СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ КЛИНИЧЕСКОГО ТЕЧЕНИЯ УВЕАЛЬНОЙ МЕЛАНОМЫ

СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ КЛИНИЧЕСКОГО ТЕЧЕНИЯ УВЕАЛЬНОЙ МЕЛАНОМЫ


RU (11) 2146823 (13) C1

(51) 7 G01N33/53 

(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ 
Статус: по данным на 10.08.2007 - прекратил действие 

--------------------------------------------------------------------------------

(14) Дата публикации: 2000.03.20 
(21) Регистрационный номер заявки: 98118055/14 
(22) Дата подачи заявки: 1998.09.29 
(24) Дата начала отсчета срока действия патента: 1998.09.29 
(45) Опубликовано: 2000.03.20 
(56) Аналоги изобретения: Величко Л.Н. и др. Трансформация моноцитов в макрофаги в аутологической сыворотке больных меланомой увеального тракта глаза в процессе органосохранного лечения и применения лаферона. - Офтальмологический журнал, 1977, N1 с.39-40. 2. RU 2088940 C1, 27.08.97. 3. US 4507391 A, 26.03.85. 4. Blom D.J., Schurmans L.R., De Maard-Seebinda I et al., HLA expression in primary Uveal melanome, its cell line and four of its metastases, Br.J. Onhthalmol, 1997, nov 81(11), pp.989-993. 
(71) Имя заявителя: Московский НИИ глазных болезней им.Гельмгольца 
(72) Имя изобретателя: Лихванцева В.Г.; Слепова О.С.; Бровкина А.Ф.; Гришина Е.Е. 
(73) Имя патентообладателя: Московский НИИ глазных болезней им.Гельмгольца 
(98) Адрес для переписки: 103064, Москва, ул.Садово-Черногрязская, 14/19, МНИИГБ 

(54) СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ КЛИНИЧЕСКОГО ТЕЧЕНИЯ УВЕАЛЬНОЙ МЕЛАНОМЫ 

Изобретение относится к медицине, в частности к к офтальмологии, а именно к офтальмоонкологии, и предназначено для прогнозирования клинического течения увеальной меланомы и оценки эффективности проводимого лечения с целью увеличения продолжительности и качества жизни этого тяжелого контингента больных. Проводят исследование уровня фактора некроза опухоли альфа в сыворотке и слезной жидкости больного и парного здорового глаза в динамике. При отсутствии этого фактора в сыворотке и слезной жидкости обоих глаз прогнозируют ухудшение клинического течения заболевания с повышением вероятности метастазирования. Отсутствие этого фактора является абсолютным показанием к проведению адекватного иммунокорректирующего лечения под контролем иммунологических показателей. Способ обеспечивает высокую точность прогноза клинического течения увеальной меланомы и своевременное назначение адекватного иммунокорректирующего лечения. 


ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ



Изобретение относится к офтальмологии, а именно к офтальмоонкологии, и предназначено для прогнозирования клинического течения увеальной меланомы с целью увеличения продолжительности и качества жизни этого тяжелого контингента больных. В настоящее время известен способ прогнозирования течения увеальной меланомы на основе определения индекса трансформации макрофагальных моноцитов периферической крови в динамике (Л.Н. Величко, В.В. Вит, Малецкий А. П. Трансформация моноцитов в макрофаги в аутологической сыворотке больных меланомой увеального тракта глаза в процессе органосохранного лечения и применения лаферона. Офтальмологический журнал. 1997 г, N 1, с. 39-40). Авторами установлена прямая коррелятивная связь между показателями естественной резистентности (индексом созревания моноцитов и перехода их в зрелые макрофаги) у больных увеальной меланомой и клиническим течением опухолевого процесса. Ими было отмечено, что по мере прогрессирования меланомы снижается индекс созревания моноцитов и перехода их в зрелые макрофаги. Указанный показатель остается низким при частичной регрессии или продолженном росте опухоли. И, наоборот, индекс повышается по мере регрессии опухоли и стабилизации неопластического процесса, приближаясь к показателям здоровых доноров.

