ИЗОБРЕТЕНИЕ
Патент Российской Федерации RU2309405

СПОСОБ КАЧЕСТВЕННОЙ ПРЕДВАРИТЕЛЬНОЙ ЭКСПРЕСС-ДИАГНОСТИКИ СТАДИИ ОНКОЛОГИЧЕСКОГО ЗАБОЛЕВАНИЯ

СПОСОБ КАЧЕСТВЕННОЙ ПРЕДВАРИТЕЛЬНОЙ ЭКСПРЕСС-ДИАГНОСТИКИ СТАДИИ ОНКОЛОГИЧЕСКОГО ЗАБОЛЕВАНИЯ

Имя изобретателя: Савватеева Людмила Юрьевна (RU), Савватеев Евгений Витальевич (RU), Бессмертный Дмитрий Васильевич (RU)
Имя патентообладателя: Савватеева Людмила Юрьевна (RU), Савватеев Евгений Витальевич (RU), Бессмертный Дмитрий Васильевич (RU)
Адрес для переписки: 308023, г.Белгород, ул. Садовая, 118а, кв.8, Л.Ю. Савватеевой
Дата начала действия патента: 11.11.2005

Изобретение относится к области медицины, а именно к диагностическим методам в онкологии. Сущность способа заключается в том, что пробу крови обследуемого человека подвергают экстракции смесью полярного органического растворителя и неполярного водорастворимого спирта, фильтруют, отделяют отстоявшийся верхний окрашенный водно-спиртовый слой, визуально сравнивают его цвет с контрольным цветным эталоном. По цвету верхнего окрашенного водно-спиртового слоя делают предварительное заключение об отсутствии или наличии онкологического заболевания и его стадии. Дополнительное подтверждение получают по внешнему виду сухого остатка после его промывания на фильтре. В качестве смеси полярного органического растворителя и неполярного водорастворимого спирта может быть использован соответственно хлороформ и этиловый спирт в равных соотношениях каждого ингредиента с кровью. Использование способа позволяет в короткие сроки составить предварительное заключение о наличии онкологического заболевания и его стадии. Способ прост в исполнении, может быть использован при массовом обследовании населения.

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Изобретение относится к области медицины, а именно - к онкологии, и может быть использовано для качественной клинической экспресс-диагностики крови при вынесении предварительного заключения об отсутствии или наличии онкологического заболевания и его стадии, а также для проверки степени реабилитации больного.

Из технического уровня известен способ ранней диагностики онкологических заболеваний и их рецидивов [Заявка RU №9300347/14, БИ №4, 10.02.96]. Согласно этому способу в сыворотке крови больных раком определяют СОД-активность Р-белков, по факту которой судят о наличии или отсутствии у обследуемого рецидива или метастазов, инкубируют сыворотку крови с обнаруженной патологией с тканями различных органов и при исчезновении СОД-активности и Р-белков с одним или несколькими из образцов ткани идентифицируют данную ткань органа как мишень для развития или патологического процесса. Способ доступен для применения клиническими учреждениями, но продолжителен по времени.

Известен также способ ранней диагностики и мониторинга онкологических заболеваний, согласно которому в крови больного определяют концентрацию внутриклеточных нуклеиновых кислот, связанных с клеточной поверхностью форменных элементов крови, и при нулевом значении этого показателя диагностируют рак [Патент RU №2251696, БИ №13, 10.05.05]. Недостатком рассмотренного способа является его сложность.

Известен способ диагностики острого лейкоза, включающий изменение содержания липидно-связанных сиаловых кислот (ЛСК) и специфической активности ДНК-связывающих белков (СА ДСБ) в крови. Для раннего выявления острого лейкоза у больных миелодиспластическим синдромом дополнительно определяют в крови содержание ДНК и при одновременном изменении всех показателей, причем содержание ЛСК увеличивается до 0,2 г/л и более, ДНК - до 7,5 мкг/мл и более, а специфическая активность ДНК-связывающих белков снижается до 14 ед/мг белка и более, диагностируют острый лейкоз [Патент RU №2007720, БИ №3, 15.02.94]. К недостаткам способа следует отнести его узкую направленность.

Последний способ основан на фиксировании процессов перекисного окисления липидов и продуктов их окисления, поступивших в кровь.

В техническом уровне не обнаружен прототип заявляемого изобретения, так как известные выявления онкологического заболевания предусматривают вынесение окончательного решения, а это приводит либо к усложнению способа диагностики, либо к его удорожанию.

Задачей изобретения является разработка экономически доступного и простого способа качественной предварительной экспресс-диагностики по крови стадии онкологического заболевания.

Техническими результатами, которые могут быть получены при использовании заявляемой экспресс-диагностики, являются:

- краткость определения;

- экономичность;

- обеспечение возможности визуального контроля продуктов окисления липидов, белков и углеводов крови, растворимых в водно-спиртовой среде.

