СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ СЕНСОНЕВРАЛЬНОЙ ТУГОУХОСТИ

СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ СЕНСОНЕВРАЛЬНОЙ ТУГОУХОСТИ


RU (11) 2229131 (13) C1

(51) 7 G01N33/48 

(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ 
Статус: по данным на 29.08.2007 - прекратил действие, но может быть восстановлен 

--------------------------------------------------------------------------------

(14) Дата публикации: 2004.05.20 
(21) Регистрационный номер заявки: 2003102399/15 
(22) Дата подачи заявки: 2003.01.27 
(24) Дата начала отсчета срока действия патента: 2003.01.27 
(45) Опубликовано: 2004.05.20 
(56) Аналоги изобретения: SU 1138129 А, 07.02.85. ПАЛЬЧУН В.Т. и др. Коррекция нарушений метаболизма печени при нейросенсорной тугоухости методом квантовой гемотерапии. Вестн. Оторинолар., 2001, №4, с.4-9. RU 2177712 С2, 10.01.2002. RU 2195272 C1, 27.12.2002. 
(72) Имя изобретателя: Золотова Т.В. (RU) 
(73) Имя патентообладателя: Золотова Татьяна Викторовна (RU) 
(98) Адрес для переписки: 344022, г.Ростов-на-Дону, пер. Нахичеванский, 29, Ростовский государственный медицинский университет, патентный отдел 

(54) СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ СЕНСОНЕВРАЛЬНОЙ ТУГОУХОСТИ 

Изобретение относится к области медицины, а именно, к оториноларингологии, и предназначено для диагностики сенсоневральной тугоухости. Определяют в сыворотке крови больных содержание холестерина (ХС). Исследуют показатели липидного спектра сыворотки крови: общие липиды (ОЛ), триглицериды (ТГ), -липопротеиды (ЛП). Оценивают состояние свободнорадикального окисления (СРО) методом хемилюминесценции (ХЛ). По увеличению содержания ХС, ОЛ, ТГ и ЛП в сочетании с признаками угнетения системы СРО, сопровождающегося снижением показателя (S) интенсивности спонтанного свечения на 23% и более, определяют сенсоневральную тугоухость. Способ позволяет своевременно назначить коррекцию патогенетически направленной терапии. 2 табл. 


ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ



Изобретение относится к области медицины и найдет применение в оториноларингологической практике при диагностике и лечении больных с сенсоневральной тугоухостью (СНТ).

Известно, что число больных СНТ постоянно возрастает. Причиной заболевания могут быть различные факторы (сосудистый, инфекционный, токсический), и развитие СНТ происходит вследствие поражения структур слухового анализатора. Этому могут способствовать самые разнообразные нарушения в организме человека. Используемые в настоящее время традиционные лечебные воздействия часто оказываются неэффективными, приводя, преимущественно, к стабилизации слуховой функции. Многообразие предлагаемых средств для лечения СНТ объясняется особенностями развития заболевания, а также тем, что при этом не удается улучшить слух значимо для больного. Это заставляет искать возможные новые звенья в патогенезе СНТ, которые могут уточнять состояние больного и быть использованы при диагностике нарушений в структурах слухового анализатора. Диагностика нарушений в организме человека при СНТ может способствовать уточнению этиологических и патогенетических факторов и проведению в последующем адекватной терапии.

Обследование больных, находящихся на лечении в ЛОР клинике РГМУ по поводу СНТ с сопутствующей соматической патологией (заболеваниями сердца, суставов, крови, печени, почек), показало наличие сдвигов параметров липидного обмена. У них же были исследованы свободно-радикальные процессы и тоже обнаружены изменения. Эта случайно выявленная закономерность навела на мысль о возможности участия в патогенезе СНТ нарушений липидного обмена на фоне изменений процессов свободнорадикального окисления.