Способ информативен, доступен, однако, имеет ряд недостатков. Он осуществляется следующим образом. Из вены больного берут 1,5 мл крови, помещают во флакон с 3,5 мл среды, состоящей из среды 199, сыворотки крупного рогатого скота и 20 ЕД гепарина. На дно его помещали покровное стекло. Флакон с кровью термостатировали на протяжении 1 часа. За это время люноциты прикрепляются к стеклу. Через час покровное стекло извлекают из сосуда и промывают раствором Хенкса, затем вновь помещают в культуральную среду. Эритроциты и другие клетки к этому времени оседают. Через 48 часов покровное стекло извлекают и промывают физиологическим раствором, фиксируют 80o спиртом и окрашивают азур-эозином. Далее производят подсчет зрелых макрофагов методом микроскопии.

Способ имеет ряд недостатков: во- первых, продолжительность реакции трансформации мононуклеаров велика - 48 часов (ELISA - 6 часов). Во-вторых, анализируемый показатель отражает лишь один из механизмов противораковой защиты. Макрофаги - потенциально важный клеточный медиатор противоопухолевого иммунитета. Их роль продемонстрирована в экспериментах, проведенных in vitro, где активированные макрофаги лизируют исключительно опухолевые клетки, а не нормальные тканевые. Подобно нормальным киллерным клеткам, макрофаги экспрессируют Fc-рецепторы, и они могут быть нацелены на опухолевые клетки, покрытые антителами. Существует несколько механизмов убийства макрофагами опухолевых клеток. Они, в сущности, идентичны механизмам макрофагального киллинга инфицированных клеток.

Активированный присутствием опухолевой клетки макрофаг секретирует ФНО. Имеется ряд фактов, подтверждающих, что ФНО является основным компонентом макрофаг-опосредованного киллинга опухоли. Например, опухолевые клетки, устойчивые in vitro к к киллингу ФНО, также устойчивы и киллингу макрофагами. Поэтому, вполне естественно предположить, что определение уровня циркулирующего ФНО в СК даст более полную информацию о состоянии противоопухолевого иммунитета, чем индекс трансформации моноцита в макрофаги.

ФНО убивает опухоль двумя различными механизмами. Во-первых, связь ФНО с высоко-аффинными рецепторами на поверхности опухолевых клеток прямо токсична для них. Токсичность заключается в продукции свободных радикалов, разрушении цитоскелетных белков в клетке и возникающих при этом промежуточных эффектах. Нормальные клетки отвечают на ФНО синтезом супероксид дисмутазы - энзима, который участвует в инактивации свободных радикалов. Опухолевые клетки в силу особенностей своего метаболизма не могут этого сделать. Это объясняет избирательный киллинг опухолевых клеток ФНО. Во-вторых, ФНО вызывает некроз опухоли мобилизуя эффекторный ответ хозяина in vivo. Фактически, даже опухоли у мышей, не имеющие рецепторы к ФНО, при обработке цитокином гибнут. Причем ФНО селективно уничтожает васкуляризированные опухоли более активно, чем аваскулярные импланты. Гисто-морфологический ответ к ФНО выглядит как локализованная реакция Шварцмана в ответ на тромбоз сосудов с последующим геморрагически-ишемическим некрозом опухоли. Опухолевые сосуды первыми вовлекаются в триггерный механизм - Шварцмановскую реакцию. Некоторые выделяемые опухолью ангиогенные факторы, при этом потенциируют ответ на ФНО. Например, сосудистый эндотелиальный фактор роста.

Предлагаемый способ базируется на экспериментальных данных о роли фактора некроза опухоли альфа (ФНО) в механизмах противораковой защиты, а также его специфических функций.

Согласно экспериментальным данным, полученным как in vitro, так и in vivo, ФНО, обладая цитотоксическими и цитостатическими свойствами, повышает активность естественных киллеров (ЕКК), осуществляющих неспецифический киллинг опухолевых клеток-мишеней.

ФНО, усиливая экспрессию HLA-LR-антигснов на поверхности макрофагов, способствует быстрому распознаванию ими опухолевых антигенов и элиминации клеток, их несущих. (Vassalli P. The pathophysiology of tumor necrosis factors. Аnnu. Immunol. 1992, vol. 10, p.411-4251.

