СПОСОБ ПОДГОТОВКИ ПРЕПАРАТА ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ ИЗМЕНЕНИЙ КОНЪЮНКТИВЫ ГЛАЗНОГО ЯБЛОКА

СПОСОБ ПОДГОТОВКИ ПРЕПАРАТА ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ ИЗМЕНЕНИЙ КОНЪЮНКТИВЫ ГЛАЗНОГО ЯБЛОКА


RU (11) 2282843 (13) C2

(51) МПК
G01N 1/30 (2006.01) 

(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ 
Статус: по данным на 17.10.2007 - может прекратить свое действие 

--------------------------------------------------------------------------------

Документ: В формате PDF 
(14) Дата публикации: 2006.08.27 
(21) Регистрационный номер заявки: 2004136355/15 
(22) Дата подачи заявки: 2004.12.14 
(24) Дата начала отсчета срока действия патента: 2004.12.14 
(43) Дата публикации заявки: 2006.05.20 
(45) Опубликовано: 2006.08.27 
(56) Аналоги изобретения: ВОЛОХОВСКАЯ З.П. Дистрофия ядер эпителиальных клеток сенсибилизированной конъюнктивы. - Здравоохранение Туркменистана, 1982, №6, с.16-18. RU 2179006 С2, 10.02.2002. RU 2110975 С1, 20.05.1998. RU 2022544 C1, 15.11.1994. RU 2062134 C1, 20.06.1996. 
(72) Имя изобретателя: Кореняк Галина Викторовна (RU); Житенко Наталья Алексеевна (RU) 
(73) Имя патентообладателя: Кореняк Галина Викторовна (RU); Житенко Наталья Алексеевна (RU) 
(98) Адрес для переписки: 355007, г.Ставрополь, ул. Айвазовского, 24а, кв.1, Г.В. Кореняк 

(54) СПОСОБ ПОДГОТОВКИ ПРЕПАРАТА ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ ИЗМЕНЕНИЙ КОНЪЮНКТИВЫ ГЛАЗНОГО ЯБЛОКА

Изобретение относится к области медицины, в частности к офтальмологии. Сущность способа заключается в подготовке препарата для цитологического исследования, для чего проводят соскоб эпителия бульбарной конъюнктивы, при этом соскобный материал с бульбарной конъюнктивы берут расслаивателем (ALKON) после предварительной местной анестезии раствором 0,5% дикаина и наносят на поверхность чистого обезжиренного предметного стекла, высушивают естественным путем, фиксируют 96% этиловым спиртом, окрашивают по Романовскому-Гимзе, затем краску смывают проточной водой, соскобы высушивают естественным путем. Цитологические препараты микроскопируют. Изобретение позволяет быстро подготовить материал к микроскопии для проведения диагностики.



ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Область техники, к которой относится изобретение
Изобретение относится к области медицины, в частности к офтальмологии, и может быть использовано для доклинической диагностики воздействий УФ-излучения на конъюнктиву глазного яблока.
Уровень техники
Известен способ диагностики конъюнктивального соскоба при фаринго-конъюнктивальной лихорадке, который заключается в цитоскопии конъюнктивального соскоба в комплексе с клиническими и вирусологическими исследованиями (см. А.А.Авдыкович Цитоскоскопия конъюнктивального соскоба при фаринго-конъюнктивальной лихорадке / Вестник офтальмологии. 1963. №1, стр.46-51).
Недостатком этого способа является использование дополнительных методов исследования: серологического и вирусологического для диагностики данного способа.
Известен способ цитологического исследования конъюнктивы при трахоме, который заключается в параллельных клинических и цитологических признаках трахомы (см. И.П.Маслова Изучение эпителия конъюнктивы век при трахоме с помощью электронного микроскопа / Вестник Офтальмологии. 1963. №3, стр.17-22).
Недостатком данного способа является использование высокоспециализированного оборудования - электронного микроскопа.
Наиболее близким по технической сущности и достигаемому положительному эффекту и принятый авторами за прототип является способ изучения структурных особенностей эпителиальных клеток при весеннем катаре, включающий соскоб эпителия бульбарной конъюнктивы, после предварительной местной анестезии раствором 0,5% дикаина, нанесенным на поверхность предметного стекла с последующим цитологическим исследованием (см. З.П.Волоховская Дистрофия ядер эпителиальных клеток сенсибилизированной конъюнктивы / Здравоохранение Туркменистана. 1982. №6, стр.16-18).
Недостатком данного способа является диагностика дистрофических поражений ядерных структур только у больных с сезонным аллергическим конъюнктивитом, и не учитываются дистрофические проявления переднего отрезка глаза под действием внешних факторов.
Раскрытие изобретения
Задачей предлагаемого изобретения является выявление последствий воздействия УФ-излучения на конъюнктиву глазного яблока.
Технический результат, который может быть получен с помощью предлагаемого изобретения, сводится к более точному, доступному, дешевому, быстрому диагностированию доклинических изменений конъюнктивы глазного яблока.
Технический результат достигается с помощью способа диагностики воздействий УФ-излучения на конъюнктиву глазного яблока, включающий соскоб эпителия бульбарной конъюнктивы, после предварительной местной анестезии раствором 0,5% дикаина, нанесение на поверхность предметного стекла, причем соскабливаемый материал высушивают естественным путем в течение 10-12 минут, фиксируют 96% спиртом путем однократного погружения, после чего проводят окрашивание в течение 15-17 минут по Романовскому-Гимзе, затем краску смывают проточной водой и соскобы высушивают естественным путем. Цитологические препараты микроскопируют при увеличении 7*20, а затем с использованием иммерсионной микроскопии при увеличении 7*90 с помощью бинокулярного микроскопа "Биолам Р-15".
Сущность способа диагностики воздействий УФ-излучения на конъюнктиву глазного яблока заключается в следующем.
Способ диагностики воздействий УФ-излучения на конъюнктиву глазного яблока включает цитологическое исследование соскобов эпителия бульбарной конъюнктивы у пациентов в 3 диагностических группах.
Способ проводят таким образом: соскобный материал с бульбарной конъюнктивы берут расслаивателем (ALKON) после предварительной местной анестезии раствором 0,5% дикаина и наносят на поверхность чистого обезжиренного предметного стекла. Соскобный материал высушивают естественным путем, фиксируют 96% этиловым спиртом, окрашивают по Романовскому-Гимзе. Затем краску смывают проточной водой, соскобы высушивают естественным путем. Цитологические препараты микроскопируют при увеличении 7*20, а затем с использованием иммерсионной микроскопии при увеличении 7*90 с помощью бинокулярного микроскопа "Биолан Р-15".
Осуществление изобретения
Примеры конкретного выполнения способа диагностики воздействий УФ-излучения на конъюнктиву глазного яблока.
Изучение влияния УФ-излучения на орган зрения в последнее десятилетие стало одним из приорететных направлений. Это объясняется рядом факторов: климатическими и региональными условиями, разрушением озонового слоя, распространением пищевых и лекарственных фотосенсибилизирующих агентов.
Поэтому вопросы профилактики поражения органа зрения вообще и в конкретном географическом регионе требуют индивидуального решения.