Решение указанной задачи и достижение вышеупомянутых технических результатов стало возможным благодаря тому, что в способе качественной предварительной экспресс-диагностики стадии онкологического заболевания пробу крови обследуемого человека подвергают экстракции смесью полярного органического растворителя и неполярного водо-растворимого спирта, фильтруют, отделяют отстоявшийся верхний окрашенный водно-спиртовый слой, визуально сравнивают его цвет с контрольным цветным эталоном и по цвету верхнего окрашенного водно-спиртового слоя делают предварительное заключение об отсутствии или наличии онкологического заболевания и его стадии.

В частном примере выполнения способа остаток на фильтре промывают летучим органическим растворителем и составляют дополнительное предварительное заключение по его внешнему виду об отсутствии или наличии онкологического заболевания, в качестве смеси полярного органического растворителя и неполярного водорастворимого спирта используют соответственно хлороформ и этиловый спирт в равных соотношениях каждого ингредиента с кровью.

Для клеток онкологических больных характерны метаболические процессы, при которых нарушенный гормональный комплекс, контролирующий деятельность ферментов, приводит к неферментативному свободнорадикальному окислению липидов, углеводов и белков. Реакция характеризуется кинетической особенностью и непостоянной скоростью окисления, при которой образующиеся продукты окисления становятся катализаторами самого окисления.

Неочевидным техническим результатом является перевод в процессе экстракции продуктов свободнорадикального окисления липидов, углеводов и белков из крови в водно-спиртовую фракцию, которые окрашивают эту фракцию в специфичную для каждой стадии онкологического заболевания окраску, и составление предварительного заключения визуально по факту окрашивания полученного фильтрата путем сопоставления его с контрольным эталоном.

Способ качественной предварительной экспресс-диагностики стадии онкологического заболевания человека осуществляют следующим образом. Отбирают пробу крови обследуемого человека и помещают ее в колбу с притертой пробкой. Добавляют смесь полярного органического растворителя и неполярного водорастворимого спирта и экстрагируют из крови продукты свободнорадикального окисления липидов, белков и углеводов, например путем встряхивания. Полученную смесь фильтруют через широкопористый фильтр в цилиндр и отстаивают фильтрат до момента разделения слоев. Отделяют отстоявшийся верхний окрашенный водно-спиртовый слой, например с помощью шприца, и визуально сравнивают цвет фильтрата с контрольным цветным эталоном, цвета которого соответствуют цветам окраски аналогичного фильтрата заведомо здорового человека и людей на определенной стадии онкологического заболевания. По цвету полученного фильтрата составляют предварительное заключение об отсутствии или наличии онкологического заболевания и его стадии.

Дополнительное подтверждение вышесказанному можно получить путем промывания остатка на фильтре летучим органическим растворителем и анализа его внешнего вида, что повышает достоверность заключения.

В частном примере исполнения способа в качестве смеси полярного органического растворителя и неполярного водорастворимого спирта используют соответственно хлороформ и этиловый спирт в равных соотношениях каждого ингредиента с кровью, что дополнительно улучшает процесс экстракции и делает его более доступным.

Чем больше продуктов, свободнорадикального окисления веществ в крови, тем интенсивней желтая окраска водно-спиртового экстракта, а осадок на фильтре приобретает слизистую консистенцию.

Интенсивность цвета хорошо коррелируется со значениями коэффициента экстинкции на концентрационном электроколориметре, также значениями перекисных чисел, результатами операционного вмешательства и гистологическими исследованиями. Кратковременность и простота исполнения способа на уровне лаборанта, а также отсутствие приборов делают его экономичным и пригодным для массового обследования населения на наличие онкологического заболевания.

Практическую применимость заявляемого способа показывают следующие примеры:

Пример 1

Обследуемый человек - мужчина 23 года.

Диагноз - здоров.

У обследуемого отобрано 25 мл крови. Шприцом кровь вносят в коническую колбу с притертой пробкой на 100 мл. Туда же добавляют 25 мл хлороформа и 25 мл этилового спирта. Экстрагируют смесь в течение 5 мин и фильтруют в градуированный цилиндр на 100 мл через широкопористый фильтр с красной полосой. Фильтрат отстаивают до полного расслоения. Отбирают верхний окрашенный слой.

Отобранный слой характеризуется следующими показателями:

- мутный;

- объем, мл - 4,6;

- цвет - розовый.

Полученный цвет фильтрата совпадает с цветом контрольного цветного эталона, характерным для здорового человека.

Время анализа, мин - 19.

Остаток на фильтре промывают 25 мл хлороформа и подсушивают на воздухе. Сухой остаток порошкообразный.

Пример 2

Обследуемый - мужчина 39 лет.

Диагноз - рак мочевого пузыря, 1 стадия.