Под влиянием ФНО периферические лимфоциты дифференцируются в лимфокин-активированные киллеры - клетки, обладающие максимальным потенциалом и киллинговыми способностями. Кроме того, ФНО индуцирует продукцию Т-хелперами лимфокинов, повышающих экспрессию молекул МНС I класса на опухолевых клетках, что, в свою очередь, усиливает чувствительность клеток-мишеней к специфическому лизису цитотоксическими лимфоцитами.

На всех субпопуляциях лимфоцитов имеются рецепторы к ФНО. Благодаря этому лимфоциты могут воспринимать ФНО как сигнал к пролиферации и осуществлению специфических функций.

В норме продукция ФНО находится на низком уровне, который обеспечивает прямую и обратную связь в цитокиновой сети, поддержание нормальной регуляции иммунного гомеостаза. Однако режим быстро меняется, если в организме появляется клетка, несущая чужеродную информацию. Противоопухолевая активность ФНО реализуется в процессе цитолиза, который условно можно разделить на 4 стадии.

I стадия - распознавание клетки-мишени и приближение к ней. Для этой стадии важна экспрессия молекул на мембране клетки-мишени, которые распознаются клеткой-эффектором как чужеродные. В случаях опухолевых клеток меланомы в окружающее пространство поступают иммунорегуляторные молекулы - цитокины, в том числе и ФНО. Они ориентируют клетку-киллер относительно поиска клетки-мишени. ФНО облегчает процесс распознавания, усиливая экспрессию антигенов гистосовместимости, без чего невозможен процесс цитолиза. I стадия заканчивается (условно!) приближением к мишени.

II стадия начинается процессом связывания с мишенью или прикрепления к ней. Процесс возможен только в том случае, если мембрана мишени несет чужеродную информацию: отличия в антигенах, отличия в экспрессии маркирующих молекул, в ферментах и др.

Ill стадия начинается тотчас по прикреплении, которое продолжается от 2 до 10 минут. Клетка-эффектор (естественный киллер, лимфокин-активированный киллер, цитотоксический Т-лимфоцит) начинает секретировать белки-предшественники, формирующие в дальнейшем поры. Сформировавшийся белковый конъюгат погружается в мембрану, нарушая ее структуру, и по полому цилиндру внутрь клетки-мишени перетекают цитолизины: в случае опухоли эту роль выполняет ФНО - литический агент естественных киллеров и лимфокин-активированных киллеров.

IV стадия заключительная - литический процесс. Разрушенные фрагменты цитоскелета и цитоплазмы вытекают из перфорированной мембраны, наступает лизис клетки. А клетка-эффектор, отсоединившись от мишени, снова вступает в процесс киллинга, повторяя первый и последний этапы.

ФНО действует в дозозависимой манере. Так, избыточная продукция ФНО, усиливая процессы катаболизма, способствует снижению массы тела и обуславливает проявления поздних стадий раковых интоксикаций. (Schattner А. с соавт., 1990).

Классической моделью для оценки действия ФНО является лизис клеток саркомы Meth А у мышей.

Благодаря своим свойствам рекомбинантный ФНО был первым цитокином, предложенным в качестве терапевтического агента в противораковой терапии. Введение рекомбинантного ФНО продемонстрировало антипролиферативный и антиметастатический эффект в отношении линии аденокарциномы и меланомы человека (Sersa G. с соавт. 1989).

Внутривенное введение ФНО бестимусным мышам перед имплантацией им опухоли, дающей легочные метастазы и внутрибрюшинный карциноматоз, подавляло рост легочных метастазов и увеличивало продолжительность жизни экспериментальных животных по сравнению с контролем. При одновременном внутриопухолевом введении ФНО и интерферона наблюдалась регрессия ксенотрансплантатов опухоли человека. Гистологичсски через 24 ч после введения цитокинов, клетки опухоли полностью лизировались (Lugassy C, Escande JP. Immunolocation of TNF-alpha/cachectin in human melanoma cells. Studies on co- cultivated malignant melanoma. J Invest Dermatol 1991, vol 96, p 238-242. Naomoto Ioshioe с соавт., 1989).

