СПОСОБ ОЦЕНКИ СОСТОЯНИЯ МЕСТНОГО ИММУНИТЕТА СЛИЗИСТОЙ ОБОЛОЧКИ ПОЛОСТИ НОСА В РИНОЛОГИЧЕСКОЙ ПРАКТИКЕ

СПОСОБ ОЦЕНКИ СОСТОЯНИЯ МЕСТНОГО ИММУНИТЕТА СЛИЗИСТОЙ ОБОЛОЧКИ ПОЛОСТИ НОСА В РИНОЛОГИЧЕСКОЙ ПРАКТИКЕ


RU (11) 2297633 (13) C1

(51) МПК
G01N 33/573 (2006.01)
G01N 33/547 (2006.01) 

(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ 
Статус: по данным на 29.08.2007 - действует 

--------------------------------------------------------------------------------

Документ: В формате PDF 
(14) Дата публикации: 2007.04.20 
(21) Регистрационный номер заявки: 2006120520/15 
(22) Дата подачи заявки: 2006.06.14 
(24) Дата начала отсчета срока действия патента: 2006.06.14 
(45) Опубликовано: 2007.04.20 
(56) Аналоги изобретения: RU 2127133 C1, 10.03.1999. SU 1332229 A1, 23.08.1987. RU 2004911 C1, 15.12.1993. SU 1760451 A1, 07.09.1992. SU 1691746 A1, 15.11.1991. BESANCON-WATELET С et al. Eosinophilia and cell activation mediators in nasal secretions. Laryngoscope. 2002 Jan; 112(1):43-6, PMID: 11802063 (реферат) [он-лайн] [01.09.2006], найдено из БД PubMed. BALFOUR-LYNN IM
et al. Nasal IgA response in wheezy infants. Arch Dis Child. 1993 Apr; 68(4):472-6PMID: 8503669 (реферат), [он-лайн] [01.09.2006], найдено из БД PubMed.

(72) Имя изобретателя: Самуйлов Юрий Юрьевич (RU); Портенко Геннадий Михайлович (RU); Федотова Татьяна Александровна (RU); Горшкова Марина Анатольевна (RU); Добрынин Кирилл Борисович (RU) 
(73) Имя патентообладателя: Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Тверская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию" (RU) 
(98) Адрес для переписки: 170642, г.Тверь, ул. Советская, 4, ГОУ ВПО Тверская ГМА Росздрава, патентный отдел 

(54) СПОСОБ ОЦЕНКИ СОСТОЯНИЯ МЕСТНОГО ИММУНИТЕТА СЛИЗИСТОЙ ОБОЛОЧКИ ПОЛОСТИ НОСА В РИНОЛОГИЧЕСКОЙ ПРАКТИКЕ
Изобретение относится к области медицины, а именно к оториноларингологии и иммунологии. Сущность способа заключается в том, что в носовом секрете определяют содержание лизоцима, sIgA, измеряют индекс авидности (ИА) sIgA с последующим расчетом индекса иммунного напряжения (ИИН) по формуле: , где ИAsIgA - индекс авидности sIgA; sIgA - содержание секреторного иммуноглобулина А, мг/л; Liz - содержание лизоцима, мкг/мл; 100 - постоянный коэффициент для более наглядного отображения результатов. Значение ИИН 0,45±0,15 расценивают как норму, 0,99±0,36 - как высокую степень иммунного напряжения, 0,18±0,11 - как низкую степень иммунного напряжения. Использование способа позволяет оценить состояние местного иммунитета слизистой оболочки полости носа, определить его роль в возникновении заболевания и необходимость коррекции.




ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ


Изобретение относится к области медицины, а именно к оториноларингологии и иммунологии и предназначено для оценки состояния местного иммунитета слизистой оболочки полости носа в клинической практике.

Эффективность местного иммунитета может претерпевать самые различные изменения под влиянием внешних и внутренних воздействий. Слизистые оболочки в силу своего топографического положения первыми подвергаются воздействию патогенов, при этом они обладают комплексом факторов неспецифической и специфической защиты, обеспечивающих в большинстве случаев надежный барьер на пути проникновения антигенов. Однако, несмотря на сложную организацию и совершенство защитных систем слизистых оболочек, нарушение равновесия между этими механизмами может привести к развитию заболеваний.

Исследование муконазального иммунитета актуально, так как дает дополнительную информацию, полезную для диагностики, лечения и профилактики различных инфекционных и воспалительных, острых и хронических патологических процессов в полости носа.

За прототип авторами был взят способ оценки состояния местного иммунитета слизистой оболочки полости рта (Дорофейчук В.Г., Салина Е.В., Маянская И.В. и др. Способ прогнозирования частых инфекционных заболеваний у детей // Автор.свид. №1332229. - 1987). В слюне методом радиальной иммунодиффузии в геле определяют концентрацию иммуноглобулинов A, G и активность лизоцима нефелометрическим методом. Для количественной оценки взаимосвязи показателей местного иммунитета используют специальный коэффициент. Расчет проводится по формуле

,

где 40 - условная норма содержания лизоцима, %;

IgA и IgG - содержание иммуноглобулинов А и G соответственно, г/л;

0,6 - условная норма соотношения IgG к IgA;

ЛА - лизоцимная активностью %.