Пример 1. У б-й К., 41 г. (и/б №1641), находящейся на лечении по поводу двусторонней хронической сенсоневральной тугоухости (2-3 степени) сосудистой этиологии, с сопутствующим заболеванием -хроническая ишемическая болезнь сердца, были выявлены признаки дислипидемии.

Показатели липидного спектра сыворотки крови больного: холестерин - 7,6 ммоль/л; общие липиды - 7,08 г/л; триглицериды - 1,56 г/л, липопротеиды - 6,8 г/л.

При исследовании свободнорадикальных процессов сыворотки крови получены достоверно отличающиеся от нормальных показатели хемилюминесценции (ХЛ) сыворотки крови, в частности спонтанная хемилюминесценция (S), отражающая интенсивность эндогенного свободнорадикального перекисного окисления липидов и пропорциональная концентрации гидроперекисей в данной системе, оказалась, вопреки ожидаемому повышению, сниженной

S=0,93103 импульсов за 100 с.

Пример 2. Б-ая Т., 48 л. (и/б 1313), находилась на лечении в ЛОР клинике РГМУ по поводу двусторонней сенсоневральной тугоухости неясной этиологии, прогрессирующей в течение 5 лет, с сопутствующим заболеванием - хронический гепатит, были выявлены признаки дислипидемии: холестерин - 7,8 ммоль/л; общие липиды - 7,82 г/л; триглицериды - 1,48 г/л; липопротеиды - 6,2 г/л.

Показатели ХЛ сыворотки крови свидетельствовали о снижении светосуммы спонтанного свечения

S=0,98103 импульсов за 100 с.

При анализе приведенных двух историй болезней и еще 8 историй болезней больных СНТ с различной сопутствующей соматической патологией во всех случаях выявлены признаки дислипидемии, сопровождающейся увеличением содержания холестерина, общих липидов, триглицеридов, липопротеидов, а также обнаружены признаки угнетения системы свободнорадикального окисления по показателям хемилюминесцентного анализа.

Полученные данные навели на мысль о возможности участия в патогенезе СНТ обнаруженных нарушений липидного обмена и процессов свободнорадикального окисления. Введение в схему лечения антиоксидантов приближало к нормальным исследуемые показатели и способствовало не только улучшению соматического состояния, но и более значимому улучшению слуховой функции у больных, что и подтверждало наше предположение.

Мы посчитали возможным использовать обнаруженные особенности патогенеза слуховых расстройств для дополнения диагностических критериев при СНТ.

Проведенными исследованиями по научно-медицинской, патентной литературе выявлены различные способы диагностики сенсоневральной тугоухости.

Основой аудиологической диагностики СНТ является тональная пороговая аудиометрия (Руководство по оториноларингологии / Под ред. И.Б.Солдатова. - М.: Медицина. - 1994. - С.166). Наряду с акуметрией тональная пороговая аудиометрия давно используется и является обязательной для диагностики СНТ, так как позволяет определить нарушение в системе звуковосприятия и степень тугоухости. Тем не менее, этот способ диагностики не всегда способствует выявлению звеньев патогенеза и направлений в коррекции нарушений при СНТ.

Л.А.Лазарева (2000) использует для диагностики СНТ иммунологические данные (Клинико-иммунологические аспекты острой нейросенсорной тугоухости. Дисс...к.м.н. Краснодар, 2000). Автор проводит исследование содержания в крови больных СНТ иммуноглобулинов, показателей фагоцитарной системы, субпопуляции лимфоцитов и цитокинов и считает основой формирования патогенетических реакций при СНТ гиперпродукцию фактора некроза опухоли (TNF) и интерлейкина 1 (IL 1). При сохранении высоких показателей указанных цитокинов в крови больных с СНТ предлагается проведение иммунокоррегирующей терапии. Недостатками данного способа являются экономические и технические трудности при выполнении предлагаемых иммунологических исследований, необходимость иметь специальные дорогостоящие импортные диагностикумы и диагностическую аппаратуру (спектрофотометр, иммуноферментный анализатор), не указан характер иммунокоррегирующей терапии.