За последнее время появились публикации, свидетельствующие о важной роли этого цитокина в механизмах регрессии опухолевого меланомного импланта, помещенного в переднюю камеру глаза экспериментального животного (Ferguson T.A. Herndon J., Dube P. The immune response and the eye: a role for TNF in anterior chamber-associated immune deviation. Investigative Ophthalmology & Visual Science., April 1994, vol. 35, N 5, p. 2643-2651; Filer R.S., Song J.C. Char D. H. "Zytokine in Uveamelanimen" Klin Monatsbl Augenheild 1993, vol 202, p 174-179; II. Knisely-TL, Niederkorn-JY Emergence of a dominant cytotoxic T lymphocyte antitumor effecte from tumor-infiltrating cells in the anterior chamber of the eye. Cahcer-Immunol-Immunother. 1990; 30(6): 323-30).

Установлена прогностическая значимость выявления уровней ФНО в слезной жидкости при ряде офтальмологических заболеваний (диабетической ретинопатии, катаракте, увеитах) (Cлепова с соавт. Вестник офтальмологии. 1998 год, N 3, c.28-32; Образцова Е.Н."Анализ состава цитокинов слезной жидкости и сыворотки крови в норме и при некоторых видах офтальмопатологии." Автореферат диссертации на соискание ученой степени канд. мед. наук. -М.-1996-с.7.)

Исходя из вышеуказанных данных о важной патогенетической значимости ФИО на всех этапах противораковой защиты, мы предположили, что динамическое определение до и в процессе лечения уровня ФНО в периферической крови и слезной жидкости может оказаться существенным при составлении прогноза клинического течения внутриглазной меланомы. Основанием для разработки способа послужили данные, полученные при обследовании 54 пациентов с различными стадиями увеальной меланомы. Больные прослежены в динамике на протяжении от 6 месяцев до 3,5 лет. Обследование повторяли каждые 6 месяцев.

17 пациентам произведены энуклеация глазного яблока, поскольку размеры опухоли и ее локализация не позволяли произвести органосохранную операцию. 3-м пациентам с поздним первичным обращением к врачу вынуждены были производить из-за прорастания опухоли в орбиту экзантерацию; 30 пациентов получили только брахитерапию; причем у трех пациентов в связи с продолженным ростом в рубце спустя 1,5 - 2 года лечение (брахитерапию) повторили; у 4-х больных размеры опухоли позволяли ограничиться только фотокоагуляцией опухоли. Одной пациентке с 6-летним стажем заболевания пришлось трижды проводить фотокоагуляцию и дважды брахитерапию. 3 пациентов вначале получили брахитерапию, но из-за неполной регрессии опухоли и склеромаляции постлучевого генеза им затем произвели энуклеацию. Еще двум пациентам также произвели энуклеацию спустя 6 месяцев - 1,5 года после брахитерапии по причине частичной регрессии опухоли и появления признаков вторичной гипертензии на фоне ее некроза, 3-м пациентам произведена блокэксцизия опухоли (локальное удаление опухоли радужки и цилиарного тела). Еще два пациента обратились к врачу в стадии генерализации процесса. Учитывая наличие внутриглазной гипертензии и болевого синдрома у одного из них, ему произведена энуклеация в качестве симптоматической терапии. Третий пациент имеет опухоль на единственном глазу. От какого бы то ни было лечения отказывается. Все трое находятся под наблюдением.

Среди 54 пролеченных больных у 9 пациентов, получивших энуклеацию, и одного - брахитерапию, выявлены метастазы. Двое пациентов взяты под наблюдение и обследованы уже при наличии метастазов (позднее обращение к врачу).

Результаты иммунологических исследований этой группы больных прослежены в динамике до 3, 5 лет, сопоставлены с клиническим течением неопластического процесса. Ретроспективный анализ полученных данных позволил установить коррелятивную взаимосвязь с клиникой, что позволяло использовать фактический материал для разработки прогностического теста.