Кровь отбирают, обрабатывают и фильтруют по примеру 1.

В качестве экстракта использована смесь диэтилового эфира и метилового спирта в соотношении 1,3:1,7.

Отобранный слой характеризуется следующими показателями:

- мутный;

- объем, мл - 4,7;

- цвет - светло-розовый.

Полученный цвет фильтрата совпадает с цветом контрольного цветного эталона, характерным для больного человека с диагнозом 1 стадии онкологического заболевания.

Время анализа, мин - 18.

Остаток на фильтре промывают 25 мл хлороформа и подсушивают на воздухе. Сухой остаток, близкий к порошкообразному состоянию.

Пример 3

По примеру 2.

Дополнительно остаток на фильтре промывают 25 мл хлороформа и подсушивают на воздухе. Сухой остаток близок к порошкообразному состоянию.

Пример 4

Обследуемая - женщина 45 лет.

Диагноз - рак мочевого пузыря, 2 стадия.

Кровь отбирают, обрабатывают и фильтруют по примеру 1.

В качестве экстракта использована смесь хлороформа и метилового спирта в соотношении 1,4:1,6.

Отобранный слой характеризуется следующими показателями:

- мутный;

- объем, мл - 4,5;

- цвет - светло-соломенный.

Полученный цвет фильтрата совпадает с цветом контрольного цветного эталона, характерным для больного человека с диагнозом 2 стадии онкологического заболевания.

Время анализа, мин - 20.

Остаток на фильтре промывают 25 мл хлороформа и подсушивают на воздухе. Остаток в этих условиях сохраняет влажность.

Пример 5

Обследуемый - мужчина 65 лет.

Диагноз - рак предстательной железы, 3 стадия.

Кровь отбирают, обрабатывают и фильтруют по примеру 1.

Отобранный слой характеризуется следующими показателями:

- практически прозрачный;

- объем, мл - 4,7;

- цвет - желтый.

Полученный цвет фильтрата совпадает с цветом контрольного цветного эталона, характерным для больного человека с диагнозом 3 стадии онкологического заболевания.

Время анализа, мин - 15.

Остаток на фильтре промывают 25 мл хлороформа и подсушивают на воздухе. Остаток приобрел вязкую, липкую консистенцию.

Пример 6

Обследуемый - мужчина 25 лет.

Диагноз - рак яичка, 4 стадия.

Кровь отбирают, обрабатывают и фильтруют по примеру 1.

Отобранный слой характеризуется следующими показателями:

- прозрачный;

- объем - 7,3 мл;

- цвет - ярко-желтый.

Полученный цвет фильтрата совпадает с цветом контрольного цветного эталона, характерным для больного человека с диагнозом 4 стадии онкологического заболевания.

Время анализа - 12 мин.

Остаток на фильтре промывают 25 мл хлороформа и подсушивают на воздухе.

Остаток приобрел клейкую консистенцию.

Как видно из примеров 1-6, заявляемая совокупность существенных признаков способа качественной предварительной экспресс-диагностики стадии онкологического заболевания позволяет за короткий период времени 12-20 минут сделать с высокой вероятностью достоверности предварительное заключение о наличии онкологического заболевания и его стадии. Заявляемый способ экономичен в связи с использованием недорогих химикатов, простоты исполнения и отсутствия необходимости применения измерительной аппаратуры. Что открывает неограниченные возможности массового обследования и начала лечения, а также экспресс-контроля за процессом лечения и реабилитации.

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

1. Способ качественной предварительной экспресс-диагностики стадии онкологического заболевания мочеполовой системы, характеризующийся тем, что пробу крови обследуемого человека подвергают экстракции смесью полярного органического растворителя и неполярного, водорастворимого спирта, фильтруют, отделяют отстоявшийся верхний окрашенный водно-спиртовый слой, визуально сравнивают его цвет с контрольным цветным эталоном и по цвету верхнего окрашенного водно-спиртового слоя делают предварительное заключение об отсутствии или наличии онкологического заболевания и его стадии: розовый цвет характерен для здоровых людей, светло-розовый цвет - для 1-й стадии онкологического заболевания, светло-соломенный - для 2-й стадии, желтый для - 3-й стадии, ярко-желтый - для 4-й стадии онкологического заболевания мочеполовой системы.

2. Способ по п.1, отличающийся тем, что дополнительно остаток на фильтре промывают летучим органическим растворителем, подсушивают на воздухе и составляют дополнительное предварительное заключение по его внешнему виду, при этом порошкообразный сухой остаток характерен для здоровых людей, слизистая консистенция осадка характерна для больных с 3-4 стадией онкологического заболевания.

3. Способ по п.1, отличающийся тем, что в качестве смеси полярного органического растворителя и неполярного, водорастворимого спирта используют соответственно хлороформ и этиловый спирт.

Версия для печати


вверх