в иммуноферментном тесте.

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Изобретение относится к медицине, а именно к инфекционным болезням, и может быть использовано при оценке эффективности проводимой терапии (прогнозирования исходов рожи).

Известны способы прогнозирования исходов стрептококковых инфекций (рожи, ревматизма, гломерулонефрита, ангины, скарлатины), заключающиеся в определении содержания в сыворотке крови больных так называемых острофазовых белков: СРБ, серомукоида, антистрептолизина-0, антистрептокиназы в динамике заболевания. При данных способах оценки, к сожалению, не достигается высокая вероятность прогнозирования рецидивов, а обострения могут протекать при минимальной активности протеинов острой фазы.

Наиболее близким к предлагаемому способу является способ прогнозирования течения стрептококковой инфекции, заключающийся в определении уровня С-реактивного белка в крови больного. Данный лабораторный тест далеко не всегда отражает истинную динамику инфекционного процесса в организме больного человека и уступает предлагаемому как в разрешающей способности, так и в точности.

Предлагаемый способ отличается от известного тем, что количественно определяется уровень одного из медиаторов иммунной системы - фактора некроза опухолей- a в динамике течения острой стрептококковой инфекции кожи (рожи) и при снижении уровня ФНО- a в сыворотке крови больного на фоне реконвалесценции в 4-5 раз по сравнению с исходным (на фоне разгара болезни) прогнозируется благоприятный исход заболевания, если же на фоне клинического улучшения у больного уровень ФНО- a снижается незначительно либо повышается, прогнозируется ранний рецидив заболевания и/или формирование хронического лимфостаза. Следовательно, заявляемый способ соответствует критерию "новизна".

Использование ФНО- a в медицине известно. Рекомбинантный ФНО- a применяется для лечения злокачественных новообразований. Сведений об использовании ФНО- a для прогнозирования исхода течения рожи в источниках научно-медицинской информации и патентной документации не обнаружено. Следовательно, можно сделать вывод, что заявляемый способ имеет изобретательский уровень.

Способ осуществляют с использованием двух моноклональных антител, взаимодействующих с двумя эпитопами ФНО- a.

96-луночные полистирольные платы покрывают нейтрализующими моноклональными антителами к ФНО- a (1 мкг в 100 мкл 0,1 М бикарбонатного буфера с рН 9,6) с последующей инкубацией при 4оС и 5-кратным промыванием фосфатно-солевым буфером (ФСБ).

Неспецифические участки связывания на плате блокируют 1% бычьим сывороточным альбумином в ФСБ (БСА ФСБ). Инкубация 1 ч при 20оС. После дополнительной 5-кратной отмывки ФСБ титруемые образцы сывороток вносят по 100 мкл в лунку. В качестве стандарта используют рекомбинантный ФНО- a (НПО "Фермент", Вильнюс). После инкубации в течение 30 мин на горизонтальном шейкере при 20оС платы отмывают 5-кратно ФСБ и в лунки вносят нейтрализующие антитела к ФНО- a, меченные биотином в концентрации 0,5 мкг/мл в БСА ФСБ. Инкубация 30 мин при 20оС на горизонтальном шейкере. После 5-кратной отмывки ФСБ в лунки вносят стрептоавидин-пероксидазу (В10-RAD, USA), разведенную 1/4000 в БСА ФСБ. После инкубации при 20оС на горизонтальном шейкере платы еще раз отмывают ФСБ. Для проявления цветной реакции в лунки вносят по 100 мкл 20 ммоль цитратного буфера рН 4,7; содержащего 0,6 мг ортофенилендиамина (Sigma. USA) в 1 мл буфера и 0,001% Н2О2. Реакцию останавливают через 10 мин 50 мкл 2 М раствора Н2SO4 и учитывают на спектрофотометре с вертикальным лучом. (Organon, Teknika, Belgium) при длине волны 492 нм. Концентрацию ФНО- a в исследуемых образцах рассчитывают по калибровочной кривой рекомбинантного ФНО- a.