Полученные данные показали, что основной процент случаев неблагоприятного течения заболевания выявлен у тех пациентов, у которых ФНО не обнаруживается ни в сыворотке, ни в слезе обоих глаз (81% из группы). Так, из 16 больных, у которых не был обнаружен ни в сыворотке, ни в слезной жидкости ФНО, у 11 обнаруживаются метастазы в сроки до 6 месяцев после забора проб. Причем двое из них уже умерли от генерализации процесса. Продолжительность их жизни (и, соответственно, наблюдения) составила 1,5 года. Только в трех случаях (19%) из этой группы больных отмечена стабилизация процесса при сроках наблюдения до трех лет.

При выявлении ФНО в какой-либо одной из трех исследуемых проб риск ухудшения клинического процесса снижался.

Так, из двух пациентов, у которых выявлен ФНО в слезе больного глаза, только в одном случае выявлена стабилизация процесса после энуклеации при сроке наблюдения до 6 месяцев.

При выявлении ФНО в сыворотке и отсутствии его в слезе обоих глаз в 5-ти из 14 случаев (36%) клиническое течение было расценено как неблагоприятное. У двух пациентов - частичная регрессия опухоли с последующим развитием вторичной гипертензии и энуклеацией. Двое больных находятся под наблюдением при остаточной опухоли, леченной брахитерапией с адекватной дозой на верхушку на протяжении 1 года. И у одного пациента брахитерапия проведена дважды в течение 1,5 лет в связи с опухолевым ростом из-под рубца.

В 2 случаях из 7-ми (29%), где ФНО обнаружен в слезе парного глаза и отсутствует в сыворотке и слезе больного глаза, диагностирован продолженный рост опухоли.

У одного из 7 пациентов (14%) при отсутствии ФНО в слезе больного глаза, но положительных пробах сыворотки и слезы парного "здорового" глаза, опухоль регрессировала частично при достаточной дозе облучения на верхушку. У остальных 6 отмечена полная регрессия опухоли.

При выявлении ФНО в сыворотке и слезе обоих глаз (6 случаев) или только больного глаза (2 случая) у всех пациентов произошла стабилизация процесса независимо от проведенного метода лечения.

Задачей предлагаемого изобретения является разработка способа, позволяющего прогнозировать клиническое течение заболевания у каждого конкретного больного. Техническим результатом является объективизация и повышение точности прогнозирования. Технический результат достигается за счет исследования ФНО как фактора противоопухолевой защиты, принимающего участие на различных патогенетических звеньях.

Тест по выявлению ФНО- производится с помощью иммуно-(ферментного анализа (используют коммерческие тест-системы для количественного определения ФНО- (например, "Протеинового контура, Санкт-Петербург, "Innogenetic", Бельгия).

Использованные нами тест-системы позволяли определить ФНО- в интервале концентраций 20-2000 пкг/мл.

Способ осуществляли следующим способом.

1. Забирают периферическую кровь из локтевой вены в сухую пробирку объеме не менее 1 мл. Сыворотку и слезную жидкость получают обычным способом. Всего при постановке ELISA на ФНО нужно не более 100 kл исследуемой пробы, которую можно получить из 1 мл сыворотки.

2. Пробирку ставят в термостат (37oC) для формирования сгустка на 30 минут.

3. Путем центрифугирования получают сыворотку, которую используют для последующих исследований.

4. Пробы хранят в морозильной камере при to -20o до накопления количества, необходимого для заполнения одной плашки тест-системы (до 6 месяцев) или при to -70o (до 1 года).

5. После двухкратного промывания лунок планшета, вносят 300 мкл буфера соответствующего разведения, предоставляемого тест-системой фирмой-изготовителем, в каждую лунку, затем аспирируют жидкость.

6. Растворяют содержимое ампул со стандартными препаратами, внося по 1 мл буфера для образцов в каждую лунку.

7. В ячейки планшета, предназначенные для нулевой пробы (Blank), вносят по 100 мкл буфера C. В ячейки планшета, предназначенные для калибровки значений, вносят по 100 мкл стандартов ФНО-.