Известен “Способ диагностики тугоухости”, предложенный Е.П.Москаленко и соавт., 1987 (А.с. №1332230), основанный на выявлении в сыворотке крови больных противомозговых (ПМА), противокохлеарных (ПКА), противовестибулярных (ПВА) антител при СНТ и противоневриномных (ПНА) антител при невриноме слухового нерва. Недостатком способа является сложность выделения и приготовления антигенов из тканей умерших людей и удаленной опухоли, используемых в реакции пассивной гемагглютинации (РПГА).

В.Т.Пальчун, Н.А.Петухова, 2001 (Коррекция нарушений метаболизма печени при нейросенсорной тугоухости методом квантовой гемотерапии. Вести, оторинолар. - 2001. - №4. - С.4-9) для обоснования метода квантовой гемотерапии изучали функцию печени у больных с СНТ и обнаружили нарушения ее метаболизма. Авторы определяли методом спектрографии на биохимическом анализаторе “Express” (в мг/дл) содержание в плазме крови общего холестерина (ХС), холестерина липопротеидов высокой плотности (ХСЛПВП), триглицеридов (ТГ), вычисляли количество холестерина липопротеидов низкой плотности (ХСЛПНП), определяли коэффициент дислипопротеидемии Кд по формуле

Кд=(ХС-ХСЛПВП)/ХСЛПВП.

Эти же авторы оценивали активность перекисного окисления липидов (ПОЛ) по концентрации субстанций, дающих позитивную реакцию с 2,4-тиобарбитуровой кислотой (в единицах оптической плотности), и обнаружили нарушение липидного метаболизма при СНТ, что выражалось в повышении концентрации липидов плазмы (ХС, ТГ, Кд) и снижении уровня ХСЛПВП. Данная методика достаточно сложна и помимо оборудования для спектрографии требует математической обработки по формулам. Что касается определяемого авторами состояния ПОЛ, то полученные ими результаты исследований неоднозначны, имеется несоответствие данных, представленных в таблице (с.8) в различных сериях исследований и описания и оценки в тексте, что не позволяет сделать конкретные выводы и использовать эти критерии для диагностики СНТ.

Наиболее близким по своей сущности и взятым в качестве прототипа является “Способ диагностики тугоухости”, предложенный Н.В.Крыловой и Н.А.Крюковой, 1985 (А.С. 1138129, опубл. 07.02.85, Бюл. №5). Способ осуществляется путем определения в крови содержания холестерина, а также магния и кальция, оксипролина или гликозаминогликанов. При увеличении содержания холестерина в сочетании с гипомагниемией или гипокальциемией, а также с гипероксипролинемией или гипогликозамингликанемией диагностируют тугоухость. Проведенные исследования крови у больных СНТ с применением данного способа показали указанные соотношения в 70% случаев.

К недостаткам описанного способа относятся

- недостаточная точность диагностики (в 70% случаев);

- труднодоступность диагностикумов для определения множества компонентов предлагаемого способа.

Целью изобретения является создание доступного способа диагностики нарушений при СНТ с высокой степенью точности диагностики, раскрывающего звенья патогенеза данного заболевания с определением направления для их коррекции.

Эта цель достигается оценкой состояния липидного обмена и процессов свободнорадикального (СРО) окисления при СНТ путем определения показателей липидного спектра сыворотки крови и исследования сыворотки крови методом хемилюминесценции (ХЛ).