Имеются эпидемиологические, клинические и гистологические данные о связи времени воздействия УФ-излучения с возникновением изменений конъюнктивы: птеригиум, пингвекула (см. Я.П.Бергмансон, Т.М.Шелдон Профилактика повреждений глаза УФ-излучением "Глаз". 1999. №3, стр.23-27), (см. Clinicopathologic correlation of disease, Saint Lois, 1978 Chapter 10, p.474).
Пример 1
Способ диагностики воздействий УФ-излучения на конъюнктиву глазного яблока проводят таким образом.
Соскобный материал с бульбарной конъюнктивы берут расслаивателем (ALKON) после предварительной местной анестезии раствором 0,5% дикаина и наносят на поверхность чистого обезжиренного предметного стекла. Соскобный материал высушивают 2-3 минуты естественным путем, фиксируют 96% этиловым спиртом и окрашивают по Романовскому-Гимзе 4-5 минут.
Микроскопию цитологических препаратов проводят при увеличении 7*20, а затем с использованием иммерсионной микроскопии при увеличении 7*90 с помощью бинокулярного микроскопа "Биолан Р-15".
Способ диагностики воздействий УФ-излучения на конъюнктиву глазного яблока проводился у 86 пациентов (172 глаза), которые распредилились на 3 диагностические группы.
1 группа - 25 (29,06%) пациентов, мужчины - 11 (44%), женщины - 14 (56%) возраст 20-30 лет.
2 группа - 28 (32,5%) пациентов, мужчины - 12 (42,9%), женщины - 16 (57,1%), возраст 30-40 лет.
3 группа - 33 (38,4%) пациента, мужчины - 17 (51,5%), женщины - 16 (48,5%), возраст 40-55 лет.
1 группу составили пациенты, не имеющие жалоб на орган зрения и клинических признаков воспаления.
При микроскопии препараты эпителия конъюнктивы рассмотреть не удается, так как окраска неравномерная.
2 группу составили пациенты с клиническими признаками дистрофии конъюнктивы: пингвекула и птеригиум.
При микроскопии препараты также не достаточно окрашены для изучения.
В 3 группу вошли пациенты с клиническими признаками начальной заднекапсулярной и субкапсулярной катарактой.
При микроскопии неравномерное окрашивание препаратов затрудняет их диагностику.
В ходе проведения способа доклинической диагностики воздействия УФ-излучения на конъюнктиву глазного яблока по примеру 1 и сравнивая с нормой диагностику эпителия бульбарной конъюнктивы (см. И.П.Маслова / Изучение эпителия конъюнктивы век при трахоме с помощью электронного микроскопа / Вестник Офтальмологии. 1963, №3, стр.20) (см. Г.В.Егорова, А.А.Федоров / Кератоконус и синдром сухого глаза / Клиническая офтальмология, том 5, 2004, №1, стр.31), микроскопия соскобов эпителия бульбарной конъюнктивы не удалась, так как выявлена неравномерная окраска препаратов в 3 диагностических группах.
Пример 2
Способ диагностики воздействия УФ-излучения на конъюнктиву глазного яблока был проведен аналогично примеру 1, но отличается тем, что соскобный материал высушивают 4-5 минут и окрашивают по Романовскому-Гимзе 8-9 минут.
1 группу составили пациенты не, имеющие жалоб на орган зрения и клинических признаков воспаления.
При микроскопии препарат бледной окраски, клетки едва просматриваются, диагностика затруднена.
2 группу составили пациенты с клиническими признаками дистрофии конъюнктивы: пингвекула, птеригиум.
При микроскопии клетки окрашены недостаточно для точной диагностики.
В 3 группу вошли пациенты с клиническими признаками начальной заднекапсулярной и субкапсулярной катарактой.
При микроскопии препарат слабо окрашен, диагностически неинформативен.
В ходе проведения способа диагностики воздействия УФ-излучения на конъюнктиву глазного яблока по примеру 2 и сравнив с нормой, выявлено недостаточное окрашивание препаратов в 3 диагностических группах, что затрудняет проведение диагностики.
Пример 3
Способ диагностики воздействия УФ-излучения на конъюнктиву глазного яблока был проведен аналогично примеру 1, 2, но отличается тем, что соскобный материал высушивают естественным путем 10-12 минут, фиксируют 96% этиловым спиртом - однократным погружением, после чего окрашивают 15-17 минут по Романовскому-Гимзе, затем краску смывают проточной водой и соскобы высушивают естественным путем. Цитологические препараты микроскопируют при увеличении 7*20, а затем с использованием иммерсионной микроскопии при увеличении 7*90 с помощью бинокулярного микроскопа "Биолам Р-15".
1 группу составили пациенты с клинически здоровой конъюнктивой (25 пациентов). При микроскопии определялись пласты клеток плоского эпителия овальной и округлой формы, ядра нормохромные, хроматин распределен равномерно, мелкозернистый. Ядро овальной или округлой формы, с четкими контурами, расположено в средней части клетки или несколько смещено к суженному концу. Размер ядер составляет более половины диаметра клеток. Цитоплазма окрашена интенсивно, гомогенна, с четкими контурами. Иногда в цитоплазме определяется зона просветления вокруг ядра или вакуоли. Границы клеток четкие, иногда ровные с одной из сторон. Также встречаются скопления и пласты клеток с отростками цитоплазмы (клетки-"паучки").