Значения К от 0,1 до 1 определяют как норму; 1,1-2,0 - пограничное состояние; 2,1 и выше - снижение активности факторов местной защиты. При значении К выше 2 прогнозируют частые инфекционные заболевания.

Этот способ позволяет оценить состояние местного иммунитета полости рта с целью прогнозирования частых инфекционных заболеваний у детей.

При этом, на взгляд авторов, данный способ имеет ряд недостатков. Именно sIgA играет ведущую роль в обеспечении специфической защиты слизистых оболочек. Однако ценность просто количественного учета содержания sIgA сомнительна из-за большого разброса значений данного иммуноглобулина как в норме, так и при различных патологических состояниях. Повышение уровня sIgA не всегда отражает усиление местной специфической защиты слизистой оболочки полости носа и в ринологической практике наблюдается нередко, наоборот, при неблагоприятном течении заболеваний (частые обострения, развитие осложнений). Попадание IgG в состав носовой секрета не является следствием специального транспорта, подобно sIgA. IgG проходит по межклеточным пространствам, и увеличение его содержания является, в большей степени, следствием повышения проницаемости эпителиального пласта в условиях воспаления. Поэтому определение концентрации IgG для оценки состояния местного иммунитета малоинформативно.

Учитывая, что важнейшими воротами для проникновения патогенных микроорганизмов в организм человека являются верхние дыхательные пути, в частности слизистая оболочка полости носа первой подвергается воздействию инфекционных «агентов», оценка местного иммунитета по исследованию носового секрета прогностически значима.

Целью изобретения является разработка более полноценного и точного способа определения состояния местного иммунитета слизистой оболочки полости носа, позволяющего оценить не только сбалансированность показателей неспецифической и иммунной защиты, но и, прежде всего, функциональную активность системы местного иммунитета, что позволило бы использовать данный способ в комплексе мер по диагностике, лечению и профилактике заболеваний полости носа и околоносовых пазух.

Авторы предлагают способ оценки состояния местного иммунитета слизистой оболочки полости носа в ринологической практике по расчету индекса иммунного напряжения, используя для этого определение в носовом секрете следующих показателей: содержание лизоцима, содержание sIgA и индекса авидности sIgA.

Способ осуществляется следующим образом. Производят забор носового секрета: в область общего носового хода вводят поролоновую полоску в каждую половину полости носа, после пропитывания поролона слизью в течение 5 минут полоску удаляют и отделяемое с помощью шприца выдавливают в стерильную пробирку в количестве 1 мл.

Определение лизоцима в носовом секрете осуществляют фотометрическим способом в мкг/мл.

Оценку содержания sIgA проводят методом твердофазного иммуноферментного анализа с помощью набора «sIgA - ИФА - БЕСТ» в мг/л. Параллельно определяют индекс авидности (ИА) sIgA (ИAsIgA) - прочность связи между антителом и антигеном. Определение авидности заключается в дифференциации высоко- и низкоавидных антител с помощью обработки иммунных комплексов (sIgA, связавшийся в лунках с адсорбированными иммобилизованными моноклональными антителами к нему) раствором мочевины, которая разрушает непрочные иммунные комплексы. Авидность антител оценивают с помощью расчетного показателя - ИА, который представляет собой отношение результата иммуноферментного определения концентрации антител в пробе, подвергнутой обработке мочевиной, к результату измерения концентрации антител в пробе, не обработанной мочевиной.

Далее для определения взаимосвязи вышеприведенных показателей местного иммунитета рассчитывают специальный показатель - индекс иммунного напряжения(ИИН) по формуле

,

где ИAsIgA - индекс авидности sIgA;

sIgA - содержание секреторного иммуноглобулина А, мг/л;

Liz - содержание лизоцима, мкг/мл;

100 - постоянный коэффициент для более наглядного отображения результатов.

Диагностическая значимость заявленного метода оценивалась на случайной выборке из 70 человек, в которую вошли здоровые лица и пациенты с различной патологией полости носа (острые и хронические риносинуситы) - 30 и 40 человек соответственно.

При определении ИИН было установлено, что оптимальным для здоровых лиц является показатель, равный 0,45±0,15 (р<0,05). Выявление ИИН равного 0,99±0,36 - высокая степень иммунного напряжения - отмечалось при острых риносинуситах и в случае редких обострений хронических, а также после недавно перенесенных ОРВИ, что можно расценивать как результат типичной острофазовой реакции на воспаление в норме. Показатель ИИН нормы - 0,18±0,11 - низкая степень иммунного напряжения - выявлялся в группе лиц с частыми рецидивами острых и обострениями хронических риносинуситов, с частыми ОРВИ и, кроме того, у пациентов с «недоброкачественным» течением заболеваний полости носа (длительное течение с неэффективностью проводимой консервативной терапии, развитие осложнений). При этом не всегда частым рецидивам и «недоброкачественному» течению заболевания соответствовала низкая степень иммунного напряжения, и при дальнейшем обследовании больных выявлялись другие причины (анатомические изменения полости носа, хронические воспалительные заболевания зубов), коррекция которых позволяла достичь положительных результатов. Таким образом, оценка ИИН позволяет подтвердить или исключить роль нарушения местного иммунитета слизистой оболочки полости носа в развитии заболевания и определить необходимость его коррекции.