Исследование содержания липидов в сочетании с изучением процессов СРО представляется целесообразным при СНТ в связи с имеющимися сведениями о строении клеточной мембраны и роли нарушения ее функции в патогенезе заболеваний нервной системы (Л.М.Пустовалова. Практикум по биохимии. - Ростов-на-Дону: издательство “Феникс”. - 1999. - 544 с.). Как известно, биологическая мембрана - образование, организованное из молекул фосфолипидов (ФЛ) в виде бислоя, обеспечивающего ее полупроницаемость; холестерина, способствующего упорядочности ФЛ и поддержанию свойства текучести на среднем уровне; белков; гликопротеинов и гликолипидов. Перекисное окисление липидов (ПОЛ) это свободнорадикальный процесс, а основными субстратами ПОЛ являются полиненасыщенные высшие жирные кислоты (ВЖК), находящиеся в структуре ФЛ мембран. ПОЛ регулирует проницаемость мембран, влияет на деление и рост клеток, начинает фагоцитоз, а антиоксидантная система осуществляет контроль за уровнем ПОЛ. Снижение активности антиоксидантов (АО) или высокая активность прооксидантов способствуют нарушению процессов СРО, переходу ПОЛ в неконтролируемое состояние, ведет к повреждению клеточных структур и гибели клетки, что имеет место в патогенезе сенсоневральной тугоухости, относительно нейроэпителиальных клеток спирального органа и нервных элементов головного мозга. Вышеперечисленные механизмы могут приводить к дегенеративно-атрофическим изменениям в структурах слухового анализатора, лежащим в основе патогенеза СНТ.

Исследование показателей липидного спектра сыворотки крови, а также биохимические исследования с использованием метода хемилюминесценции (ХЛ) проведено нами 30 больным СНТ в динамике до и после лечения. У каждого обследуемого изучали холестерин (ХС), общие липиды (ОЛ), триглицериды (ТГ), -липопротеиды (ЛП) по унифицированным методикам с помощью стандартных наборов реактивов; для оценки состояния СРО использовали метод ХЛ в присутствии ионов двухвалентного железа. Показатели ХЛ регистрировали на установке ХЛМ 1 Ц-01 по методу Ю.А.Владимирова и соавт. (Ю.А.Владимиров, В.Н.Оленев, Т.В.Суслова. Сверхслабое свечение плазмы крови в клинической диагностике // Сб. трудов 2 МОЛМИ. - Т.9, вып.8. – М., 1974, с.6-33).

Важнейшими преимуществами применения ХЛ биологических субстратов для оценки СРО является высокая чувствительность метода, позволяющая обнаружить в биологических жидкостях свободные радикалы в самых низких концентрациях. Кроме того, становится возможным получение информации как о свободнорадикальных процессах (СРП) в организме, так и об антиоксидантной системе (АОС), что важно для комплексной оценки состояния больного и его коррекции при патологии.

Изучали следующие показатели ХЛ.

1. Спонтанная хемилюминесценция (S) - отражает интенсивность эндогенного свободнорадикального перекисного окисления липидов. Интенсивность спонтанного свечения пропорциональна концентрации гидроперекисей в данной системе. Светосумма спонтанного свечения измеряется в импульсах за 100 с.

2. Быстрая вспышка (h) - наблюдается при введении ионов двухвалентного железа (Fe2+) в систему, содержащую гидроперекиси липидов. Вспышка обусловлена бурным выделением радикалов при разложении перекисей ионами двухвалентного железа (величина пропорциональна квадрату концентрации гидроперекисей в системе); измеряется в милиметрах.

3. Латентный период (L) - длительность L зависит от снижения концентрации ионов двухвалентного железа до критической величины и от наличия антиоксидантов в биологическом субстрате; измеряется в секундах.

4. Угол наклона () начальной фазы медленной вспышки - зависит от соотношения прооксидантов к антиоксидантам в данном биологическом субстрате. Результаты этой зависимости выражают величиной тангенса угла наклона (tg ).

5. Время “до плато” (Т “до плато”) - характеризует продолжительность нарастания медленной вспышки и зависит от количества субстрата окисления, особенно от неокисленных жирных кислот; измеряется в секундах.