На основании проведения способа диагностики воздействия УФ-излучения на конъюнктиву глазного яблока, 1 группу составили пациенты с практически здоровой конъюнктивой; 2 группу составили пациенты с клиническими признаками дистрофии конъюнктивы: пингвекула, птеригиум.
Цитологическая картина у пациентов с птеригиумом (16 пациентов): в препаратах наряду с неизмененными пластами клеток плоского эпителия встречаются разрозненно лежащие и в пластах клетки с признаками дистрофии: округлой, овальной, вытянутой формы. Ядра пикнотичные, округлые, овальные, расположенные центрально. Цитоплазма окрашена слабо, гомогенная, вакуолизированная.
Цитологическая картина у пациентов с пингвекулой (12 пациентов): в препарате пласты клеток плоского эпителия овальной и округлой формы, ядра нормохромные и с признаками дистрофии: округлые, овальные, пикнотичные, расположены центрально, хроматин распределен равномерно, мелкозернистый. Цитоплазма гомогенна, с четкими контурами. Иногда в цитоплазме определяется зона просветления вокруг ядра или вакуоли. Границы клеток четкие, иногда ровные с одной из сторон.
На основании проведения способа диагностики воздействия УФ-излучения на конъюнктиву глазного яблока выявлены дистрофические проявления во 2 группе пациентов.
В 3 группу вошли пациенты с клиническими признаками начальной заднекапсулярной и субкапсулярной катарактой.
При микроскопии эпителия конъюнктивы у пациентов с кортикальной (15) и заднекапсулярной (18) катарактой отмечались пласты клеток овальной и округлой формы, увеличение размеров эпителиальных клеток и ядер, появляются неровности контуров ядер у части клеток, хроматин распределен равномерно или с участками разряжения, в некоторых клетках определяется вакуолизация, цитоплазма окрашена равномерно.
На основании проведения способа диагностики воздействия УФ-излучения на конъюнктиву глазного яблока в 3 группе пациентов выявляются признаки пролиферирующего плоского эпителия, о чем свидетельствует увеличение размеров эпителиальных клеток и ядер, появление неровности контуров ядер.
В ходе проведения способа диагностики воздействия УФ-излучения на конъюнктиву глазного яблока по примеру 3, сравнивая с нормой эпителия конъюнктивы, выявлены наиболее оптимальные условия окрашивания препаратов по Романовскому-Гимзе для 3 диагностических групп.
Пример 4
Способ диагностики воздействия УФ-излучения на конъюнктиву глазного яблока был проведен аналогично примеру 1, 2, 3, но отличается тем, что соскобный материал высушивают в термостате 8-9 минут, фиксируют 96% этиловым спиртом - однократным погружением, после чего окрашивают 25-27 минут по Романовскому-Гимзе.
1 группу составили пациенты с клинически здоровой конъюнктивой. На цитограмме клетки и ядра гиперхромны, диагностика затруднена.
Во 2 группу вошли пациенты с клиническими признакам дистрофии конъюнктивы: пингвекула и птеригиум.
При микроскопии учитывать диагностические изменения соскобного материала не удается, так как интенсивная окраска препарата.
В 3 группу вошли пациенты с клиническими признаками начальной заднекапсулярной и субкапсулярной катарактой.
При микроскопии гиперхромия ядра и цитоплазмы эпителиоцитов не дает четкой диагностической картины.
В ходе проведения способа диагностики воздействия УФ-излучения на конъюнктиву глазного яблока по примеру 4 выявлено интенсивное окрашивание препаратов в 3 диагностических группах, что затрудняет анализ микроскопии.
Таким образом, способ достоверной, доклинической диагностики воздействий УФ-излучения на конъюнктиву глазного яблока дает пример 3 и является наиболее оптимальным.
Предлагаемое изобретение по сравнению с прототипом и другими известными техническими решениями имеет следующие преимущества:
- точность диагностики изменений конъюнктивы глазного яблока под воздействием УФ-излучения в 3 возрастных группах;
- экономически недорогое выполнение способа диагностики воздействий Уф-излучения на конъюнктиву глазного яблока;
- быстрота выполнения способа диагностики воздействий УФ-излучения на конъюнктиву глазного яблока;
- доклиническая диагностика изменений эпителия бульбарной конъюнктивы.



ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

Способ подготовки препарата для диагностики изменений конъюнктивы глазного яблока, включающий соскоб эпителия бульбарной конъюнктивы после предварительной местной анестезии раствором 0,5% дикаина, нанесение на поверхность предметного стекла с последующим цитологическим исследованием, отличающийся тем, что соскабливаемый материал высушивают естественным путем в течение 10-12 мин, фиксируют 96% этиловым спиртом, путем однократного погружения, после чего проводят окрашивание в течение 15-17 мин по Романовскому-Гимзе, затем краску смывают проточной водой и высушивают естественным путем, после чего проводят цитологическое исследование.