Абсолютное содержание ФНО- a в контексте с клиническими и другими лабораторными данными оценивалось в динамике на фоне стандартной терапии (этиотропной и патогенетической), включавшей назначение пенициллина, димедрола, глюконата кальция, аспирина и физиотерапии. Течение болезни оценивалось по анамнестическим данным (наличие интеркуррентных заболеваний, сроки наступления и частота рецидивов рожи, острота начала, проводившаяся предшествующая терапия), клиническим показателям (длительность и высота лихорадки, болевой синдром, гиперемия, отек и инфильтрация тканей, регионарный лимфаденит и лимфангоит, площадь и локализация поражения, пузыри, эрозии, геморрагии, формирование стойкого лимфостаза в исходе заболевания) и лабораторным тестам (лейкоцитоз и формула белой крови, протеино- и коагулограмма, СРБ, сиаловая кислота). Под наблюдением находилось 39 больных различными клиническими формами рожи. Тяжелые формы рожи как первичной, так и рецидивирующей сопровождаются повышением уровня ФНО- a в 5-10 раз по сравнению с контролем у здоровых доноров. У 9 пациентов изучаемой группы клинико-лабораторная реконвалесценция не сопровождалась снижением уровня ФНО- a в сыворотке крови, а у троих - отмечено повышение уровня данного цитокина в 2,5 раза. У всех пациентов этой выборки сфоpмировался стойкий лимфостаз в исходе заболевания, у четверых наступил ранний рецидив в трехмесячный срок. У 17 больных со снижением уровня ФНО- a в 4-5 раз по сравнению с исходным наступила стойкая клинико-лабораторная ремиссия без формирования хронического лимфостаза.

П р и м е р 1. Больной Х., 53 года (история болезни N 2665), поступил 31.09.90 в инфекционную клиническую больницу в первые сутки болезни с жалобами на острое повышение температуры тела до 38,6оС с ознобом, сильные распирающие жгучие боли в левой голени, сопровождающиеся яркой краснотой, и боли в левой паховой области. Ранее перенес три рецидива данного заболевания соответствующей локализации в легкой форме без признаков формирования хронического лимфостаза. Превентивная терапия не проводилась.

При поступлении у больного на левой голени определяется четко очерченный очаг яркой гиперемии, горячий и болезненный при пальпации, площадью до 60 см2, внутрикожные геморрагии, инфильтрация подлежащих тканей, регионарный лимфаденит лимфангоит на фоне выраженного лимфатического отека. Клинический диагноз: рожа левой голени, эритематозно-геморрагическая форма, рецидив средней тяжести. Лимфостаз 2-й степени.

1.10.90. Лабораторное обследование.

Гемоцитограмма. Hb= 156 г/л; эритроциты=4,8Ч1012 1/л; лейкоциты 13,1 cdot<N>109 1/л; п=1%; с=87%; л=10%; м=2%, СОЭ=29 мм/ч; тромбоциты = 246Ч109 1/л.

Биохимический анализ крови: общий белок = 77,7 г/л; альбумины = 41.3%. глобулины ( a1=10,2%;a2=3,3 %; b =16,1%. U=19,1%) СРБ=++++, сиаловая кислота = 0,300.

Коагулограмма: время свертывания по Ли-Уайту=4 '15''; каолиновое время= 40''; фибриноген А=1065 мг%; протромбиновый индекс (ПТИ) = 1,16; гематокрит (Ht)=0,65; фибринолиз=14 ч; протаминовое время=30 мл/ч; этаноловое время=20 мл/ч; фибриноген В=120 мл/ч; ретракция=67%; спонтанный фибринолиз=5%. При поступлении уровень ФНО- a составил 0,30 нг/мл.

В течение пребывания в стационаре больному проводилась противовоспалительная и десенсибилизирующая терапия, физиолечение и 10-дневный курс внутримышечного введения пенициллина по 40 млн. ед. в сутки. В результате у пациента стойко нормализовалась температура тела, купировались локальные проявления инфекции и болевой синдром. Однако на левой голени отмечено формирование лимфостаза 2-й степени.

14.10.90 проведено лаборатоpное обследование.

Гемоцитограмма: лейкоциты - 6,1Ч109 1/л; э-2%; п-4%; с-56%. л-35%; м-3% ; СОЭ-20 мм/ч; тромбоциты - 195Ч109 1/л.

Протеинограмма: общий белок 77,7 г/л; альбумины - 57,3%; глобулины ( a1=7,1%, a2 =11,9%, b =9,5%, U=14,2%); СРБ- "+"; сиаловая кислота - 0,190.

Коагулограмма: время свертывания по Ли-Уайту-7'; фибриноген А-556,8 мг% ; ПТИ - 1,05; фибриназа-6'; протаминовое время-30 мл/ч; этаноловое время - 5 мл/ч; фибриноген В-100 мл/ч; ретракция-70%. спонтанный фибринолиз-10%.