6. Интенсивность медленной вспышки (Н) - отражает потенциальные возможности системы к генерированию свободных радикалов; зависит от способности системы противостоять накоплению свободных радикалов и от длительности нарастания процессов перекисного окисления, что в свою очередь связано с наличием антиоксидантов; измеряется в импульсах (F) за 1000 с.

Результаты исследования липидного спектра крови и ХЛ контрольной группы (здоровые) и больных с СНТ представлены в таблице 1 и таблице 2 соответственно.



Из анализа полученных данных выявлено, что у больных СНТ все показатели липидного спектра достоверно повышены относительно нормы, что указывает на дислипидемию при хронической СНТ. Выраженным увеличением показателя отличается уровень холестерина.



Из анализа приведенных в таблице 2 данных видно, что у больных с СНТ выявлены достоверные отличия показателей СРО от контрольной группы. Интенсивность спонтанного свечения (S) до лечения оказалась достоверно сниженной до 1,13±0,07 импульсов/100 с10 (р<0,10) по отношению к контрольной группе - 1,60±0,07, что указывает на угнетение процессов СРО при хронической СНТ. При определении процентных соотношений показатель интенсивности спонтанного свечения у больных с СНТ был на 23,63% меньше относительно контрольной группы. Имеет тенденцию к снижению при СНТ и показатель быстрой вспышки (91,2±2,4), указывающий на уменьшение содержания гидроперекисей, укорачивается латентный период (96,5±5,4), что предполагает уменьшение числа антиоксидантов в системе. Незначительно повышаются tg (0,35±0,25) и показатель Т “до плато” (204,0±11,6), и более заметно - “Н”: интенсивность медленной вспышки (47,0±3,2), что может свидетельствовать о повышенной потенциальной способности системы к генерированию свободных радикалов и отражает снижение количества антиоксидантов.

Таким образом, течение хронической сенсоневральной тугоухости сопровождается признаками нарушения липидного обмена с тенденцией к повышению его показателей в сочетании с угнетением процессов свободнорадикального окисления, что является одним из компонентов патогенеза СНТ и требует коррекции при лечении. Указанные соотношения выявлены у 27 из 30 обследованных больных с хронической СНТ, что составило 90% случаев.

Предлагаемый способ диагностики сенсоневральной тугоухости осуществляется следующим образом.

Проводят забор крови из локтевой вены больного СНТ и определяют показатели липидного спектра сыворотки крови - холестерин (ХС), общие липиды (ОЛ), триглицериды (ТГ), -липопротеиды (ЛП) унифицированным методом, используя стандартные наборы реактивов, а затем оценивают состояние СРО методом ХЛ в присутствии ионов двухвалентного железа на установке ХЛМ 1Ц-01 с определением его показателей - спонтанная хемилюминесценция (S), быстрая вспышка (h), латентный период (L), тангенс угла наклона tg , время “до плато” (Т “до плато”), интенсивность медленной вспышки (Н). При выявлении признаков гиперлипидемии, сопровождающейся увеличением содержания ХС, а также ОЛ, ТГ и ЛП, в сочетании с признаками угнетения системы СРО по показателям хемилюминесцентного анализа, сопровождающегося снижением S - интенсивности спонтанного свечения (на 23% и более), диагностируют сенсоневральную тугоухость.

Предлагаемый способ апробирован в ЛОР клинике РГМУ у 30 больных и показал положительные результаты.

Представляем выписки из 2-х историй болезни, иллюстрирующих возможности предлагаемого способа.

Выписка из истории болезни №1313 больной Т., 45 лет, находившейся на лечении в ЛОР клинике РГМУ с диагнозом: двусторонняя сенсоневральная тугоухость. Жалобы на снижение слуха и шум в ушах отмечает более 1 года. При аудиометрическом исследовании выявлено: двустороннее снижение слуха, больше справа, по типу нарушения звуковосприятия, с преобладанием в диапазоне высоких частот (до 50-60 дБ). Для определения состояния липидного обмена и процессов СРО исследована сыворотка крови больной. Изучены показатели липидного спектра с использованием стандартных наборов реактивов. Затем исследовали состояние СРО методом ХЛ на установке ХЛМ 1Ц-01.

