СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ ИЗ КРОВИ БОЛЬНЫХ САХАРНЫМ ДИАБЕТОМ ГЕЛЬМИНТОВ, ЛИЧИНОК ГЕЛЬМИНТОВ
(51) МПК
G01N 33/48 (2006.01)
G01N 1/28 (2006.01)
(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
Статус: по данным на 10.08.2007 - может прекратить свое действие
--------------------------------------------------------------------------------
Документ: В формате PDF
(14) Дата публикации: 2006.11.20
(21) Регистрационный номер заявки: 2004111698/15
(22) Дата подачи заявки: 2004.04.19
(24) Дата начала отсчета срока действия патента: 2004.04.19
(45) Опубликовано: 2006.11.20
(56) Аналоги изобретения: SU 1308900 A1, 07.05.1987. RU 2011202 C1, 15.04.1994. SU 1601546 A1, 23.10.1990. SU 814339 C1, 23.03.1981. А.И.ОСИПОВСКИЙ. Учебник паразитологии с энтомологией. - М.: Медгиз, 1959, с.146.
(72) Имя изобретателя: Балугян Ружена Шаликовна (RU); Сеид-Гусейнов Алексей Асадович (RU)
(73) Имя патентообладателя: Балугян Ружена Шаликовна (RU); Сеид-Гусейнов Алексей Асадович (RU)
(98) Адрес для переписки: 125130, Москва, 6-й Новоподмосковный пер., 3, кв.141, Р.Ш.Балугян
(54) СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ ИЗ КРОВИ БОЛЬНЫХ САХАРНЫМ ДИАБЕТОМ ГЕЛЬМИНТОВ, ЛИЧИНОК ГЕЛЬМИНТОВ
Изобретение относится к области медицины. Для обнаружения гельминтов и их личинок получают микроскопические препараты, для чего смешивают пробы крови с антикоагулянтом К3 -ЭДТА и физиологическим раствором 1:1, готовят на основе первого раствора второй раствор, с 0,5% NaOH соответственно берут 2:1, инкубируют полученный раствор при 60°С в течение 5-10 минут, центрифугируют его при 3000 об/мин в течение 5 минут, удаляют надосадочную жидкость, инкубируют осадок при 37°С в течение 10 минут, обрабатывают осадок 1% раствором Люголя при соотношении 1:1, готовят мазки, сушат при 37°С в течение 15-20 минут и проводят микроскопирование с объективами 10 и 40. Изобретение позволяет выявить паразитов в 100% случаях. 2 ил.
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Изобретение относится к области медицины и может быть использовано для выделения из крови больных, например больных сахарным диабетом I и II типов, гельминтов, личинок гельминтов и других паразитов. Предложенный способ является новым, ранее в научной и медицинской литературе не описан.
Целью изобретения является разработка способа выделения из крови больных сахарным диабетом гельминтов, личинок гельминтов и других паразитов.
Поставленная цель достигается способом, включающим получение препарата крови на предметном стекле путем предварительного забора крови у больного с антикоагулянтом К3-ЭДТА (калиевая соль этилендиаминтетрауксусной кислоты); приготовление первого раствора из пробы крови и физиологического раствора в соотношении 1:1; в дальнейшем приготовление на основе первого раствора второго раствора, представляющего смесь первого раствора и раствора 0,5% NaOH в соотношении 2:1; последующая инкубация полученного раствора при 60°С в течение 5-10 мин; центрифугирование второго раствора в течение 5 минут при 3000 об/мин и удаление надосадочной жидкости. После дополнительной инкубации осадка при 37°С в течение 10 минут последний обрабатывается 10% раствором Люголя в соотношении объемов 1:1, что обеспечивает визуализацию паразитарных форм. Приготовленный на основе последнего мазок на предметном стекле, высушенный при 37°С, позволяет через 15-20 минут при его микроскопии с объективами 10 и 40 обнаружить в крови больных сахарным диабетом I и II типов гельминтов, личинок гельминтов и других паразитов.
Новым в предложенном способе является то, что в результате последовательного применения описанных этапов удалось выявить в 100% случаев в крови больных сахарным диабетом I и II типов имевшихся там гельминтов, личинок гельминтов и других паразитов.
Новый способ обнаружения гельминтов, личинок гельминтов и других паразитов в крови больных сахарным диабетом необходим для улучшения диагностики и лечения этих больных.
При отработке отдельных этапов способа проверены и обоснованы параметрические значения концентраций, времени, температуры и так далее, что отражено в приведенных примерах.
ПРИМЕР 1 (см. фиг.1).
1. Взята венозная кровь больного М. - 0,5 мл с антикоагулянтом К3-ЭДТА.
2. К ней добавлено 0,5 мл стерильного физиологического раствора и проба аккуратно перемешана.
3. К раствору добавлена 0,5 мл 0,5% NaOH.
4. Раствор инкубирован при 60°С в течение 5 минут.
5. После инкубации раствор отцентрифугирован в течение 5 минут на 3000 об/мин.
6. Надосадочная жидкость удалена.
7. Полученный осадок инкубирован при 37°С в течение 10 минут.
8. Из осадка приготовлен мазок с 1% раствором Люголя в соотношении объемов 1:1. Для приготовления мазка взято 15 мкл осадка и в виде капли перенесено на предметное стекло, затем взято 15 мкл 1% раствора Люголя и помещено рядом в виде второй капли на предметном стекле. Обе капли аккуратно смешиваются и полученный препарат термостатируется при 37°С 15 минут. При микроскопии препарата с объективами 10 и 40 обнаружены паразиты.
ПРИМЕР 2.
1. У больного сахарным диабетом взята капиллярная кровь из пальца в количестве 0,1 мл с антикоагулянтом К3-ЭДТА.
2. Эта кровь смешана с 0,1 мл физиологического раствора, затем к полученной смеси добавлен 0,1 мл 0,5% раствора NaOH.
3. Далее последовательность приготовления препарата соответствует ранее описанной в примере 1.
Всего венозная и капиллярная кровь была исследована более чем у 80 больных сахарным диабетом, и в во всех препаратах, приготовленных по данной методике, были обнаружены гельминты, личинки гельминтов и другие паразиты.
Предлагаемый способ позволяет в обычных лабораторных условиях с помощью недорогих реактивов получать препараты крови больных сахарным диабетом и определять в них гельминтов, личинок гельминтов и других паразитов.
ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
Способ выделения из крови больных сахарным диабетом гельминтов, личинок гельминтов, включающий получение микроскопических препаратов из осадочного субстрата в результате смешивания пробы крови с антикоагулянтом К3-ЭДТА и физиологического раствора 1:1, приготовление на основе этого первого раствора - второго раствора с 0,5% NaOH 2:1, инкубацию полученного раствора при 60°С в течение 5-10 мин, центрифугирование его при 3000 об/мин в течение 5 мин, удаление надосадочной жидкости, инкубацию осадка при 37°С в течение 10 мин, обработку осадка 1% раствором Люголя 1:1, приготовление мазка на предметном стекле, сушку при 37°С в течение 15-20 мин и микроскопию препаратов с объективами 10 и 40.