8. В оставшиеся ячейки планшета вносят исследуемые образцы сыворотки в объеме 100 мкл. Инкубируют 1 час при 37oC.

9. Удаляют жидкость из ячеек и трижды промывают их буфером В (300 мкл на одну ячейку), проводят полную аспирацию оставшейся жидкости.

10. Пипеткой вносят в каждую лунку по 100 мкл раствора вторых антител (находящихся в тест-системе). Вновь инкубируют 1 час при 37oC.

11. Удаляют жидкость из ячеек и трижды промывают их буфером В (300 мкл на одну ячейку). Вновь проводят полную аспирацию оставшейся жидкости.

12. Разбавляют необходимое для анализа количество в соотношении 1:10 конъюгата стрептовидина с пероксидазой хрена буфером C и вносят по 100 мкл раствора в каждую ячейку планшета.

13. Инкубируют 45 минут при 37oC.

14. Удаляют жидкость из ячеек и трижды промывают их буфером В (300 мкл на одну ячейку). Проводят полную аспирацию оставшейся жидкости.

15. Дважды промывают ячейки путем постукивания по поверхности стока, покрытого фильтровальной бумагой.

16. Вносят во все лунки по 100 мкл раствора субстрата с красителями.

17. Инкубируют планшет 15-30 минут при комнатной температуре в защищенном от света месте. Наблюдают развитие голубой окраски.

18. Реакцию останавливают добавлением 50 мкл раствора серной кислоты в каждую лунку.

19. Проводят учет результатов с использованием автоматического фотометра при длине волны 450 нанометров, устанавливая нулевое поглощение по нулевой лунке.

20. Строят калибровочную кривую /оптическая плотность/концентрация, пользуясь данными по концентрациям, указанным для растворов стандартов. По калибровочной кривой определяют графически концентрацию ФНО в образцах.

При получении отрицательного результата в трех исследуемых тест-объектах прогноз считают неблагоприятным с повышением риска метастазирования. Такой больной нуждается в срочном проведении адекватной иммунокоррекции под контролем иммунологических показателей.

Пример N 1. Больная К., 1929 года рождения. Поступила в стационар с диагнозом: меланома хориоидеи правого глаза (Т3N0М0) (проминенция 9,4 мл, а диаметр основания-14,2 мм2). Данные об отсутствии метастазов подтверждены инструментальными методами. Больной предложена энуклеация из-за размеров опухоли, однако из-за категорического ее отказа расстаться с глазом, произведена попытка брахитерапии. Иммунологическое обследование, проведенное накануне лечения, не выявило ФНО в сыворотке и слезе обоих глаз. 6 месяцев позднее: на фоне постлучевой реакции и продолжающейся частичной регрессии опухоли оказались вновь негативными все пробы на ФНО. Больная отпущена под наблюдение окулиста по месту жительства с контрольной явкой через 6 месяцев. Спустя 1 год после проведенного лечения при повторном обследовании: опухоль частично регрессировала. Проминенция составила 5,4 мм на момент осмотра, диаметр - 10.2 мм2, но при проведении ультразвукового исследования больного глаза выявлена инфильтрация склеры на всю толщину. ФНО в сыворотке крови и слезе обоих глаз практически отсутствовал. Произведена энуклеация правого глаза. Наличие опухолевых комплексов на эписклере и опухолевая инвазия склеры подтверждена гисто-морфологическими исследованиями. Приведенный нами пример наглядно демонстрирует прямую взаимосвязь между переходом опухолевого процесса от стадии Т3 к T4, то есть отягощением клиники (несмотря на то, что опухоль под воздействием брахитерапии частично регрессировала, т.е. уменьшилась в размерах, она сохранила все признаки агрессивности и инфильтрировала склеру), что протекало на фоне длительного отсутствия системной и секреторной продукции ФНО.

Пример N2. Больная A, 1945 г.р. Поступила с диагнозом увеальная меланома (Т2N0М0) левого глаза, правый глаз - здоров. Иммунологические показатели на момент обследования: ФНО в сыворотке - 480 пкг/мл, в слезе левого глаза - 120 пкг/мл, а в слезе правого глаза - 25 пкг/мл.