Получены следующие данные.

Показатели липидного спектра сыворотки крови больной:

ХС - 7,0 ммоль/л;

ОЛ - 7,04 г/л;

ТГ - 1,38 г/л;

ЛП - 6,2 г/л.

Показатели ХЛ сыворотки крови:

S - 0,93103 импульсов за 100 с;

h - 80,0 мм;

tg - 0,26;

Т “до плато” - 204 с;

Н - 45,3103 импульсов.

На основании полученных данных выявлены признаки дислипидемии, сопровождающейся увеличением содержания ХС, ОЛ, ТГ и ЛП, а также признаки угнетения системы СРО по показателям хемилюминесцентного анализа, сопровождающегося снижением S - интенсивности спонтанного свечения на 41,9%, что значительно превышает контрольные данные (более чем на 23%). На основании полученных данных были обнаружены изменения, определяемые нами как характерные для сенсоневральной тугоухости. Выявление указанных изменений позволило назначить своевременную коррекцию патогенетически направленной терапии.

Выписка из истории болезни №745 больной Ч., 35 лет, поступившей в ЛОР клинику РГМУ с жалобами на снижение слуха, шум в ушах с детского возраста. При аудиометрическом исследовании выявлено двустороннее снижение слуха по типу нарушения звуковосприятия, преимущественно в диапазоне средних и высоких частот (от 30 до 60 дБ на 500-8000 Гц). При поступлении в стационар больной проведено исследование липидного спектра сыворотки крови и изучение процессов СРО методом ХЛ.

Для определения состояния липидного обмена и процессов СРО исследована сыворотка крови больной. Изучены показатели липидного спектра с использованием стандартных наборов реактивов. Затем исследовано состояние СРО методом ХЛ на установке ХЛМ 1Ц-01.

Получены следующие данные.

Показатели липидного спектра сыворотки крови больной:

ХС - 7,4 ммоль/л;

ОЛ - 6,99 г/л;

ТГ - 1,40 г/л;

ЛП - 5,84 г/л.

Показатели ХЛ сыворотки крови:

S - 1,21103 импульсов за 100 с;

h - 97,0 мм;

L - 84 с;

tg - 0,34;

Т “до плато” - 210 с;

Н - 51,7103 импульсов.

На основании полученных данных выявлены признаки дислипидемии, сопровождающейся увеличением содержания ХС, ОЛ, ТГ и ЛП, а также признаки угнетения системы СРО по показателям хемилюминесцентного анализа, сопровождающегося снижением S - интенсивности спонтанного свечения на 24,4%, что превышает контрольные данные (более чем на 23%). На основании полученных данных были обнаружены изменения, определяемые нами, как характерные для сенсоневральной тугоухости. Выявление указанных изменений позволило назначить своевременную коррекцию патогенетически направленной терапии.

Заявляемый способ обладает следующими преимуществами:

- высокой точностью диагностики (90% случаев);

- доступен для осуществления в биохимических лабораториях;

- позволяет выяснить звенья патогенеза СНТ для проведения адекватного лечения. 


ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ



Способ диагностики сенсоневральной тугоухости (СНТ), предусматривающий определение в крови больных содержания холестерина (ХС), отличающийся тем, что исследуют и другие показатели липидного спектра сыворотки крови: общие липиды (ОЛ), триглицериды (ТГ), -липопротеиды (ЛП), а также оценивают состояние свободно радикального окисления (СРО) методом хемилюминесценции (ХЛ), и при увеличении содержания ХС, а также ОЛ, ТГ и ЛП в сочетании с признаками угнетения системы СРО, сопровождающегося снижением показателя (S) интенсивности спонтанного свечения на 23% и более, диагностируют сенсоневральную тугоухость.