Преимущества данного способа заключаются в том, что он позволяет более качественно, полноценно и объективно оценить состояние местного иммунитета слизистой оболочки полости носа по ИИН, что дает достоверную информацию, полезную в диагностическом и прогностическом плане в ринологической практике. Учет HasIgA (прочности связывания sIgA антигенов) позволяет не просто оценивать количественное содержание sIgA, а учитывать, прежде всего, его функциональную активность. Так, например, при высоких показателях sIgA, но при этом низких значениях ИAsIgA нельзя говорить о потенциально хорошем состоянии местного иммунитета слизистой оболочки полости носа. Посредством расчета ИИН оценивается взаимосвязь и сбалансированность показателей специфической (sIgA, ИAsIgA) и неспецифической (лизоцим) местной защиты слизистой оболочки полости носа. Оценивая степень иммунного напряжения при различных заболеваниях полости носа и околоносовых пазух, можно определить роль нарушения местного иммунитета слизистой оболочки полости носа в развитии данного заболевания и необходимость его коррекции, прогнозировать дальнейший характер течения заболевания и индивидуализировать лечебно - профилактические мероприятия, что позволяет использовать данный способ в комплексе мер на этапе диагностики, лечения и профилактики заболеваний в ринологической практике.

Заявленный метод был оценен в клинике при обследовании 37 человек: 22 чел. с диагнозом - острый риносинусит - с быстрой положительной динамикой на проводимую стандартную консервативную терапию(первая группа), 15 чел. - не имели патологии со стороны верхних дыхательных путей(вторая группа). По разработанной методике было установлено, что у пациентов первой группы ИНН был в пределах 0,93±0,17 (высокая степень иммунного напряжения). Во второй группе ИИН составлял 0,47±0,12 (в пределах нормы).

Возможность практического осуществления способа подтверждается примерами конкретного исполнения.

Клинический пример 1.

Больной 3., 21 год, карта обследования №17, диагноз: острый гнойный гайморит справа. Из анамнеза установлено, что заболевание было диагностировано около 1,5 месяца назад, пункции верхнечелюстной пазухи не проводились, лечился антибиотиками с временным эффектом. В связи с ухудшением госпитализирован в стационар, где после 6 пункций и курса консервативной терапии, учитывая отсутствие динамики, было проведено оперативное лечение - гайморотомия. При эндоскопии полости носа анатомических изменений не выявлено. Консультация стоматолога - здоров. У больного взят носовой секрет. При исследовании заявляемым способом: ИИН равен 0,11 (лизоцим 6,83 мкг/мл, sIgA 549 мг/л, ИAsIgA 0,089) - низкая степень иммунного напряжения, а это значительно ниже нормы, что связано с неблагоприятным течением данного заболевания, а также длительной неадекватной антибиотикотерапией. Пациенту при выписке назначена иммуномодулирующая терапия (ИРС 19, рибомунил) и рекомендовано повторное определение ИИН через 1 месяц.

Клинический пример 2.

Больная Н., 20 лет, карта обследования №52, диагноз: острый катаральный гайморит справа, рецидивирующее течение. Обострения 3-4 раза в год в течение последних двух лет, протекают, как правило, легко, с выраженной положительной динамикой на фоне стандартной консервативной терапии. Заболела после перенесенной ОРВИ. На рентгенограмме придаточных пазух носа - утолщение слизистой правой верхнечелюстной пазухи, при пункции - слизь. После курса консервативной терапии - быстрая положительная динамика. При исследовании заявляемым способом ИИН составил -0,92 (лизоцим 17,45 мкг/мл, sIgA 251 мг/л, ИAsIgA 0,132) - высокая степень иммунного напряжения, что соответствует нормальной реакции иммунной системы на острое воспаление. При эндоскопическом осмотре полости носа отмечена деформация носовой перегородки справа в виде «шипа», прикрывающего область среднего носового хода. Больной рекомендована плановая эндоназальная операция с целью восстановления нормального функционирования естественного соустья правой верхнечелюстной пазухи. Коррекция местного иммунитета не требуется.




ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ


Способ оценки состояния местного иммунитета слизистой оболочки полости носа в ринологической практике, включающий определение состояния местного иммунитета, отличающийся тем, что в носовом секрете определяют содержание лизоцима, sIgA, измеряют индекс авидности sIgA, рассчитывают индекс иммунного напряжения по формуле

,

где ИAsIgA - индекс авидности sIgA;

sIgA - содержание секреторного иммуноглобулина А, мг/л;

Liz - содержание лизоцима, мкг/мл;

100 - постоянный коэффициент для более наглядного отображения результатов,

и при значении ИИН 0,99±0,36 определяют высокую степень иммунного напряжения, 0,18±0,11 - низкую степень иммунного напряжения, при нормальном значении ИНН 0,45±0,15.