Проведена брахитерапия без осложнений. Больной обследован спустя 6 месяцев повторно. Остаточная опухоль: размеры уменьшились вдвое. ФНО в сыворотке - 120 пкг/мл, слезе правого глаза - 90 пкг/мл, слезе левого глаза - 240 пкг/мл. Год спустя после брахитерапии: на ультразвуковом исследовании зафиксирован плотный хорио-ретинальный рубец, толщиной до 1 мм, офтальмоскопически данных за наличие остаточной опухолевой ткани нет. ФНО в сыворотке - 240 пкг/мл, в слезе больного глаза - 25 пкг/мл, слезе здорового глаза - 8 пкг/мл. На КТ печени и рентгенографии метастазы не выявлены.

Накопление ФНО в сыворотке и слезной жидкости, выявляемые при динамическом обследовании, свидетельствуют о наличии хороших компенсаторных возможностей системной и локальной противораковой защиты у больного. Ухудшения клинического течения увеальной меланомы не отмечено.

Пример N 3. Больная К. 1935 г. рождения. Поступила в стационар с диагнозом увеальная меланома (Т3N0М0) левого глаза. Отсутствие метастазов на момент госпитализации подтверждено компьютерной томограммой печени и рентгенографией легких. Иммунологическое обследование показало отсутствие ФНО в слезной жидкости обоих глаз при слабой системной продукции (в сыворотке - 25 пкг/мл). Поскольку размеры опухоли не позволяли провести брахитерапию, произведена энуклеация. Гистологически верифицирована эпителиоидная меланома с эпибульбарными узлами. Больная получила протоно терапию на область орбиты с целью профилактики рецидива меланомы в орбите.

При контрольной явке спустя 1 год: ФНО в сыворотке - не выявляется. ФНО в слезе, взятой из коньюнктивальной полости больного глаза, не обнаружен, как и в слезе здорового глаза. Учитывая уже имеющиеся данные по аналогичным больным, у пациента заподозрено отягощение неопластического процесса с переходом в стадию генерализации. Дана рекомендация: срочно обследоваться у общего онколога с целью выявления метастазов и обязательное исследование печени и легких. При проведении сцинтиграфии обнаружено наличие метастазов в печени. Наличие метастазов в печени подтверждено также и УЗИ.

Приведенный выше пример может быть продемонстрирован как позднее выявление меланомы на фоне почти полного истощения резервов иммунной системы, о чем свидетельствует сначала низкий уровень, а затем отсутствие ФНО в сыворотке при перманентном дефиците его в слезе обоих глаз. По-видимому, операция (энуклеация) сама по себе с последующей протонотералией) или, стресс, связанный с ними, а возможно и то и другое вместе взятые, привели к полной декомпенсации иммунитета и спровоцировали процесс метастазирования. Исходно низкий уровень ФНО в сыворотке и отсутствие такового в слезе уже позволяли предположить худший прогноз для пациента с таким показателем.

Таким образом, полученные данные по определению уровня ФНО в слезной жидкости обоих глаз и сыворотке с ретроспективным анализом клинического течения больных с увеальной меланомой, позволяют утверждать, что с помощью повторных иммунологических исследований в рамках указанных параметров, возможно проведение прогноза клинического течения увеальной меланомы. Ценность предлагаемого нами метода заключается в том, что он также позволяет произвести оценку эффективности проводимого лечения, скорректировать его на каждом анализируемом этапе, осуществить отбор больных с повышением риска метастазирования и определить показания к проведению своевременной иммунокоррекции. 


ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ



Способ прогнозирования клинического течения увеальной меланомы, включающий количественное определение факторов неспецифической противоопухолевой защиты в сыворотке крови, отличающийся тем, что в качестве такого фактора исследуют фактор некроза опухоли альфа, при этом определяют его дополнительно в слезной жидкости обоих глаз и при практическом отсутствии его как в сыворотке, так и в слезной жидкости обоих глаз прогнозируют ухудшение клинического течения, а при обнаружении этого фактора прогнозируют благоприятное течение на протяжении 6 месяцев.