На фоне клинико-лабораторной ремиссии уровень сывороточного ФНО- a возрос в 1,5 раза и составил - 0,47 нг/мл.

15.06.90 выписан с клиническим выздоровлением под наблюдение участкового терапевта.

20.11.90 у больного Х. наступил ранний рецидив заболевания на фоне сформировавшегося хронического лимфостаза.

П р и м е р 2. Больной Х., 53 года (история болезни N 3574), госпитализирован в инфекционную клиническую больницу 20.11.90 в первые сутки заболевания с жалобами на высокую лихорадку до 39оС с потрясающим ознобом, интенсивные жгучие распирающие боли в области левой голени и в паху, отек и покраснение там же, головную боль и отсутствие аппетита. При поступлении объективно отмечено у больного наличие яркой четко очерченной гиперемии с геморрагиями площадью 50 см2 на фоне отека и инфильтрации по передне-боковой поверхности левой голени, увеличенные до 4-5 см и болезненные паховые лимфоузлы слева, повышение температуры тела до 39,2оС. В сентябре 1990 года перенес четвертый рецидив рожи аналогичной локализации. Превентивная терапия бициллином-5 не проводилась.

21.10.90. Лабораторное обследование.

Гемоцитограмма. Hb=160 г/л; эритроциты= 5,1Ч1012 1/л; лейкоциты=8,5Ч109 1/л; п=11; с=85%; л=3%; м=1%; СОЭ=47 мм/ч; тромбоциты=125Ч109 1/л.

Биохимический анализ крови. СРБ=++++; сиаловая кислота=0,320; общий белок= 68,8 г/л; альбумин=46,4%. глобулины ( a1 =4,8%; a2=9,3%; b =14,3%; U = 22,5%).

Коагулограмма: время свертывания по Ли-Уайту=5'10''; каолиновое время= 34'', фибриноген А=799,2 мг%; ПТИ=1,22; Ht=0,38; фибринолиз=5 ч; фибриназа= 7'30''. протаминовое время=5 мл/ч; этаноловое время=5 мл/ч; фибриноген В= 130 мл/ч; ретракция=70%; спонтанный фибринолиз=8%.

Уровень ФНО- a = 1,1 нг/мл.

Клинический диагноз: рожа левой голени, эритематозно-геморрагическая форма, рецидивирующее течение, средней тяжести. Лимфостаз 2-й степени.

Проведено лечение пенициллином в течение 7 дней в суточной дозе 4 млн, ед. ; димедролом; глюконатом кальция и УВЧ на очаг. На 13-й день пребывания в стационаре полностью купировались местные проявления болезни.

5.11.90. Лабораторное обследование.

Гемоцитограмма: лейкоциты=6,3Ч109 1/л; э=2%; п=3%; с=69%; л=25%; м=1%; СОЭ=20 мм/ч; тромбоциты=180Ч109 1/л;

Биохимический анализ крови.

Общий белок = 72,2 г/л; альбумин=54,6%; глобулины ( a1 =4,6%; a2= 8,8%; b= 11,2%; U =17,5%).

Коагулограмма: время свертывания по Ли-Уайту=6'30''; фибриноген А=588 мг% ; каолиновое время=60''; ПТИ=1.1; Ht=0,40; фибринолиз=3 ч; фибриназа= 8'30''; этаноловое время=20 мл/ч; протаминовое время=следы; фибриноген В=60 мл/ч; ретракция=88%; спонтанный фибринолиз=10%.

Уровень ФНО- a составил 0,12 г/л.

В течение трех месяцев наблюдения рецидивов заболевания и нарастания лимфостаза не отмечено.

Таким образом, заявляемый способ прогнозирования исходов течения рожи путем определения уровня ФНО- a в сыворотке крови у больных различными клиническими формами заболевания воспроизводим, информативен и точен, поскольку используются высокоаффинные моноклональные антитела в иммуноферментном тесте.

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ ТЕЧЕНИЯ РОЖИ путем исследования биологического материала, отличающийся тем, что в сыворотке крови определяют уровень фактора некроза опухолей - a в начале курса лечения рожи и по его окончании и при понижении уровня этого показателя в сравнении с начальным в 4 - 5 раз прогнозируют благоприятное течение, а при его сохранении или повышении прогнозируют рецидив заболевания и/или формирование хронического лимфостаза.

Версия для печати


вверх